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文檔簡介
1、RNA干擾機制干擾機制安德魯安德魯法爾和克雷格法爾和克雷格梅洛梅洛+Arthur KornbergDNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)者聚合酶的發(fā)現(xiàn)者1959Roger D. Kornberg真核生物轉(zhuǎn)錄機制真核生物轉(zhuǎn)錄機制2006 拓撲異構(gòu)酶DNA聚合酶III前導鏈前導鏈模板解鏈酶 引發(fā)酶 RNA引物后隨鏈模板DNA聚合酶III岡崎片段 親本DNA單鏈結(jié)合蛋白引發(fā)體 半不連續(xù)復制與岡畸片段半不連續(xù)復制與岡畸片段(1)引發(fā)酶合成RNA引物 (2)DNA聚合酶III在引物3-OH延伸,合成岡崎片段 (3)DNA聚合酶I切除引物,填補缺口 (4)連接酶封閉缺口 型復制型復制 滾環(huán)式復制滾環(huán)式復制 D D環(huán)復制環(huán)復制
2、PCR: Viral detectionPCR: DNA fingerprintingPCR: DNA fingerprintingDNAmRNATranscriptionCellPolypeptide(protein)TranslationRibosome4. 轉(zhuǎn)錄的底物是轉(zhuǎn)錄的底物是4 4種核糖核苷三磷酸種核糖核苷三磷酸(rNTP)(rNTP),即,即ATPATP、GTPGTP、CTPCTP和和UTPUTP;RNARNA與模板與模板DNADNA的堿基相互配對關(guān)系為的堿基相互配對關(guān)系為G-C G-C 和和A-UA-U。而復制的底物是。而復制的底物是dNTPdNTP,堿基互補配對關(guān)系為,堿基互
3、補配對關(guān)系為G-CG-C和和A-TA-T。5. RNARNA的合成依賴于的合成依賴于RNARNA聚合酶的催化作用,而聚合酶的催化作用,而DNADNA復制需復制需要要DNADNA聚合酶,兩種聚合酶系不同。聚合酶,兩種聚合酶系不同。6. 轉(zhuǎn)錄時轉(zhuǎn)錄時DNA-RNADNA-RNA雜合雙鏈分子是不穩(wěn)定的,雜合雙鏈分子是不穩(wěn)定的,RNARNA鏈在延伸鏈在延伸過程中不斷從模板鏈上游離出來,模板過程中不斷從模板鏈上游離出來,模板DNADNA又恢復雙鏈狀態(tài);又恢復雙鏈狀態(tài);而而DNADNA復制叉形成之后一直打開,不斷向兩側(cè)延伸,新合成的復制叉形成之后一直打開,不斷向兩側(cè)延伸,新合成的鏈與親本鏈形成子鏈。鏈與親
4、本鏈形成子鏈。7. 真核生物基因和真核生物基因和rRNArRNA、tRNAtRNA基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄生成的初級轉(zhuǎn)錄物基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄生成的初級轉(zhuǎn)錄物一般都需經(jīng)過加工,才能具有生物功能和成熟的一般都需經(jīng)過加工,才能具有生物功能和成熟的RNARNA分子。分子。 RNA TranscriptProtein Coding RegionTerminator SequencePromoter/Control Region3 Untranslated RegionTranscription Start Site5 Untranslated Region Constitutive GeneHeat Shock GeneP1
5、P2Different promotersRNAPol. 2、轉(zhuǎn)錄的延伸、轉(zhuǎn)錄的延伸3、轉(zhuǎn)錄的終止、轉(zhuǎn)錄的終止 強終止子的結(jié)構(gòu)強終止子的結(jié)構(gòu) 因子不依賴轉(zhuǎn)錄終止機制因子不依賴轉(zhuǎn)錄終止機制 Robert Holley H. G. Khorana Marshal Nirenberg 1968 肽鏈的延伸過程肽鏈的延伸過程 肽鏈的延伸過程肽鏈的延伸過程Francois JacobJacques Monod1965trpRtrpOtrpEDCBAPtrpLtrpa色氨酸色氨酸阻遏蛋白阻遏蛋白不轉(zhuǎn)錄不轉(zhuǎn)錄 6個層次個層次轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄RNA 加工加工mRNA 轉(zhuǎn)運轉(zhuǎn)運mRNA 翻譯翻譯mRNA 降解降解1.
6、蛋白質(zhì)降解蛋白質(zhì)降解1、DNA及染色體水平的調(diào)控及染色體水平的調(diào)控2、轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控、轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控2.1 基因轉(zhuǎn)錄的順式作用元件和反式作用元件基因轉(zhuǎn)錄的順式作用元件和反式作用元件 順式作用元件:基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)。順式作用元件:基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)。(增強子、啟動子、沉默子及應(yīng)答元件等)(增強子、啟動子、沉默子及應(yīng)答元件等) 反式作用元件:轉(zhuǎn)錄因子,與順式作用元件相結(jié)合,反式作用元件:轉(zhuǎn)錄因子,與順式作用元件相結(jié)合,影響轉(zhuǎn)錄。影響轉(zhuǎn)錄。 轉(zhuǎn)錄因子:基本轉(zhuǎn)錄因子,轉(zhuǎn)錄激活因子,轉(zhuǎn)錄抑轉(zhuǎn)錄因子:基本轉(zhuǎn)錄因子,轉(zhuǎn)錄激活因子,轉(zhuǎn)錄抑制因子制因子轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合域(左圖為結(jié)合域(左圖為H-T-H結(jié)構(gòu),右圖為鋅指結(jié)構(gòu))結(jié)構(gòu),右圖為鋅指結(jié)構(gòu))二聚體化域是負責蛋白與蛋白相互作用形成二聚體的結(jié)構(gòu)域,常二聚體化域是負責蛋白與蛋白相互作用形成二聚體的結(jié)構(gòu)域,常見的特征性結(jié)構(gòu)有:見的特征性結(jié)構(gòu)有:亮氨酸拉鏈(亮氨酸拉鏈(leucine zipper)和螺旋
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