醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、鹽酸氯己定測(cè)定方法

1、附錄 A（資料性附錄）醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、鹽酸氯己定測(cè)定方法A.1 方法一：高效液相色譜法A.1.1適用范圍適用于含醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、鹽酸氯己定的單方和復(fù)方消毒劑。A.1.2 原理樣品經(jīng)流動(dòng)相（0.02 mol/L 磷酸二氫鉀溶液pH=2.5 +乙腈=65+35）超聲波提取，采用高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定，峰面積外標(biāo)法定量。A.1.3 儀器A.1.3.1高效液相色譜儀，具二極管陣列檢測(cè)器。A.1.3.2電子天平，感量為 0.1 mg。A.1.3.3超聲波清洗器。A.1.4 試劑除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。A.1.4

2、.1醋酸氯己定（C22H30Cl2Ni0?2C2H4O2，CASt： 56-95-1 ）標(biāo)準(zhǔn)品。A.1.4.2磷酸二氫鉀（KHPO4。A.1.4.385% 磷酸（HPO4。A.1.4.4 乙腈（CHCN :色譜純。A.1.5分析步驟A.1.5.1流動(dòng)相、提取液的制備稱取2.7 g磷酸二氫鉀，放入1000 mL量筒中，加入約950 mL水溶解后，加入1.5 mL 85% 磷酸，然后用水定容至1000 mL,混勻，得到流動(dòng)相 A相 （pH=2.5） , B相為乙腈。量取流動(dòng)相A相650 mL,加乙腈350 mL,混合均勻，得到提取液。A.1.5.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取醋酸氯己定標(biāo)準(zhǔn)品20 mg

3、，用流動(dòng)相稀釋至50 mL,得到400 mg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液。A.1.5.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備將標(biāo)準(zhǔn)溶液用流動(dòng)相稀釋成10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L、80 mg/L、100 mg/L、200 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)系列，10卩L進(jìn)樣測(cè)定。A.1.5.4色譜參考條件色譜柱：C18柱 （4.6 mnK 250 mm,5 卩 m）;流動(dòng)相：A相 + B相相 = 65+35;流速：1.0 mL/min ; 進(jìn)樣量:10卩L;柱溫：30 C；波長(zhǎng)掃描200 nm400 nm；測(cè)定波長(zhǎng)：260 nm ;以保留時(shí)間 和紫外光譜圖譜定性，以峰面積外標(biāo)法定量。A.1.5.5樣品測(cè)定稱取或量取樣品適量于 50

4、mL容量瓶中，加提取液40 mL超聲波提取20 min，定容至50mL, 過0.45卩m濾膜后，進(jìn)樣測(cè)定。色譜圖見圖A.1。A.1.6結(jié)果計(jì)算A.1 ）。（A.1 ）g/kg 或 g/L ）;單位為毫克每升（mg/L）;1.4352。0.9246。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中醋酸氯己定含量，計(jì)算公式見式（PxvXM 1000式中：X樣品中醋酸氯己定的含量，單位為克每千克或克每升（ P 由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣品溶液的醋酸氯己定的質(zhì)量濃度，V定容體積，單位為毫升（mL ; M樣品量，克或毫升（g或mL。注：葡萄糖酸氯己定含量測(cè)定可以用醋酸氯己定做標(biāo)準(zhǔn)品，并將結(jié)果乘以 鹽酸氯己定含量測(cè)定可以用醋酸氯己定做標(biāo)準(zhǔn)

5、品，并將結(jié)果乘以A.1.7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%A.2 方法二：滴定法（本方法依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典中醋酸氯己定的測(cè)定方法）A.2.1適用范圍適用于含醋酸氯己定的單方消毒劑。A.2.2 原理樣品用丙酮和冰醋酸溶解，加甲基橙飽和丙酮溶液，用高氯酸滴定液滴定，甲基橙指示液顯橙色時(shí)停止滴定，通過高氯酸滴定液使用量，計(jì)算醋酸氯己定含量。A.2.3 儀器A.2.3.1電子天平，感量為 0.1 mg。A.2.4 試劑除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。A.2.4.1 高氯酸（CIHQ）標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液（0.

6、1mol/L ）。A.2.4.2 丙酮（CHCOCH。冰醋酸（CHCOOH。甲基橙（SHuNNaOS）。樣品測(cè)定精密稱取或量取樣品適量，加丙酮 30 mL與冰醋酸2 mL ,振搖使溶解后，加甲基橙的飽 和丙酮溶液0.5 mL1 mL,用高氯酸滴定液（0.1mol/L ）滴定至溶液顯橙色，并將滴定的結(jié) 果用空白試驗(yàn)校正。每 1 mL高氯酸滴定液（0.1mol/L ）相當(dāng)于 31.28mg的G2H0CI2NW 2C2HkQ。A.2.6結(jié)果計(jì)算樣品中醋酸氯己定含量，計(jì)算公式見式（A.2 ）。(A.2)C (V -V0) 31.28M式中：X樣品中醋酸氯己定的含量，單位為克每千克或克每升（ g/kg或

7、g/L ）； C標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的摩爾濃度，單位為摩爾每升（mol/L ）;V試樣測(cè)定所消耗的標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，單位為毫升（mL）;V0相應(yīng)的空白測(cè)定所消耗的標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，單位為毫升（mL）；M樣品量，克或毫升（g或mL）。A.2.7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。A.3 方法三：紫外分光光度法（本方法依據(jù)中華人民共和國(guó)藥典 中醋酸氯己定軟膏的測(cè) 定方法）A.3.1適用范圍適用于軟膏型或液體制劑型含氯己定類（包括醋酸氯己定、葡萄糖酸氯己定、 鹽酸氯己定）的單方消毒劑。A.3.2 原理樣品中的醋酸氯己定經(jīng)氯仿溶解基質(zhì)，再用1.5 mol/L的

8、醋酸溶液提取，在波長(zhǎng) 260 nm處測(cè)定吸光度值定量。A.3.3 儀器A.3.3.1紫外分光光度計(jì)。A.3.3.2電子天平，感量為 0.1 mg。A.3.4 試劑除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為GB/T 6682規(guī)定的一級(jí)水。A.3.4.1醋酸氯己定(8HoCl2Nw?2GHO, CASt： 56-95-1 )標(biāo)準(zhǔn)品。氯仿（CHC3）。冰醋酸（HPO4。分析步驟標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定精密稱取醋酸氯己定標(biāo)準(zhǔn)品約 10 mg置100 ml容量瓶中，加1.5 mol/L醋酸溶液溶解并 稀釋至刻度，搖勻，精密量取 5 mL，置50 mL量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，在 260 nm的波長(zhǎng) 處測(cè)定吸

9、光度。A.3.5.2 樣品測(cè)定精密稱取樣品適量（約相當(dāng)于醋酸氯己定10 mg），置分液漏斗中，加微溫氯仿30 mL,振搖使基質(zhì)溶解，用1.5 mol/L醋酸溶液提取5次（20 mL 20 mL 15 mL 15 mL、15 mL）， 合并酸液于100 m量瓶中，用1.5 mol/L醋酸溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50m量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，在260 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。液體劑型醋酸氯己定消毒液，直接用1.5 mol/L醋酸溶液稀釋后，再用乙醇稀釋，測(cè)定吸光度。A.3.6結(jié)果計(jì)算樣品中醋酸氯己定含量，計(jì)算公式見式（ A.3 ）。A2mA, M (A.3)式中：X樣品中醋酸氯己定的含量，單位為克每千克或克每升（g/kg或g/L）；m醋酸氯己定標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量，單位為毫克（mg）；A 醋酸氯己定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收值；A樣品溶液的吸收值；M樣品量，克或毫升（g或mL）