動物營養(yǎng)實驗指導(dǎo)

1、實驗一 樣本的采集與制備方法飼料分析結(jié)果的準確性取決于樣本的代表性，因此飼料樣本的采集與制備方法是飼料分析和檢測的重要環(huán)節(jié)。一 采集樣本的目的與要求由一種物品中采集供分析用的樣本稱之為采樣或取樣。采樣是飼料分析的第一步。采樣的根本目的是通過對樣品的理化指標的分析，客觀地反映受檢飼料原料或產(chǎn)品的品質(zhì)。因此，所采取的樣本必須具有代表性，即能夠代表全部被分析的原料物品。否則即使以后的分析方法和處理無論多么嚴謹精確，所得出的分析結(jié)果都毫無科學(xué)性公證性和實用價值。對飼料加工業(yè)而言，采樣正確與否將影響其多方面的決策，例如：配方設(shè)計時對原料的選擇；原料供應(yīng)商的決策; 對一批原料的取舍與對加工程度的確定;對產(chǎn)

2、品的鑒定-產(chǎn)品是否符合其規(guī)格要求與保證值;對全部保證項目，在規(guī)定的期限內(nèi)是否穩(wěn)定以及加工條件是否控制與官方檢驗的必要性等。顯然，飼料生產(chǎn)和質(zhì)量控制人員的許多決策問題需要以采集樣本的指標為依據(jù)。因此，正確的采樣應(yīng)該是從有不同代表性的區(qū)域取幾個樣點，然后把這些樣本充分混合，使之成為整個飼料的代表樣本，然后再從中分出一小部分作為分析樣本之用。其最后分析的結(jié)果就作為整個被采取樣本飼料的平均值。要使采樣合乎規(guī)范化，則必需加強管理。管理人員必須熟悉各種原料加工工藝產(chǎn)品；必須嚴格規(guī)定各種采樣方法的步驟以及采用特定的儀器設(shè)備。管理人還須指導(dǎo)采樣人員掌握正確的采樣方法及了解采樣原料的基本特點。對采樣系統(tǒng)的要求包

3、括二方面：其一是對采樣人員和教育與培訓(xùn);其二是對采樣工具(包括手動和自動)的正確設(shè)計與安裝。采樣人員應(yīng)通過專門培訓(xùn)，且具有高度責(zé)任心和熟練的采樣技能方能上崗。在采樣過程中，要認真按操作規(guī)程進行，并做到隨機，客觀，避免人為和主觀因素的影響，及時發(fā)現(xiàn)和報告一切異常的情況。采樣工具的制造原料要求耐磨損而且是不易損壞的材料(如不銹鋼)。二、樣本采集的方法與原則（一） 常用樣本類別與定義（1）標準樣本：是指由權(quán)威實驗室仔細分析化驗后的樣本。如再由其它實驗室進行分析化驗，可用標準樣本來校正或確定某一測定方法或某種儀器的準確性。（2）商業(yè)樣本：是指由賣方發(fā)貨時，一同送往買方的樣本。（3）參考樣本：指具有特定

4、性質(zhì)的樣本，在購買原料時可作為參考比較，或用于鑒定成品與之有無顏色結(jié)構(gòu)及其它表現(xiàn)特征上的區(qū)別。（4）備用樣本：指在發(fā)貨后留下的樣品，供急需時備用。（5）仲裁樣本：指由公正的采樣員所采取的樣本。然后送仲裁實驗室分析化驗，以有助于買賣雙方在商業(yè)貿(mào)易工作中達成協(xié)議。（6）化驗樣本：指送往化驗室或檢驗站分析的樣本。（二） 樣本采集的方法和原則 采樣的一般方法，可先采取原始樣本，再從原始樣本中采取分析樣本。由生產(chǎn)現(xiàn)場如田間牧地倉庫青貯窖和試驗場等大量分析對象中采集的樣本叫原始樣本。原始樣本應(yīng)盡量從大批量飼料或大面積牧地上，按照不同的部位和不同深度和廣度來采取，以保證每一小部分與其全部的成分完全相同，使其

5、具有代表性。然后，再從原始樣本中采取分析樣本。為了使樣本的取舍均勻一致，對于均勻性的物品，即單相的液體或是攪拌均勻的籽實磨成粉末的各種糠麩等飼料以及研碎的物品，可用“四分法”來縮減原始樣本。方法是：將籽實粉末及可研碎的物品置于一張方形紙或塑料布上（大小視樣本的多少而定），提起紙的一角，使籽實或粉末等流向?qū)?，隨即提起對角使籽實或粉末等流回，如此將四角輪流反復(fù)提起，使粉末反復(fù)移動混合均勻，然后將籽實粉末等鋪平成方形，用藥鏟刀子或其它適當(dāng)器具，從中劃一 “十”字或以對角線相連接，將樣本分成4等份，除去對角的兩份，將剩余的兩份，如前述混合均勻后中，再分成4個等份，重復(fù)上述過程，直至剩余樣本與分析樣本

6、所需用量相接近時為止。對于大量的籽實粉末和等均勻性飼料的分析樣本采樣，也可在潔凈的地板上堆成錐形，然后將堆移至另一處，移動時將每一鏟飼料倒于前一鏟飼料之上，這樣使籽實粉末由錐頂向下流動到周圍，如此反復(fù)移動三次以上，即可混合均勻。最后，將飼料堆成圓錐形，將頂部略壓平成圓臺狀，再從上部中間分割為十字形4等份，棄去對角線的兩等份，縮減二分之一，然后，如上法縮減至適當(dāng)數(shù)量為止。一般飼料樣本縮減取樣至500g左右作為分析用樣本，送實驗室供化學(xué)分析之用。對于不均勻的物料如各種粗飼料塊根塊莖飼料家畜屠體等，則需要較復(fù)雜的采樣技術(shù)。其復(fù)雜程度隨物料體積的大小和不均勻程度而定，一般可采用“幾何法”取樣，具體方法

7、如下：把整個一堆物料看成一種規(guī)則的幾何體，如立方體圓錐體圓柱體等，取樣時先將該立體分成若干體積相等的部分（或在想象中將其分開），這些部分必須是在原樣中均勻分布的，而不只是在表面或只是在一面。從這些部分取出體積相等的樣本，稱之為支樣，將這些支樣混合后即為“初級樣本”。如此，重復(fù)取樣多次，得到一系統(tǒng)逐漸減少的樣本叫“初級”“次級”“三級”等樣本，然后由最后一級樣品中制備分析用樣本。對配合飼料或混合飼料的取樣，其采樣方法相對而言比較容易。如在水平臥式或垂直式混合機（攪拌機）里的飼料采樣，只要確定飼料已充分混合均勻了，就可以直接從混合機的出口處定期（或定時）地取樣，而取樣的間隔應(yīng)該是隨機的。混合飼料中

8、不同的成分的顆粒大小及吸濕性可能不一樣，這將給混合飼料準確采樣帶來麻煩。因此，在某些情況下，可將混合飼料含有的成分單獨進行分析。但必須注意在稱重上要準確無誤并且是混合均勻的飼料。采樣的原則是所采集的樣本必須具有代表性。為此，應(yīng)遵循正確的采樣方法，盡可能地采取被檢測飼料的各個不同部分，并把它們磨碎至相當(dāng)程度（粉碎粒度要求4060目），以有利于增加其均勻性和便于溶樣。三、采樣與制備方法（一） 粉料與顆粒料 對于磨成粉未的各種谷物和糠麩以及配合飼料或混合飼料，預(yù)混料等飼料的采樣，由于貯存的方式不同，又分為散裝袋裝倉裝三種。所選用的取樣器探棒，又稱探管或探槍，可以是有槽的單管或雙管，具有銳利的尖端。1

9、.散裝散裝的原料應(yīng)在機械運輸過程的不同場所（如滑運道供送帶等處）取樣。 如果在機械運輸過程中未能取樣，可用探棒取樣，但應(yīng)該避免因飼料原料不勻而造成的錯誤取樣。（1）散裝車箱原料及產(chǎn)品：使用抽樣錐自每車至少10不同角落處采樣。方法是使用短柄大錐的探棒，從距離邊緣0.5m和中間五個不同的地方，不同的深度選取。將從汽車運輸散狀和顆粒產(chǎn)品中采取的原始樣本置于樣本容器容器后，并以“四分法”縮樣。（2）散裝貨柜車原料及產(chǎn)品：從專用汽車和火車車廂里采取散裝和顆粒狀產(chǎn)品的原始樣本可使用抽樣錐，自貨柜車58個不同角落處抽取樣品，也可以卸車時用長柄勺，自動選樣器或機械選樣器等，間隔相同時間，截斷落下的料流采取，置

10、于樣本容器中混合后，再按“四分法”縮樣至適量。2袋裝（包裝）關(guān)于袋裝原料的取樣，可以人袋裝貨運時應(yīng)用探棒從幾個袋中取樣，以獲得混合的樣品。一般可按原料總袋數(shù)的10% 采取原始樣本。（1）袋裝車廂原料及產(chǎn)品：用抽樣錐隨意的自至少10% 袋數(shù)的飼料中取樣。方法是對編織袋包裝的散狀或顆粒狀飼料的原始樣本，用取樣器從料袋的上下兩個部位取樣，或?qū)⒘洗牌?，從料袋的頭到底斜對角插入取樣器，插取樣器前用軟刷刷凈選定的位置，插入時應(yīng)使槽口向下，然后轉(zhuǎn)180º，再取出。取完樣本后將袋口封好;而用聚乙烯襯的紙袋或編織袋包裝的散裝成品的原始樣本，則用短柄錐形袋式，大號取樣器從拆了線的料袋內(nèi)上中下三個部位采

11、樣。對顆粒狀產(chǎn)品的原始樣本，是用勺子在拆了線的口袋取樣。將采取的原始樣本置于樣本容器中混合后，按“四分法”縮樣至適量。袋裝飼料采樣方案見表2-1。表2-1袋裝飼料采樣方案飼料包裝單位（袋）取樣包裝單位（袋）10以下10100每袋取樣隨機化選取10袋100以上從10個包裝單位取樣，每增加100個包裝單位需補采3個單位（2）袋裝貨柜車原料及產(chǎn)品：使用抽樣錐隨意的自至少10% 袋數(shù)的飼料中取樣，置于樣本容器中混合后再縮樣至適量。3倉裝一種方法是在飼料進入包裝車間或成品庫的流水線或傳送帶上，貯塔下料斗下秤上或工藝設(shè)備上采取原始樣本。其方法是用長柄勺，自動或機械式采樣器，間隔時間相同，截斷落下的飼料流。

12、選擇的時間應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品移動的速度來確定，同時要考慮到每批采取的原始樣本的總重量。對于飼料磷酸鹽、動物飼料粉和魚粉應(yīng)不少于2kg，而其它飼料產(chǎn)品則不低于4kg。另一種是貯藏在飼料庫中的散裝產(chǎn)品的原始樣本的采取，料層在1.5m以下時用車廂和探棒取樣，料層在1.5m以上時，使用有旋桿的探管取樣。采樣前先將表面劃分成六個等分，在每一部分的四方形對角線的四角和交叉點五個不同地方采樣。料層厚度在0.75m以下時，從兩層中采取,即從距料層表面1015cm深處的上層和靠近地面上的下層采取。當(dāng)料層厚度在0.75cm時，應(yīng)從三層中采取，即從距料層表面1015cm深處的上層、中層和靠近地面的下層采取。在任何情況下，原

13、是樣本都是先從上層，然后是中層，下層依次采取的。顆粒狀產(chǎn)品的原始樣本使用長柄勺或短柄大號錐形探管，在不少于30cm深處采取的。貯藏在貯塔中的散狀或顆粒狀產(chǎn)品的原始樣本的取樣，是在其移入另一貯塔或倉庫時采集的。將所采取的原始樣本（包括散裝、袋裝和倉裝）混合攪拌均勻，用四分法采取500g樣品，用粉碎機粉碎過1mm篩網(wǎng)，混合均勻后盛于兩個樣品瓶中，一份供鑒定或分析化驗用，另一份供檢查用（注意封閉，放置干燥潔凈處保存一個月）。如為不易粉碎的樣品，則應(yīng)盡量磨碎。尤其要注意的是，如果所采取的樣本為添加劑預(yù)混料，由于其粒度較小，故制備時應(yīng)避免樣品中小顆粒的丟失。（二）液體原料1動物性油脂在一批飼料中由10%

14、的包裝單位中采集平均樣本，最少不低于三個包裝單位。在每一包裝單位（如桶）中的上、中、下三層分別取樣，由一批飼料中采取的平均樣本為600g左右。所使用的取樣工具是空心探針（這種取樣器是一個鍍鎳或不銹鋼的金屬管子），直徑為25mm，長度為750mm，管壁具有長度為715mm，寬度為18mm的空，孔的邊緣應(yīng)為圓滑的，管的下端應(yīng)為圓錐形的，與內(nèi)壁成15°角，管上端裝有把柄。采樣時先打開裝有飼料油脂的容器，然后在距油脂層表面深約50cm處取樣。油脂樣本應(yīng)放在清潔干燥的罐中，通過熱水浴加熱至油膏狀充分攪拌均勻。2糖蜜糖蜜等濃稠飼料由于富有粘性或含有固形物，故其取樣方法特殊。一般可在其卸料過程中采

15、用抓取法采樣，可定時用勺等器皿隨機取樣（約500g）即可。例如，分析用糖蜜平均樣本可直接由工廠的鐵路槽車或倉庫采集。用特制的采樣器通過槽車和倉庫上面的艙口在上、中、下三層采集。所采集的樣本體積為每噸糖蜜至少1L。原始樣本用木鏟充分攪拌后即可作為平均樣本。（二） 副食及釀造加工副產(chǎn)品 這類飼料包括酒糟、粉渣、豆渣等。其采樣方法是：在木桶、貯藏池或貯藏堆中分上、中、下三層取樣，按桶、池或堆的大小每層取510個點，每個采樣點取100g放入瓷桶內(nèi)充分混合隨機取分析樣本約500g，用其中200g測定初水分，其余放入大瓷盤中，在6065恒溫干燥箱中干燥。豆渣和粉渣等含水較多的樣本，在采樣過程中應(yīng)注意勿使汁

16、液損失及時測定干物質(zhì)百分含量。為避免腐敗變質(zhì)，可滴加少量氯仿或甲苯等防腐劑。（三） 油餅類 大塊的油餅類采樣，一般可以從堆積油餅的不同部位選取不少于五大塊，然后從每塊中切取對角的小三角形（見圖2-3），將全部小三角形塊錘碎混合后，再用“四分法”取分析樣本約200g左右，經(jīng)粉碎機粉碎后裝入樣本瓶中。小塊的油餅，要選取具有代表性者數(shù)10片，粉碎后充分混合，用“四分法”取供分析的樣本約200g。圖2-3 塊餅類飼料采樣示意圖（ 引自胡堅主編動物飼養(yǎng)學(xué)實驗指導(dǎo)）（四） 塊根、塊莖和瓜類 此類飼料因其含水分多和不均勻性，采樣時應(yīng)由多個單獨樣本以消除每個樣本間的差異。樣本個數(shù)的多少，根據(jù)成熟均勻與否，以及

17、所測定的營養(yǎng)成分而定，詳見表2-2。表2.2塊根、塊莖和瓜類取樣數(shù)量（引自張麗英主編飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù),）種類個數(shù)（個）一般的塊根塊莖飼料1020馬鈴薯 50胡蘿卜 20南瓜 10采樣方法：從田間或貯藏窖內(nèi)隨機分點采取原始的15kg，按大、中、小分堆稱重求出比例，按比例取5kg，先用水洗干凈，洗滌時注意勿損傷樣本的外皮，洗滌后用布拭去表面的水分。然后，從各個塊根的頂端至根部縱切具有代表性的對角1/4，1/8或1/16直至適量的分析樣品，迅速切碎后混合均勻取300g左右測定初水分，其余樣本平鋪于潔凈的瓷盤內(nèi)或用線串連置于陰涼通風(fēng)處風(fēng)干23天，然后在6065度的恒溫干燥箱中烘干。（六）新鮮

18、青綠飼料及水生飼料 牧地青飼料可按牧地類型劃分地區(qū)分點采樣，每區(qū)選5個以上的采樣點，每個采樣點一平方的范圍，在此范圍內(nèi)離地面34cm處割取牧草，除去不可食草，將各點原始樣品剪碎，混合均勻后取分析樣品5001000g。栽培的青綠飼料應(yīng)視田地面積的大小按上述方法等距離分點，每點采1至數(shù)株，切碎混合后取分析樣本（見圖2-4）。此法也適用于水生飼料，但應(yīng)注意采樣后要晾干樣品外表游離水分，然后切碎取分析樣品。（七）青貯飼料 青貯飼料飼料的樣品一般在圓形窖青貯塔或長方形青貯壕內(nèi)采取。取樣前應(yīng)除去覆蓋的泥土，秸桿以及發(fā)霉變質(zhì)的青貯料。然后按圖2-5和2-6中所示的采樣點分層取樣，原始樣品重5001000g。

19、長方形青貯壕的采樣點視青貯壕長度大小可分為若干段，每段設(shè)采樣點分層取樣。（八）粗飼料 應(yīng)用“幾何法”在秸桿或干草的堆垛中選取五個以上不同部位的點采樣，每個點采樣約200g左右，作為原始樣品。然后將采取的原始樣品放在紙或塑料布上，剪成12cm長度，充分混合后取分析樣品約300g，粉碎過篩裝瓶。應(yīng)當(dāng)注意的是，在采取原始樣本和分析樣本過程中，應(yīng)盡量避免葉片的脫落損失，影響其營養(yǎng)成分的含量，制備樣品時少量難以粉碎的秸桿渣屑應(yīng)當(dāng)捶碎弄細均勻混入全部分析樣品中，決不能丟棄，保持樣品的完整性或具有代表性。實驗二 飼料水分的測定按照概略養(yǎng)分分析程序，飼料中營養(yǎng)物質(zhì)首先可以分成水分和干物質(zhì)。測定飼料的水分含量，

20、就可以計算出干物質(zhì)量。飼料中的水分包括游離水和結(jié)合水，因此測定也可以分兩步進行，先測定初水分（游離水），再測定吸附水（結(jié)合水），然后計算出飼料的總水分。飼料水分的測定方法可分為直接法和間接法兩大類。直接法是利用飼料水分自身的理化性質(zhì)來測定的，常用的有重量法（常壓干燥法、減壓干燥法、蒸餾法等）和化學(xué)法（如卡爾.費希爾法）。間接法是利用水分含量與其物理化學(xué)性質(zhì)的相關(guān)性為基礎(chǔ)的方法。此外，近紅外吸收光譜法、中子活化法、氣相色譜法以及核磁共振譜等近代儀器分析方法已引入飼料水分測定中。但這些方法需要價格昂貴的儀器，不易普及。在具體分析工作中，還應(yīng)考慮飼料中是否有揮發(fā)性物質(zhì)存在、是否需低溫真空、某些化合物

21、是否可起化學(xué)變化等, 具體情形不同，采用的分析方法也不同，現(xiàn)行飼料水分測定仍以干燥法為標準分析方法。測定飼料中水分，不僅間接獲得了干物質(zhì)含量；同時也為其它營養(yǎng)成分的分析制備分析樣品，使不同飼料中各種營養(yǎng)成分的相互比較有一致的基礎(chǔ)；對飼料在貯存、加工、運輸過程中防止某些營養(yǎng)成分的轉(zhuǎn)化、變性、霉爛等，都有指導(dǎo)意義。一、水分的表示方法飼料水分含量有兩種表示方法。一種是以包括全部水分在內(nèi)的原樣（鮮樣）基礎(chǔ)表示，即：水分（%）= ×100 （3-1）式中，W為飼料重量（g）；W水為水分重量（g）另一種是以干物質(zhì)為基礎(chǔ)的，即：水分（%）= ×100 （3-2）式中，W水為水分重量（g）

22、；W干為飼料中干物質(zhì)重量（g）。不僅水分，飼料中的其它各種成分的含量，也有上述兩種表示方法。由于飼料在放置和分析過程中，其水分因蒸發(fā)而減少，而干物質(zhì)則不會因水分的變化而受影響，故各種成分的含量常以干物質(zhì)為基礎(chǔ)來表示。二、烘箱干燥法烘箱干燥法是AOAC的方法，將樣品放在105土2烘箱中烘至恒重，所失重量即代表水分含量。這種方法有一定誤差，因為在水分蒸發(fā)的同時，一些短鏈脂肪酸和有機酸等易揮發(fā)性物質(zhì)有揮發(fā)損失。（一） 原理 將風(fēng)干(或半于)試樣置于105±2烘箱中，在一個大氣壓下烘干，直至恒重，烘后所失去的重量即為吸附水。實際上在此溫度下烘干所失去的不僅是吸附水，還含有一部分膠體水分，此外

23、，也有少量揮發(fā)油揮發(fā)及少量碳水化合物分解。與此同時，試樣中的脂肪也可能氧化而使重量增加。本法適用于測定配合飼料及單一飼料中的吸附水含量。對用作飼料的奶制品、植物及動物的油脂等除外。 （二）儀器設(shè)備1分析天平：感量0.0001g；2實驗室用樣品粉碎機或研缽；3分樣篩：40目、60目； 4電熱式恒溫干燥箱（烘箱）：可控溫度為105土2；5干燥器：用氯化鈣或變色硅膠作干燥劑；6稱樣皿：玻璃或鋁質(zhì)，直徑為40mm以上，高25mm以下；7坩堝鉗和藥匙。（三 ） 試樣的選取與制備1選取1000g以上具有代表性的原始樣本；2用四分法將原始樣本縮至500g，風(fēng)干后粉碎過40目篩，再用四分法縮至200g，裝入密

24、封容器，放陰涼干燥處保存；3如試樣是多汁的鮮樣，或無法粉碎時，應(yīng)預(yù)先干燥處理，稱取200300g，在105土2烘箱中烘15min，立即降至65，烘干56h。取出后，在室內(nèi)空氣中冷卻使水分含量達到當(dāng)?shù)匾话闼?，稱重，即得風(fēng)干試樣,同時計算初水分含量。（四）測定步驟1取潔凈稱樣皿置于105土2烘箱中烘1h取出，在干燥器中冷卻30min(冷卻至室溫)，稱重(準確稱至0.0002g)。2將稱樣皿再烘30min，同樣冷卻，稱重，至兩次重量之差小于0.0005g為恒重3用已恒重的稱樣皿稱取2份平行試樣，每份25g(含水量0.1g以上，試樣厚度為4mm以下)。準確稱至0.0002g。4將稱樣皿半開蓋，在10

25、5土2烘箱中烘3h(以溫度至105開始計時)后取出，蓋好稱樣皿蓋，在干燥器中冷卻30min，稱重。5再同樣烘干1h，冷卻，稱重，至兩次重量之差小于0.002g為止，以其中較小的值進行計算。測定吸附水后的試樣，可保留作測粗脂肪和粗纖維之用。(五) 測定結(jié)果計算1 計算公式：水分（）=×100 =×100 （3-3）式中：W1105土2烘干前試樣及稱樣皿重量，g；W2105土2烘干后試樣及稱樣皿重量，g；W0已恒重的稱樣皿重量，g）。2重復(fù)性 每個試樣，應(yīng)取兩個平行樣進行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。兩個平行樣測定值相差不得超過0.2%，否則應(yīng)重做。3如果按上述(三) 3步驟進行

26、過預(yù)先干燥處理（指多汁的鮮樣），則應(yīng)按下式計算原來試樣中所含水分總量：原樣總水分（%）=初水分（%）+100%初水分（%）×風(fēng)干試樣吸附水（%）說明：某些含脂肪高的樣品，烘干時間長反而增重，乃脂肪氧化所致，應(yīng)以增重前那次稱量為準。含糖分高的易分解或易焦化試樣，應(yīng)使用減壓干燥法測定水分。實驗三 飼料粗灰分的測定粗灰分是飼料樣品在高溫爐中將所有有機物質(zhì)全部氧化后剩余的殘渣。主要為礦物質(zhì)氧化物或鹽類等無機物質(zhì)，有時還含有少量泥沙?；曳址炙苄耘c水不溶性，酸溶性與酸不溶性。水溶性灰分大部分是鉀、鈉、鈣、鎂等氧化物和可溶性鹽，水不溶性灰分除泥沙外，還有鐵、鋁等的氧化物和堿土金屬的堿式磷酸鹽。酸

27、不溶性灰分大部分為污染摻入泥沙和原來存在于動植物組織中經(jīng)灼燒成的二氧化硅。測定粗灰分，可掌握飼料中的灰分總量，了解不同生長期、不同器官中灰分的變動情況；也可在此基礎(chǔ)上測定灰分中組成元素的含量。此外，測定粗灰分對飼料品質(zhì)鑒定也有參考意義，若含量過高，飼料中可能混入砂石、土等。一、測定原理試樣在550灼燒后，所得殘渣，用質(zhì)量百分數(shù)表示。殘渣中主要是氧化物，鹽類等礦物質(zhì)，也包括混入飼料中的砂石、土等，故稱粗灰分。二、儀器和設(shè)備1實驗室用樣品粉碎機或研缽。2分析篩：40目。3分析天平：感量0.0001。4高溫電爐：電加熱，有溫度計且可控制爐溫在550±20。5坩堝：50ml，瓷質(zhì)。6坩堝鉗7

28、干燥器：用氯化鈣（干燥試劑）或變色硅膠為干燥劑。三、測定步驟1 坩堝恒重：將干凈坩堝放入高溫爐中，在550±20下灼燒30min。取出，在空氣中冷卻約1min，放入干燥器中冷卻30min，稱重。再重復(fù)灼燒，冷卻、稱重，直至兩次質(zhì)量之差小于0.0005為恒重。2稱樣品：在已知質(zhì)量的坩堝中稱取25試樣（勿使樣品高于坩堝深度的1/2，灰分質(zhì)量應(yīng)在0.05以上）。3炭化：將盛有樣品坩堝放在電爐上，坩堝蓋須留一小縫隙，小心炭化，在炭化過程中，應(yīng)在低溫狀態(tài)加熱灼燒直至無煙，然后升溫灼燒至樣品無炭粒（勿著明火）。4灰化及稱恒重：將炭化至無煙坩堝用坩堝鉗移入高溫爐內(nèi)，坩堝蓋須留一小縫隙，在550&#

29、177;20下灼燒3，待爐溫降至200以下，取出，在空氣中冷卻約1min，放入干燥器中冷卻30min，稱重。再同樣灼燒1，冷卻、稱重，直至兩次質(zhì)量之差小于0.001為恒重。四、測定結(jié)果的計算1. 計算公式 試樣中粗灰分含量（%）按下式計算：粗灰分（%） （3-28）式中：已恒重空坩堝的質(zhì)量，；坩堝加試樣的質(zhì)量，；灰化后坩堝加灰分的質(zhì)量，。2.允許差 每個試樣應(yīng)取兩個平行樣進行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。粗灰分含量在5以上時，允許相對偏差為1；粗灰分含量在5以下時，允許相對偏差為。五、注意事項1坩堝的準備：新坩堝編號，將帶蓋的坩堝洗凈烘干后，用鋼筆蘸5·氯化鐵墨水溶液（稱0.5FeCl

30、3·62溶于100l水中）編號，然后于高溫爐中550灼燒30min即可。2試樣開始炭化時，坩堝蓋須留一小縫隙，便于氣流流通；溫度應(yīng)逐漸上升，防止火力過大而使部分樣品顆粒被逸出的氣體帶走。3為了避免試樣氧化不足，不應(yīng)把試樣壓得過緊，應(yīng)松松放在坩堝內(nèi)。4灼燒溫度不宜超過600，否則會引起磷、硫等鹽的揮發(fā)。5灰化后樣品應(yīng)呈白灰色，但其顏色與試樣中各元素含量有關(guān)，含鐵高時為紅棕色，含錳高為淡藍色。如有明顯黑色炭粒時，為炭化不完全，可在冷卻后加幾滴硝酸或過氧化氫，在電爐上燒干后再放入高溫爐灼燒直至呈白灰色。實驗四 飼料粗蛋白質(zhì)的測定蛋白質(zhì)是由氨基酸以肽鍵構(gòu)成的多肽高分子化合物，它存在于一切動植

31、物體中，是一切細胞和組織的基本組成成分，承擔(dān)著體內(nèi)各種復(fù)雜的生理、生化功能，它是體現(xiàn)生命現(xiàn)象的物質(zhì)基礎(chǔ)。動物從飼料中撮取蛋白質(zhì)及其分解產(chǎn)物，以組成自身的蛋白質(zhì)。因此，蛋白質(zhì)含量是評價飼料營養(yǎng)價值的主要指標。各種蛋白質(zhì)中都含有一定比例的氮。長期以來，人們通過測定飼料總氮量來估計蛋白質(zhì)含量。然而，各種飼料中除蛋白質(zhì)含有氮素外，還有一些化合物，如核酸，生物堿，含氮碳水化合物，含氮類脂、卟啉、酰胺，色素以及硝態(tài)氮等，也含有氮素。因此，用測定總氮量計算出的“蛋白質(zhì)”，實際上包括真蛋白和非蛋白氮物質(zhì)，總稱為粗蛋白質(zhì)。由總氮量換算蛋白質(zhì)含量時，通常采用系數(shù)6.25。這是按蛋白質(zhì)中平均含氮量為16%推算出來的

32、。其實，不同飼料中蛋白質(zhì)含氮比例是有差別的。因此，應(yīng)當(dāng)提倡不同飼料采用不同的比例系數(shù)。例如，蕎麥、玉米，碗豆為6.25，稻米為5.95，全小麥，大麥、谷子為5.8，大豆為5.71，小麥麩為6.31，牛奶為6.38。只有對含氮比尚不清楚的飼料采用平均比例系數(shù)為6.25。蛋白質(zhì)的測定方法分為直接法和間接法兩類。直接法是利用蛋白質(zhì)物理性質(zhì)或化學(xué)性質(zhì)，直接測定蛋白質(zhì)含量的方法。常用的有紫外吸收光度法、折光法、雙縮脲法、酚試劑法、染料結(jié)合法等，但其中有些方法不適合于混合飼料分析。間接法則是通過測定樣品中的總氮量，進而推算出蛋白質(zhì)含量的方法，即粗蛋白的測定方法。常用的有凱氏法，杜馬斯法，奈氏比色法和次氯酸

33、比色法等。長期以來，人們不斷致力于凱氏法的改進，在縮短消化時間和提高氮的回收率等方面作了大量深入的研究，目前已提出數(shù)十種催化劑。為提高凱氏法的儀器自動化水平，近年來已研制出幾種自動或半自動的蛋白質(zhì)分析儀。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，近代儀器分析方法如中子活化、分光光度法、X射線分光光度法、紫外分光光度法和紅外分光光度法等，也用于蛋白質(zhì)的測定中。一、 凱式定氮法凱式定氮法是1833年由凱達爾（Kjedehl）首創(chuàng)，后經(jīng)多人改進，迄今仍廣泛應(yīng)用于土壤、肥料、飼料和食品的分析中。此法具有較高的準確度和精確度，美國分析化學(xué)家協(xié)會（AOAC）、國際谷物化學(xué)協(xié)會（ICC）等組織都將其確定為法定分析方法。（一）原理

34、飼料中的有機物在濃硫酸作用下被消化，其中真蛋白質(zhì)和氨化物中N轉(zhuǎn)化為(NH4)2SO4中N，其它非氮物質(zhì)則以CO2、H2O和SO2逸出： 2CH3CHNH2COOH+13H2SO4（NH4）2SO4+6CO2+12SO2十16H2O （3-14）消化液在濃堿的作用下進行蒸餾，放出的NH3用硼酸吸收：(NH4)SO4+2NaOH2NH3十+2H2O+Na2SO4 （3-15）4H3BO3+NH3NH4HB4O7+5H2O （3-16）然后以甲基紅一溴甲酚綠作指示劑，用標準酸溶液滴定： NH4HB4O7+HCI+5H2O NH4CI+4H3BO3 （3-17）根據(jù)酸標準溶液的濃度和消耗的體積，即可計

35、算出氮的含量，乘以相應(yīng)的蛋白質(zhì)換算系數(shù)(一般用6.25)，即為粗蛋白質(zhì)含量。(二) 儀器設(shè)備（1）實驗室用樣品粉碎機或研缽；（2）分樣篩：40目；（3）分析天平：感量0.000lg；（4）消煮爐或電爐；（5）滴定管：酸式，25ml、10ml；（6）凱氏燒瓶：250或500ml；（7）凱氏蒸餾裝置：常量直接蒸餾式、微量蒸餾式或半微量水蒸汽蒸餾式；（8）錐形瓶：150或250m1；（9）容量瓶：100ml；（10）通風(fēng)櫥。(三) 試劑（1）硫酸：化學(xué)純；（2）硫酸銅：化學(xué)純；（3）硫酸鉀或硫酸鈉：化學(xué)純；（4）氫氧化鈉：分析純，40g溶于100ml水配成40%水溶液(WV)；（5）硼酸：分析純，2

36、g溶于100ml水配成2%溶液(WV)；（6）混合指示劑：甲基紅0.1乙醇溶液，溴甲酚綠0.5乙醇溶液，兩溶液等體積混合，陰涼處保存期三個月以內(nèi)；（7）0.05N鹽酸標準溶液(鄰苯二甲酸氫鉀法標定)：4.2ml鹽酸（GB 622，分析純）用蒸餾水定容到1000ml；（8）蔗糖：分析純；（9）硫酸氨：分析純。(四) 試樣的選取與制備 取具有代表性試樣，粉碎至40目，用四分法縮減至200g，裝于密封容器中，防止試樣成分的變化或變質(zhì)。液體或軟膏狀粘液試樣應(yīng)注意取樣的代表性。用干凈的可放入凱式燒瓶的小玻璃容器稱樣。（五）測定步驟1試樣的消煮 稱取0.51g試樣(含氮量580mg，準確至0.0002g)

37、，于光潔紙上，卷成圓筒水平插入燒瓶中，無損失地倒入凱氏燒瓶底部，加入硫酸銅0.9g，無水硫酸鉀(或硫酸鈉)15g，與試樣混合均勻，再加濃硫酸25mI和2粒玻璃珠，在消煮爐上小火加熱，待樣品焦化，泡沫消失，再加強火力(360410)直至溶液澄清后，再繼續(xù)加熱至少30min.。2氮的蒸餾（1）常量直接蒸餾法（主要用于含氮量低的樣本）：蒸餾裝置見圖33。將(五).1中的試樣消煮液冷卻，加蒸餾水200ml，搖勻，冷卻。沿瓶壁小心加入40%氫氧化鈉溶液100ml，立即與蒸餾裝置相連。蒸餾裝置冷凝管口浸入50ml 2硼酸溶液內(nèi)，加混合指示劑2滴輕搖凱氏燒瓶，使溶液混勻，加熱蒸餾，直到餾出液體積約為150m

38、1。移動三角瓶，使冷凝管口離開液面，再蒸餾1min.。用少許蒸餾水沖管口，移開三角瓶，即可滴定。（2）半微量蒸餾法：蒸餾裝置見圖34將試樣的消煮液冷卻，加蒸餾水20ml，轉(zhuǎn)入100ml容量瓶，冷卻后用水稀釋至刻度，搖勻，為試樣分解液。取20ml2硼酸溶液，加混合指示劑2滴，使半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入此溶液蒸餾裝置的蒸氣發(fā)生器的水中應(yīng)加甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，且保持此液為橙紅色否則補加硫酸。準確移取試樣分解液1020ml注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中。用少量蒸餾水沖洗進樣入口。塞好入口玻璃塞，再加10ml40%氫氧化鈉溶液，小心提起玻璃塞使之流入反應(yīng)室，將玻璃塞塞好。且在入口處加水封好，防止漏

39、氣，蒸餾4min.，使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min.，用蒸餾水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液，準備滴定。（3）微量蒸餾法：蒸餾裝置見圖35微量蒸餾法的測定裝置和方法均與半微量法基本一致，只是所測樣本量較少，消耗的試劑相應(yīng)減少。3滴定 吸收氨后的吸收液立即用0.05N鹽酸標準溶液滴定，溶液由藍綠色變?yōu)榛壹t色為終點。4空白測定 稱取蔗糖0.1g，代替試樣，按上述步驟進行空白測定，消耗0.05N鹽酸標準溶液的體積不得超過0.3ml。(六) 測定結(jié)果的計算1計算公式：粗蛋白質(zhì)(%)=×F×100 （ 3-18）式中：V2滴定試樣時所需鹽酸標準溶液體積（ml）；VI滴定空白

40、時所需鹽酸標準溶液體積（ml）；C鹽酸標準溶液摩爾濃度（mol/l）；W試樣重量（g）；V4試樣分解液總體積（ml）；V3試樣分解液蒸餾用體積（ml）；0.0140氮的毫摩爾質(zhì)量；F 氮換算成蛋白質(zhì)的系數(shù)（平均值為6.25）。2重復(fù)性 每個試樣取兩平行樣進行測定以其算術(shù)平均值為結(jié)果。當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在25以上時，允許相對偏差為1，當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在1025時，允許相對偏差為2，當(dāng)粗蛋白質(zhì)含量在10以下時，允許相對偏差為3。(七) 測定步驟的檢驗精確稱取0.2g硫酸銨，代替試樣，按(五)的各步驟操作，按(六)的公式計算(但不乘系數(shù)6.25)測得硫酸銨含氮量為21.19土0.2，否則應(yīng)檢查加堿，蒸餾和

41、滴定各步驟是否正確。試樣消煮時，加入硫酸銅0.2g，無水硫酸鈉3g，與試樣混合均勻，再加濃硫酸10m1，仍可使飼料試樣分解完全，只是試樣焦化再變?yōu)槌吻逅钑r間略長些。實驗五 飼料脂類測定脂類包括脂肪和類脂脂肪是由一分子的甘油(丙三醇)和三分子的脂肪酸構(gòu)成，故又稱為甘油三酯類脂包括脂肪酸、磷脂，糖脂、固醇，蠟質(zhì)等。 脂類化合物分子中常含有長碳鏈或其它非極性基團，即具有疏水性，難溶于水，而易溶于乙醚、石油醚、四氯化碳等非極性溶劑或甲醇、氯仿等弱極性溶劑。由于不同樣品的脂類化合物中，碳鏈的長度和飽和程度以及脂的分子構(gòu)型等存在某些差異，所以，用不同溶劑作提取劑時，其測定結(jié)果也有差異。在實際分析工作中可

42、根據(jù)具體情況采用下列分析方法。一、 索氏提取法(一) 原理 索氏(Sohlet)法或乙醚萃取法的原理是根據(jù)飼料樣本中的脂類可溶于有機溶劑如乙醚，通過乙醚反復(fù)抽提，使溶于乙醚中的脂肪隨乙醚流注于盛醚瓶中，由于乙醚和脂肪的沸點不同，控制水浴溫度，蒸發(fā)去乙醚，盛醚瓶所增加的重量即為該樣本的脂肪量。由于游離脂肪酸、卵磷脂、蠟質(zhì)、麥角固醇、膽固醇、脂溶性維生素、葉綠素等物質(zhì)，亦溶于乙醚，故此法所測得脂肪不純，統(tǒng)稱為粗脂肪。(二) 儀器設(shè)備（1）實驗室用植物樣品粉碎機或研缽；（2）分樣篩：40目；（3）分析天平：感量0.0001g；（4）電熱恒溫水浴鍋：室溫100；（5）恒溫烘箱；（6）索氏脂肪提取器（見

43、圖36）：100ml或150m1；（7）濾紙或濾紙簡：中速脫脂（8）脫脂棉線；（9）干燥器：用氯化鈣(干燥級)或變色硅膠為干燥劑。（三）試劑乙醚：化學(xué)純(四) 試樣的選取與制備選取有代表性的試樣，用四分法將試樣縮減至500g，粉碎粒度為40目，再用四分法縮減至200g，于密封容器低溫或陰涼處保存防止成分變化和變質(zhì)。(五) 測定步驟 1將已洗凈的盛醚瓶置于105±2的烘箱中烘干30min.，而后取出于干燥器內(nèi)冷卻30min.，稱重。再烘干30min.，同樣冷卻、稱重，兩次重量之差小于0.001g為恒重2洗凈并裝置好脂肪提取器(干燥無水)，檢查裝置是否嚴密。3稱取試樣15g，準確至0.0

44、002g于濾紙筒中，或用濾紙包好，用脫脂棉線扎成一定大小的脂肪包(其高度不超過浸提管高度的23，寬度以能放入即可)。用鉛筆作上編號，置于105±2烘箱內(nèi)烘干2h(或稱測水分后的干試樣，折算成風(fēng)干樣重)取出待用。4用鑷子將濾紙筒或脂肪包放入浸提管內(nèi)，加少許乙醚，盛醚瓶中加乙醚60l00ml。在6075水浴鍋（用蒸餾水）上加熱，使乙醚回流，回流速度每h 46次，約經(jīng)816h，樣品中的脂肪即全部提出，或控制乙醚回流次數(shù)為每h約10次，共回流約50次（含油高的試樣約70次）或檢查抽提管流出的乙醚揮發(fā)后不留下油跡為抽提終點。5浸提完畢取出脂肪包，然后讓乙醚再回流一次，再開始回收乙醚，直至盛醚瓶

45、中乙醚幾乎全部收完。最后取下盛醚瓶，在水浴上蒸去殘余乙醚。用酒精棉擦凈瓶外壁。6將盛醚瓶置于105土2烘箱內(nèi)烘干1h，取出后于干燥器中冷卻20min.，稱重。再烘干30min.同樣冷卻稱重，至兩次重量之差小于0001g為恒重。(六)結(jié)果計算1計算 粗脂肪()= (3-20)式中：W風(fēng)干試樣質(zhì)量(g)。W1已恒重的盛醚瓶質(zhì)量(g)。W2已恒重的浸提后盛醚瓶質(zhì)量(g)。2重復(fù)性 每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果。 粗脂肪含量在10%以上(含10%)，允許相對偏差為3； 粗脂肪含量在10以下，允許相對偏差為5。二、魯氏殘留法（一）原理 ）殘留法的原理是用乙醚提取試樣后，樣品減少的重

46、量即為粗脂肪的含量。（二）儀器設(shè)備1實驗室用植物樣品粉碎機或研缽；2分樣篩：40目；3分析天平：感量0.0001g；4電熱恒溫水浴鍋：室溫100；5恒溫烘箱；6索氏脂肪提取器：（見圖36）100ml或150m1；7濾紙或濾紙簡：中速，脫脂8脫脂棉線；9干燥器：用氯化鈣(干燥級)或變色硅膠為干燥劑。（三）試劑 乙醚：化學(xué)純(四) 試樣的選取與制備 選取有代表性的試樣，用四分法將試樣縮減至500g，粉碎粒度為40目，再用四分法縮減至200g，于密封容器低溫或陰涼處保存防止成分變化和變質(zhì)。（五）操作步驟1將脫脂濾紙裁成10×10cm2大小，疊成一邊不封口的紙包，用鉛筆編號，按順序排列于培養(yǎng)

47、皿上，置于105土2烘箱中烘2h，取出放于干燥器中冷卻至室溫，分別放入同一稱量瓶中稱重(W0，g)。2將25g風(fēng)干樣品(通過40目篩)用小藥匙小心裝入已經(jīng)稱重的紙包中，封上包口。按順序排列于培養(yǎng)皿中置于105±2烘箱中烘3h，取出放入干燥器中冷卻至室溫，分別放入原稱量瓶中稱至恒重(WI，g)。3將樣品包放入抽提管中，倒入無水乙醚，使之剛超過樣品包高度，如圖36所示連接裝置，浸泡過夜然后將浸泡過樣品的無水乙醚放入抽提瓶中，再重新向抽提管中倒入無水乙醚，使之完全浸沒樣品包連接裝置，接通冷凝水，在7080水浴鍋中回流68h，回流速度以每分鐘20ml左右為宜抽提完畢，取出樣品包，在通風(fēng)處揮干

48、乙醚剩余乙醚可進行回收。4將樣品包仍按原序號排列在培養(yǎng)皿中，置于105±2烘箱中烘2h，取出放入干燥器中冷卻至室溫，再將樣品包放原稱量瓶中，稱至恒重(W2，g)。(六)結(jié)果計算粗脂肪含量（%）= （3-21）式中，W0濾紙+稱量瓶重(g)；W1提取前樣品包+稱量瓶重(g)；W2提取后樣品包+稱量瓶重(g)。上述兩種方法都是以乙醚為溶劑的提取方法，其優(yōu)點是具有較好的準確度和精密度，尤其是測定粗脂肪含量在5% 以下的樣品，用此法比較可靠。缺點是費工費時，反復(fù)提取需816h；另外乙醚不能將樣品中的全部脂肪提盡。這是因為部分脂肪常與蛋白質(zhì)或碳水化合物等非脂肪成分結(jié)合。成為結(jié)合態(tài)脂類，如脂蛋白

49、、糖脂、磷酯等，同時樣品也必須是烘干的，因乙醚難以滲入含水樣品的組織內(nèi)部。在烘干樣品時，又應(yīng)考慮到脂肪在高溫下易被空氣氧化等情況。附1：Tecator公司脂肪測定儀操作步驟以下操作步驟適用于瑞典Tecator公司生產(chǎn)的Soxteoc System HT6傳統(tǒng)的索氏脂肪浸提法因它的精確性和重復(fù)性而被世界所公認但其缺點是手工索氏浸提法操作太費時間脂肪測定儀既采用經(jīng)典索氏浸提法原理，又可大大縮短浸提時間，它將浸提過程分為高溫沸騰浸提與沖洗浸提兩個步驟，整個浸提過程一般只需3060min以樣品類型而定，從而可以快速測定試樣中的粗脂肪含量操作步驟1打開恒溫加熱裝置開關(guān)，控制工作溫度為75；2用萬分之一分

50、析天平稱2g左右的樣品(準確至0.0002g) (W1)，放入濾紙筒內(nèi)烘干；3用套筒夾將6個濾紙?zhí)淄惭b入浸提冷凝管內(nèi)，當(dāng)確信套筒已被磁鐵吸牢后取下套簡夾；4用分析天平稱浸提杯重量(W2)，然后加入約50ml無水乙醚，用杯托將6個浸提杯放在加熱板上，再將冷凝管提升機構(gòu)搬下，使浸提懷與冷凝管連接好；5事先接通浸提冷凝管的冷卻水將濾紙筒置于“沸騰”位置。冷凝管應(yīng)有良好的冷凝作用；6無水乙醚沸騰15mln或30min(依樣品含油量而異)后，將濾紙筒提升到“沖洗”位置，沖洗30min或45min；7沖洗結(jié)束后，關(guān)閉冷凝管旋塞閥，回收乙醚；8松開冷凝管提升機構(gòu)，取下浸提杯，并放入烘箱烘干；9在干燥器中冷卻

51、浸提杯然后用分析天平稱重(W3)；10按以下公式計算樣品中粗脂肪含量。粗脂肪(%)= （3-24）實驗六 飼料粗纖維測定粗纖維（crude fiber，CF）是植物細胞壁的主要成分，包括纖維素、半纖維素、木質(zhì)素及角質(zhì)等成分。一 、原理粗纖維的常規(guī)測定法是在公認的強制規(guī)定條件下測定。將試樣用一定容量和一定濃度的預(yù)熱硫酸和氫氧化鈉溶液煮沸消化一定時間，再用乙醇和乙醚除去醚溶物，經(jīng)高溫灼燒扣除礦物質(zhì)的剩余物為粗纖維。當(dāng)用稀酸處理時，淀粉、果膠和部分半纖維素被溶解；當(dāng)用稀堿處理時，又可除去蛋白質(zhì)和部分半纖維素、木質(zhì)素、脂肪；用乙醇和乙醚處理時，可除去單寧、色素、脂肪、蠟質(zhì)以及部分蛋白質(zhì)和戊糖。用這種方

52、法測得的“粗纖維”實際上是以纖維素為主，還有少量半纖維素和木質(zhì)素的混合物。二、儀器設(shè)備（1）實驗室用樣品粉碎機或研缽（2）分樣篩：40目；（3）分析天平：感量0.0001g；（4）消煮器：有冷凝球的500ml燒杯，或有冷凝管的錐形瓶；（5）布氏漏斗：直徑6cm；（6）抽濾瓶：5001000ml；（7）濾布：100支紗的麻綢或200目的尼龍網(wǎng)布；（8）真空抽氣機(真空泵)；（9）電熱式恒溫箱(烘箱)；（10）干燥器：用氯化鈣或變色硅膠作干燥劑；（11）高溫爐(茂福爐)：電加熱，有高溫計且可控制爐溫在550600；（12）古氏坩堝：30ml，預(yù)先加入30ml酸洗石棉懸浮液，再抽干，以石棉厚度均勻，

53、不透光為宜；（13）電爐或電熱板。三、試劑（1）硫酸 分析純，0.255土0.005N，每100ml含硫酸1.25g，應(yīng)用氫氧化鈉標準溶液標定；（2）氫氧化鈉 分析純，0.313土0.005N，每100ml含氫氧化鈉1.25g應(yīng)用磷苯二甲酸氫鉀法標定；（3） 石棉 市售或自制中等長度酸洗石棉置于蒸發(fā)皿中，在600灼燒16h，用1.25%硫酸溶液浸泡并煮沸30min，過濾并用水洗至中性。同樣用1.25%氫氧化鈉溶液煮沸30min.，過濾并用少量1.25%硫酸溶液洗一次，再用水洗凈，烘干后于600灼燒2h，其空白試驗結(jié)果為每克石棉含粗纖維值小于Img；（4）95%乙醇：化學(xué)純；（5）乙醚；化學(xué)純；

54、（6）正辛醇：分析純，防泡劑。四、試樣的選取與制備選取有代表性的試樣，用四分法將試樣縮減至500g，粉碎粒度為40目，再用四分法縮減至200g，于密封容器低溫或陰涼處保存防止成分變化和變質(zhì)。五、測定步驟1稱取12g試樣，準確稱至0.0002g，用乙醚脫脂(試樣含脂肪量低于1%時可不脫脂也可用測定脂肪后的試樣殘渣)放入消煮器。2加入煮沸的0.255N硫酸溶液200ml和1滴正辛醇(防泡劑)立即加熱，使其在1min內(nèi)沸騰并連續(xù)微沸30min注意保持硫酸濃度不變(可補加沸蒸餾水)，并避免試樣粘貼在液面以上的杯壁。3微沸30min后立即停止加熱，用鋪有濾布的布氏漏斗過濾，將200ml濾液在10min內(nèi)全部濾凈再用沸蒸餾水反復(fù)沖洗殘渣，直至濾液不使藍色石蕊試紙變紅為止。4取下不溶物，放入原容器中，加入煮沸的0.313N氫氧化鈉溶液，立即加熱，使其在1min內(nèi)沸騰，同樣準確微沸30min。5立即在鋪有石棉的