生物化學與分子生物學(全套課件127P)

1、一生物化學與分子生物學的定義生物化學與分子生物學的定義 生物化學是用化學的理論和方法研究生命現(xiàn)象的科學。+分子生物學是研究生物大分子結構和功能的學科。+生物化學與分子生物學是同一個二級學科,在大學本科階段可以作為兩門課開設, 也可以作為一門課開設.緒論二生物化學與分子生物學的研究范疇（一）生物體的組成物質復雜性組成物質多；分子大；空間結構復雜。規(guī)律性元素構件小分子聚合物（生物大分子）；結構與功能相適應。（二）物質和能量代謝 復雜性 多步化學反應構成代謝途徑； 多條代謝途徑相互交織成網(wǎng)； 物質代謝和能量代謝相互交織； 調節(jié)控制有條不紊。 規(guī)律性 反應類型不多； 反應機理符合有機化學理論； 調節(jié)控

2、制與生物學功能相適應。 （三）信息分子的生物合成 復雜性合成過程復雜；調節(jié)控制復雜；與生命現(xiàn)象的關系復雜。規(guī)律性遺傳密碼已經(jīng)破譯；基因表達的基本過程已經(jīng)清楚；生物大分子結構與功能的關系逐漸明晰；研究方法日新月異。 三. .生物化學與分子生物學同生產(chǎn)實踐的關系 啟蒙階段 食品選擇和加工； 醫(yī)療。發(fā)展階段 維生素、抗生素醫(yī)療； 代謝食品、醫(yī)療； 分子生物學 基因工程、蛋白質工程。發(fā)展前景生物制品；轉基因動植物；基因芯片；基因診斷；基因治療。四.生物化學的發(fā)展史1.1.煉金術階段: : 現(xiàn)代化學起源于煉金術(alchemy)。換言之，煉金活動是化學的前史。“ chemistry” 一詞也來自alch

3、emy, 而alchemy = al (the) + chem, 其中的chem來自中國的“ 金” 的古漢語發(fā)音。煉金術在各個古代文明中都占重要位置, 并不是中國特有, 一般而言都是如何將銅, 鉛, 錫變成金、銀這樣的貴金屬的實用學問。在西方, 煉金術從公元前幾百年開始到17世紀為止, 延續(xù)了2000年；在中國也生存了差不多同樣長的時間。中國的煉金術除了得到貴金屬以外，還致力于研制長生不老之藥“ 金丹”。因此, 中國的煉金術的化學成份比其他古代文明要濃。 中國的煉金術隨絲綢之路傳到了阿拉伯文化圈, 所以有了alchemy這個行業(yè)。 西臘文明在歐州歷史上曾一度失傳, 幸好阿拉伯人繼承了其精華(7

4、14世紀), 1113世紀十字軍的侵略將散落在阿拉伯文化中的希臘文化又帶回了歐洲, 也順便將中國的煉金術帶進入了西方文明。此后，西方的煉金術活動朝著獨自的方向發(fā)展，特別是對酸, 堿, 鹽等物質的化學性質有了相當?shù)闹R積累。2.2.從煉金術到化學: : 17世紀興起的文藝復興活動使alchemy真正向現(xiàn)代的chemistry過渡。 當時的化學家, 要么是貴族, 要么是業(yè)余愛好。在與英國的Newton同時期的貴族Robert Boyle (1627-1691) 對氣體和真空進行了研究, 寫了“ The Sceptical Chymist (1661)” 一書, 主張決別帶有神秘色彩的煉金術, 而以

5、理性思考的態(tài)度來研究化學。他發(fā)現(xiàn)了波以爾法則 PV=Const, 實際上就是現(xiàn)代物理化學的起點。1662英國設立了 Royal Society, 1666年 Paris Academia 分別設立, 為科學研究和交流提供了土壤。這是化學與煉金術決別的標志。 隨后,空氣中含有不同成分1764年CO2 (Black), 1766年H2 (Canvendish), 1772年O2 (Sheele), 1772年N2 (Ratherford) , 1774年Cl2 (Sheele), 相繼被發(fā)現(xiàn)。1774年Lavoisier確立了物質不滅定理, 1777年確立了燃燒理論。此后的化學反應的定比例法則 (

6、Joseph Louis Proust, 1799) 及化學元素分析方法的發(fā)展, 為有機化學的出現(xiàn)奠定了基礎。3.3.有機化學的發(fā)展 簡單的說, 有機化學就是H, C, N, O的化學。 其發(fā)展是必然的, 因為人對生命物質的興趣要比對非生命物質更濃?；瘜W分析的手段發(fā)展后, 勢必要用來研究有機的物質。通過有機化學研究知道的物質結構, 成為生物化學研究的起點。 有機化學的發(fā)展, 是從尿素的合成開始的。 1828年 Wohler (德) 從無機鹽合成了尿素 1831年 Liebig (德) 有機物元素分析定量法的發(fā)明 1840年 有機基團 (group) 的概念的形成 1848年 Pasteur (

7、法) 酒石酸的光學異構體的發(fā) 1858年 Kekule (德) C原子的四價理論 1865年 Kekule (德) Benzen環(huán)結構的發(fā)現(xiàn) 1869年 元素周期表的確立 1874年 vant Hoff (荷) C4的正四面體結構 1884年 Fischer (德) 糖的化學結構研究的開始4.生物化學重大發(fā)展年代表1897年 Buchner 發(fā)現(xiàn)酵母細胞質能使糖發(fā)酵1902年 Fischer 肽鍵理論1926年 Sumner結晶得到了脲酶,證明酶就是蛋白質1935年 Schneider將同位素應用于代謝的研究 1944年 Avery等人證明遺傳信息在核酸上 1953年 Sanger的胰島素氨基

8、酸序列測定 Waston-Click提出DNA 雙螺旋模型 1958年 Perutz等解明肌紅蛋白的立體結構 1970年 發(fā)現(xiàn)了DNA限制性內(nèi)切酶 1972年 DNA重組技術的建立 1978年 DNA雙脫氧測序法的成功 1990年 人類基因組計劃的實施,2003年完成,進入 后基因組時代生物化學中的關鍵技術 電泳（電泳（19231923） 生物大分子的分離、分析生物大分子的分離、分析 超離心（超離心（19251925）蛋白質、細胞亞器官的）蛋白質、細胞亞器官的 分離；分子量的確定分離；分子量的確定 同位素標記（同位素標記（19341934）物質代謝途徑、生物大分子結構測定）物質代謝途徑、生物大

9、分子結構測定 層析（層析（1944 1944 ） 生物大分子的分離純化生物大分子的分離純化 X-X-光衍射、光衍射、NMRNMR：生物大分子結構測定生物大分子結構測定五生物化學與分子生物學 同有關學科的關系 生物化學與分子生物學是生物學的最深層次； 生物化學與分子生物學是化學的最高層次； 生物化學與分子生物學為農(nóng)學、醫(yī)學和食品科學提供理論依據(jù)和研究手段； 物理學、信息科學和數(shù)學為生物化學與分子生物學提供研究手段。課外閱讀書籍 Lehninger Lehninger ：Principles of BiochemistryPrinciples of Biochemistry StryerStrye

10、r：BiochemistryBiochemistry 王鏡巖生物化學 沈仁權生物化學教程 鄭集普通生物化學 Garrett,and Grisham: Biochemistry (Garrett,and Grisham: Biochemistry (影印版) ) 羅紀盛等 生物化學簡明教程 朱玉賢 李毅 現(xiàn)代分子生物學 Robert F.Weaver: Molecular biology (Robert F.Weaver: Molecular biology (影印版) )六學習方法 積極培養(yǎng)學習的興趣； 記憶與理解相互促進； 注重閱讀和練習； 注重學習科學思維的方法和實驗技能； 注重與數(shù)理化特

11、別是化學知識的聯(lián)系； 注重與生物學功能的聯(lián)系。蛋白質的結構與功能第一章第一章Structure and Function of Proteinn什么是蛋白質?蛋白質(protein)是由許多氨基酸(amino acids)通過肽鍵(peptide bond)相連形成的高分子含氮化合物。n蛋白質研究的歷史18331833年年，PayenPayen和和PersozPersoz分離出淀粉酶。分離出淀粉酶。18381838年年，荷蘭科學家，荷蘭科學家 G. J. MulderG. J. Mulder引入引入“protein”protein”（源自希臘字（源自希臘字proteiosproteios，意為

12、，意為primaryprimary）一詞）一詞 18641864年年，Hoppe-SeylerHoppe-Seyler從血液分離出血紅蛋白，并將從血液分離出血紅蛋白，并將其制成結晶。其制成結晶。1919世紀末世紀末，F(xiàn)ischerFischer證明蛋白質是由氨基酸組成的，證明蛋白質是由氨基酸組成的，并將氨基酸合成了多種短肽并將氨基酸合成了多種短肽 。 19511951年年, PaulingPauling采用采用X X（射）線晶體衍射發(fā)現(xiàn)了蛋白（射）線晶體衍射發(fā)現(xiàn)了蛋白質的二級結構質的二級結構-螺旋螺旋(-helix)(-helix)。 19531953年年，F(xiàn)rederick SangerFr

13、ederick Sanger完成胰島素一級序列測定。完成胰島素一級序列測定。 19621962年年，John KendrewJohn Kendrew和和Max PerutzMax Perutz確定了血紅蛋白確定了血紅蛋白的四級結構。的四級結構。2020世紀世紀9090年代以后年代以后，隨著人類基因組計劃實施，功，隨著人類基因組計劃實施，功能基因組與蛋白質組計劃的展開能基因組與蛋白質組計劃的展開 ，使蛋白，使蛋白質結構與功能的研究達到新的高峰質結構與功能的研究達到新的高峰 。蛋白質的分子組成The Molecular Component of Protein第一節(jié)第一節(jié)n蛋白質的生物學重要性分布

14、廣：所有器官、組織都含有蛋白質；細胞的各個部分都含有蛋白質。含量高：蛋白質是生物體中含量最豐富的生物大分子，約占人體固體成分的45%，而在細胞中可達細胞干重的70%以上。 1. 蛋白質是生物體重要組成成分蛋白質是生物體重要組成成分作為生物催化劑（酶）作為生物催化劑（酶）代謝調節(jié)作用代謝調節(jié)作用免疫保護作用免疫保護作用物質的轉運和存儲物質的轉運和存儲運動與支持作用運動與支持作用參與細胞間信息傳遞參與細胞間信息傳遞2. 蛋白質具有重要的生物學功能蛋白質具有重要的生物學功能3. 氧化供能氧化供能n組成蛋白質的元素主要有C、H、O、N和 S。 有些蛋白質含有少量磷或金屬元素鐵、銅、鋅、錳、鈷、鉬，個別

15、蛋白質還含有碘 。 各種蛋白質的含氮量很接近，平均為各種蛋白質的含氮量很接近，平均為16。 由于體內(nèi)的含氮物質以蛋白質為主，因此，只要測定生物樣品中的含氮量，就可以根據(jù)以下公式推算出蛋白質的大致含量：100克樣品中蛋白質的含量克樣品中蛋白質的含量 (g %)= 每克樣品含氮克數(shù)每克樣品含氮克數(shù) 6.251001/16%n蛋白質元素組成的特點一、組成人體蛋白質的20種L-氨基酸 存在自然界中的氨基酸有300余種，但組成人體蛋白質的氨基酸僅有20種，且均屬 L-氨基酸（甘氨酸除外）。H甘氨酸甘氨酸CH3丙氨酸丙氨酸L-L-氨基酸的通式氨基酸的通式RC+NH3COO-H 除了除了2020種基本的氨基

16、酸外，近年發(fā)現(xiàn)硒代半種基本的氨基酸外，近年發(fā)現(xiàn)硒代半胱氨酸在某些情況下也可用于合成蛋白質。硒胱氨酸在某些情況下也可用于合成蛋白質。硒代半胱氨酸從結構上來看，硒原子替代了半胱代半胱氨酸從結構上來看，硒原子替代了半胱氨酸分子中的硫原子。硒代半胱氨酸存在于少氨酸分子中的硫原子。硒代半胱氨酸存在于少數(shù)天然蛋白質中，包括過氧化物酶和電子傳遞數(shù)天然蛋白質中，包括過氧化物酶和電子傳遞鏈中的還原酶等。硒代半胱氨酸參與蛋白質合鏈中的還原酶等。硒代半胱氨酸參與蛋白質合成時，并不是由目前已知的密碼子編碼，具體成時，并不是由目前已知的密碼子編碼，具體機制尚不完全清楚。機制尚不完全清楚。體內(nèi)也存在若干不參與蛋白質合成但

17、具有體內(nèi)也存在若干不參與蛋白質合成但具有重要生理作用的重要生理作用的L-L-氨基酸，如參與合成尿素的氨基酸，如參與合成尿素的鳥氨酸（鳥氨酸（ornithineornithine）、瓜氨酸（）、瓜氨酸（citrullinecitrulline）和精）和精氨酸代琥珀酸（氨酸代琥珀酸（argininosuccinateargininosuccinate）。）。非極性脂肪族氨基酸非極性脂肪族氨基酸極性中性氨基酸極性中性氨基酸芳香族氨基酸芳香族氨基酸酸性氨基酸酸性氨基酸堿性氨基酸堿性氨基酸二、氨基酸二、氨基酸可根據(jù)側鏈結構和理化可根據(jù)側鏈結構和理化性質進行分類性質進行分類( (一一) )側鏈含烴鏈的氨基

18、酸屬于非極性脂肪族側鏈含烴鏈的氨基酸屬于非極性脂肪族氨基酸氨基酸( (二二) )側鏈有極性但不帶電荷的氨基酸是極性側鏈有極性但不帶電荷的氨基酸是極性中性氨基酸中性氨基酸甲硫氨酸( (三三) )側鏈含芳香基團的氨基酸是芳香族氨基酸側鏈含芳香基團的氨基酸是芳香族氨基酸( (四四) )側鏈含負性解離基團的氨基酸是酸性氨基酸側鏈含負性解離基團的氨基酸是酸性氨基酸( (五五) )側鏈含正性解離基團的氨基酸屬于堿性側鏈含正性解離基團的氨基酸屬于堿性氨基酸氨基酸n幾種特殊氨基酸幾種特殊氨基酸 脯氨酸脯氨酸（亞氨基酸）（亞氨基酸）CH2CHCOO-NH2+CH2CH2CH2CHCOO-NH2+CH2CH2 半

19、胱氨酸半胱氨酸 +胱氨酸胱氨酸二硫鍵二硫鍵-HH-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3 在蛋白質翻譯后的修飾過程中，脯氨酸和賴氨酸在蛋白質翻譯后的修飾過程中，脯氨酸和賴氨酸可分別被羥化為羥脯氨酸和羥賴氨酸?？煞謩e被羥化為羥脯氨酸和羥賴氨酸。 蛋白質分子中蛋白質分子中2020種氨基酸殘基的某些基團還可被種氨基酸殘基的某些基團還可被甲基化、甲?；?、乙?；愇?/p>

20、二烯化和磷酸化甲基化、甲?；?、乙?；?、異戊二烯化和磷酸化等。等。 這些翻譯后修飾，可改變蛋白質的溶解度、穩(wěn)定這些翻譯后修飾，可改變蛋白質的溶解度、穩(wěn)定性、亞細胞定位和與其他細胞蛋白質相互作用的性、亞細胞定位和與其他細胞蛋白質相互作用的性質等，體現(xiàn)了蛋白質生物多樣性的一個方面。性質等，體現(xiàn)了蛋白質生物多樣性的一個方面。三、三、20種氨基酸具有共同或特異的理化性質種氨基酸具有共同或特異的理化性質n兩性解離及等電點兩性解離及等電點氨基酸是兩性電解質，其解離程度取決于所氨基酸是兩性電解質，其解離程度取決于所處溶液的酸堿度。處溶液的酸堿度。等電點等電點(isoelectric point, pI) 在某

21、一在某一pH的溶液中，氨基酸解離成陽離子和的溶液中，氨基酸解離成陽離子和陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電陰離子的趨勢及程度相等，成為兼性離子，呈電中性。此時溶液的中性。此時溶液的pH值值稱為該氨基酸的稱為該氨基酸的等電點等電點。（一）氨基酸具有兩性解離的性質（一）氨基酸具有兩性解離的性質pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI氨基酸的兼性離子氨基酸的兼性離子 陽離子陽離子陰離子陰離子CHNH2COOHR CHNH2COOHRCHNH3+COO-R CHNH3+COO-RCHNH2COO-R CHNH2COO-RCH COOHRNH3+CH COOHRNH3+（二）含共軛雙

22、鍵的氨基酸具有紫外吸收性質（二）含共軛雙鍵的氨基酸具有紫外吸收性質色氨酸、酪氨酸色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在的最大吸收峰在 280 nm 附近。附近。大多數(shù)蛋白質含大多數(shù)蛋白質含有這兩種氨基酸殘基，有這兩種氨基酸殘基，所以測定蛋白質溶液所以測定蛋白質溶液280nm的光吸收值是分的光吸收值是分析溶液中蛋白質含量析溶液中蛋白質含量的快速簡便的方法。的快速簡便的方法。芳香族氨基酸的紫外吸收芳香族氨基酸的紫外吸收（三）氨基酸與茚三酮反應生成藍紫色化合物（三）氨基酸與茚三酮反應生成藍紫色化合物氨基酸與茚三酮水合物共熱，可生成氨基酸與茚三酮水合物共熱，可生成藍藍紫色紫色化合物，其最大吸收峰在化合物，其最大

23、吸收峰在570nm處。處。由于此吸收峰值與氨基酸的含量存在正由于此吸收峰值與氨基酸的含量存在正比關系，因此可作為氨基酸定量分析方法。比關系，因此可作為氨基酸定量分析方法。四、氨基酸通過肽鍵連接而形成蛋白質或活性肽肽鍵肽鍵( (peptide bond) )是由一個氨基酸的是由一個氨基酸的 - -羧基與另一個氨基酸的羧基與另一個氨基酸的 - -氨基脫水縮合而形成氨基脫水縮合而形成的化學鍵。的化學鍵。（一）（一）氨基酸通過肽鍵連接而形成肽氨基酸通過肽鍵連接而形成肽NH2-CH-CHOOH甘甘氨氨酸酸NH2-CH-CHOOH甘甘氨氨酸酸NH-CH-CHOHO OH甘甘氨氨酸酸+-HOH甘氨酰甘氨酸甘

24、氨酰甘氨酸肽鍵NH2-CH-C-N-CH-COOHHHHONH2-CH-C-N-CH-COOHHHHO肽肽(peptide)是由氨基酸通過肽鍵縮合而形是由氨基酸通過肽鍵縮合而形成的化合物。成的化合物。兩分子氨基酸縮合形成二肽，三分子氨基兩分子氨基酸縮合形成二肽，三分子氨基酸縮合則形成三肽酸縮合則形成三肽肽鏈中的氨基酸分子因為脫水縮合而基團肽鏈中的氨基酸分子因為脫水縮合而基團不全，被稱為氨基酸殘基不全，被稱為氨基酸殘基(residue)。由十個以內(nèi)氨基酸相連而成的肽稱為寡肽由十個以內(nèi)氨基酸相連而成的肽稱為寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相連形成的肽，由更多的氨基酸相連形成的肽稱多

25、肽稱多肽(polypeptide)。N 末端：多肽鏈中有末端：多肽鏈中有游離游離-氨基氨基的一端的一端C 末端：多肽鏈中有末端：多肽鏈中有游離游離-羧基羧基的一端的一端n多肽鏈有兩端：多肽鏈有兩端：多肽鏈多肽鏈(polypeptide chain)是指許多氨是指許多氨基酸之間以肽鍵連接而成的一種結構?；嶂g以肽鍵連接而成的一種結構。N末端末端C末端末端牛核糖核酸酶牛核糖核酸酶 蛋白質是由許多氨基酸殘基組成、折疊蛋白質是由許多氨基酸殘基組成、折疊成特定的空間結構、并具有特定生物學功能成特定的空間結構、并具有特定生物學功能的多肽。一般而論，蛋白質的氨基酸殘基數(shù)的多肽。一般而論，蛋白質的氨基酸殘基

26、數(shù)通常在通常在50個以上，個以上，50個氨基酸殘基以下則仍個氨基酸殘基以下則仍稱為多肽。稱為多肽。（二）體內(nèi)存在多種重要的生物活性肽 1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH)GSH過氧過氧化物酶化物酶H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH還原酶還原酶NADPH+H+ NADP+ nGSH與與GSSG間的轉換間的轉換 體內(nèi)許多激素屬寡肽或多肽體內(nèi)許多激素屬寡肽或多肽 神經(jīng)肽神經(jīng)肽(neuropeptide)2.多肽類激素及神經(jīng)肽多肽類激素及神經(jīng)肽蛋白質的分子結構The Molecular Structure of Protein 第二節(jié)第二節(jié)n蛋白質的分子結構包括蛋白質的分子結

27、構包括: 高級高級結構結構一級結構一級結構(primary structure)二級結構二級結構(secondary structure)三級結構三級結構(tertiary structure)四級結構四級結構(quaternary structure)n定義定義:蛋白質的一級結構指在蛋白質分子從蛋白質的一級結構指在蛋白質分子從N-端至端至C-端的端的氨基酸排列順序氨基酸排列順序。一、一、氨基酸的排列順序決定蛋白質氨基酸的排列順序決定蛋白質的一級結構的一級結構n主要的化學鍵主要的化學鍵:肽鍵肽鍵，有些蛋白質還包括二硫鍵。，有些蛋白質還包括二硫鍵。 一級結構是蛋白質空間構象和特異生物學一級結構是

28、蛋白質空間構象和特異生物學功能功能的基礎的基礎，但不是決定蛋白質空間構象的但不是決定蛋白質空間構象的唯一因素唯一因素。 目前已知一級結構的蛋白質數(shù)量已相當可觀，并且還以更快的速度增加。 國際互聯(lián)網(wǎng)有若干重要的蛋白質數(shù)據(jù)庫，例如 EMBL（European Molecular Biology Laboratory Data Library） Genbank （Genetic Sequence Databank） PIR（Protein Identification Resource Sequence Database） 收集了大量最新的蛋白質一級結構及其他資料，為蛋白質結構與功能的深入研究提供了

29、便利。 二、二、多肽鏈的局部主鏈構象為蛋白質多肽鏈的局部主鏈構象為蛋白質二級結構二級結構蛋白質分子中某一段肽鏈的局部空間蛋白質分子中某一段肽鏈的局部空間結構，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對空結構，即該段肽鏈主鏈骨架原子的相對空間位置，并不涉及氨基酸殘基側鏈的構象間位置，并不涉及氨基酸殘基側鏈的構象 。n定義定義: : n主要的化學鍵主要的化學鍵：氫鍵氫鍵 - -螺旋螺旋 ( -helix) - -折疊折疊 ( -pleated sheet) - -轉角轉角 ( -turn) 無規(guī)卷曲無規(guī)卷曲 (random coil) n蛋白質二級結構蛋白質二級結構n所謂肽鏈主鏈骨架原子即所謂肽鏈主鏈骨架原子即

30、N N（氨基氮）、（氨基氮）、 CC（- -碳原子）和碳原子）和CoCo（羰基碳）（羰基碳）3 3個原子個原子依次重復排列。依次重復排列。 （一）參與肽鍵形成的（一）參與肽鍵形成的6個原子在同一平面上個原子在同一平面上參與肽鍵的參與肽鍵的6個原子個原子C 1、C、O、N、H、C 2位于同一平位于同一平面，面，C 1和和C 2在平面上所處的位置為反式在平面上所處的位置為反式(trans)構型，此同構型，此同一平面上的一平面上的6個原子構成了所謂的個原子構成了所謂的肽單元肽單元 (peptide unit) 。 - -螺旋螺旋 ( -helix) - -折疊折疊 ( -pleated sheet)

31、 - -轉角轉角 ( -turn) 無規(guī)卷曲無規(guī)卷曲 (random coil) （二）（二）-螺旋結構是常見的蛋白質二級結構螺旋結構是常見的蛋白質二級結構n蛋白質二級結構蛋白質二級結構（二）（二）-螺旋結構是常見的蛋白質二級結構螺旋結構是常見的蛋白質二級結構（三）（三） - -折疊使多肽鏈形成片層結構折疊使多肽鏈形成片層結構（四）（四） - -轉角和無規(guī)卷曲在蛋白質分子中轉角和無規(guī)卷曲在蛋白質分子中普遍存在普遍存在 - -轉角轉角無規(guī)卷曲是用來闡述沒有確定規(guī)律性的那部無規(guī)卷曲是用來闡述沒有確定規(guī)律性的那部分肽鏈結構。分肽鏈結構。（五）（五）二級結構可組成蛋白質分子中的二級結構可組成蛋白質分子

32、中的模體模體在許多蛋白質分子中，可發(fā)現(xiàn)二個或三個具在許多蛋白質分子中，可發(fā)現(xiàn)二個或三個具有二級結構的肽段，在空間上相互接近，形成一有二級結構的肽段，在空間上相互接近，形成一個個有規(guī)則的二級結構組合，被稱為有規(guī)則的二級結構組合，被稱為超二級結構超二級結構。二級結構組合形式有二級結構組合形式有3 3種：種：， 。二個或三個具有二級結構的肽段，在空間二個或三個具有二級結構的肽段，在空間上相互接近，形成一個特殊的空間構象，稱為上相互接近，形成一個特殊的空間構象，稱為模體模體(motif) 。模體是具有特殊功能的超二級結構。模體是具有特殊功能的超二級結構。鈣結合蛋白中結合鈣結合蛋白中結合鈣離子的模體鈣離

33、子的模體鋅指結構鋅指結構- -螺旋螺旋-轉角（或轉角（或環(huán)）環(huán)）-螺旋模體螺旋模體鏈鏈-轉角轉角- -鏈模體鏈模體鏈鏈-轉角轉角-螺旋螺旋-轉角轉角- -鏈模體鏈模體n模體常見的形式模體常見的形式（六）氨基酸殘基的側鏈影響二級結構的形成（六）氨基酸殘基的側鏈影響二級結構的形成蛋白質二級結構是以一級結構為基礎的。蛋白質二級結構是以一級結構為基礎的。一段肽鏈其氨基酸殘基的側鏈適合形成一段肽鏈其氨基酸殘基的側鏈適合形成 - -螺旋螺旋或或-折疊，它就會出現(xiàn)相應的二級結構。折疊，它就會出現(xiàn)相應的二級結構。 三、多肽鏈在二級結構基礎上進一步折疊形成三級結構疏水鍵、離子鍵、氫鍵和疏水鍵、離子鍵、氫鍵和 范

34、德華力等。范德華力等。n主要的化學鍵主要的化學鍵:整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置。整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置。即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。即肽鏈中所有原子在三維空間的排布位置。n定義定義:（一）三級結構是指整條肽鏈中全部氨基酸（一）三級結構是指整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對空間位置殘基的相對空間位置 肌紅蛋白肌紅蛋白 (Mb) N 端端 C端端（二）結構域（二）結構域是三級結構層次上的獨立功能區(qū)是三級結構層次上的獨立功能區(qū)分子量較大的蛋白質?？烧郫B成多個結構較分子量較大的蛋白質常可折疊成多個結構較為緊密且穩(wěn)定的區(qū)域，并各行其功能，稱為結構為緊密且穩(wěn)定的區(qū)域，并各行

35、其功能，稱為結構域域 ( (domain) ) 。 大多數(shù)結構域含有序列上連續(xù)的大多數(shù)結構域含有序列上連續(xù)的100100至至200200個氨基酸殘個氨基酸殘基，若用限制性蛋白酶水解，含多個結構域的蛋白質基，若用限制性蛋白酶水解，含多個結構域的蛋白質常分解出常分解出獨立獨立的結構域，而各結構域的構象可以基本的結構域，而各結構域的構象可以基本不改變，并保持其功能。不改變，并保持其功能。 超二級結構則不具備這種特點。超二級結構則不具備這種特點。 因此，結構域也可看作是球狀蛋白質的獨立折疊單位，因此，結構域也可看作是球狀蛋白質的獨立折疊單位，有較為獨立的三維空間結構。有較為獨立的三維空間結構。 3-磷

36、酸甘油醛脫氫酶亞基的結構示意圖 （三）（三）蛋白質的多肽鏈須折疊成正確的空間構象蛋白質的多肽鏈須折疊成正確的空間構象分子伴侶分子伴侶(chaperon)通過提供一個保護環(huán)境從而通過提供一個保護環(huán)境從而加速蛋白質折疊成天然構象或形成四級結構。加速蛋白質折疊成天然構象或形成四級結構。分子伴侶可逆地與未折疊肽段的疏水部分結合隨分子伴侶可逆地與未折疊肽段的疏水部分結合隨后松開，如此重復進行可防止錯誤的聚集發(fā)生，后松開，如此重復進行可防止錯誤的聚集發(fā)生，使肽鏈正確折疊。使肽鏈正確折疊。 分子伴侶也可與錯誤聚集的肽段結合，使之解聚分子伴侶也可與錯誤聚集的肽段結合，使之解聚后，再誘導其正確折疊。后，再誘導其

37、正確折疊。 分子伴侶在蛋白質分子折疊過程中二硫鍵的正確分子伴侶在蛋白質分子折疊過程中二硫鍵的正確形成起了重要的作用。形成起了重要的作用。 亞基之間的結合主要是氫鍵和離子鍵。亞基之間的結合主要是氫鍵和離子鍵。四、四、含有二條以上多肽鏈的蛋白質含有二條以上多肽鏈的蛋白質具有四級結構具有四級結構蛋白質分子中各亞基的空間排布及亞基接蛋白質分子中各亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用，稱為觸部位的布局和相互作用，稱為蛋白質的四級蛋白質的四級結構結構。許多功能性蛋白質分子含有許多功能性蛋白質分子含有2 2條或條或2 2條以上條以上多肽鏈。每一條多肽鏈都有完整的三級結構，多肽鏈。每一條多肽鏈都有完整

38、的三級結構，稱為蛋白質的稱為蛋白質的亞基亞基 (subunit)。由由2個亞基組成的蛋白質四級結構中，若亞基分子個亞基組成的蛋白質四級結構中，若亞基分子結構相同，稱之為結構相同，稱之為同二聚體同二聚體(homodimer)，若亞基分子，若亞基分子結構不同，則稱之為結構不同，則稱之為異二聚體異二聚體(heterodimer)。 血紅蛋白的血紅蛋白的四級結構四級結構五、蛋白質的分類n根據(jù)蛋白質組成成分根據(jù)蛋白質組成成分:單純蛋白質單純蛋白質結合蛋白質結合蛋白質 = = 蛋白質部分蛋白質部分 + + 非蛋白質部分非蛋白質部分n根據(jù)蛋白質形狀根據(jù)蛋白質形狀:纖維狀蛋白質纖維狀蛋白質球狀蛋白質球狀蛋白質

39、n蛋白質家族（蛋白質家族（protein family） : 氨基酸序列相氨基酸序列相似而且空間結構與功能也十分相近的蛋白質。似而且空間結構與功能也十分相近的蛋白質。n屬于同一蛋白質家族的成員，稱為屬于同一蛋白質家族的成員，稱為同源蛋白質同源蛋白質（homologous protein） 。 n蛋白質超家族蛋白質超家族（superfamily） : 2 2個或個或2 2個以上的蛋個以上的蛋白質家族之間，其氨基酸序列的相似性并不高，白質家族之間，其氨基酸序列的相似性并不高，但含有發(fā)揮相似作用的同一模體結構。但含有發(fā)揮相似作用的同一模體結構。蛋白質結構與功能的關系蛋白質結構與功能的關系The Re

40、lation of Structure and Function of Protein第三節(jié)第三節(jié)（一）一級結構是空間構象的基礎（一）一級結構是空間構象的基礎一、蛋白質一級結構一、蛋白質一級結構是高級結構是高級結構與功能的基礎與功能的基礎牛核糖核酸酶的牛核糖核酸酶的一級結構一級結構二二硫硫鍵鍵 天然狀態(tài)，天然狀態(tài)，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、 -巰基乙醇巰基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巰基乙醇巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性非折疊狀態(tài)，無活性（二）一級結構相似的蛋白質具有相似的高級（二）一級結構相似的蛋白質具有相似的高級結構與功能結構與功能一級結構相似的多肽或蛋白質，其空間構象一級結構相似的多

41、肽或蛋白質，其空間構象以及功能也相似。以及功能也相似。 氨基酸殘基序號氨基酸殘基序號胰島素胰島素 A5 5 A6 6 A10 10 A3030 人人 Thr Ser Ile Thr 豬豬 Thr Ser Ile Ala 狗狗 Thr Ser Ile Ala 兔兔 Thr Gly Ile Ser 牛牛 Ala Gly Val Ala 羊羊 Ala Ser Val Ala 馬馬 Thr Ser Ile Ala（三）（三）氨基酸序列提供重要的生物進化信息氨基酸序列提供重要的生物進化信息一些廣泛存在于生一些廣泛存在于生物界的蛋白質如細胞色物界的蛋白質如細胞色素素(cytochrome C)，比，比較它

42、們的一級結構，可較它們的一級結構，可以幫助了解物種進化間以幫助了解物種進化間的關系。的關系。 （四）重要蛋白質的氨基酸序列改變可引起疾病（四）重要蛋白質的氨基酸序列改變可引起疾病n例：鐮刀形紅細胞貧血例：鐮刀形紅細胞貧血N-val his leu thr pro glu glu C(146)HbS 肽鏈肽鏈HbA 肽肽 鏈鏈N-val his leu thr pro val glu C(146) 這種由蛋白質分子發(fā)生變異所導致的疾病，這種由蛋白質分子發(fā)生變異所導致的疾病，稱為稱為“分子病分子病”。n肌紅蛋白肌紅蛋白/ /血紅蛋白血紅蛋白含有血紅素輔基含有血紅素輔基血紅素結構血紅素結構 二、二、

43、蛋白質的功能依賴特定空間結構蛋白質的功能依賴特定空間結構（一）（一）血紅蛋白亞基與肌紅蛋白結構相似血紅蛋白亞基與肌紅蛋白結構相似n肌紅蛋白肌紅蛋白( (myoglobin，Mb) ) 肌紅蛋白是一個只有三級肌紅蛋白是一個只有三級結構的單鏈蛋白質，有結構的單鏈蛋白質，有8 8段段 - -螺螺旋結構。旋結構。血紅素分子中的兩個丙酸血紅素分子中的兩個丙酸側鏈以離子鍵形式與肽鏈中的側鏈以離子鍵形式與肽鏈中的兩個堿性氨基酸側鏈上的正電兩個堿性氨基酸側鏈上的正電荷相連，加之肽鏈中的荷相連，加之肽鏈中的F8F8組氨組氨酸殘基還與酸殘基還與FeFe2+2+形成配位結合，形成配位結合，所以血紅素輔基與蛋白質部分

44、所以血紅素輔基與蛋白質部分穩(wěn)定結合。穩(wěn)定結合。 n血紅蛋白血紅蛋白( (hemoglobin，Hb) )血紅蛋白具有血紅蛋白具有4個亞個亞基組成的四級結構，基組成的四級結構，每每個亞基可結合個亞基可結合1 1個血紅素個血紅素并攜帶并攜帶1 1分子氧分子氧。Hb亞基之間通過亞基之間通過8對鹽鍵，使對鹽鍵，使4個亞基緊密個亞基緊密結合而形成親水的球狀結合而形成親水的球狀蛋白。蛋白。 脫氧脫氧Hb亞基間和亞基內(nèi)的鹽鍵亞基間和亞基內(nèi)的鹽鍵 Hb與Mb一樣能可逆地與O2結合， Hb與O2結合后稱為氧合Hb。氧合Hb占總Hb的百分數(shù)（稱百分飽和度）隨O2濃度變化而改變。（二）血紅蛋白亞基構象變化可影響亞基

45、（二）血紅蛋白亞基構象變化可影響亞基與氧結合與氧結合肌紅蛋白肌紅蛋白(Mb)和血紅蛋白和血紅蛋白(Hb)的氧解離曲線的氧解離曲線n協(xié)同效應(cooperativity)一個寡聚體蛋白質的一個亞基與其配體結合后，能影響此寡聚體中另一個亞基與配體結合能力的現(xiàn)象，稱為協(xié)同效應。 如果是促進作用則稱為正協(xié)同效應 (positive cooperativity)如果是抑制作用則稱為負協(xié)同效應(negative cooperativity)血紅素與氧結合后，鐵原子半徑變小，就能進血紅素與氧結合后，鐵原子半徑變小，就能進入卟啉環(huán)的小孔中，繼而引起肽鏈位置的變動。入卟啉環(huán)的小孔中，繼而引起肽鏈位置的變動。n別

46、構效應(allosteric effect)蛋白質空間結構的改變伴隨其功能的變化，稱為別構效應。（三）蛋白質構象改變（三）蛋白質構象改變可引起疾病可引起疾病蛋白質構象疾病蛋白質構象疾?。喝舻鞍踪|的折疊發(fā)生：若蛋白質的折疊發(fā)生錯誤，盡管其一級結構不變，但蛋白質的構錯誤，盡管其一級結構不變，但蛋白質的構象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴重時可導象發(fā)生改變，仍可影響其功能，嚴重時可導致疾病發(fā)生。致疾病發(fā)生。蛋白質構象改變導致疾病的機理蛋白質構象改變導致疾病的機理：有些蛋：有些蛋白質錯誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解白質錯誤折疊后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)酶的淀粉

47、樣纖維沉淀，產(chǎn)生毒性而致病，表現(xiàn)為蛋白質淀粉樣纖維沉淀的病理改變。為蛋白質淀粉樣纖維沉淀的病理改變。這類疾病包括這類疾病包括：人紋狀體脊髓變性病、老：人紋狀體脊髓變性病、老年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。年癡呆癥、亨停頓舞蹈病、瘋牛病等。瘋牛病是由朊病毒蛋白瘋牛病是由朊病毒蛋白(prion protein, PrP)引起的一組人和動物神經(jīng)退行性病變。引起的一組人和動物神經(jīng)退行性病變。正常的正常的PrP富含富含-螺旋，稱為螺旋，稱為PrPc。PrPc在某種未知蛋白質的作用下可轉變成全在某種未知蛋白質的作用下可轉變成全為為-折疊的折疊的PrPsc，從而致病。，從而致病。n瘋牛病中的蛋白質構象改變

48、瘋牛病中的蛋白質構象改變第四節(jié)第四節(jié)蛋白質的理化性質蛋白質的理化性質The Physical and Chemical Characters of Protein一、一、蛋白質具有兩性電離的性質蛋白質具有兩性電離的性質蛋白質分子除兩端的氨基和羧基可解離外，蛋白質分子除兩端的氨基和羧基可解離外，氨基酸殘基側鏈中某些基團，在一定的溶液氨基酸殘基側鏈中某些基團，在一定的溶液pH條條件下都可解離成帶負電荷或正電荷的基團。件下都可解離成帶負電荷或正電荷的基團。 當?shù)鞍踪|溶液處于某一當?shù)鞍踪|溶液處于某一pH時，蛋白質解離成時，蛋白質解離成正、負離子的趨勢相等，即成為兼性離子，凈電正、負離子的趨勢相等，即成

49、為兼性離子，凈電荷為零，此時溶液的荷為零，此時溶液的pH稱為稱為蛋白質的等電點。蛋白質的等電點。n蛋白質的等電點蛋白質的等電點( isoelectric point, pI)二、蛋白質具有膠體性質二、蛋白質具有膠體性質蛋白質屬于生物大分子之一，分子量可自蛋白質屬于生物大分子之一，分子量可自1萬至萬至100萬之巨，其分子的直徑可達萬之巨，其分子的直徑可達1100nm，為膠粒范圍之內(nèi)。為膠粒范圍之內(nèi)。 顆粒表面電荷顆粒表面電荷 水化膜水化膜n蛋白質膠體穩(wěn)定的因素蛋白質膠體穩(wěn)定的因素:+帶正電荷的蛋白質帶正電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質在等電點的蛋白質在等電點的蛋白質水化膜水化膜+帶正

50、電荷的蛋白質帶正電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質帶負電荷的蛋白質不穩(wěn)定的蛋白質顆粒不穩(wěn)定的蛋白質顆粒酸酸堿堿酸酸堿堿酸酸堿堿脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用脫水作用溶液中蛋白質的聚沉溶液中蛋白質的聚沉三、蛋白質空間結構破壞而引起變性三、蛋白質空間結構破壞而引起變性在某些物理和化學因素作用下，其特定的在某些物理和化學因素作用下，其特定的空間構象被破壞，也即有序的空間結構變成無空間構象被破壞，也即有序的空間結構變成無序的空間結構，從而導致其理化性質改變和生序的空間結構，從而導致其理化性質改變和生物活性的喪失。物活性的喪失。n蛋白質的變性蛋白質的變性(denaturation)n造成變性的因素造

51、成變性的因素: :如如加熱、乙醇等有機溶劑、強酸、強堿、加熱、乙醇等有機溶劑、強酸、強堿、重金屬離子及生物堿試劑等重金屬離子及生物堿試劑等 。 n變性的本質變性的本質: :破壞非共價鍵和二硫鍵，不改變蛋白破壞非共價鍵和二硫鍵，不改變蛋白質的一級結構。質的一級結構。n 應用舉例應用舉例: :臨床醫(yī)學上，變性因素常被應用來消毒及臨床醫(yī)學上，變性因素常被應用來消毒及滅菌。滅菌。此外此外, , 防止蛋白質變性也是有效保存蛋白質防止蛋白質變性也是有效保存蛋白質制劑（如疫苗等）的必要條件。制劑（如疫苗等）的必要條件。 若蛋白質變性程度較輕，去除變性因素若蛋白質變性程度較輕，去除變性因素后，蛋白質仍可恢復或

52、部分恢復其原有的構后，蛋白質仍可恢復或部分恢復其原有的構象和功能，稱為象和功能，稱為復性復性(renaturation) 。 天然狀態(tài)，天然狀態(tài)，有催化活性有催化活性 尿素、尿素、 -巰基乙醇巰基乙醇 去除尿素、去除尿素、-巰基乙醇巰基乙醇非折疊狀態(tài)，無活性非折疊狀態(tài)，無活性在一定條件下，蛋白疏水側鏈暴露在外，肽在一定條件下，蛋白疏水側鏈暴露在外，肽鏈融會相互纏繞繼而聚集，因而從溶液中析出。鏈融會相互纏繞繼而聚集，因而從溶液中析出。變性的蛋白質易于沉淀，有時蛋白質發(fā)生沉變性的蛋白質易于沉淀，有時蛋白質發(fā)生沉淀，但并不變性。淀，但并不變性。 蛋白質變性后的絮狀物加熱可變成比較堅固蛋白質變性后的絮

53、狀物加熱可變成比較堅固的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。的凝塊，此凝塊不易再溶于強酸和強堿中。 n蛋白質沉淀蛋白質沉淀n蛋白質的凝固作用蛋白質的凝固作用(protein coagulation)四、蛋白質四、蛋白質在紫外光譜區(qū)有特征性吸收峰在紫外光譜區(qū)有特征性吸收峰由于蛋白質分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸由于蛋白質分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此在和色氨酸，因此在280nm波長處有特征性吸收波長處有特征性吸收峰。蛋白質的峰。蛋白質的A280與其濃度呈正比關系，因此與其濃度呈正比關系，因此可作蛋白質定量測定。可作蛋白質定量測定。蛋白質經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸也可發(fā)生茚蛋白質經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基

54、酸也可發(fā)生茚三酮反應。三酮反應。 蛋白質和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與蛋白質和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應稱為硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應稱為雙雙縮脲反應縮脲反應，雙縮脲反應可用來檢測蛋白質水解，雙縮脲反應可用來檢測蛋白質水解程度。程度。五、應用蛋白質呈色反應可測定蛋白質五、應用蛋白質呈色反應可測定蛋白質溶液含量溶液含量1. 茚三酮反應茚三酮反應(ninhydrin reaction)2. 雙縮脲反應雙縮脲反應(biuret reaction)第五節(jié)第五節(jié)蛋白質的分離純化與結構分析蛋白質的分離純化與結構分析The Separation and Purif

55、ication and Structure Analysis of Protein一、一、透析及超濾法可去除蛋白質溶液中的透析及超濾法可去除蛋白質溶液中的小分子化合物小分子化合物應用正壓或離心力使蛋白質溶液透過有一應用正壓或離心力使蛋白質溶液透過有一定截留分子量的超濾膜，達到濃縮蛋白質溶液定截留分子量的超濾膜，達到濃縮蛋白質溶液的目的。的目的。n透析透析(dialysis)n超濾法超濾法利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法物分開的方法。二、丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀是常用二、丙酮沉淀、鹽析及免疫沉淀是常用的蛋白質濃縮方法的蛋白質濃縮方法使用使用丙酮

56、沉淀丙酮沉淀時，必須在時，必須在04低溫下進行，低溫下進行，丙酮用量一般丙酮用量一般10倍于蛋白質溶液體積。蛋白質倍于蛋白質溶液體積。蛋白質被丙酮沉淀后，應立即分離。除了丙酮以外，被丙酮沉淀后，應立即分離。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。也可用乙醇沉淀。 鹽析鹽析(salt precipitation)是將硫酸銨、硫酸鈉或是將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質溶液，使蛋白質表面電荷氯化鈉等加入蛋白質溶液，使蛋白質表面電荷被中和以及水化膜被破壞，導致蛋白質沉淀。被中和以及水化膜被破壞，導致蛋白質沉淀。 免疫沉淀法：免疫沉淀法：將某一純化蛋白質免疫動物可獲得將某一純化蛋白質免疫動物可獲得抗該蛋白的特

57、異抗體。利用特異抗體識別相應的抗該蛋白的特異抗體。利用特異抗體識別相應的抗原蛋白，并形成抗原抗體復合物的性質，可從抗原蛋白，并形成抗原抗體復合物的性質，可從蛋白質混合溶液中分離獲得抗原蛋白。蛋白質混合溶液中分離獲得抗原蛋白。 三、利用荷電性質可電泳分離蛋白質三、利用荷電性質可電泳分離蛋白質蛋白質在高于或低于其蛋白質在高于或低于其pIpI的溶液中為帶電的的溶液中為帶電的顆粒，在電場中能向正極或負極移動。這種通過顆粒，在電場中能向正極或負極移動。這種通過蛋白質在電場中泳動而達到分離各種蛋白質的技蛋白質在電場中泳動而達到分離各種蛋白質的技術術, , 稱為稱為電泳電泳(elctrophoresis)

58、。根據(jù)支撐物的不同，可分為薄膜電泳、凝膠根據(jù)支撐物的不同，可分為薄膜電泳、凝膠電泳等。電泳等。 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳，常用于蛋白質分子，常用于蛋白質分子量的測定。量的測定。等電聚焦電泳等電聚焦電泳，通過蛋白質等電點的差異而分，通過蛋白質等電點的差異而分離蛋白質的電泳方法。離蛋白質的電泳方法。雙向凝膠電泳雙向凝膠電泳是蛋白質組學研究的重要技術。是蛋白質組學研究的重要技術。n幾種重要的蛋白質電泳幾種重要的蛋白質電泳:四、四、應用相分配或親和原理可將蛋白質應用相分配或親和原理可將蛋白質進行層析分離進行層析分離待分離蛋白質溶液（流動相）經(jīng)過一個固待分離蛋白質溶液（流動相）經(jīng)過一個固態(tài)物質（固定相）時，根據(jù)溶液中待分離的蛋態(tài)物質（固定相）時，根據(jù)溶液中待分離的蛋白質顆粒大小、電荷多少及親和力等，使待分白