綠葛沙解酒飲對(duì)酒精性肝損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究

1、綠葛沙解酒飲對(duì)酒精性肝損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究                            作者：張利霞 安建鋼 羅綏蘭【摘要】  目的：探討綠葛沙解酒飲對(duì)小鼠急性酒精(乙醇)性肝損傷的保護(hù)作用。方法：采用酒精(乙醇)肝損傷模型小鼠，以海王金樽片為陽性對(duì)照組，觀察綠葛沙解酒飲低中高劑量組對(duì)模型小鼠肝臟中MDA、

2、GSH、TG的影響。結(jié)果：綠葛沙解酒飲低、中、高劑量組均有抑制乙醇誘導(dǎo)的肝臟中MDA、TG含量的升高和提高肝臟中GSH活力的作用。結(jié)論：綠葛沙解酒飲對(duì)急性酒精性肝損傷具有一定的保護(hù)作用。 【關(guān)鍵詞】  綠葛沙解酒飲;酒精性肝損傷;實(shí)驗(yàn)研究醫(yī)學(xué)研究證明，適量飲酒可以加速血液循環(huán)、消除疲勞、強(qiáng)心提神，而過量飲酒則可以致醉、傷人，并可造成肝臟不同程度的損害，因此，探討解酒護(hù)肝的保健食品已成為國內(nèi)外醫(yī)學(xué)和營養(yǎng)學(xué)界共同關(guān)注的課題。根據(jù)醒酒保肝產(chǎn)品的需求及現(xiàn)狀，本課題組研制出以綠豆、葛根、沙棘為原料配方的復(fù)方解酒制劑綠葛沙解酒飲。雖然關(guān)于葛根的解酒護(hù)肝作用有很多的報(bào)道，它也是常用的解酒藥、保健食

3、品配方原料之一，但與綠豆、沙棘配伍后對(duì)酒精性肝損傷的保護(hù)作用卻未曾見報(bào)道。本研究通過乙醇肝損傷模型小鼠，測試綠葛沙解酒飲對(duì)急性酒精性肝損傷的保護(hù)作用，以期為酒類消費(fèi)者提供新型保健飲品。1 材料與方法1.1 材料1.2 方法 小鼠72只，以小鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。按體重隨機(jī)分為6組，即陰性對(duì)照組、乙醇損傷模型組、陽性對(duì)照組和綠葛沙解酒飲低、中、高3個(gè)劑量組，每組12只。以經(jīng)口灌胃的方式，低、中、高劑量組每日給予綠葛沙解酒飲，劑量分別為15 mL/kgBW、30 mL/kgBW、60 mL/kgBW;陰性對(duì)照組和模型組均給予蒸餾水20 mL/kgBW;陽性對(duì)照組給予

4、海王牌金樽片的供試液15 mL/kgBW(折合海王牌金樽片的劑量為1.5 g/kgBW)。動(dòng)物每周稱重2次，按體重調(diào)整解酒飲、蒸餾水、海王金樽的灌胃量，實(shí)驗(yàn)時(shí)間為30 d。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，低中高劑量組、模型組及陽性對(duì)照組一次灌胃給予50 %乙醇14 mL/kgBW(折合乙醇的劑量為7 g/kgBW)，陰性對(duì)照組給予蒸餾水20 mL/kgBW，禁食16 h頸椎脫臼處死小鼠，剝離肝臟1。肝臟預(yù)處理：迅速剖取肝臟，冰生理鹽水沖洗，濾紙吸濕后，稱取0.5 g肝臟，加入預(yù)冷的生理鹽水4.5 mL，冰水浴中制成10 %肝勻漿，3 000 r/min離心15 min，提取上清液，按試劑盒提供的方法測定勻漿上清中

5、MDA、TG、GSH和蛋白含量。1.3 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，對(duì)方差齊的資料用單因素方差分析(ANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，對(duì)P<0.05的數(shù)據(jù)用SNK-q檢驗(yàn)法進(jìn)行陰性對(duì)照組、模型組、陽性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組兩兩之間的比較。2 結(jié)果陰性對(duì)照組的MDA、TG含量明顯低于乙醇損傷模型組(P<0.01)，GSH含量明顯高于乙醇損傷模型組(P<0.01)，說明模型制備成功。綠葛沙解酒飲的低、中、高劑量組與乙醇損傷模型組比較，MDA、TG含量均明顯降低(P<0.01)，GSH含量則明顯升高(P<0.01);低、中、高劑量組與陽性對(duì)照

6、組比較，MDA、TG、GSH間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。比較3個(gè)劑量組對(duì)MDA、TG、GSH含量的影響，發(fā)現(xiàn)隨著劑量的增加，MDA、TG有逐漸降低的趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);GSH有逐漸升高的趨勢，且高劑量組的GSH含量明顯高于低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。表1 綠葛沙解酒飲對(duì)小鼠肝組織MDA、TG、GSH水平的影響(3 討論酒的主要成分是乙醇，乙醇進(jìn)入體內(nèi)后通過胃腸道吸收，90 %在肝臟內(nèi)氧化，很少在肝外代謝。在生理?xiàng)l件下經(jīng)乙醇脫氫酶系統(tǒng)代謝為乙醛，再經(jīng)乙醛脫氫酶(ALDH)作用生成乙酸，再合成為乙酰CoA納入三羧酸(TCA)

7、循環(huán)。此外，肝臟中還存在微粒體氧化酶系(MEOS)等代謝系統(tǒng)，主要在攝取高劑量乙醇時(shí)發(fā)揮作用。1         酒精(乙醇)是常見的肝臟毒劑。機(jī)體大量攝入乙醇后，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的微粒體乙醇氧化酶系(MEOS)被誘導(dǎo)，進(jìn)一步促進(jìn)乙醇氧化成乙醛，從而導(dǎo)致肝細(xì)胞內(nèi)有害的中間代謝產(chǎn)物乙醛濃度大大提高。乙醛是高毒性的物質(zhì)，能顯著損害肝臟利用氧的能力，對(duì)肝臟有直接毒性。同時(shí)在此代謝途徑中有大量活性氧生成，使肝細(xì)胞的抗氧化物質(zhì)消耗增加，GSH水平下降，同時(shí)乙醛能與GSH的巰基及抗氧化酶蛋白結(jié)合，加速細(xì)胞內(nèi)清道夫分子GSH耗竭，使機(jī)體內(nèi)

8、源性抗氧化能力減弱，難以清除過多的自由基，當(dāng)生成的活性氧量超過了GSH等抗氧化因子的清除能力時(shí)，肝細(xì)胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷。MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，其含量反應(yīng)了體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的水平。此外，乙醇代謝過程消耗氧化型輔酶(NAD+)而使還原型輔酶(NADH)增加，使NAD+/NADH比值相應(yīng)減小而失衡，改變了細(xì)胞氧化還原狀態(tài)，嚴(yán)重干擾細(xì)胞新陳代謝，使三羧酸循環(huán)受到抑制，脂肪酸氧化減弱，導(dǎo)致肝細(xì)胞內(nèi)脂肪沉積2-3。本研究通過乙醇致小鼠肝損傷模型，觀測到小鼠灌胃乙醇16 h后，肝脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強(qiáng)，使肝勻漿中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量明顯升高，還原性物質(zhì)GSH含量明顯降低，且肝組織

9、脂肪酸代謝障礙，甘油三酯合成增加，TG含量明顯升高。而綠葛沙解酒飲低、中、高劑量組均可逆轉(zhuǎn)上述改變，與乙醇損傷模型組比較，MDA、TG明顯降低，GSH明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而與陽性對(duì)照組相比，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明綠葛沙解酒飲低、中、高劑量組均可抑制乙醇誘導(dǎo)的肝臟中MDA、TG含量的升高，并可提高肝臟中GSH的活力。研究結(jié)果提示綠葛沙解酒飲具有保護(hù)小鼠乙醇性肝損傷的作用，且與海王金樽的作用相近。其作用機(jī)理可能是通過清除氧自由基和抗脂質(zhì)過氧化所致。解酒飲中所含葛根能有效拮抗酒精引起的肝脂質(zhì)過氧化損害,提高肝細(xì)胞漿中谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(GST)活性水平，有利于機(jī)體解毒功能的發(fā)揮，保護(hù)肝細(xì)胞免

10、受自由基、親化合物和毒物的損害，從而減輕乙醇的毒性4-5。綠葛沙解酒飲所含沙棘果汁富含維生素E、維生素C、必須氨基酸和黃酮類，曾用于高血脂、冠心病，對(duì)CCl4肝損傷亦有明顯保護(hù)作用，且有明顯的抗脂質(zhì)過氧化作用，可延緩衰老6-7;所含綠豆富含黃酮類化合物，為高效抗氧化成分，抗氧化能力很強(qiáng)8。我們?cè)谟^察各劑量組對(duì)GSH的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，隨著劑量的增加，GSH有逐漸升高的趨勢，且高劑量組的GSH含量明顯高于低劑量組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明隨著劑量的增加，保護(hù)作用在增強(qiáng)。綠葛沙解酒飲的具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。【】  1 中華人民共和國衛(wèi)生部.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范(2003年)S.2

11、003:14-15.2 Jordao AA Jr,Chiarello PG,Arantes MR,et al.Effect of an acute dose of ethanol on lipid peroxidation in rats:action of vitamin EJ.Food Chem Toxicol,2004,42(3):459-464.3 鄧源，班春林，武曉瓊.乙醇誘導(dǎo)肝損傷作用機(jī)制的研究進(jìn)展J.華北國防醫(yī)藥，2005，17(4)：242-244.4 鐘飛，王曉春，林麗.葛根體外清除氧自由基作用的研究J.湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004,24(2):17.5 唐春紅，陳琪.國內(nèi)外葛根營養(yǎng)保健功能的研究與開發(fā)現(xiàn)狀J.食品添加劑