天津大學(xué)生物化學(xué)課件Lecture08Enzymes

1、酶酶第五章第五章 酶酶 酶的概念酶的概念 酶的分類(lèi)與命名酶的分類(lèi)與命名 酶的化學(xué)本質(zhì)酶的化學(xué)本質(zhì) 酶的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系酶的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 酶作用的專(zhuān)一性酶作用的專(zhuān)一性 酶的作用機(jī)制酶的作用機(jī)制 酶促反應(yīng)的速度和影響因素酶促反應(yīng)的速度和影響因素 酶活力的測(cè)定酶活力的測(cè)定 酶的制備酶的制備 酶的應(yīng)用酶的應(yīng)用酶的概念酶的概念 酶是生物催化劑酶是生物催化劑 酶的特點(diǎn)酶的特點(diǎn): 1) 催化效率高催化效率高; 2) 高度的專(zhuān)一性高度的專(zhuān)一性; 3) 對(duì)環(huán)境條件極為敏感對(duì)環(huán)境條件極為敏感 新陳代謝的調(diào)控多是通過(guò)酶來(lái)進(jìn)行的新陳代謝的調(diào)控多是通過(guò)酶來(lái)進(jìn)行的酶的命名酶的命名CHOHCH3COO-+ NAD+CC

2、H3COO-O+ NADH + H+EC 1. 1. 1. 27乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶酶學(xué)委員會(huì)縮寫(xiě)酶學(xué)委員會(huì)縮寫(xiě)表示第一大類(lèi)表示第一大類(lèi),即氧化還原酶即氧化還原酶 表示第一亞類(lèi)表示第一亞類(lèi),即被氧化基團(tuán)為即被氧化基團(tuán)為CHOH基基亞亞類(lèi)的順序號(hào)亞亞類(lèi)的順序號(hào)表示第一亞亞類(lèi)表示第一亞亞類(lèi),氫受體為氫受體為NAD+酶的分類(lèi)酶的分類(lèi) 氧還酶氧還酶 AH2 + B A + BH2 轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)移酶 AR + B A + BR 水解酶水解酶 AB + H2O AOH + BH 裂解酶裂解酶 AB A + B 異構(gòu)酶異構(gòu)酶 A B 合成酶合成酶 A + B + ATP AB + ADP + Pi氧還酶實(shí)例氧還

3、酶實(shí)例CH3CH2OHH3CCOHEthanolAcetaldehydeNAD+NADH + H+Alcohol dehydrogenase (EC 1.1.1.1)(oxidation with NAD+)轉(zhuǎn)移酶實(shí)例轉(zhuǎn)移酶實(shí)例OHOHOHHHOHHOHCH2OHHOHOHOHHHOHHOHCH2OPO32-HD-GlucoseD-Glucose-6-phosphateATPADP Hexokinase (EC 2.7.1.2)(phosphorylation)水解酶實(shí)例水解酶實(shí)例NCCONCCOO-RnHHRn-1HHNCCOO-H3NCCOO-RnHRn-1HH+ Carboxypepti

4、dase A (EC 3.4.17.1)(peptide bond cleavage)C-terminus of polypeptideH2O裂解酶實(shí)例裂解酶實(shí)例-OOCCCH3O+H+CO2+HCCH3OPyruvateAcetaldehydePyruvate decarboxylase (EC 4.1.1.1) (decarboxylation)異構(gòu)酶實(shí)例異構(gòu)酶實(shí)例HCOO-OOCHCOO-H-OOCHMaleateFumarate Maleate isomerase (EC 5.2.1.1)(cis-trans isomerization)合成酶實(shí)例合成酶實(shí)例-OOCCOCH3+CO2-

5、OOCCOCH2COO-PyruvateOxaloacetateATP ADP + PiPyruvate carboxylase (EC 6.4.1.1) (carboxylation)酶的化學(xué)本質(zhì)酶的化學(xué)本質(zhì)大多數(shù)酶是蛋白質(zhì)，少數(shù)酶是大多數(shù)酶是蛋白質(zhì)，少數(shù)酶是RNA酶是蛋白質(zhì)的證據(jù)：酶是蛋白質(zhì)的證據(jù)： 1）酶對(duì)熱不穩(wěn)定）酶對(duì)熱不穩(wěn)定 2）酶是兩性電解質(zhì)）酶是兩性電解質(zhì) 3）引起蛋白質(zhì)變性的因素能使酶失活）引起蛋白質(zhì)變性的因素能使酶失活 4）酶具有膠體的特性）酶具有膠體的特性 5）酶能被蛋白水解酶水解）酶能被蛋白水解酶水解 6）多次重結(jié)晶的酶其活性仍不變）多次重結(jié)晶的酶其活性仍不變 7）許多酶

6、的氨基酸序列測(cè)定）許多酶的氨基酸序列測(cè)定酶的輔因子酶的輔因子 酶按化學(xué)組成可分為單純酶和結(jié)合酶兩大酶按化學(xué)組成可分為單純酶和結(jié)合酶兩大類(lèi)類(lèi) 單純酶只由純的蛋白質(zhì)或單純酶只由純的蛋白質(zhì)或RNA構(gòu)成構(gòu)成, 如胃如胃蛋白酶等蛋白酶等 結(jié)合酶除蛋白質(zhì)組分外結(jié)合酶除蛋白質(zhì)組分外, 還含有對(duì)熱穩(wěn)定還含有對(duì)熱穩(wěn)定的非蛋白的小分子物質(zhì)的非蛋白的小分子物質(zhì), 前者稱(chēng)為酶蛋白前者稱(chēng)為酶蛋白, 后者稱(chēng)為輔因子后者稱(chēng)為輔因子; 如果小分子物質(zhì)與酶結(jié)如果小分子物質(zhì)與酶結(jié)合較松合較松, 則又稱(chēng)為輔酶則又稱(chēng)為輔酶, 反之反之, 則稱(chēng)為輔基則稱(chēng)為輔基 全酶全酶=酶蛋白酶蛋白+輔因子輔因子肌紅蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)肌紅蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)單

7、體酶單體酶 只有一條肽鏈的酶只有一條肽鏈的酶, 全部為水解酶全部為水解酶酶酶相對(duì)分子質(zhì)量相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)氨基酸殘基數(shù)氨基酸殘基數(shù)溶菌酶溶菌酶核糖核酸酶核糖核酸酶木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶胰蛋白酶胰蛋白酶羧肽酶羧肽酶A14,60013,70023,00023,80034,600129124203223307寡聚酶寡聚酶 由多個(gè)亞基組成的酶由多個(gè)亞基組成的酶, 亞基之間以非共價(jià)鍵結(jié)合亞基之間以非共價(jià)鍵結(jié)合, 已知的寡聚酶大多為糖代謝酶已知的寡聚酶大多為糖代謝酶酶酶亞基亞基相對(duì)分子質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量量(Mr)數(shù)目數(shù)目相對(duì)分子質(zhì)量相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)磷酸化酶磷酸化酶A肌酸激酶肌酸激酶乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶烯醇

8、化酶烯醇化酶424292,50040,00035,00041,000370,00080,000150,00082,000多酶復(fù)合物多酶復(fù)合物 幾個(gè)酶嵌合而成的復(fù)合物，一般由幾個(gè)酶嵌合而成的復(fù)合物，一般由26個(gè)個(gè)功能相關(guān)的酶組成功能相關(guān)的酶組成 相對(duì)分子質(zhì)量都在幾百萬(wàn)以上相對(duì)分子質(zhì)量都在幾百萬(wàn)以上 例如丙酮酸脫氫酶復(fù)合物和脂肪酸合成酶例如丙酮酸脫氫酶復(fù)合物和脂肪酸合成酶復(fù)合物復(fù)合物酶的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系酶的結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系 活性部位和必需基團(tuán)活性部位和必需基團(tuán) 酶原的激活酶原的激活 同工酶同工酶活性部位和必需基團(tuán)活性部位和必需基團(tuán) 必需基團(tuán)必需基團(tuán)對(duì)這些基團(tuán)對(duì)這些基團(tuán)進(jìn)行化學(xué)修飾進(jìn)行化學(xué)修飾, 則

9、酶則酶的活性喪失的活性喪失, 常見(jiàn)的如常見(jiàn)的如Ser的羥基的羥基, His的咪的咪唑基唑基, Cys的巰基的巰基, Asp、Glu的側(cè)鏈羧基等的側(cè)鏈羧基等 活性部位活性部位酶分子中直接和底物結(jié)合，并酶分子中直接和底物結(jié)合，并與酶催化作用直接有關(guān)的部位。與酶催化作用直接有關(guān)的部位。羧肽酶羧肽酶A的活性部位的活性部位OHCH2CHOO-NHHNNH2NHArg 145COHNR1CHHHOTyr248OCR2HNHCOCHHNR3OHHNHNHis 69NHNHis 196OO-Glu 72OO-Glu 270Zn2+ENZYME酶原的激活酶原的激活 酶原酶原酶的無(wú)活性前體酶的無(wú)活性前體 酶原的激

10、活酶原的激活酶原在一定條件下轉(zhuǎn)變成活酶原在一定條件下轉(zhuǎn)變成活性酶的過(guò)程性酶的過(guò)程 胰蛋白酶：胰臟細(xì)胞分泌胰蛋白酶原，進(jìn)胰蛋白酶：胰臟細(xì)胞分泌胰蛋白酶原，進(jìn)入小腸要經(jīng)腸激酶激活后才有活性入小腸要經(jīng)腸激酶激活后才有活性 胃蛋白酶：由胃粘膜細(xì)胞分泌胃蛋白酶原，胃蛋白酶：由胃粘膜細(xì)胞分泌胃蛋白酶原，在胃液鹽酸作用下才有活性在胃液鹽酸作用下才有活性同工酶同工酶 具有不同分子形式但卻催化相同的化學(xué)反應(yīng)具有不同分子形式但卻催化相同的化學(xué)反應(yīng) 活性部位在結(jié)構(gòu)上相同或相似活性部位在結(jié)構(gòu)上相同或相似 乳酸脫氫酶的亞基分為乳酸脫氫酶的亞基分為M和和H兩種類(lèi)型，可組兩種類(lèi)型，可組裝成裝成H4、H3M、H2M2、HM3

11、、M4等等5種四聚體，種四聚體，都催化同一反應(yīng)都催化同一反應(yīng)CHOHCH3COO-+ NAD+CCH3COO-O+ NADH + H+酶作用的結(jié)構(gòu)專(zhuān)一性酶作用的結(jié)構(gòu)專(zhuān)一性(1)RCORO+ H2ORCOO- + ROH + H+酯酶OOHOROHOHCH2OH+ H2OOOHOHOHOHCH2OH+ ROH 葡萄糖苷酶ONH2H2N+H2O2 NH3+CO2脲酶只要求酯基，只要求酯基，R和和R可變可變要求要求-糖苷鍵，糖苷鍵，R可變可變只水解尿素，其它尿素衍生物一般不起作用只水解尿素，其它尿素衍生物一般不起作用酶作用的結(jié)構(gòu)專(zhuān)一性酶作用的結(jié)構(gòu)專(zhuān)一性(2)p5A3pA5pp5A3pA3pA2pA3

12、pA2pA2pA3pAp5A3p + A5pp5A3p + A3p + A2pA3p + A2pA2pA3p +AA + A5pp5A + A + A2pA + A2pA2pA +A2 p5AA + p5AA + 2 p5ARNase T2Alkaline Phosphatase Hydrolysis (APH)Phosphodiesterase I (PDI)PDIPDI酶作用的立體專(zhuān)一性（酶作用的立體專(zhuān)一性（1）L-乳酸乳酸D-乳酸乳酸乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶CCOO-HOHCH3CCOO-CH3O-2HCCOO-HOHCH3CCOO-CH3O-2H酶作用的立體專(zhuān)一性（酶作

13、用的立體專(zhuān)一性（2）OOHOOOHOAAPOOO-OOHOHAPOO-OOOHOHAHOOHD,D-A3pAL,L-A3pAD,D-A3pARNase T2D-A3p + D-AdenosineL,L-A3pARNase T2L-A3p + L-Adenosine酶的作用機(jī)制酶的作用機(jī)制 催化作用、過(guò)渡態(tài)、分子活化能催化作用、過(guò)渡態(tài)、分子活化能 中間產(chǎn)物學(xué)說(shuō)中間產(chǎn)物學(xué)說(shuō) 誘導(dǎo)契合模型誘導(dǎo)契合模型 使酶具有高度催化效率的因素使酶具有高度催化效率的因素催化作用、過(guò)渡態(tài)、分子活化能催化作用、過(guò)渡態(tài)、分子活化能過(guò)渡態(tài)模型過(guò)渡態(tài)模型中間產(chǎn)物學(xué)說(shuō)中間產(chǎn)物學(xué)說(shuō)SPE + SESE + P底物底物 產(chǎn)物產(chǎn)物誘

14、導(dǎo)契合模型誘導(dǎo)契合模型(1)誘導(dǎo)契合模型誘導(dǎo)契合模型(2)使酶具有高度催化效率的因素使酶具有高度催化效率的因素 鄰近定向效應(yīng)鄰近定向效應(yīng)-不僅指底物和酶活性部位不僅指底物和酶活性部位的鄰近，還包括正確的立體化學(xué)排列的鄰近，還包括正確的立體化學(xué)排列 “張力張力”和和“形變形變”-就是酶與底物誘導(dǎo)就是酶與底物誘導(dǎo)契合的過(guò)程契合的過(guò)程 酸堿催化酸堿催化-酶活性部位上某些基團(tuán)可用作酶活性部位上某些基團(tuán)可用作酸堿酸堿 共價(jià)催化共價(jià)催化-與底物形成不穩(wěn)定的共價(jià)中間與底物形成不穩(wěn)定的共價(jià)中間物物影響酶促反應(yīng)速度的因素影響酶促反應(yīng)速度的因素 pH對(duì)酶的影響對(duì)酶的影響 溫度對(duì)酶作用的影響溫度對(duì)酶作用的影響 激活

15、劑對(duì)酶作用的影響激活劑對(duì)酶作用的影響 酶動(dòng)力學(xué)酶動(dòng)力學(xué)-米氏方程式米氏方程式 抑制劑對(duì)酶作用的影響抑制劑對(duì)酶作用的影響 酶的別構(gòu)效應(yīng)酶的別構(gòu)效應(yīng)pH對(duì)酶的影響對(duì)酶的影響 每一種酶只能在一定范圍的每一種酶只能在一定范圍的pH內(nèi)才有活性，內(nèi)才有活性，超出這個(gè)范圍酶就失活，在某一超出這個(gè)范圍酶就失活，在某一特定特定pH可可能表現(xiàn)出最大的活性能表現(xiàn)出最大的活性 pH對(duì)酶的影響主要表現(xiàn)在兩方面：對(duì)酶的影響主要表現(xiàn)在兩方面：1）強(qiáng)）強(qiáng)酸或強(qiáng)堿本身使酶變性失活；酸或強(qiáng)堿本身使酶變性失活；2）pH改變改變影響酶活性部位上有關(guān)基團(tuán)的解離，或影影響酶活性部位上有關(guān)基團(tuán)的解離，或影響底物的解離響底物的解離 一般酶的

16、最適一般酶的最適pH在在4-8之間之間溫度對(duì)酶作用的影響溫度對(duì)酶作用的影響 在一定溫度范圍內(nèi)（在一定溫度范圍內(nèi)（040C），酶促反），酶促反應(yīng)速度隨溫度升高而加快應(yīng)速度隨溫度升高而加快 決大多數(shù)酶在決大多數(shù)酶在60C以上即失去活性以上即失去活性 各種酶在一各種酶在一定定條件下都有其一定的最適溫條件下都有其一定的最適溫度，度，例如例如動(dòng)物體內(nèi)酶在動(dòng)物體內(nèi)酶在3750C激活劑對(duì)酶作用的影響激活劑對(duì)酶作用的影響 能提高酶活力的物質(zhì)就是酶的激活劑能提高酶活力的物質(zhì)就是酶的激活劑 許多酶的激活劑就是一些金屬離子或其他許多酶的激活劑就是一些金屬離子或其他無(wú)機(jī)離子無(wú)機(jī)離子 以巰基為活性基團(tuán)的酶，易被氧化降低

17、活以巰基為活性基團(tuán)的酶，易被氧化降低活性，需加還原劑（如抗壞血酸等）性，需加還原劑（如抗壞血酸等）酶動(dòng)力學(xué)酶動(dòng)力學(xué)米氏方程式米氏方程式酶促反應(yīng)速度酶促反應(yīng)速度 S底物濃度底物濃度 Vmax最大酶促速度最大酶促速度Km米氏常數(shù)米氏常數(shù), Km = (k2 + k3)/k1Km S, = V/KmS, 一級(jí)反應(yīng)一級(jí)反應(yīng)S Km, = V, 零級(jí)反應(yīng)零級(jí)反應(yīng)E + SESE + Pk1k2k3 =Km + SVmax1 +KmS =Vmax Sor底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度作圖底物濃度對(duì)酶促反應(yīng)速度作圖Vmax1 +KmS =某些酶的米氏常數(shù)某些酶的米氏常數(shù)酶酶底物底物Km (mol/L)過(guò)氧化氫酶過(guò)氧

18、化氫酶-半乳糖苷酶半乳糖苷酶麥芽糖酶麥芽糖酶谷氨酸脫氫酶谷氨酸脫氫酶己糖激酶己糖激酶琥珀酸脫氫酶琥珀酸脫氫酶乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶尿素酶尿素酶-淀粉酶淀粉酶蔗糖酶蔗糖酶H2O2乳糖乳糖麥芽糖麥芽糖-酮戊二糖酮戊二糖葡萄糖葡萄糖果糖果糖琥珀酸鹽琥珀酸鹽丙酮酸丙酮酸尿素尿素淀粉淀粉蔗糖蔗糖2.5 x 10-24 x 10-32.1 x 10-12 x 10-31.5 x 10-41.5 x 10-35 x 10-73.5 x 10-52.5 x 10-26 x 10-42.8 x 10-2Lineweaver-Burk作圖法作圖法 1=KmVmaxS1Vmax1+Eadie-Hofstee Plot

19、KmSVV = Vmax 抑制劑對(duì)酶作用的影響抑制劑對(duì)酶作用的影響 不可逆抑制作用不可逆抑制作用抑制劑與酶的結(jié)合是一抑制劑與酶的結(jié)合是一不可逆反應(yīng)不可逆反應(yīng) 可逆抑制作用：可逆抑制作用：1）競(jìng)爭(zhēng)性抑制）競(jìng)爭(zhēng)性抑制抑制劑和抑制劑和底物競(jìng)爭(zhēng)與酶結(jié)合；底物競(jìng)爭(zhēng)與酶結(jié)合；2）非競(jìng)爭(zhēng)性抑制）非競(jìng)爭(zhēng)性抑制抑抑制劑和底物同時(shí)結(jié)合在酶的不同部位上制劑和底物同時(shí)結(jié)合在酶的不同部位上不可逆抑制作用不可逆抑制作用OHEnzymeactive siteserinePOOOFDFP+POOOO-HF可逆抑制可逆抑制-競(jìng)爭(zhēng)性抑制競(jìng)爭(zhēng)性抑制E + SESE + Pk1k2k3 =Vmax SKm + SKm = Km1 +

20、IKi1=KmVmaxS1Vmax1+VV+IEI特點(diǎn)：特點(diǎn)：改變改變Km不改變不改變max，當(dāng)?shù)孜餄舛群芨邥r(shí)，當(dāng)?shù)孜餄舛群芨邥r(shí)，抑制作用可以被解除抑制作用可以被解除競(jìng)爭(zhēng)性抑制競(jìng)爭(zhēng)性抑制Lineweaver-Burk圖圖Km = Km1 +IKi1=KmVmaxS1Vmax1+V可逆抑制可逆抑制-非競(jìng)爭(zhēng)性抑制動(dòng)力學(xué)方程非競(jìng)爭(zhēng)性抑制動(dòng)力學(xué)方程E + SESE + Pk1k2k3 =Vmax SKm + SVmax = Vmax1 +IKi1=KmVmaxS1Vmax1+VV+IEI + S+IESI特點(diǎn)：影響特點(diǎn)：影響max而不改變而不改變m，不能用增大，不能用增大的辦法克服。的辦法克服。可逆抑

21、制可逆抑制-非競(jìng)爭(zhēng)性抑制動(dòng)力學(xué)圖非競(jìng)爭(zhēng)性抑制動(dòng)力學(xué)圖Vmax = Vmax1 +IKi1=KmVmaxS1Vmax1+V酶活力酶活力 是指酶催化指定化學(xué)反應(yīng)的能力，其大小是指酶催化指定化學(xué)反應(yīng)的能力，其大小可用在一定條件下酶促反應(yīng)的速率來(lái)表示，可用在一定條件下酶促反應(yīng)的速率來(lái)表示， 反應(yīng)速率愈快，就表明酶活力愈高，通常反應(yīng)速率愈快，就表明酶活力愈高，通常是測(cè)定單位時(shí)間產(chǎn)物的增加量來(lái)確定是測(cè)定單位時(shí)間產(chǎn)物的增加量來(lái)確定 國(guó)際酶活力單位（國(guó)際酶活力單位（IU，1 IU = 1 mol/min ）：在最適條件下，每分鐘內(nèi)催）：在最適條件下，每分鐘內(nèi)催化一微摩爾底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物所需的酶量化一微摩爾底物轉(zhuǎn)

22、化為產(chǎn)物所需的酶量 酶的比活力：每毫克酶蛋白所具有的酶活酶的比活力：每毫克酶蛋白所具有的酶活力單位數(shù)。力單位數(shù)。測(cè)定酶活力測(cè)定酶活力 常用分光光度法，利用底物、產(chǎn)物或指示劑常用分光光度法，利用底物、產(chǎn)物或指示劑在紫外光或可見(jiàn)光部分吸光度的不同，選擇在紫外光或可見(jiàn)光部分吸光度的不同，選擇一個(gè)適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)，連續(xù)地測(cè)出反應(yīng)過(guò)程中反一個(gè)適當(dāng)?shù)牟ㄩL(zhǎng)，連續(xù)地測(cè)出反應(yīng)過(guò)程中反應(yīng)體系吸光度的變化，再進(jìn)一步推算底物或應(yīng)體系吸光度的變化，再進(jìn)一步推算底物或產(chǎn)物濃度或數(shù)量的變化，從而求出酶活力產(chǎn)物濃度或數(shù)量的變化，從而求出酶活力酶的分離純化酶的分離純化 原材料處理與蛋白提?。杭磸膭?dòng)物、植物、微原材料處理與蛋白提?。杭?/p>

23、從動(dòng)物、植物、微生物等組織或細(xì)胞中提取含有目標(biāo)酶的原液生物等組織或細(xì)胞中提取含有目標(biāo)酶的原液 粗制分離：用鹽析法、等電點(diǎn)沉淀法或有機(jī)溶粗制分離：用鹽析法、等電點(diǎn)沉淀法或有機(jī)溶劑分離法等除去含量比較多的雜質(zhì)，并濃縮酶劑分離法等除去含量比較多的雜質(zhì)，并濃縮酶溶液溶液 精制分離：用柱層析法、梯度離心法或者電泳精制分離：用柱層析法、梯度離心法或者電泳法進(jìn)一步純化法進(jìn)一步純化 酶制劑的脫鹽、濃縮、干燥和保存：用透析法酶制劑的脫鹽、濃縮、干燥和保存：用透析法脫鹽，濃度較低時(shí)，需進(jìn)一步濃縮或者通過(guò)冷脫鹽，濃度較低時(shí)，需進(jìn)一步濃縮或者通過(guò)冷凍真空干燥做成固體制劑進(jìn)保存凍真空干燥做成固體制劑進(jìn)保存酶的分離純化應(yīng)注意事項(xiàng)酶的分離純化應(yīng)注意事項(xiàng) 在酶的分離純化過(guò)程中始終保持低溫（通常在酶的分離純化過(guò)程中始終保持低溫（通常4 C左右），透析、層析或電泳等操作需在專(zhuān)門(mén)的冷室左右），透析、層析或電泳等操作需在專(zhuān)門(mén)的冷室進(jìn)行進(jìn)行 將酶在低溫下保存，一般可在將酶在低溫下保存，一般可在-20 C至至-80 C之之間保存酶制劑間保存酶制劑 使用溫和的操作條件，在純化過(guò)程中使用