癌癥檢測新方向-液體活檢

1、液體活檢介紹在我國癌癥篩查結(jié)果中，只有20%是早期，80%的癌癥查出來都是中晚期了，而這20%的癌癥早期還是體檢查出來的。眾所周知，癌癥越早發(fā)現(xiàn)治愈率越高，但患者缺乏相應(yīng)的篩查手段，體檢得來的報(bào)告結(jié)果，其靈敏度和準(zhǔn)確度都相對(duì)較低。如今在美國，一種被稱為液體活檢的檢測方法正開始興起，為一些病人省去了手術(shù)活檢和穿刺活檢，這兩種活檢是長期需要來指導(dǎo)病人癌癥治療的。目前國內(nèi)也有一些生物公司在研發(fā)液體活檢技術(shù)-只需抽取68ml血，就能篩查是否患有6大常見癌癥肺癌、胃癌、食管癌、肝癌、大腸癌、乳腺癌，準(zhǔn)確率超過80%，花費(fèi)約20003000元。液體活檢是什么？真的像宣傳的那么有效么？液體活檢作為體外診斷的

2、一個(gè)分支,是指一種非侵入式的血液測試,能監(jiān)測腫瘤或轉(zhuǎn)移灶釋放到血液的循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)和循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)碎片,是檢測腫瘤和癌癥、輔助治療的突破性技術(shù)。它的優(yōu)勢在于能解決精準(zhǔn)醫(yī)療的痛點(diǎn),通過非侵入性取樣降低活檢危害,而且有效延長患者生存期,具有高性價(jià)比。液體活檢技術(shù)主要包括CTC 和ctDNA，以及外泌體檢測。基因突變是腫瘤產(chǎn)生開展的重要原因，幾乎所有癌癥患者都攜帶有DNA突變，這些突變只存在于腫瘤細(xì)胞而不存在于正常細(xì)胞，因此為腫瘤組織的檢測與跟蹤提供了方便的特異性生物標(biāo)記。種類繁多的突變位點(diǎn)及基因型也為腫瘤的精確診療提供了必要的信息。1.液體活檢尚不能用于腫瘤早篩。早篩是指對(duì)腫

3、瘤的預(yù)測，以及早期腫瘤的檢查。因?yàn)橹挥挟?dāng)腫瘤生長到一定階段后，CTC或者ctDNA進(jìn)入血液，才能通過液體活檢的方式檢測出來。而此時(shí)，腫瘤往往已經(jīng)生長到一定規(guī)模，不再是早期腫瘤了。2.液體活檢技術(shù)不是傳統(tǒng)檢查的替代技術(shù)。腫瘤的初步診斷、確診和療效評(píng)估，應(yīng)該根據(jù)實(shí)際情況，結(jié)合影像、腫瘤標(biāo)志物和液體活檢等檢查方式綜合判斷。液體活檢在一定程度上解決了傳統(tǒng)技術(shù)的局部局限性，但尚缺乏以替代傳統(tǒng)檢測技術(shù)。一、 液體活檢介紹1. 循環(huán)腫瘤細(xì)胞circulating tumor cells,CTCs 循環(huán)腫瘤細(xì)胞circulating tumor cells,CTCs是游離于血液循環(huán)系統(tǒng)中的腫瘤細(xì)胞，來源于原發(fā)

4、腫瘤組織，是腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要方式，也是腫瘤患者術(shù)后復(fù)發(fā)的重要原因，同事還是激發(fā)癌癥致死機(jī)制的重要因素。CTC作為腫瘤細(xì)胞，不僅包含腫瘤的DNA信息，同時(shí)還包含基因組、蛋白質(zhì)組等信息，是研究腫瘤組織信息的豐富來源。1二代CTC檢測技術(shù)1.密度梯度離心可將CTC與紅細(xì)胞白細(xì)胞別離，根據(jù)不同密度沉降在不同區(qū)間而進(jìn)行別離。目前市場上有較多的這種類型的試劑盒，F(xiàn)icoll-paque solutionPharmacia Fine Chmeicals，Sweden，OncoQuick等。2.過濾法依據(jù)CTC體積大雨血細(xì)胞的特性，對(duì)CTC進(jìn)行捕獲。CTC的直徑約為1020um，而血細(xì)胞大小為712um，通

5、過過濾，留下體積比擬大的CTC.隨著對(duì)CTC研究深入，發(fā)現(xiàn)很多CTC與白細(xì)胞大小類似甚至只有它一半或者更小。這些小或者超小CTC的數(shù)目比例在某些腫瘤中可高達(dá)三分之一。3.微控流芯片針對(duì)CTC的體積和可變形性對(duì)CTC進(jìn)行捕獲，CTC的捕獲率和特異性可到達(dá)80%以上。不僅能夠檢測CTC的數(shù)量，而且可以別離活細(xì)胞進(jìn)行其他分析，是未來CTC檢測的開展方向，微流控芯片內(nèi)CTC的分選富集方法主要分為生物化學(xué)方法和物理別離法。生物化學(xué)方法指的是選擇特異性抗體對(duì)細(xì)胞外表表達(dá)的標(biāo)志物進(jìn)行特異性的抗原抗體吸附，到達(dá)分選的目的，物理法主要應(yīng)用外力場電、磁場、流體場、超聲波等基于細(xì)胞間的物理特性差異大小、變形性、密度

6、、介電性等進(jìn)行別離。4.其他別離方法核心原理還是利用CTC免疫學(xué)和物理學(xué)特性，但是缺乏臨床數(shù)據(jù)驗(yàn)證。2CTC臨床應(yīng)用1.輔助診斷。主要是在常規(guī)手段無法對(duì)早期腫瘤進(jìn)行判斷時(shí)進(jìn)行。2.療效評(píng)估。癌癥患者進(jìn)行化療、靶向治療后進(jìn)行CTC檢測，假設(shè)CTC數(shù)量減少，那么提示治療方式可能有效，相比于現(xiàn)階段的CT、MRI等檢查手段，CTC檢測技術(shù)操作更方便，應(yīng)用更簡單，可以更及時(shí)地提示醫(yī)生該患者是否適合化療或者靶向治療。3.術(shù)后監(jiān)測。以肺癌為例，肺癌患者手術(shù)后約50%可能復(fù)發(fā)，術(shù)后監(jiān)測非常重要，目前主要監(jiān)測手段是3或6個(gè)月進(jìn)行CTC檢查，因活檢無法高頻次檢查，而CTC可以克服這個(gè)缺點(diǎn)，及時(shí)檢測血液中CTC的變

7、化，在癌癥發(fā)生的早期就及時(shí)進(jìn)行治療，能提高患者存活率。2.血漿游離腫瘤DNA( Cell-Free' Circulating Tumor DNA，ctDNA)ctDNA:是指人體血液循環(huán)系統(tǒng)中不斷流動(dòng)的攜帶一定包括突變、缺少、插入、重排、拷貝數(shù)異常、甲基化等來自腫瘤基因組的DNA片段。CtDNA的主要來源包括：1.來自壞死的腫瘤細(xì)胞 2.來自凋亡的腫瘤細(xì)胞 3.循環(huán)腫瘤細(xì)胞 4.來自腫瘤細(xì)胞分泌的外排體。cfDNA最成熟的應(yīng)用是NIPT無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測，抽取孕婦靜脈血分析胎兒游離的片段DNA，判斷胎兒患唐氏綜合征21、18、13三體綜合征的概率。已經(jīng)是國內(nèi)常見的優(yōu)生優(yōu)育篩查手段。對(duì)ct

8、DNA的分析包括定性和定量的分析，其中定性分析包括檢測基因突變、缺失、插入、融合、重排、拷貝數(shù)變異、甲基化、微衛(wèi)星不穩(wěn)定MSI和雜合性缺失LOH等，定量分析就是計(jì)算ctDNA在血液中實(shí)時(shí)的含量，定性和定量均可反響腫瘤的存在和嚴(yán)重程度。理論上說，一個(gè)細(xì)胞含有約67pg的DNA,1ml血能提取10ng游離DNA,相當(dāng)于來自約20003000個(gè)凋亡細(xì)胞的DNA量，但是一般情況下只占整個(gè)循環(huán)DNA的1%，甚至0.01%。因此，這對(duì)DNA的檢測技術(shù)提出了比擬高的要求。目前國內(nèi)外均沒有成熟產(chǎn)品，主要有兩個(gè)方向：一是應(yīng)用測序技術(shù)直接獲取ctDNA序列信息，另外利用DNA擴(kuò)增技術(shù)PCR檢測包含特定序列的ctD

9、NA的濃度。ctDNA的技術(shù)開展可以預(yù)測向著高精度和高通量的方向開展。NGS由于其價(jià)格因素，未來還是用于研發(fā)，所以最新的研究都集中在富集靶向DNA,將富集后的DNA做深度測序可以大幅度降低本錢，但是如何高效準(zhǔn)確的富集目的DNA序列仍舊是ctDNA檢測的瓶頸。所以還是處于前期開展階段，離真正走向臨床還有一段距離要走。3外泌體外泌體exosome是細(xì)胞分泌出的小泡，小泡中包含蛋白質(zhì)、DNA、信使RNA以及一些非編碼RNA，是細(xì)胞之間溝通的載體，研究發(fā)現(xiàn)這些外泌體與腫瘤的發(fā)生、開展、轉(zhuǎn)移以及抗藥性具有一定的相關(guān)性。腫瘤細(xì)胞以這些小泡為載體幫助其逃過免疫系統(tǒng)的監(jiān)視，這些小泡一方面給腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移指引方

10、向，另一方面也創(chuàng)造適合腫瘤生長的微環(huán)境。外泌體攜帶的信息多樣化。其中的蛋白質(zhì)和核酸，均可用于癌癥的早診、復(fù)發(fā)監(jiān)測、抗藥性監(jiān)測等相關(guān)方面的分析。而且外泌體在數(shù)量上多于CTC,更容易富集，在形式上分泌小泡能夠有效保護(hù)核酸類物質(zhì)，克服了ctDNA在血液中易降解的問題，在臨床應(yīng)用上有廣泛前景。但是外泌體的研究尚處于臨床早期，參與公司較少。4液體活檢技術(shù)比擬二、市場現(xiàn)狀癌癥液體活檢作為基因測序產(chǎn)業(yè)下的一個(gè)細(xì)分領(lǐng)域，與基因測序有著非常相似的產(chǎn)業(yè)鏈模式?，F(xiàn)有基因測序產(chǎn)業(yè)鏈分為上游儀器與耗材生產(chǎn)銷售企業(yè)，中游檢測效勞提供企業(yè)，以及下游數(shù)據(jù)分析企業(yè)，由于單純提供測序效勞技術(shù)門檻不高、競爭劇烈，導(dǎo)致中游測序效勞企

11、業(yè)利潤微博。故國內(nèi)大多數(shù)有能力的測序效勞公司都自行提供結(jié)果分析效勞，在腫瘤基因檢測領(lǐng)域更甚。基因測序公司提供的腫瘤檢測報(bào)告幾乎都會(huì)提供相關(guān)的基因突變位點(diǎn)分析，供醫(yī)生參考，因此，腫瘤液體活檢產(chǎn)業(yè)鏈可以劃分為上游器械耗材企業(yè)和中下游監(jiān)測分析企業(yè)。上游企業(yè)的核心競爭力是技術(shù)。提供核心技術(shù)的CTC分析儀、數(shù)字PCR儀、二代測序儀及配合使用的試劑盒關(guān)鍵技術(shù)掌握在國外幾個(gè)公司手里，而且技術(shù)壁壘較高，專利保護(hù)嚴(yán)格，這幾個(gè)國外大公司相當(dāng)于壟斷瓜分大局部市場。在國內(nèi)基因測序行業(yè)中，國外儀器提供商的議價(jià)能力很強(qiáng)，為擺脫這種影響，局部國內(nèi)公司發(fā)奮圖強(qiáng)，嘗試自主研發(fā)儀器耗材或者通過重組并購上游企業(yè)。已有幾家國內(nèi)公司通

12、過并購實(shí)現(xiàn)二代測序儀的生產(chǎn)。但在比拼核心技術(shù)方面，國內(nèi)“山寨版性能與同功能的國外版性能有不小的差距，而且國內(nèi)產(chǎn)品同質(zhì)化嚴(yán)重，競爭劇烈。目國內(nèi)的腫瘤液體活檢也綁上了火箭般的速度開展。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，自2021年以來成立做二代測序的公司都到達(dá)了200多家，而開展腫瘤液體活檢多數(shù)采用二代測序技術(shù)對(duì)ctDNA進(jìn)行分析。所以液體活檢初期開展階段，在腫瘤組織活檢市場上有強(qiáng)勢銷售地位的公司如假設(shè)緊跟CTC、ctDNA的潮流，發(fā)揮原有市場的作用，對(duì)其進(jìn)行局部產(chǎn)品替代，即可快速搶占液體活檢市場份額。即誰有渠道進(jìn)入醫(yī)院就能占山為王。中下游企業(yè)的競爭點(diǎn)除了銷售渠道，就剩下數(shù)據(jù)解讀分析能力了。樣本量越大、信息越全面來源

13、數(shù)據(jù)越可靠的數(shù)據(jù)庫必定更受市場青睞。國內(nèi)的基因測序公司都在積極積累自有數(shù)據(jù)庫并優(yōu)化基因數(shù)據(jù)的解讀分析能力，但都沒有形成絕對(duì)優(yōu)勢，行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)也有待建立。三、 審批制度在美國的醫(yī)療器械拿到臨床準(zhǔn)入有“雙通道制，第一是可以通過FDA認(rèn)證，拿到臨床準(zhǔn)入，產(chǎn)品可以在市場上推廣和銷售；二是獲得CLIA認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室，可以實(shí)現(xiàn)臨床實(shí)驗(yàn)室的消費(fèi)級(jí)和科研應(yīng)用。CLIA實(shí)驗(yàn)室能夠根據(jù)市場的現(xiàn)實(shí)需求，快速地開發(fā)實(shí)驗(yàn)室自建工程，并通過在臨床上的應(yīng)用給與可靠的臨床指導(dǎo)。CLIA認(rèn)證解決了根底研究和臨床應(yīng)用之間低效率轉(zhuǎn)化甚至脫節(jié)的問題，對(duì)轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)和研究成果轉(zhuǎn)化有非常重要的意義。美國大局部液態(tài)活檢公司都是走CLIA認(rèn)證而非FD

14、A認(rèn)證。國內(nèi)也借鑒這種方式來標(biāo)準(zhǔn)基因檢測公司的競爭。國內(nèi)的基于基因檢測的液態(tài)活檢工程進(jìn)入臨床也實(shí)行雙重監(jiān)管，所有儀器設(shè)備，試劑歸CFDA報(bào)批管理，臨床實(shí)驗(yàn)室歸屬衛(wèi)計(jì)委這與美國CLIA認(rèn)證制度類似，即要求試點(diǎn)單位內(nèi)部有嚴(yán)格的質(zhì)量控制，并且相關(guān)工作人員需經(jīng)培訓(xùn)合格上崗，那么不受CFDA對(duì)儀器和試劑的注冊(cè)限制。未來ctDNA的開展將會(huì)嚴(yán)重依賴渠道資源及疾病樣本資源，且CFDA對(duì)產(chǎn)品臨床資質(zhì)的管理也將越來越嚴(yán)格，未來 ctDNA公司最可能的業(yè)務(wù)模式為：國家批準(zhǔn)的臨床應(yīng)用試點(diǎn)單位自行進(jìn)行臨床實(shí)驗(yàn)，類似于美國CLIA實(shí)驗(yàn)室；不具有試點(diǎn)資格的企業(yè)通過與醫(yī)院合作，獲取醫(yī)院外包效勞資質(zhì)，但以科研效勞為主；不具有

15、試點(diǎn)資格的企業(yè)通過與醫(yī)院合作，自行進(jìn)行診斷試劑盒報(bào)批，并把產(chǎn)品投向醫(yī)院。值得注意的是，目前獲得批準(zhǔn)的臨床試點(diǎn)單位數(shù)量較少，對(duì)應(yīng)的樣本量也受限，在大量ctDNA公司劇烈競爭市場蛋糕的情況下，獲得入場券、保證渠道及樣本優(yōu)勢將會(huì)非常關(guān)鍵。所以，技術(shù)、渠道資源在ctDNA領(lǐng)域依然缺一不可。四、 國家政策支持從精準(zhǔn)醫(yī)療概念的提出，國家就制定了一系列戰(zhàn)略方案積極鼓勵(lì)以DNA測序?yàn)楦椎木珳?zhǔn)醫(yī)療。2021年3月科技部召開國家首次精準(zhǔn)醫(yī)療戰(zhàn)略專家會(huì)議，提出在2030年以前投入600億元用于精準(zhǔn)醫(yī)療。同月衛(wèi)計(jì)委發(fā)布?國家衛(wèi)生計(jì)生委醫(yī)政醫(yī)管局關(guān)于腫瘤診斷與治療工程高通量基因測序技術(shù)臨床應(yīng)用試點(diǎn)工作的通知?，包括1

16、4家醫(yī)療機(jī)構(gòu)和6家第三方檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室。另外發(fā)布以腫瘤個(gè)體化治療、藥物代謝酶及作用靶點(diǎn)基因檢測的技術(shù)指南，旨在標(biāo)準(zhǔn)化推廣相關(guān)技術(shù)。2021年4月國家開展改革委員會(huì)下發(fā)了?關(guān)于第一批基因檢測技術(shù)應(yīng)用示范中心建設(shè)方案的復(fù)函?正式批復(fù)27個(gè)省市發(fā)改委關(guān)于基因檢測技術(shù)應(yīng)用示范中心的建設(shè)方案，從審批進(jìn)度來看，未來示范單位的審批已經(jīng)逐漸放開。這一系列政策的出臺(tái)顯示出政府對(duì)腫瘤基因測序從資金到監(jiān)管的全方位支持，也奠定了腫瘤基因測序的高端開展路線。五、 國內(nèi)外液體活檢現(xiàn)有產(chǎn)品六、 液體活檢臨床應(yīng)用方向、七、 現(xiàn)狀及展望2021年3月?第13屆中國肺癌頂峰論壇會(huì)議?專家共識(shí)中也提到了關(guān)于液體活檢：1本次公布的共識(shí)，

17、首先將共識(shí)的級(jí)別進(jìn)行了分類，因?yàn)橐后w活檢屬于新生事物，在許多判斷上全球也沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，因此首先將共識(shí)級(jí)別進(jìn)行分類，為未來共識(shí)的進(jìn)一步升級(jí)奠定了根底；2共識(shí)二將液體活檢范圍擴(kuò)大到了CTC、ctDNA和外泌體。隨著免疫治療對(duì)人群精準(zhǔn)治療的需求，未來相信針對(duì)腫瘤特異性免疫細(xì)胞和相關(guān)基因組序列特征的檢測，用以展開免疫治療療效的評(píng)估會(huì)納入共識(shí)二的更新版本中；3共識(shí)三提到NGS的優(yōu)勢在于檢測多個(gè)基因變異，隨著一些靶點(diǎn)的復(fù)雜變異形式出現(xiàn)，期待未來的共識(shí)會(huì)從描述靶點(diǎn)轉(zhuǎn)為描述變異位點(diǎn)，單個(gè)變異位點(diǎn)可能使用傳統(tǒng)的檢測方式更加適宜，而即使是單靶點(diǎn)遇到復(fù)雜變異形式如無熱點(diǎn)突變，使用NGS更加適宜；4共識(shí)四提到NGS

18、亦可用于研究探索，是其一個(gè)巨大優(yōu)勢，相信未來結(jié)合其他液體活檢技術(shù)探索臨床預(yù)后和監(jiān)測療效也會(huì)寫進(jìn)共識(shí)；5共識(shí)五非常全面的關(guān)注到了早期篩查和術(shù)后復(fù)發(fā)監(jiān)測，且提到目前無論是CTC還是ctDNA用于早期篩查都都僅限于科研探索。由于技術(shù)的限制，目前確實(shí)存在證據(jù)缺乏問題。隨著時(shí)間進(jìn)步，相信在2-3年內(nèi)，不僅新的檢測技術(shù)會(huì)納入到共識(shí)五中，且應(yīng)用也會(huì)進(jìn)入臨床實(shí)踐級(jí)別；6共識(shí)六專家在2A級(jí)別共識(shí)了NGS檢測要平衡患者利益、倫理和科學(xué)探索之間的關(guān)系，這是目前精準(zhǔn)醫(yī)療的一個(gè)重要特點(diǎn)，每個(gè)患者都是數(shù)據(jù)點(diǎn)，每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)都可能通過科學(xué)探索奉獻(xiàn)醫(yī)學(xué)和臨床，因此平衡好三者關(guān)系是推動(dòng)精準(zhǔn)醫(yī)療良性開展的重要根底。任何技術(shù)的臨床應(yīng)用

19、轉(zhuǎn)化都會(huì)經(jīng)歷三個(gè)階段：1.技術(shù)性能指標(biāo)確實(shí)認(rèn)；2.臨床應(yīng)用可行性的評(píng)估；3.臨床產(chǎn)品的轉(zhuǎn)化及落地?，F(xiàn)階段，液體活檢技術(shù)整體還處于第一階段到第二階段的過渡中。液體活檢的內(nèi)容包含cfDNA、CTC和外泌體，但其實(shí)技術(shù)成熟度、應(yīng)用廣泛性、法規(guī)支持等方面有很大差異，目前在臨床實(shí)際應(yīng)用中，ctDNA仍是目前最常用的液體活檢。而且，不管是NGS還是ARMS-PCR，目前應(yīng)用較多的還是針對(duì)明確的體細(xì)胞突變進(jìn)行靶向藥物治療的指導(dǎo)。對(duì)于多線治療失敗后無法取組織的患者進(jìn)行液體活檢對(duì)于探索耐藥機(jī)制，進(jìn)行療效監(jiān)測。NGS相比傳統(tǒng)方法有巨大優(yōu)勢。但是在技術(shù)尚未完善和標(biāo)準(zhǔn)化之前，野蠻生長的產(chǎn)業(yè)也許會(huì)帶來區(qū)域性的失控。那么

20、液體活檢走到臨床，還有哪些問題需要解決？1技術(shù)層面一方面，CTC和ctDNA檢測手段有待進(jìn)一步提高。CTCs僅少量存在于外周血，且異質(zhì)性很大，所以CTC的別離技術(shù)還面臨著很多挑戰(zhàn)，目前尚未找到特異的CTCs的外表標(biāo)志物，所以依賴外表標(biāo)志物的別離策略難以防止假陰性的出現(xiàn)，多種生物、物理技術(shù)被用來別離CTCs，使得CTCs的得率有了很大的提升，但是不同技術(shù)的原理不同，導(dǎo)致別離得到的細(xì)胞也各異，對(duì)CTCs的認(rèn)識(shí)還處于盲人摸象的階段，改良和標(biāo)準(zhǔn)化CTCs的別離技術(shù)顯得至關(guān)重要。目前ctDNA檢測常用驅(qū)動(dòng)基因的檢測，如外周血EGFR突變檢測，盡管具有高的特異性，但是敏感性徘徊于50%70%左右，成為ct

21、DNA檢測臨床應(yīng)用的瓶頸。另一方面，基因突變、表觀遺傳學(xué)變化和基因差異表達(dá)是個(gè)體化診療的主要檢測目標(biāo)。對(duì)應(yīng)的檢測技術(shù)包括等位基因特異PCR、甲基特異PCR，芯片技術(shù)和NGS；其原理和技術(shù)參數(shù)均有不同。在臨床應(yīng)用中，只有很好的將樣本類型與相關(guān)檢測技術(shù)相匹配才能獲得最優(yōu)化的臨床產(chǎn)品。滿足可并行檢測體細(xì)胞基因單一位點(diǎn)突變、基因擴(kuò)增和融合等多種突變類型，降低樣本用量。綜合分析當(dāng)前常用技術(shù)不難發(fā)現(xiàn)，真正符合這一要求的技術(shù)并不多，如常用的等位基因特異PCR技術(shù)靈敏度在110%左右，可根本滿足腫瘤組織基因檢測的要求，但在基因突變豐度如此低的液體活檢樣本面前卻顯得束手無策；ddPCR技術(shù)靈敏度可以到達(dá)0.1，

22、可以用于低豐度基因突變檢測，并已經(jīng)成功應(yīng)用于血漿EGFR檢測。但ddPCR只能對(duì)突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測，且不適用于融合基因。相比之下，NGS作為高通量的檢測技術(shù)優(yōu)勢就顯得非常明顯；通過不斷的優(yōu)化，已經(jīng)出現(xiàn)靈敏度到達(dá)萬分之一的NGS檢測試劑盒。而且NGS可以同時(shí)檢測多種基因突變類型，包括體細(xì)胞突變、基因擴(kuò)增和融合，可以對(duì)突變豐度低到0.02%的基因進(jìn)行檢測，且特意性到達(dá)96%，因此非常適合對(duì)液體活檢進(jìn)行基因檢測。資料個(gè)人收集整理，勿做商業(yè)用途第三，CTC和ctDNA的診斷價(jià)值還需要更多的研究去驗(yàn)證。目前，CTC在臨床上的使用還局限在術(shù)后或晚期病人計(jì)量外周血中CTCs的數(shù)量，預(yù)測預(yù)后，CTCs在早期患者中的研究很少，所