簡論損傷Claudin在銅綠假單胞菌感染所致急性肺損傷中表達(dá)變化及其作用學(xué)位論文

1、簡論損傷Claudin在銅綠假單胞菌感染所致急性肺損傷中表達(dá)變化及其作用學(xué)位論文    摘要：第一部分Claudin在銅綠假單胞菌感染所致急性肺損傷中表達(dá)變化情況目的本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠肺損傷模型,旨在探討claudin在銅綠假單胞菌(PA)感染所致急性肺損傷(ALI)中的表達(dá)變化情況及其可能的作用。策略實(shí)驗(yàn)選用清潔級SD大鼠,隨機(jī)分為正常大鼠(N組)、陰性對照組(C組)和銅綠假單胞菌組(P組),C組和P組分別設(shè)氣道滴入生理鹽水(NS)或PA后3h、9h和24h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)。腹主動(dòng)脈抽血行動(dòng)脈血?dú)鉁\析；腹腔放血處死后,收集肺組織標(biāo)本,行肺泡灌洗術(shù),檢測肺泡灌

2、洗液(BALF)中總蛋白濃度；HE染色光鏡下觀察肺組織病理轉(zhuǎn)變情況并行肺損傷評分,以評價(jià)造模后肺損傷程度。檢測肺組織mRNA及蛋白水平claudin-3、-4、-18和-5表達(dá),以觀察PA感染所致肺損傷中claudin表達(dá)變化情況。結(jié)果P組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)動(dòng)脈血氧分壓均較N組和C組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)下降,P-24h下降與P-3h、P-9h比較有顯著差別：BALF中總蛋白濃度P組較N組和C組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)有顯著升高,P-3h、P-9h、P-24h總蛋白濃度顯著逐漸增高。光鏡下可見P組有顯著病理轉(zhuǎn)變,P-3h有少許炎性細(xì)胞浸潤；P-9h肺泡腔增寬,肺泡間隔內(nèi)大量中性粒細(xì)胞浸潤：P-24h可見肺泡間隔增寬更為顯著,有

3、大量中性粒細(xì)胞浸潤,伴肺泡間隔內(nèi)毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血和部分肺不張；肺損傷評分P-24h顯著高于P-3h、P-9h。Claudin-4、-18和-5mRNA在P-24h時(shí)顯著增高而claudin-3mRNA則無顯著變化；claudin-3、-4、-18和-5蛋白水平均無顯著變化。結(jié)論1.大鼠氣道內(nèi)注入PA出現(xiàn)病理生理學(xué)變化,時(shí)間越長損傷越顯著,以P-24h損傷最為嚴(yán)重。2.Claudin-4、-18和-5mRNA在損傷最重的P-24h表達(dá)顯著高于其他時(shí)間點(diǎn)以及C組、N組,而claudin-3、-4、-18和-5蛋白水平則沒有顯著轉(zhuǎn)變,肺組織中claudin-4、-18和-5mRNA增高可能是肺損傷

4、早期增強(qiáng)上皮屏障功能的一種保護(hù)性機(jī)制。第二部分Claudin在銅綠假單胞菌所致急性肺損傷中表達(dá)變化的作用目的本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠肺損傷模型,觀察PA引起的claudin表達(dá)轉(zhuǎn)變對緊密連接(TJs)結(jié)構(gòu)的影響,并在BALF中檢測claudin蛋白的變化,淺析其與肺損傷程度的相關(guān)性,以了解claudin對肺損傷的作用。策略電鏡下觀察肺泡上皮細(xì)胞、肺血管內(nèi)皮細(xì)胞以及上皮細(xì)胞之間的TJs結(jié)構(gòu)；檢測肺組織表面活性蛋白SP-A、SP-B和SP-C,假性血管性血友病因子(vWF)mRNA表達(dá)情況；行肺泡灌洗術(shù),檢測BALF中claudin-3、-4、-18和-5濃度并對BALF中claudin的含量與肺損傷評

5、分做spearman相關(guān)淺析,淺析claudin表達(dá)變化在急性肺損傷中的作用。結(jié)果電鏡觀察P組肺組織超微結(jié)構(gòu)呈現(xiàn)病理變化,P-3h肺泡上皮細(xì)胞輕度破壞,細(xì)胞之間TJs較正常。P-9h肺泡上皮細(xì)胞特別是I型肺泡上皮細(xì)胞顯著破壞,腫脹、呈空泡狀,TJs不緊密。P-24h I型肺泡上皮翹起、呈空泡狀、部分上皮結(jié)構(gòu)消失,可見內(nèi)皮細(xì)胞破裂,嚴(yán)重處可見氣血屏障三層結(jié)構(gòu)均破壞,TJs結(jié)構(gòu)不易在鏡下找到。肺組織SP-A、SP-B、SP-C及vWF mRNA表達(dá)P組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)與C組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)及N組之間均無顯著變化。BALF中claudin-3、-4和-18在N組和C組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)含量均較低,而在P組顯著增高,且P

6、-3h、P-9h、P-24hBALF中claudin含量顯著逐漸增高,spearman相關(guān)淺析顯示BALF中claudin-3、-4和-18含量分別與肺損傷評分顯著正相關(guān)。Claudin-5在N組和C組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)含量低,在PA造模后3h迅速增高,9h、24h較3h略有增高,claudin-5與肺損傷評分無顯著相關(guān)性。結(jié)論1BALF中Claudin-3、-4和-18含量在P-3h、P-9h和P-24h逐漸升高,并與肺損傷嚴(yán)重程度正相關(guān),可能成為PA感染所致ALI早期肺泡上皮細(xì)胞損傷潛在的分子標(biāo)記物。2.BALF中claduin-5含量在3h、9h和24h均升高但與肺損傷嚴(yán)重程度無顯著相關(guān),提示B

7、ALF中claduin-5含量增高不能作為早期肺損傷微血管內(nèi)皮細(xì)胞破壞的分子標(biāo)記物。    關(guān)鍵詞：。    文超微結(jié)構(gòu)論文中文摘要5-7英文摘要7-9引言9-14參考文獻(xiàn)11-14第一部分Claudin在銅綠假單胞菌感染所致急性肺損傷中表達(dá)變化情況14-40前言14-15材料和策略15-25結(jié)果25-33討論33-36參考文獻(xiàn)36-40第二部分ClaClaudin論文 急性肺損傷論文 銅綠假單胞菌論文 Claudin論文 急性肺損傷論文 肺泡灌洗液論文 超微結(jié)構(gòu)論文         中文摘要5-7英文摘要7-9引言9-14參考文獻(xiàn)11-14第一部分 Claudin在銅綠假單胞菌感染所致急性肺損傷中表達(dá)變化情況14-40前言14-15材料和策略15-25結(jié)果25-33討論33-36參考文獻(xiàn)36-40第