病毒感染和免疫

1、病毒感染和免疫 掌握 病毒的垂直傳播、水平傳播、顯性感染、隱性感染、持續(xù)性感染、慢性感染、潛伏感染、慢發(fā)病毒感染等定義及舉例。 干擾素的抗病毒作用。 熟悉 病毒感染的類型和傳播方式。 病毒的致病作用。 宿主抗病毒免疫。 了解 病毒在機(jī)體內(nèi)的播散。 掌握 標(biāo)本的采集與送檢。 病毒的細(xì)胞培養(yǎng)。 熟悉 病毒分離培養(yǎng)的方法與細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）。 病毒感染的現(xiàn)代診斷方法。 抗病毒治療。 病毒感染的免疫預(yù)防。 了解 病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的檢查與鑒定。 抗病毒基因治療及中草藥、免疫制劑等在抗病毒治療中的作用。 病毒感染預(yù)防用核酸疫苗和其他類型的疫苗。 動(dòng)物模型。一、病毒的傳染源、傳播方式與感染途徑一、病毒的

2、傳染源、傳播方式與感染途徑病毒的感染病毒的感染傳染源傳染源人人 （ 病人、隱性和慢性感染者）動(dòng)物動(dòng)物傳播方式傳播方式水平傳播水平傳播垂直傳播垂直傳播病毒在人群不同個(gè)體間的傳播病毒在人群不同個(gè)體間的傳播 通過(guò)胎盤、產(chǎn)道或哺乳等通過(guò)胎盤、產(chǎn)道或哺乳等 病毒由親代病毒由親代(母親母親)傳給子代傳給子代(胎兒胎兒)的方式的方式感染途徑感染途徑主要感染途徑傳播方式及媒介常見病毒呼吸道空氣、飛沫、皮屑呼吸道病毒等消化道污染水和食品腸道病毒、輪狀病毒甲、戊肝病毒等輸血注射等污染血、血制品、注射器乙肝病毒、HIV等眼泌尿生殖道接觸、游泳池、性交皰疹、腺病毒、HIV等胎盤、圍生期宮內(nèi)、產(chǎn)道、哺乳乙肝、HIV、風(fēng)

3、疹、巨細(xì)胞病毒等破損皮膚昆蟲叮咬、狂犬、鼠類出血熱、狂犬病毒腦炎病毒等人類病毒的感染途徑人類病毒的感染途徑二、病毒在體內(nèi)的播散和排泄二、病毒在體內(nèi)的播散和排泄局 部 = 局部感染病毒血 源 = 全身感染，二次病毒血癥神 經(jīng) = 嗜神經(jīng)病毒沿神經(jīng)移行三種播散形式：三種播散形式：多種類靶組織：多種類靶組織：全身感染時(shí)，病毒的靶組織包括各個(gè)部位 皮膚粘膜、內(nèi)臟器官、 神經(jīng)組織、免疫系統(tǒng)等等多途徑排泄：多途徑排泄： 呼吸道、消化道、 唾液、尿液、皮膚等等隱性或亞臨床感染inapparent viral infection /subclinical infection急性感染急性感染 Acute inf

4、ectiona.慢性感染慢性感染 Chronic infectionsb.潛伏感染潛伏感染 Latent infectionsc.慢發(fā)病毒感染慢發(fā)病毒感染 Slow virus infections持續(xù)性感染持續(xù)性感染 Persistent infection123隱隱性性顯顯性性三、病毒感染的類型三、病毒感染的類型隱性或亞臨床感染隱性或亞臨床感染inapparent viral infection /subclinical infection 概念：概念： 病毒侵入機(jī)體不引起臨床癥狀病毒侵入機(jī)體不引起臨床癥狀 特點(diǎn)特點(diǎn): 感染而無(wú)臨床癥狀感染而無(wú)臨床癥狀 病毒仍可增殖并向體外排出而成為重要的

5、傳染源。病毒仍可增殖并向體外排出而成為重要的傳染源。 機(jī)體可獲得免疫力機(jī)體可獲得免疫力 舉例：甲型肝炎、脊髓灰質(zhì)炎病毒、乙腦病毒感染舉例：甲型肝炎、脊髓灰質(zhì)炎病毒、乙腦病毒感染急性感染急性感染 Acute infection 概念概念 病毒感染機(jī)體后，短時(shí)間內(nèi)即被清除或?qū)е聶C(jī)體死病毒感染機(jī)體后，短時(shí)間內(nèi)即被清除或?qū)е聶C(jī)體死亡的過(guò)程。亡的過(guò)程。 特點(diǎn)特點(diǎn) 發(fā)病急，病程短，可為數(shù)日至數(shù)周，發(fā)病急，病程短，可為數(shù)日至數(shù)周， 恢復(fù)后體內(nèi)不再檢測(cè)到病毒恢復(fù)后體內(nèi)不再檢測(cè)到病毒 。 舉例舉例 普通感冒、流行性感冒等普通感冒、流行性感冒等持續(xù)性感染persistent viral infection 病毒在

6、機(jī)體內(nèi)持續(xù)數(shù)月、數(shù)年甚至數(shù)十年；可出現(xiàn)病毒在機(jī)體內(nèi)持續(xù)數(shù)月、數(shù)年甚至數(shù)十年；可出現(xiàn)癥狀也可不出現(xiàn)癥狀癥狀也可不出現(xiàn)癥狀 長(zhǎng)期帶毒，是重要傳染源長(zhǎng)期帶毒，是重要傳染源 產(chǎn)生原因產(chǎn)生原因 機(jī)體免疫力弱機(jī)體免疫力弱 病毒存在于受保護(hù)的部位或發(fā)生突變病毒存在于受保護(hù)的部位或發(fā)生突變 病毒抗原性弱病毒抗原性弱 基因整合基因整合1. 慢性感染慢性感染 chronic infection概念：概念： 病毒感染機(jī)體后可出現(xiàn)或不出現(xiàn)急性癥狀，隨機(jī)體免疫系統(tǒng)的激活，大部分病毒被清除，但有少數(shù)殘留在體內(nèi)，可持續(xù)存在機(jī)體中，并不斷排出體外，癥狀可有可無(wú)，可輕可重特點(diǎn)：特點(diǎn)：長(zhǎng)期感染，長(zhǎng)期排毒病毒可被分離培養(yǎng)或檢出舉例

7、：舉例：乙型肝炎、巨細(xì)胞病毒、EB病毒等所致的慢性感染Persistent infection2. 潛伏性感染潛伏性感染 latent infection概念：概念：特點(diǎn)：特點(diǎn)：舉例：舉例：急性或隱性感染后，病毒并不引起臨床癥狀，也不復(fù)制出大量的病毒顆粒，僅在一定的組織中潛伏存在。在某些條件下病毒被激活而急性發(fā)作，在急性發(fā)作期可檢測(cè)出病毒的存在。病毒長(zhǎng)期存在，時(shí)隱時(shí)現(xiàn)單純皰疹水痘帶狀皰疹Persistent infectionPrimary infectionreactivation單純皰疹病毒單純皰疹病毒HSV感染感染3. 慢發(fā)病毒感染慢發(fā)病毒感染 slow virus infection概

8、念：概念：特點(diǎn)：特點(diǎn)：舉例：舉例：感染后有很長(zhǎng)的潛伏期，既分離不到病毒，也無(wú)癥狀，待發(fā)病后，發(fā)展呈亞急性進(jìn)行性，并導(dǎo)致死亡潛伏期長(zhǎng)、慢性進(jìn)行性、預(yù)后差亞急性硬化性全腦炎（SSPE）AIDS朊粒感染Persistent infectionAIDS四、病毒感染的致病機(jī)制四、病毒感染的致病機(jī)制病毒對(duì)宿主細(xì)胞的直接作用病毒對(duì)宿主細(xì)胞的直接作用 細(xì)胞水平的病毒感染細(xì)胞水平的病毒感染殺細(xì)胞或細(xì)胞病變機(jī)制殺細(xì)胞或細(xì)胞病變機(jī)制細(xì)胞轉(zhuǎn)化和永生化機(jī)制細(xì)胞轉(zhuǎn)化和永生化機(jī)制病毒感染誘發(fā)的免疫損傷病毒感染誘發(fā)的免疫損傷 免疫病理作用與免疫抑制免疫病理作用與免疫抑制病毒的免疫逃逸病毒的免疫逃逸 1、病毒對(duì)宿主細(xì)胞的直接作

9、用、病毒對(duì)宿主細(xì)胞的直接作用殺細(xì)胞效應(yīng)殺細(xì)胞效應(yīng)穩(wěn)定狀態(tài)感染穩(wěn)定狀態(tài)感染包涵體形成包涵體形成細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡基因整合與細(xì)胞轉(zhuǎn)化基因整合與細(xì)胞轉(zhuǎn)化殺細(xì)胞效應(yīng)殺細(xì)胞效應(yīng)cytocidal effect病毒在增殖過(guò)程中，阻斷細(xì)胞核酸與蛋白質(zhì)的合成，使細(xì)胞新病毒在增殖過(guò)程中，阻斷細(xì)胞核酸與蛋白質(zhì)的合成，使細(xì)胞新陳代謝功能紊亂，造成細(xì)胞病變與死亡。陳代謝功能紊亂，造成細(xì)胞病變與死亡。多見于無(wú)包膜病毒多見于無(wú)包膜病毒多引起急性感染多引起急性感染正常細(xì)胞病變細(xì)胞Cytopathic effect, CPE (細(xì)胞病變效應(yīng)細(xì)胞病變效應(yīng))穩(wěn)定狀態(tài)感染穩(wěn)定狀態(tài)感染 某些病毒進(jìn)入細(xì)胞后能夠復(fù)制，但不立即引起細(xì)胞某些

10、病毒進(jìn)入細(xì)胞后能夠復(fù)制，但不立即引起細(xì)胞裂解死亡。裂解死亡。 多見于有包膜病毒（出芽）。多見于有包膜病毒（出芽）。 可引起細(xì)胞膜成分等改變，可引起細(xì)胞膜成分等改變， 促進(jìn)細(xì)胞與細(xì)胞之間的融合促進(jìn)細(xì)胞與細(xì)胞之間的融合形成多核巨細(xì)胞形成多核巨細(xì)胞等等Syncytium formation by measles virus包涵體形成包涵體形成病毒顆粒的聚集體病毒顆粒的聚集體病毒增殖留下的痕跡病毒增殖留下的痕跡病毒感染引起的反應(yīng)物病毒感染引起的反應(yīng)物Negri body“owls eyes”Inclusion body： 細(xì)胞被病毒感染后細(xì)胞被病毒感染后在細(xì)胞漿或細(xì)胞核中形成的光鏡下可在細(xì)胞漿或細(xì)胞核

11、中形成的光鏡下可見的團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu)見的團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu)細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡Cell apoptosis基因整合與細(xì)胞轉(zhuǎn)化基因整合與細(xì)胞轉(zhuǎn)化逆轉(zhuǎn)錄病毒逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA病毒病毒整合整合細(xì)胞損傷細(xì)胞損傷增生和轉(zhuǎn)化增生和轉(zhuǎn)化2. 病毒感染誘發(fā)的免疫損傷病毒感染誘發(fā)的免疫損傷 T細(xì)胞介導(dǎo)的病理?yè)p傷 CD8+ T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫病理： HBV感染引起的嚴(yán)重肝損傷 柯薩奇B型病毒感染引起的心肌炎 CD4+ T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫病理： 抗體介導(dǎo)的病理?yè)p傷 自身免疫病 免疫抑制 超抗原免疫逃逸機(jī)制病毒舉例及作用方式細(xì)胞內(nèi)寄生所有病毒皆為嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生，通過(guò)逃避抗體、補(bǔ)體及藥物作用而發(fā)揮逃避免疫機(jī)制的作用抗原變異HIV、甲型流感

12、病毒高頻率的抗原變異是的免疫應(yīng)答滯后抗原結(jié)構(gòu)復(fù)雜鼻病毒、柯薩奇病毒、ECHO病毒等型別多，抗原多態(tài)性致使免疫應(yīng)答不利損傷免疫細(xì)胞HIV、EB病毒、麻疹病毒等可在T或B細(xì)胞內(nèi)寄生并導(dǎo)致宿主細(xì)胞死亡降低抗原表達(dá)腺病毒、巨細(xì)胞病毒可抑制MHC-1轉(zhuǎn)錄、表達(dá)病毒的免疫增強(qiáng)作用登革病毒以及其他黃病毒再次感染，因機(jī)體內(nèi)預(yù)先存在或經(jīng)胎盤獲得中和抗體能促進(jìn)游離的病毒進(jìn)入單核細(xì)胞內(nèi)，并大量增殖，導(dǎo)致病毒血癥及病毒-抗體復(fù)合物形成，繼之大量細(xì)胞因子及血管活性因子釋放，導(dǎo)致登革熱休克綜合征3. 病毒的免疫逃逸病毒的免疫逃逸 第二節(jié)第二節(jié) 抗病毒免疫抗病毒免疫非特異性免疫非特異性免疫1.屏障皮膚粘膜，血腦，胎盤屏障皮

13、膚粘膜，血腦，胎盤2.細(xì)胞細(xì)胞-巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞 Macrophage 自然殺傷細(xì)胞自然殺傷細(xì)胞 Natural killer cell 樹狀突細(xì)胞樹狀突細(xì)胞 Dendritic cell3.分子分子-細(xì)胞因子細(xì)胞因子 Cytokine（干擾素等）干擾素等） 1.體液免疫體液免疫 Humoral immunity2.細(xì)胞免疫細(xì)胞免疫 T cell-mediated immunity特異性免疫特異性免疫抗病毒免疫機(jī)制抗病毒免疫機(jī)制 識(shí)別和裂解病毒感染細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞 在早期階段有效控制病毒感染，抑制病毒擴(kuò)散NK NK 細(xì)胞細(xì)胞定義定義 機(jī)體受病毒及其他干擾素誘生劑作用后，機(jī)體受病毒及其他干擾素

14、誘生劑作用后， 由感染細(xì)胞等多種細(xì)胞所產(chǎn)生的由感染細(xì)胞等多種細(xì)胞所產(chǎn)生的 能抑制病毒復(fù)制的小分子糖蛋白能抑制病毒復(fù)制的小分子糖蛋白類型類型種類種類 產(chǎn)生細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞 抗病毒抗病毒 抗腫瘤抗腫瘤 免疫調(diào)節(jié)免疫調(diào)節(jié) IFN- 白細(xì)胞白細(xì)胞 強(qiáng)強(qiáng) 弱弱 弱弱 IFN- 成纖維細(xì)胞成纖維細(xì)胞 強(qiáng)強(qiáng) 弱弱 弱弱 IFN- T細(xì)胞，細(xì)胞，NK細(xì)胞細(xì)胞 弱弱 強(qiáng)強(qiáng) 強(qiáng)強(qiáng)干擾素干擾素 interferon interferon ， IFNIFNI型型II型型抗病毒特點(diǎn)抗病毒特點(diǎn)廣譜性、間接性、特異性、早期性廣譜性、間接性、特異性、早期性作用機(jī)理作用機(jī)理 細(xì)胞受干擾素作用后，合成抗病毒蛋白細(xì)胞受干擾素作用后，合

15、成抗病毒蛋白（蛋白激酶、2-5A合成酶、磷酸二酯酶）阻斷病毒蛋白合成而起抗病毒作用阻斷病毒蛋白合成而起抗病毒作用其他機(jī)制：活化巨噬細(xì)胞、其他機(jī)制：活化巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、細(xì)胞、CTL等等30interferon-alpha, interferon-betainterferon receptor induction of 25oligo A synthaseinduction of protein kinase R (PKR)25oligo Aactivated RNAase L ATPactivatedprotein kinase RATPmRNA degraded phosphorylate

16、d initiation factor (eIF-2 )inhibition of protein synthesis 能與病毒結(jié)合并使之喪失感染力的抗體能與病毒結(jié)合并使之喪失感染力的抗體 一般為病毒表面抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生一般為病毒表面抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生 中和抗體中和抗體 Neutralizing antibody 體液免疫體液免疫抗體的分子量大，不能進(jìn)入病毒抗體的分子量大，不能進(jìn)入病毒感染的細(xì)胞清除胞內(nèi)病毒，故一感染的細(xì)胞清除胞內(nèi)病毒，故一般無(wú)根治感染的作用。般無(wú)根治感染的作用。血凝抑制抗體血凝抑制抗體 Haemagglutination inhibition antibody病毒血凝素刺激機(jī)體

17、產(chǎn)生，可抑制血凝現(xiàn)象的抗體病毒血凝素刺激機(jī)體產(chǎn)生，可抑制血凝現(xiàn)象的抗體與病毒結(jié)合后使之喪失感染力，故也為中和抗體與病毒結(jié)合后使之喪失感染力，故也為中和抗體非中和抗體非中和抗體 由于非中和抗體可通過(guò)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)而檢測(cè)，由于非中和抗體可通過(guò)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)而檢測(cè)，故又稱補(bǔ)體結(jié)合抗體，有時(shí)具有診斷價(jià)值。故又稱補(bǔ)體結(jié)合抗體，有時(shí)具有診斷價(jià)值。由與病毒入侵易感細(xì)胞不相關(guān)的病毒抗原誘導(dǎo)的由與病毒入侵易感細(xì)胞不相關(guān)的病毒抗原誘導(dǎo)的無(wú)中和作用的抗體，稱非中和抗體。無(wú)中和作用的抗體，稱非中和抗體。多為病毒內(nèi)部抗原刺激產(chǎn)生多為病毒內(nèi)部抗原刺激產(chǎn)生細(xì)胞免疫細(xì)胞免疫 殺傷病毒感染細(xì)胞殺傷病毒感染細(xì)胞CD8+ T細(xì)胞細(xì)胞

18、（殺傷性（殺傷性T細(xì)胞細(xì)胞CTL）CD4+ T細(xì)胞 （輔助性T細(xì)胞）產(chǎn)生淋巴因子產(chǎn)生淋巴因子誘發(fā)炎癥反應(yīng)誘發(fā)炎癥反應(yīng)促進(jìn)抗體產(chǎn)生促進(jìn)抗體產(chǎn)生 第25章 病毒感染的檢查方法與防治原則第一節(jié) 病毒感染的檢查方法一、標(biāo)本采集與送檢一、標(biāo)本采集與送檢 分離病毒，檢測(cè)核酸及抗原等標(biāo)本分離病毒，檢測(cè)核酸及抗原等標(biāo)本 標(biāo)本采集時(shí)間標(biāo)本采集時(shí)間 在發(fā)病初期（急性期）在發(fā)病初期（急性期） 標(biāo)本類型標(biāo)本類型 在感染部位采取在感染部位采取 標(biāo)本運(yùn)輸冷藏，標(biāo)本在處理、接種前切忌反復(fù)凍標(biāo)本運(yùn)輸冷藏，標(biāo)本在處理、接種前切忌反復(fù)凍融，病變組織則應(yīng)保存于融，病變組織則應(yīng)保存于50%的甘油緩沖鹽水中的甘油緩沖鹽水中。 無(wú)菌操作

19、無(wú)菌操作，加抗生素，加抗生素 供血清學(xué)檢測(cè)的標(biāo)本采集原則供血清學(xué)檢測(cè)的標(biāo)本采集原則 采取急性期與恢復(fù)期雙份血清采取急性期與恢復(fù)期雙份血清二、病毒分離培養(yǎng)與鑒定二、病毒分離培養(yǎng)與鑒定（一）病毒的分離培養(yǎng)（一）病毒的分離培養(yǎng)（1）細(xì)胞培養(yǎng)）細(xì)胞培養(yǎng)分類特點(diǎn)舉例原代培養(yǎng)細(xì)胞敏感度高、來(lái)源困難猴腎細(xì)胞人胚腎細(xì)胞二倍體細(xì)胞株對(duì)多種病毒敏感、無(wú)致瘤潛能、有限傳代WI-38傳代細(xì)胞系/株穩(wěn)定、應(yīng)用廣泛、有致癌危險(xiǎn)，不能用于生產(chǎn)疫苗HeLa、Hep-2細(xì)胞1.病程長(zhǎng)診斷困難，疑似病毒感染，但檢測(cè)病程長(zhǎng)診斷困難，疑似病毒感染，但檢測(cè)陰性陰性2.懷疑新現(xiàn)病毒感染或懷疑新現(xiàn)病毒感染或“死灰復(fù)燃死灰復(fù)燃”感染感染3.

20、鑒別不同病毒所致同種癥狀疾病，明確何鑒別不同病毒所致同種癥狀疾病，明確何種病毒感染種病毒感染 4.對(duì)所用減毒活疫苗監(jiān)測(cè)回復(fù)毒力突變株的對(duì)所用減毒活疫苗監(jiān)測(cè)回復(fù)毒力突變株的出現(xiàn)出現(xiàn)5.病毒生物學(xué)性狀研究或流行病學(xué)調(diào)查病毒生物學(xué)性狀研究或流行病學(xué)調(diào)查39特點(diǎn)：正常細(xì)胞，均為二倍染色體特點(diǎn)：正常細(xì)胞，均為二倍染色體 對(duì)病毒敏感性高對(duì)病毒敏感性高 可用于生產(chǎn)病毒疫苗可用于生產(chǎn)病毒疫苗 但不能持續(xù)傳代培養(yǎng)，故不便用于診斷但不能持續(xù)傳代培養(yǎng)，故不便用于診斷種類：人胚腎、猴腎、雞胚等種類：人胚腎、猴腎、雞胚等細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞培養(yǎng) 將組織經(jīng)酶消化成單個(gè)細(xì)胞后培養(yǎng)，將組織經(jīng)酶消化成單個(gè)細(xì)胞后

21、培養(yǎng)， 在培養(yǎng)瓶底部長(zhǎng)成單層細(xì)胞在培養(yǎng)瓶底部長(zhǎng)成單層細(xì)胞二倍體細(xì)胞培養(yǎng)二倍體細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)：生長(zhǎng)迅速，能傳特點(diǎn)：生長(zhǎng)迅速，能傳50-100代，代， 二倍染色體二倍染色體 可用于生產(chǎn)病毒疫苗和實(shí)驗(yàn)室診斷可用于生產(chǎn)病毒疫苗和實(shí)驗(yàn)室診斷 種類：人胚組織成纖維細(xì)胞等種類：人胚組織成纖維細(xì)胞等細(xì)胞在體外分裂細(xì)胞在體外分裂50代以上，仍能保存二倍體特征代以上，仍能保存二倍體特征的細(xì)胞。的細(xì)胞。傳代細(xì)胞培養(yǎng)傳代細(xì)胞培養(yǎng)特點(diǎn)：生長(zhǎng)迅速，可無(wú)限傳代，特點(diǎn)：生長(zhǎng)迅速，可無(wú)限傳代， 但染色體常異常，不是二倍體但染色體常異常，不是二倍體 有腫瘤細(xì)胞特性有腫瘤細(xì)胞特性 用于科研、實(shí)驗(yàn)室診斷等用于科研、實(shí)驗(yàn)室診斷等種類：種

22、類：Hela細(xì)胞、細(xì)胞、Vero細(xì)胞、細(xì)胞、Hep-2細(xì)胞等細(xì)胞等 由腫瘤細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而來(lái)，由腫瘤細(xì)胞或二倍體細(xì)胞突變而來(lái)， 有貼壁單層細(xì)胞與懸浮細(xì)胞有貼壁單層細(xì)胞與懸浮細(xì)胞2種種（2） 雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng) 流感病毒流感病毒（3） 動(dòng)物接種動(dòng)物接種 尚無(wú)敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)尚無(wú)敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)43（二）病毒的鑒定 病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的鑒定指標(biāo)(1) 細(xì)胞病變 溶細(xì)胞型感染的病毒，在敏感細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE），可表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)顆粒增多、圓縮、聚集、融合，有的可形成多核巨細(xì)胞、包涵體等。 不同病毒CPE特征不同，故觀察病毒所致CPE特點(diǎn)，可對(duì)病毒進(jìn)行判定。麻疹病毒感染后形成的多核巨

23、細(xì)胞麻疹病毒感染后形成的多核巨細(xì)胞圖片引自圖片引自Murry et al:Medical Microbiology, 7e44(2) 紅細(xì)胞吸附 包膜上帶有血凝素刺突的病毒感染敏感細(xì)胞后，血凝素能出現(xiàn)在細(xì)胞膜表面，使感染細(xì)胞能與加入的紅細(xì)胞結(jié)合?？勺鳛闄z測(cè)正粘病毒和副粘病毒的間接指標(biāo)。流感病毒等感染后的紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象流感病毒等感染后的紅細(xì)胞吸附現(xiàn)象圖片引自圖片引自Murry et al:Medical Microbiology, 7e45(3) 病毒干擾作用風(fēng)疹病毒猴腎細(xì)胞 病毒增殖，CPE(-)埃可病毒猴腎細(xì)胞 病毒增殖，CPE(+)風(fēng)疹病毒?？刹《?猴腎細(xì)胞CPE(-)462. 病毒感染性

24、的測(cè)定及病毒數(shù)量的測(cè)定（1）血凝試驗(yàn) 病毒血凝素刺突+紅細(xì)胞受體 紅細(xì)胞凝集（2）空斑形成試驗(yàn) 病毒的數(shù)量單位: 每毫升病毒液的空斑形成單位（pfu/ml）（3）50%組織細(xì)胞感染量（TCID50） 將待測(cè)病毒液作10倍系列稀釋，分別接種單層細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后觀察CPE等指標(biāo)，以能感染50%細(xì)胞的最高稀釋度的病毒量作為終點(diǎn)，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)算TCID5047（三）形態(tài)學(xué)檢查 1. 電鏡或免疫電鏡檢查 形態(tài)特征、大小 2. 光學(xué)顯微鏡檢查 痘病毒 包涵體狂犬病病毒感染后形成的內(nèi)基小體狂犬病病毒感染后形成的內(nèi)基小體電鏡下的輪狀病毒電鏡下的輪狀病毒圖片引自圖片引自Murry et al:Medical M

25、icrobiology, 7e48（四）成分檢測(cè)1.抗原檢測(cè)病毒蛋白抗原檢測(cè) 基于免疫學(xué)技術(shù)直接檢測(cè)標(biāo)本中的抗原 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)） IFA（免疫熒光測(cè)定） RIA（放射免疫測(cè)定） WB（蛋白質(zhì)印跡）49 病毒核酸檢測(cè) （1） 核酸電泳 正粘病毒屬與呼腸病毒屬病毒的核酸是分節(jié)段的，將病毒核酸經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳和銀染后可清楚顯示相應(yīng)條帶。50（2） 核酸雜交 原理：將與病原體特異基因互補(bǔ)的，并且經(jīng)過(guò)放射性核素、生物素、地高辛或辣根過(guò)氧化物酶的標(biāo)記的核酸探針與標(biāo)本中的DNA雜交，得出相應(yīng)的診斷。 方法：原位雜交、點(diǎn)雜交、DNA印跡和RNA印跡原位雜交法檢測(cè)原位雜交法檢測(cè)CMV感染感染

26、圖片引自圖片引自Murry et al:Medical Microbiology, 7e51（3） 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR)原理： PCR是體外酶擴(kuò)增特定DNA片段的快速方法。其特點(diǎn)是利用耐熱的DNA聚合酶，將引物和目標(biāo)DNA混合，以高溫變性、低溫退火和適溫延伸3個(gè)過(guò)程為周期進(jìn)行循環(huán)，將目標(biāo)DNA在短時(shí)間內(nèi)得到大量擴(kuò)增。 可用于潛伏感染、整合感染的病毒如：HIV、皰疹病毒、乳頭瘤病毒等，以及其他DNA病毒。1 23030次循環(huán)次循環(huán)PCR結(jié)果電泳圖結(jié)果電泳圖52反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）原理：RT-PCR是將病毒的RNA或mRNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA后，再進(jìn)行PCR反應(yīng)。定量實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反

27、應(yīng)（Real-time PCR）原理：美國(guó)PE公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)，該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能。在檢測(cè)過(guò)程中通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記的熒光信號(hào)的累積來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析。應(yīng)用：HIV病毒載量測(cè)定53(4)基因芯片技術(shù)54（5）基因測(cè)序 全基因組測(cè)序和特征性片段測(cè)序55血清學(xué)診斷血清學(xué)診斷 適用范圍：采取標(biāo)本時(shí)為時(shí)已晚、無(wú)分離該病毒方法或難于分適用范圍：采取標(biāo)本時(shí)為時(shí)已晚、無(wú)分離該病毒方法或難于分離、證實(shí)該病毒的臨床意義、血清流行病學(xué)調(diào)查。離、證實(shí)該病毒的臨床意義、血清流行病學(xué)調(diào)查。 中和試驗(yàn)中和試驗(yàn) 病毒中

28、和抗體病毒中和抗體 病毒失去感染性病毒失去感染性 適用于人群免疫情況調(diào)查適用于人群免疫情況調(diào)查 血凝抑制試驗(yàn)血凝抑制試驗(yàn) 病毒血凝素刺突病毒血凝素刺突+ +紅細(xì)胞受體紅細(xì)胞受體紅細(xì)胞凝集紅細(xì)胞凝集 病毒血凝素刺突病毒血凝素刺突+ +紅細(xì)胞受體紅細(xì)胞受體+ +抗體抗體紅細(xì)胞不凝集紅細(xì)胞不凝集 流感病毒、乙腦病毒等輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查流感病毒、乙腦病毒等輔助診斷及流行病學(xué)調(diào)查 鑒定型與亞型鑒定型與亞型 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn) 病毒可溶性抗原檢測(cè)補(bǔ)體抗體病毒可溶性抗原檢測(cè)補(bǔ)體抗體 近期感染，特異性差近期感染，特異性差 凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)?zāi)z免疫擴(kuò)散試驗(yàn)56早期抗體檢測(cè)IgM類特異抗體檢測(cè) 孕婦羊水

29、中查到IgM類抗體可診斷某些病毒引起的新生兒先天性感染 急性HBV感染的指標(biāo)：抗HBc IgM57第二節(jié)第二節(jié) 病毒感染的免疫預(yù)防病毒感染的免疫預(yù)防 同細(xì)菌感染，通過(guò)人工接種生物制劑的方法同細(xì)菌感染，通過(guò)人工接種生物制劑的方法達(dá)到預(yù)防、控制和消滅傳染病的目的。達(dá)到預(yù)防、控制和消滅傳染病的目的。 免疫免疫預(yù)防預(yù)防人工主動(dòng)免疫：減毒活疫苗、滅活疫苗、人工主動(dòng)免疫：減毒活疫苗、滅活疫苗、 基因工程疫苗、核酸疫苗基因工程疫苗、核酸疫苗人工被動(dòng)免疫：普通免疫球蛋白人工被動(dòng)免疫：普通免疫球蛋白 抗病毒血清（高特異性免疫球蛋白抗病毒血清（高特異性免疫球蛋白 ） 免疫調(diào)節(jié)劑免疫調(diào)節(jié)劑人工主動(dòng)免疫滅活疫苗和減毒活疫苗比較特點(diǎn)滅活疫苗減毒活疫苗免疫持續(xù)時(shí)間較短較長(zhǎng)保護(hù)力較低較高抗體類型IgGIgA和IgG粘膜免疫低有細(xì)胞免疫低有毒力回復(fù)無(wú)有受其他病毒干擾無(wú)有運(yùn)輸方便要求高使用中擴(kuò)散無(wú)可能穩(wěn)定性高低 減毒活疫苗： Sabin脊髓灰質(zhì)炎疫苗、風(fēng)疹疫苗、麻疹疫苗、水痘疫苗