促性腺激素抑制激素對性腺,垂體的發(fā)育和維護

1、 作者：Takayoshi Ubuka, Kazuyoshi Ukena, Peter J. Sharp, George E. Bentley, and Kazuyoshi Tsutsui 通訊地址：Kazuyoshi Tsutsui，腦科學(xué)實驗室，廣島大學(xué)綜合藝術(shù)與科學(xué)學(xué)院，739-8521，東廣島，日本1.研究背景任何有關(guān)神經(jīng)肽能夠抑制促性腺激素的的分泌的說法沒有得到證實，他們最近證明了在鵪鶉中一種新型的下丘腦十二肽能直接抑制促性縣激素的釋放，并命名它為GnIH,抑制促性腺激素釋放的作用是以鵪鶉下丘腦中一種新型G蛋白偶聯(lián)受體為媒介的。這個新的促性腺激素抑制系統(tǒng)被看作是鳥類的普遍特性，以一個

2、完全新穎的觀點，提供了一個前所未有的機遇來研究鳥類繁殖調(diào)控。為了了解GnIH在家禽生殖方面的作用，他們調(diào)查了GnIH在性腺發(fā)育和維護的作用。通過滲透泵給成熟的鳥類連續(xù)施加兩周的GnIH,降低了促性腺激素共同，LH亞基mRNA的表達。 PlasmaLH和睪酮濃度也降低。此外，給成熟鳥類施加GnIH會誘發(fā)睪丸中睪丸細胞的凋亡和降低生精活性。對不成熟的鳥類兩周每天施加GnIH會抑制正常睪丸細胞的生長和血漿睪酮濃度的升高。幼年時蛻毛抑制也在給予GnIH后發(fā)生，這些結(jié)果暗示GnIH通過降低促性腺激素的合成和釋放來抑制性腺發(fā)育和維護。GnIH也許能夠解釋在鵪鶉中下丘腦的GnRH可觀察到降低之前光照能夠誘發(fā)

3、性腺的回歸的現(xiàn)象。據(jù)他們所知，GnIH是首種被證明能抑制任何脊椎動物生殖功能的一種下丘腦神經(jīng)肽。2.目的及意義為了闡示GnIH作用模式。GnIH功能性意義和它作為一種涉及到家禽生殖關(guān)鍵神經(jīng)肽的潛在功能。為了調(diào)查GnIH是否抑制睪丸細胞的發(fā)育與維護。3.材料和方法 動物：成熟和未成熟的雄性日本鵪鶉。新孵出的鵪鶉被放置在一個溫度控制室(352)日常16小時光照和8小時黑暗(開燈700小時)育雛第一周。溫度以每周下降3.5 的梯度到第四周，將鵪鶉分離到單獨的籠子。所有的鳥類提供鵪鶉食物和自來水。實驗計劃:為了確定GnIH合成和分泌的影響，利用小型滲透泵把GnIH施加給三個月大的成熟個體，用三個不用的

4、劑量(0.03,0.3,3微克GnIH在0.5微升0.9%的生理鹽水中/h,每組七只），對照組用相同的滲透泵攝入生理鹽水。每個滲透泵在戊巴比妥鈉（40mg/kg)下植入ip（趨化因子干擾素誘導(dǎo)蛋白），在連續(xù)兩周的施加GnIH后，所有鳥類在1400至1600小時之間通過去頭終止生命活動，血液收集在肝素化中并在4離心20min，血漿保存在20 ，立即收集血液后去除垂體，將其速凍，保存在-80中。促性性腺激素common ，LH和FSH亞基mRNA在垂體表達用競爭性PCR量化。PlasmaLH和睪酮濃度用RIA量化。 為了調(diào)查GnIH在睪丸發(fā)育方面的影響，向不成熟的鵪鶉（每組8只)注射三種不同劑量的

5、GnIH，從8-20日齡開始在1400-1600小時之間每天一次，因為不成熟鵪鶉體型較小，注射用小型滲透泵。它們在實驗過程中，平均體重由17.1g增至56.8g。將GnIH劑量由5.8ng每天降至1.8ng每天/g（體重）。對照組僅提供生理鹽水。所有的鵪鶉在1400-1600小時之間，在第二十一天的時候通過去頭收集血液和睪丸，血液收集后，移除睪丸，稱重，浸泡在Bouin氏固定液里兩天。隨后脫水嵌入石蠟，切成6微米小段蘇木-伊紅染色用于組織學(xué)檢查，血漿睪酮濃度用RIA量化。 為了調(diào)查GnIH睪丸細胞凋亡和生精活動的影響，用滲透泵給成熟的鳥類施加GnIH(0.3微克/h)兩周。在1400-1600

6、小時之間將其麻醉并且在用完4%多聚醛的固定液后用PBS灌流。去除睪丸存于固定液兩天，然后脫水嵌入石蠟。切成6微米的小段，通過末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記檢測凋亡細胞，睪丸的形態(tài)通過蘇木-伊紅染色調(diào)查。 最后為了了解GnIH家禽生殖的生理作用，我們分析了GnIH在幼年蛻毛到成熟時成年蛻毛的影響，GnIH被注射入未成熟鳥類，以三種不同的劑量（0.01,0.1,1微克在100微升0.9%的生理鹽水中）每天一次，每組8只，8-20日齡，1400-1600小時之間，對照組僅提供生理鹽水。4.結(jié)果分析 成年時GnIH對促性腺激素合成和釋放的作用圖一成年時GnIH對血漿睪酮濃度，睪丸凋亡細胞，生精活動的作用。圖二圖三圖四發(fā)育時期GnIH對睪丸生長，生精活動以及血漿睪酮濃度的作用圖五圖六圖七發(fā)育時期GnIH對幼年蛻毛進入成年的影響5.討論 實驗數(shù)據(jù)表明，GnIH直接作用于垂體GnIH受體，導(dǎo)致促性腺激素的合成和釋放減少 ，抑制睪丸的發(fā)育和維護 ，但不能排除GnIH對睪丸的直接作用，然而，體外促黃體激素直接抑制和GnIH