定性免疫學(xué)檢驗的性能驗證與質(zhì)量控制(牛廣華)

1、牛廣華牛廣華定性免疫學(xué)檢驗的性能驗定性免疫學(xué)檢驗的性能驗證與質(zhì)量控制證與質(zhì)量控制ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心ISO15189認(rèn)可中大家到困惑的問題認(rèn)可中大家到困惑的問題 定性免疫項目如：定性免疫項目如： ELISA檢測、自身抗體檢測、自身抗體免疫印跡試驗、抗核抗體免疫熒光（免疫印跡試驗、抗核抗體免疫熒光（IIF）檢測）檢測質(zhì)量控制和性能驗證及驗證內(nèi)容？如何做？標(biāo)質(zhì)量控制

2、和性能驗證及驗證內(nèi)容？如何做？標(biāo)準(zhǔn)？準(zhǔn)？ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心5.5.1.1 5.5.1.1 檢驗方法和程序的分析性能驗證內(nèi)容檢驗方法和程序的分析性能驗證內(nèi)容應(yīng)參考應(yīng)參考試劑盒說明書上明確標(biāo)示的性能參數(shù)進(jìn)行驗證試劑盒說明書上明確標(biāo)示的性能參數(shù)進(jìn)行驗證，至少，至少應(yīng)包括：應(yīng)包括：檢出限檢出限、符合率符合率（采用國家標(biāo)準(zhǔn)血清盤或臨（采用國家標(biāo)準(zhǔn)血清盤或臨床診斷明確的陰陽性樣品各床診斷明確的陰陽性樣品各2020份或與其他分析方法比份或與其他分析方法比對），對），如為定量方法應(yīng)驗證精密度（包括重復(fù)

3、性和中如為定量方法應(yīng)驗證精密度（包括重復(fù)性和中間精密度）間精密度）；并應(yīng)明確檢驗項目的預(yù)期用途，如；并應(yīng)明確檢驗項目的預(yù)期用途，如篩查篩查、診斷診斷、確認(rèn)確認(rèn)。5.5 檢驗程序檢驗程序CNAS-CL39：2012醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床免疫學(xué)檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用說明免疫學(xué)檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用說明-2014改版改版ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n 試劑盒說明書（先決條件?。┰噭┖姓f明書（先決條件！）n 國際和或國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)國際和或國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)性能驗證的合格標(biāo)準(zhǔn)從何而來？性能驗

4、證的合格標(biāo)準(zhǔn)從何而來？ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n篩查試驗篩查試驗n診斷試驗診斷試驗n確認(rèn)實驗確認(rèn)實驗nC50C50nC5C5nC95C95概念準(zhǔn)備概念準(zhǔn)備ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n篩查試驗用于檢測整個人群或部分人群中分析物的篩查試驗用于檢測整個人群或部分人群中分析物的存在情況。存在情況。n一般而言，篩查試驗應(yīng)當(dāng)具有較高的臨床敏感性（一般而言，篩查試驗應(yīng)當(dāng)具有較高的臨床敏感性（即臨床檢出率大

5、于即臨床檢出率大于95%95%），對其特異性的要求（和陽），對其特異性的要求（和陽性預(yù)測值）則取決于對各種因素的綜合考慮。性預(yù)測值）則取決于對各種因素的綜合考慮。如糞便隱血檢測如糞便隱血檢測篩查試驗篩查試驗ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n用于臨床懷疑某種特定疾病或狀況是否存在。用于臨床懷疑某種特定疾病或狀況是否存在。n診斷試驗需具有良好的敏感性和特異性。診斷試驗需具有良好的敏感性和特異性。n診斷試驗后如需進(jìn)行確認(rèn)試驗，對診斷試驗的特診斷試驗后如需進(jìn)行確認(rèn)試驗，對診斷試驗的特異性要求可以稍微降低。異

6、性要求可以稍微降低。如各種微生物培養(yǎng)如各種微生物培養(yǎng)診斷試驗診斷試驗ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n確認(rèn)試驗用于驗證篩查試驗或者診斷試驗結(jié)果的確確認(rèn)試驗用于驗證篩查試驗或者診斷試驗結(jié)果的確認(rèn)。認(rèn)。n對于確認(rèn)試驗，特異性比敏感性更為重要。對于確認(rèn)試驗，特異性比敏感性更為重要。如梅毒密螺旋體抗體熒光吸收試驗（如梅毒密螺旋體抗體熒光吸收試驗（FTA-ABSFTA-ABS）確認(rèn)試驗確認(rèn)試驗ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨

7、床檢驗中心n一份樣本，在多次重復(fù)實驗中各有一份樣本，在多次重復(fù)實驗中各有50%50%的幾率獲得的幾率獲得陽性或陰性的結(jié)果時該分析物的濃度。陽性或陰性的結(jié)果時該分析物的濃度。臨界點（臨界點（C50）濃度的定義）濃度的定義C50ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n這里的這里的C50C50指的是一個處于試劑檢測臨界點的樣本指的是一個處于試劑檢測臨界點的樣本濃度，其一旦確定，是不變的。濃度，其一旦確定，是不變的。n試劑盒試劑盒CUT-OFFCUT-OFF值指的是一個判斷某一次測定結(jié)果值指的是一個判斷某一次測定

8、結(jié)果的由陰性和陽性對照信號值按一定公式計算出來的信的由陰性和陽性對照信號值按一定公式計算出來的信號值，每次測定都會有所差異。號值，每次測定都會有所差異。C50與試劑盒陽性反應(yīng)判斷值（與試劑盒陽性反應(yīng)判斷值（CUT-OFF值）的區(qū)別值）的區(qū)別ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n一份樣本，在多次重復(fù)實驗中有一份樣本，在多次重復(fù)實驗中有95%95%的幾率獲得陰的幾率獲得陰性結(jié)果時該分析物的性結(jié)果時該分析物的濃度濃度。C5 濃度的定義濃度的定義C5ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼

9、寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n一份樣本，在多次重復(fù)實驗中有一份樣本，在多次重復(fù)實驗中有95%95%的幾率獲得陽的幾率獲得陽性結(jié)果時該分析物的濃度。性結(jié)果時該分析物的濃度。C95 濃度的定義濃度的定義C95ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n應(yīng)熟悉待驗證的試劑或系統(tǒng)應(yīng)熟悉待驗證的試劑或系統(tǒng)n進(jìn)行必要的培訓(xùn)，包括樣本的處理和儲存、試劑的進(jìn)行必要的培訓(xùn)，包括樣本的處理和儲存、試劑的處理和儲存、合理的檢測方案、對結(jié)果合理的解釋以處理和儲存、合理的檢測方案、對結(jié)果合理的解釋

10、以及系統(tǒng)的質(zhì)量控制等。及系統(tǒng)的質(zhì)量控制等。n制定質(zhì)量保證計劃制定質(zhì)量保證計劃n確定患者樣本的數(shù)量及強(qiáng)弱（評價重復(fù)性）確定患者樣本的數(shù)量及強(qiáng)弱（評價重復(fù)性）n確定比較的方法確定比較的方法性能驗證專業(yè)知識技能準(zhǔn)備性能驗證專業(yè)知識技能準(zhǔn)備ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n質(zhì)控品：可為商品質(zhì)控品，有陽性和陰性。質(zhì)控品：可為商品質(zhì)控品，有陽性和陰性。nC50C50和可能的和可能的C5C5（低于（低于C50C50濃度濃度20%20%）及）及C95C95濃度樣本濃度樣本（高于（高于C50C50濃度濃度20%20%

11、） ：用于重復(fù)性及最低檢出限驗：用于重復(fù)性及最低檢出限驗證，不少于證，不少于4040次檢測量）次檢測量）n臨床樣本或血清盤（準(zhǔn)確性驗證）（不少于臨床樣本或血清盤（準(zhǔn)確性驗證）（不少于5050份陽份陽性和陰性樣本）性和陰性樣本）樣本準(zhǔn)備樣本準(zhǔn)備ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n進(jìn)行重復(fù)性研究時，理想情況下需繪制在規(guī)定條件下候選方進(jìn)行重復(fù)性研究時，理想情況下需繪制在規(guī)定條件下候選方法的整個不精密度曲線，然而具體操作時法的整個不精密度曲線，然而具體操作時需要檢測的樣本數(shù)需要檢測的樣本數(shù)量較大量較大n可使用

12、一個可使用一個簡單的方法簡單的方法，即為待評價的檢測方法建立分析物，即為待評價的檢測方法建立分析物的臨界濃度，并判定某一特定濃度范圍，例如的臨界濃度，并判定某一特定濃度范圍，例如C50C5020%20%，是，是否包含了否包含了C5-C95C5-C95區(qū)間區(qū)間。n若若-20%-20%到到+20%+20%濃度范圍包含了濃度范圍包含了C5-C95C5-C95區(qū)間，那么區(qū)間，那么20%20%或距離或距離C50C50更遠(yuǎn)濃度的樣本更遠(yuǎn)濃度的樣本將得到一致的檢測結(jié)果將得到一致的檢測結(jié)果，即在，即在 C5-C95 C5-C95區(qū)區(qū)間之外的樣本檢測結(jié)果可認(rèn)為是精密的，濃度間之外的樣本檢測結(jié)果可認(rèn)為是精密的，濃

13、度C95C95，將持續(xù)，將持續(xù)得到陽性結(jié)果，濃度得到陽性結(jié)果，濃度C5C5，將持續(xù)得到陰性結(jié)果。，將持續(xù)得到陰性結(jié)果。20%20%僅用于舉例，實驗室也可根據(jù)檢驗?zāi)康暮涂山邮艿木芏冗x擇僅用于舉例，實驗室也可根據(jù)檢驗?zāi)康暮涂山邮艿木芏冗x擇10%10%或或30%30%。分析物濃度接近分析物濃度接近C50的定性方法精密度試驗的定性方法精密度試驗 ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n評價定性檢測試劑或系統(tǒng)精密度時，評價定性檢測試劑或系統(tǒng)精密度時，需采用濃度接需采用濃度接近臨界值的分析物作為檢測材料近臨界值的

14、分析物作為檢測材料，不宜采用陰性低值，不宜采用陰性低值或強(qiáng)陽性樣本來評價定性檢測方法的不精密度?；驈?qiáng)陽性樣本來評價定性檢測方法的不精密度。n定性測定精密度分析質(zhì)量指標(biāo)為定性測定精密度分析質(zhì)量指標(biāo)為C5-C95C5-C95濃度區(qū)間（濃度區(qū)間（亦即亦即“灰區(qū)灰區(qū)”），），這一區(qū)間范圍這一區(qū)間范圍C50C5020%20%。只提供兩種檢測結(jié)果只提供兩種檢測結(jié)果(-/+)的定性檢測的精密度的定性檢測的精密度ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心分析物濃度接近臨界值時的不精密度曲線分析物濃度接近臨界值時的不精密度曲線

15、ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心兩種不同方法的不精密度曲線比較兩種不同方法的不精密度曲線比較ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n檢測試劑或系統(tǒng)的說明書可能會注明分析物的臨界檢測試劑或系統(tǒng)的說明書可能會注明分析物的臨界濃度，但需驗證。濃度，但需驗證。n如果臨界濃度未知，則可以將陽性樣本進(jìn)行一系列如果臨界濃度未知，則可以將陽性樣本進(jìn)行一系列稀釋，然后將他們進(jìn)行重復(fù)檢測以確定能夠獲得稀釋，然后將他們進(jìn)行重復(fù)檢測以

16、確定能夠獲得50%50%陽性和陽性和50%50%陰性結(jié)果的那個稀釋度。這一稀釋度的分陰性結(jié)果的那個稀釋度。這一稀釋度的分析物濃度即為臨界點（析物濃度即為臨界點（C50C50）。）。如何獲得系統(tǒng)或試劑的如何獲得系統(tǒng)或試劑的“臨界點（臨界點（C50）”CLSI EP12-A2 User Protocol for Evaluation of Qualitative Test Performance; Approved GuidelineISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心C50是否準(zhǔn)確？是否準(zhǔn)確？ 40次測試

17、 C501陽性結(jié)果=27/40(67.5%)2陽性結(jié)果（14-26）/40（35%-65%）正確ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心不同不同C50重復(fù)檢測次數(shù)與檢出陽性數(shù)的關(guān)系重復(fù)檢測次數(shù)與檢出陽性數(shù)的關(guān)系ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心如何獲得系統(tǒng)或試劑的如何獲得系統(tǒng)或試劑的“臨界點（臨界點（C50）”ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大

18、學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n制備評價用樣本制備評價用樣本 制備制備3 3份樣本。一份濃度為份樣本。一份濃度為C50C50，一份為，一份為C50+20%C50+20%，一份為，一份為C50-20%C50-20%。 每份樣本的體積需保證每份樣本的體積需保證4040次或更多次重復(fù)檢測的次或更多次重復(fù)檢測的需要。需要。n評價方法評價方法 每份樣本檢測每份樣本檢測4040次，確定每一份樣本結(jié)果為陽性次，確定每一份樣本結(jié)果為陽性和陰性的百分比。和陰性的百分比。試驗步驟試驗步驟 ISO

19、15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心-20%-20%+20%+20%濃度范圍在濃度范圍在C5-C95C5-C95區(qū)間之內(nèi)；用該方法檢測，濃度超過區(qū)間之內(nèi)；用該方法檢測，濃度超過C50C5020%20%的樣的樣本檢測結(jié)果不一致；此結(jié)論錯誤率本檢測結(jié)果不一致；此結(jié)論錯誤率5% 5% ，需使用更寬濃度范圍的樣本（如，需使用更寬濃度范圍的樣本（如30%30%）進(jìn)行另外的試驗。進(jìn)行另外的試驗。 結(jié)果判斷結(jié)果判斷-1 ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥

20、大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心-20%-20%+20%+20%濃度范圍包含了濃度范圍包含了C5-C95C5-C95區(qū)間；用該方法檢測，濃度超過區(qū)間；用該方法檢測，濃度超過C50C5020%20%的樣的樣本檢測結(jié)果一致本檢測結(jié)果一致結(jié)果判斷結(jié)果判斷-2ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心用該方法檢測，用該方法檢測，C50+20%C50+20%的樣本檢測結(jié)果一致，的樣本檢測結(jié)果一致，C50-20%C50-20%的樣本不一定能得到一致的樣本不一定能得到一致結(jié)果；需要用低于結(jié)果；需要用低于C50C50更大百分率濃度的

21、樣本（如更大百分率濃度的樣本（如-30%-30%）進(jìn)行補(bǔ)充試驗。）進(jìn)行補(bǔ)充試驗。結(jié)果判斷結(jié)果判斷-3ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心用該方法檢測，用該方法檢測，C50-20%C50-20%的樣本檢測結(jié)果一致，的樣本檢測結(jié)果一致，C50+20%C50+20%的樣本不一定能得到一致的樣本不一定能得到一致結(jié)果；需要用高于結(jié)果；需要用高于C50C50更大百分率濃度的樣本（如更大百分率濃度的樣本（如+30%+30%）進(jìn)行補(bǔ)充試驗。）進(jìn)行補(bǔ)充試驗。結(jié)果判斷結(jié)果判斷-4ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室

22、認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n檢測限（檢測限（limit of detectionlimit of detection）是指檢測方法可檢）是指檢測方法可檢測出的最低被測量濃度，也稱檢測低限（測出的最低被測量濃度，也稱檢測低限（lower lower limit of detectionlimit of detection）或最小檢出濃度（）或最小檢出濃度（minimum minimum detectable concentrationdetectable concentration），），有時也稱為分析靈有時也稱為分析靈敏度敏度（anal

23、ytical sensitivityanalytical sensitivity）。）。n如前所述，分析物濃度位于如前所述，分析物濃度位于C5-C95C5-C95區(qū)間之外（小于區(qū)間之外（小于C5C5或大于或大于C95C95）時，候選方法對同一樣本的重復(fù)性檢）時，候選方法對同一樣本的重復(fù)性檢測將得到相同結(jié)果。因此，測將得到相同結(jié)果。因此，C95C95代表了某一試劑可以代表了某一試劑可以測出的最低被測量濃度測出的最低被測量濃度。檢出限的驗證檢出限的驗證ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n評估試劑分析敏感性

24、所使用的樣本，如檢測項目有評估試劑分析敏感性所使用的樣本，如檢測項目有國家參考品，則可使用國家參考品或經(jīng)國家參考品標(biāo)國家參考品，則可使用國家參考品或經(jīng)國家參考品標(biāo)化的參考品進(jìn)行檢測，如沒有國家參考品，則使用可化的參考品進(jìn)行檢測，如沒有國家參考品，則使用可以溯源或量化的樣本，如國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，或與國際標(biāo)以溯源或量化的樣本，如國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，或與國際標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)溯源的樣本，是更有意義的。準(zhǔn)物質(zhì)溯源的樣本，是更有意義的。n處于測定下限濃度（如處于測定下限濃度（如C95C95）的樣本，重復(fù)檢測）的樣本，重復(fù)檢測2020次，應(yīng)至少有次，應(yīng)至少有1818次以上為陽性反應(yīng)。次以上為陽性反應(yīng)。檢出限的驗證檢出限的驗證

25、ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心概概 述述 特定的定性免疫測定系統(tǒng)或試劑的特定的定性免疫測定系統(tǒng)或試劑的準(zhǔn)確度以與準(zhǔn)確度以與臨臨床診斷床診斷、金標(biāo)準(zhǔn)方法金標(biāo)準(zhǔn)方法和和經(jīng)過驗證確認(rèn)血清樣本盤的檢經(jīng)過驗證確認(rèn)血清樣本盤的檢測測比較來評價，常以比較來評價，常以敏感性敏感性（包括臨床敏感性）（包括臨床敏感性）/ /特特異性異性（包括臨床特異性）和（包括臨床特異性）和陽性符合率陽性符合率/ /陰性符合率陰性符合率來表示。來表示。準(zhǔn)確度驗證準(zhǔn)確度驗證ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼

26、寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n臨床敏感性：在患有明確臨床疾病的患者中，其檢臨床敏感性：在患有明確臨床疾病的患者中，其檢測結(jié)果呈陽性或者超過正常值范圍的比率測結(jié)果呈陽性或者超過正常值范圍的比率 （即出現(xiàn)（即出現(xiàn)陽性結(jié)果和確定患者患?。蛔ⅲ涸撆R床疾病必須由陽性結(jié)果和確定患者患病）；注：該臨床疾病必須由不依賴于被評價試驗的標(biāo)準(zhǔn)確定。不依賴于被評價試驗的標(biāo)準(zhǔn)確定。n臨床特異性：在沒有特定臨床疾病的患者中，其檢臨床特異性：在沒有特定臨床疾病的患者中，其檢測結(jié)果呈陰性或者在正常值范圍內(nèi)的比率。測結(jié)果呈陰性或者在正常值范圍內(nèi)的比率。臨床特異性和臨床敏感性臨床特異性和臨

27、床敏感性ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心研究人群研究人群 有一些研究的人群，僅包括健康人群和疾病嚴(yán)重的有一些研究的人群，僅包括健康人群和疾病嚴(yán)重的人群，而忽略了介于兩種狀態(tài)之間的人群和一些不典人群，而忽略了介于兩種狀態(tài)之間的人群和一些不典型的患病人群。將這部分人群剔除在研究人群之外，型的患病人群。將這部分人群剔除在研究人群之外，會優(yōu)化評價的結(jié)果，造成試劑在實際應(yīng)用當(dāng)中結(jié)果簡會優(yōu)化評價的結(jié)果，造成試劑在實際應(yīng)用當(dāng)中結(jié)果簡單明確的假象。因此，研究人群最好符合以下要求：單明確的假象。因此，研究人群最好符合

28、以下要求： 涵蓋疾病的各個階段；涵蓋疾病的各個階段； 涵蓋一些不典型的、較難診斷的患病人群；涵蓋一些不典型的、較難診斷的患病人群； 各組不同特征的人群均需有一定的數(shù)量。各組不同特征的人群均需有一定的數(shù)量。 總之，研究的人群要能夠代表該檢測系統(tǒng)或試劑總之，研究的人群要能夠代表該檢測系統(tǒng)或試劑預(yù)期使用的人群，否則給出的數(shù)據(jù)將存在偏倚。預(yù)期使用的人群，否則給出的數(shù)據(jù)將存在偏倚。臨床特異性和臨床敏感性臨床特異性和臨床敏感性ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n陽性結(jié)果的可靠性（陽性結(jié)果的可靠性（預(yù)示值預(yù)示值）：

29、即測定為陽性）：即測定為陽性的標(biāo)本實際上為陽性的可能性。的標(biāo)本實際上為陽性的可能性。 =真陽性真陽性/ /（真陽性（真陽性+ +假陽性）假陽性） 100%100%n陰性結(jié)果的可靠性陰性結(jié)果的可靠性: :則為一份給出陰性結(jié)果的樣本則為一份給出陰性結(jié)果的樣本實際上為陰性的可靠性。實際上為陰性的可靠性。 = = 真陰性真陰性/ /（真陰性（真陰性+ +假陰性）假陰性） 100%100%臨床特異性和臨床敏感性臨床特異性和臨床敏感性ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心試劑的檢測結(jié)果試劑的檢測結(jié)果 共計共計分析物陽

30、性分析物陽性分析物陰性分析物陰性陽性結(jié)果數(shù)陽性結(jié)果數(shù)TPFPTP+FP陰性結(jié)果數(shù)陰性結(jié)果數(shù)FNTNFN+TN共計共計TP+FNFP+TNTP+FP+FN+TN敏感性敏感性100%特異性特異性100%陽性預(yù)測值陽性預(yù)測值100%陰性預(yù)測值陰性預(yù)測值100%符合率符合率100%注注1:式中：式中：TP分析物存在時檢測結(jié)果為陽性的數(shù)量。分析物存在時檢測結(jié)果為陽性的數(shù)量。FP分析物不存在時結(jié)果為陽性的數(shù)量。分析物不存在時結(jié)果為陽性的數(shù)量。TN分析物不存在時檢測結(jié)果為陰性的數(shù)量。分析物不存在時檢測結(jié)果為陰性的數(shù)量。FN分析物存在時檢測結(jié)果為陰性的數(shù)量。分析物存在時檢測結(jié)果為陰性的數(shù)量。 FNTPTPFP

31、TNTNFPTPTPFNTNTNFNTNFPTPTPTN表表1:敏感性、特異性和陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值的計算敏感性、特異性和陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值的計算ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n作為篩查試驗，檢測的作為篩查試驗，檢測的敏感性敏感性應(yīng)應(yīng)95%95%。作為診斷試。作為診斷試驗，檢測驗，檢測敏感性和特異性敏感性和特異性均應(yīng)均應(yīng)95%95%。作為確認(rèn)試驗特。作為確認(rèn)試驗特異性應(yīng)異性應(yīng)98%-99%98%-99%。定性免疫檢驗項目敏感性、特異性要求定性免疫檢驗項目敏感性、特異性要求ISO15189實驗

32、室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心建議使用計分可信區(qū)間建議使用計分可信區(qū)間以上公式中，以上公式中，1.961.96是從標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布對應(yīng)的是從標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布對應(yīng)的9595可信區(qū)間可信區(qū)間得來的。若置信水平改變，則得來的。若置信水平改變，則1.961.96也應(yīng)被相應(yīng)的百分位點也應(yīng)被相應(yīng)的百分位點所替代。所替代。ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心敏感性、特異性的計算舉例敏感性、特異性的計算舉例表：待評價試劑與診斷標(biāo)準(zhǔn)相比較進(jìn)行敏感性、特

33、異性的計算舉例表：待評價試劑與診斷標(biāo)準(zhǔn)相比較進(jìn)行敏感性、特異性的計算舉例待評價試劑的檢測結(jié)果待評價試劑的檢測結(jié)果診斷標(biāo)準(zhǔn)診斷標(biāo)準(zhǔn) 分析物存在分析物存在分析物不存在分析物不存在總計總計陽性結(jié)果數(shù)陽性結(jié)果數(shù)88290陰性結(jié)果數(shù)陰性結(jié)果數(shù)14336350共計共計102338440n敏感性敏感性=100%=100%88/102=86.3%88/102=86.3%n特異性特異性=100%=100%336/338 =99.4%336/338 =99.4%n敏感性和特異性的95%置信區(qū)間為敏感性(74.3%, 93.2%) 和特異性 (96.7%, 99.9%)。ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室

34、認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心概概 述述n如果如果沒有可用的診斷標(biāo)準(zhǔn)沒有可用的診斷標(biāo)準(zhǔn)，那么廠家需提供待評價，那么廠家需提供待評價試劑試劑與某一已驗證方法進(jìn)行比較與某一已驗證方法進(jìn)行比較的結(jié)果，在這種情況的結(jié)果，在這種情況下，則不能夠計算敏感性和特異性，而是計算陽性符下，則不能夠計算敏感性和特異性，而是計算陽性符合率和陰性符合率。合率和陰性符合率。n這種計算反映的并非方法的準(zhǔn)確度，而是這種計算反映的并非方法的準(zhǔn)確度，而是待評價試待評價試劑和已驗證方法的一致性程度劑和已驗證方法的一致性程度。陽性符合率和陰性符合率陽性符合率和陰性符合率ISO1

35、5189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心表：待評價試劑與已驗證方法相比較進(jìn)行陽性符合率和陰性符合率的計算表：待評價試劑與已驗證方法相比較進(jìn)行陽性符合率和陰性符合率的計算陽性符合率和陰性符合率的計算陽性符合率和陰性符合率的計算待評價試劑的檢測結(jié)果待評價試劑的檢測結(jié)果已驗證方法已驗證方法+-+ab- cd共計共計a+cb+d陽性符合率陽性符合率= a/(a+c) = a/(a+c) 100%100%。陰性符合率陰性符合率= d/(b+d) = d/(b+d) 100%100%。 總符合率總符合率=(a+d)/(a+b+

36、c+d)=(a+d)/(a+b+c+d)100%100%。n需要特別說明的是，陽性符合率可以解釋為已驗證方法檢測結(jié)果為陽性需要特別說明的是，陽性符合率可以解釋為已驗證方法檢測結(jié)果為陽性的樣本中待評價試劑的陽性率，的樣本中待評價試劑的陽性率，ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心表：待評價試劑與已驗證方法相比較進(jìn)行陽性符合率和陰性符合率的計表：待評價試劑與已驗證方法相比較進(jìn)行陽性符合率和陰性符合率的計算舉例算舉例陽性符合率和陰性符合率的計算舉例陽性符合率和陰性符合率的計算舉例待評價試劑的檢測結(jié)果已驗證方法總

37、計+-+801090- 8342350共計88352440陽性符合率陽性符合率= 80/88 = 80/88 100% = 90.9%100% = 90.9%。陰性符合率陰性符合率= 342/352 = 342/352 100% = 97.2%100% = 97.2%總符合率總符合率= (80+342)/440 = (80+342)/440 100% = 95.9%100% = 95.9%95%置信區(qū)間為：敏感性(78.8%, 96.4%) 和特異性( 93.5%, 98.8%)。ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)

38、院臨床檢驗中心n每次實驗，應(yīng)立即記錄所有原始檢測數(shù)據(jù)并復(fù)核，每次實驗，應(yīng)立即記錄所有原始檢測數(shù)據(jù)并復(fù)核，以早期發(fā)現(xiàn)分析系統(tǒng)及人為誤差的來源。以早期發(fā)現(xiàn)分析系統(tǒng)及人為誤差的來源。n一旦發(fā)現(xiàn)某些結(jié)果是由可解釋的誤差引起的，則應(yīng)一旦發(fā)現(xiàn)某些結(jié)果是由可解釋的誤差引起的，則應(yīng)將其記錄下來，同時，這些結(jié)果不能用于數(shù)據(jù)分析。將其記錄下來，同時，這些結(jié)果不能用于數(shù)據(jù)分析。n如不能確定誤差產(chǎn)生的原因，則保留原始結(jié)果。如不能確定誤差產(chǎn)生的原因，則保留原始結(jié)果。數(shù)據(jù)收集的檢查數(shù)據(jù)收集的檢查 ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中

39、心n第三方質(zhì)控品第三方質(zhì)控品n檢測系統(tǒng)配套質(zhì)控品檢測系統(tǒng)配套質(zhì)控品n自制質(zhì)控品自制質(zhì)控品質(zhì)控品的來源質(zhì)控品的來源5.6 檢驗結(jié)果質(zhì)量的保證檢驗結(jié)果質(zhì)量的保證-室內(nèi)質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)控ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n基質(zhì)：應(yīng)盡量選擇人血清基質(zhì)，工程菌或動物源性基質(zhì)：應(yīng)盡量選擇人血清基質(zhì)，工程菌或動物源性的基質(zhì)由于人體內(nèi)有大量的異嗜性抗體的存在引起非的基質(zhì)由于人體內(nèi)有大量的異嗜性抗體的存在引起非特異或中和反應(yīng)造成假失控。稀釋液也應(yīng)用人血清，特異或中和反應(yīng)造成假失控。稀釋液也應(yīng)用人血清，凍干品復(fù)溶可以使用生理鹽

40、水，避免使用動物源性的凍干品復(fù)溶可以使用生理鹽水，避免使用動物源性的小牛血清等。小牛血清等。n穩(wěn)定性：室內(nèi)質(zhì)控需要觀察一段時間，一般選擇生穩(wěn)定性：室內(nèi)質(zhì)控需要觀察一段時間，一般選擇生產(chǎn)者聲明在一定保存條件下如產(chǎn)者聲明在一定保存條件下如2-82-8或或-20-20以下有效以下有效期為期為6 6個月以上個月以上。要特別注意開瓶有效期和凍干質(zhì)控。要特別注意開瓶有效期和凍干質(zhì)控物復(fù)溶后分裝瓶的有效期與原裝瓶有效期的區(qū)別，通物復(fù)溶后分裝瓶的有效期與原裝瓶有效期的區(qū)別，通常前二者的有效期要短許多。常前二者的有效期要短許多。實驗室應(yīng)對這些有效期實驗室應(yīng)對這些有效期進(jìn)行驗證。進(jìn)行驗證。5.6 檢驗程序的質(zhì)量控

41、制檢驗程序的質(zhì)量控制質(zhì)控物的選擇質(zhì)控物的選擇 ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n質(zhì)控物數(shù)量、實驗位置和頻次：質(zhì)控物數(shù)量應(yīng)滿足質(zhì)控物數(shù)量、實驗位置和頻次：質(zhì)控物數(shù)量應(yīng)滿足一個批號至少半年的實驗量。每分析批至少安排一個一個批號至少半年的實驗量。每分析批至少安排一個弱陽性弱陽性和一個和一個陰性陰性質(zhì)控，檢測位置不能固定而應(yīng)隨機(jī)質(zhì)控，檢測位置不能固定而應(yīng)隨機(jī)放置。放置。n試劑盒所設(shè)的試劑盒所設(shè)的陰、陽性內(nèi)對陰、陽性內(nèi)對照照是用來計算是用來計算CUT OFFCUT OFF值或閾值值或閾值的，也有相應(yīng)的有效性判

42、斷標(biāo)準(zhǔn)，但只能在的，也有相應(yīng)的有效性判斷標(biāo)準(zhǔn)，但只能在同批號試劑內(nèi)使用，同批號試劑內(nèi)使用，不能作為質(zhì)控指標(biāo)不能作為質(zhì)控指標(biāo)，質(zhì)控必須是質(zhì)控必須是可以監(jiān)控到不同批號試劑間的變化的外對照?？梢员O(jiān)控到不同批號試劑間的變化的外對照。質(zhì)控物的選擇質(zhì)控物的選擇 ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n高值或超高值陽性血清是用來監(jiān)控高值或超高值陽性血清是用來監(jiān)控“HOOKHOOK效應(yīng)效應(yīng)”的的，應(yīng)該在引進(jìn)分析方法或試劑盒時評價，不需要長期，應(yīng)該在引進(jìn)分析方法或試劑盒時評價，不需要長期監(jiān)控，同時其測定值遠(yuǎn)高于監(jiān)控，同時其

43、測定值遠(yuǎn)高于CUT OFF CUT OFF 值對邊緣結(jié)果的值對邊緣結(jié)果的監(jiān)控也無任何價值。監(jiān)控也無任何價值。質(zhì)控物的選擇質(zhì)控物的選擇 ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心o質(zhì)控品水平：質(zhì)控品水平：n 陰性質(zhì)控品陰性質(zhì)控品：特定項目人陰性血清混合物（若為：特定項目人陰性血清混合物（若為ELISA或或CLIA質(zhì)控品濃度宜質(zhì)控品濃度宜0.5倍臨界值左右）倍臨界值左右）n 陽性質(zhì)控品陽性質(zhì)控品：特定項目人陽性血清混合物：特定項目人陽性血清混合物o ANA 1:1000o anti-dsDNA 1:100或以上或

44、以上o anti-ENA 中強(qiáng)度陽性：若組合式檢測，至少有中強(qiáng)度陽性：若組合式檢測，至少有2個項目為陽性個項目為陽性質(zhì)控物的選擇質(zhì)控物的選擇 ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心o 質(zhì)控品水平：質(zhì)控品水平：n 弱陽性質(zhì)控品弱陽性質(zhì)控品：o ELISA、CLIA：臨界值：臨界值24倍的樣本倍的樣本o IIF:比臨界值高比臨界值高1個滴度。特定項目人陽性血清或陰陽個滴度。特定項目人陽性血清或陰陽性血清混合物。性血清混合物。nANA ：1：1001:320 ，ANA模型：斑點型，或均質(zhì)模型：斑點型，或均質(zhì)型，

45、或核仁型，或胞漿型等（可以每型，或核仁型，或胞漿型等（可以每6個月變換，存儲質(zhì)控個月變換，存儲質(zhì)控品至少有品至少有2個模型?。﹤€模型?。﹏anti-dsDNA：1:101:32nanti-ENA：低度陽性或：低度陽性或臨界值臨界值24倍的樣本倍的樣本（若組合式（若組合式檢測，至少有檢測，至少有2個項目為弱陽性）個項目為弱陽性）質(zhì)控物的選擇質(zhì)控物的選擇 ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心大量的臨床免疫項目無商品化的質(zhì)控物供應(yīng)，實驗室大量的臨床免疫項目無商品化的質(zhì)控物供應(yīng)，實驗室需自制，其步驟為：需自制，

46、其步驟為：1 1 收集陽性血清收集陽性血清( (無明顯溶血、黃膽、脂肪血和污染血清無明顯溶血、黃膽、脂肪血和污染血清) )到到一定量（至少夠本室使用一定量（至少夠本室使用6 6個月以上的量）；個月以上的量）；2 2 傳染性病原體需經(jīng)傳染性病原體需經(jīng)5656、1010小時滅活后使用；小時滅活后使用；3 0.2m3 0.2m生物濾膜過濾，去除纖維沉淀物和細(xì)菌；生物濾膜過濾，去除纖維沉淀物和細(xì)菌；4 4 稀釋，用正常人血清稀釋；稀釋，用正常人血清稀釋；5 IIF5 IIF方法方法ANAANA弱陽性弱陽性質(zhì)控質(zhì)控品（均質(zhì)型），將混合血清濃度調(diào)品（均質(zhì)型），將混合血清濃度調(diào)整到其整到其臨界值（臨界值（1

47、:1001:100）或高）或高1 1個滴度（個滴度（1:3201:320）或之間）或之間； 6 6 測定值，與定值參考品進(jìn)行對比、求值，無參考品時選擇測定值，與定值參考品進(jìn)行對比、求值，無參考品時選擇在在2 2-4-4倍倍Cut OffCut Off值值附近的陽性值；附近的陽性值；6 6 分裝小瓶（每日用量），加蓋、貼簽，分裝小瓶（每日用量），加蓋、貼簽，-20-20凍存?zhèn)溆茫粌龃鎮(zhèn)溆茫? 7 穩(wěn)定性及瓶間差評價。穩(wěn)定性及瓶間差評價。自制質(zhì)控品自制質(zhì)控品ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n 不同保存條

48、件下不同保存條件下 以數(shù)值計算方法：以數(shù)值計算方法：抽樣方法同均一性抽樣方法同均一性 2-8 2-8：CVCV值、累計值、累計CVCV值，穩(wěn)定期值，穩(wěn)定期 -80 -80：CVCV值、累計值、累計CVCV值，穩(wěn)定期值，穩(wěn)定期 室溫：室溫：CVCV值、累計值、累計CVCV值，穩(wěn)定期值，穩(wěn)定期 以定性判定方法：以定性判定方法：抽樣方法同均一性抽樣方法同均一性 2-8 2-8：滴度的符合率，累計符合率，穩(wěn)定期：滴度的符合率，累計符合率，穩(wěn)定期 -80 -80：滴度的符合率，累計符合率，穩(wěn)定期：滴度的符合率，累計符合率，穩(wěn)定期 室溫：滴度的符合率，累計符合率，穩(wěn)定期室溫：滴度的符合率，累計符合率，穩(wěn)定

49、期質(zhì)控品穩(wěn)定性的評價質(zhì)控品穩(wěn)定性的評價1 1）均一性評估：同批號質(zhì)控品隨機(jī)抽取）均一性評估：同批號質(zhì)控品隨機(jī)抽取5 5支（瓶），支（瓶），80%80%符合為合格。符合為合格。2 2）穩(wěn)定性評估：評估）穩(wěn)定性評估：評估1 1周，周，1 1月，月，3 3月，月，6 6月，月，1 1年。有效期一般可標(biāo)定為年。有效期一般可標(biāo)定為1 1年。年。ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心o純定性試驗：純定性試驗：如免疫印跡、斑點滲濾等，除膜條如免疫印跡、斑點滲濾等，除膜條本身的內(nèi)對照外：本身的內(nèi)對照外：n 每檢測日或分析

50、批，應(yīng)使用弱陽性和陰性質(zhì)控品兩每檢測日或分析批，應(yīng)使用弱陽性和陰性質(zhì)控品兩個水平進(jìn)行質(zhì)控。個水平進(jìn)行質(zhì)控。n 質(zhì)控判定規(guī)則質(zhì)控判定規(guī)則o 陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果為陰性陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果為陰性o 弱陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果為弱陽性弱陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果為弱陽性純定性試驗的質(zhì)控要求純定性試驗的質(zhì)控要求如：抗如：抗ENA抗體譜檢測抗體譜檢測ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心o以滴度或稀釋度判定的試驗：如間接免疫熒光法、凝集試驗以滴度或稀釋度判定的試驗：如間接免疫熒光法、凝集試驗等，等，n 每檢測日或分析批，應(yīng)使

51、用弱陽性和陰性質(zhì)控品兩個每檢測日或分析批，應(yīng)使用弱陽性和陰性質(zhì)控品兩個水平進(jìn)行質(zhì)控。水平進(jìn)行質(zhì)控。n 質(zhì)控判定規(guī)則：質(zhì)控判定規(guī)則：o 陰性質(zhì)控結(jié)果為陰性陰性質(zhì)控結(jié)果為陰性o 弱陽性質(zhì)控結(jié)果在弱陽性質(zhì)控結(jié)果在靶值上下一個滴度或稀釋度靶值上下一個滴度或稀釋度純定性試驗的質(zhì)控要求純定性試驗的質(zhì)控要求如：ANA、anti-dsDNA、ANCA、AMA、SMA等ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心o 用數(shù)值判定結(jié)果的試驗：如用數(shù)值判定結(jié)果的試驗：如ELISAELISA、CLIACLIA等。等。n 濃度：弱陽性質(zhì)控

52、品濃度宜在濃度：弱陽性質(zhì)控品濃度宜在2 24 4倍臨界值左右，陰倍臨界值左右，陰性質(zhì)控品濃度宜性質(zhì)控品濃度宜0.50.5倍臨界值左右（兩個水平）。倍臨界值左右（兩個水平）。n 頻次：若是頻次：若是ELISAELISA應(yīng)每板做質(zhì)控，若是應(yīng)每板做質(zhì)控，若是CLIACLIA每分析批做每分析批做質(zhì)控。質(zhì)控。n 質(zhì)控判定規(guī)則：至少利用其多規(guī)則中一個偶然誤差及一質(zhì)控判定規(guī)則：至少利用其多規(guī)則中一個偶然誤差及一個系統(tǒng)誤差規(guī)則。個系統(tǒng)誤差規(guī)則。12s警告，警告，13s和和22s失控失控。純定性試驗的質(zhì)控要求純定性試驗的質(zhì)控要求如：如：anti-PR3anti-PR3、ACLACL、anti-CCPanti-C

53、CP等等ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n發(fā)現(xiàn)問題發(fā)現(xiàn)問題n分析問題產(chǎn)生的原因分析問題產(chǎn)生的原因n采取糾正措施加以改進(jìn)，進(jìn)而預(yù)防采取糾正措施加以改進(jìn)，進(jìn)而預(yù)防n驗證和追蹤驗證和追蹤 避免同樣的問題出現(xiàn)第二次！避免同樣的問題出現(xiàn)第二次！失控原因分析及處理失控原因分析及處理ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n陽性質(zhì)控品陽性質(zhì)控品失控的常見原因失控的常見原因: : 污染、溫育時間不污染、溫育時間不穩(wěn)定、偶然誤差。

54、穩(wěn)定、偶然誤差。n陰性質(zhì)控品陰性質(zhì)控品的常見失控原因：污染、洗板不干凈的常見失控原因：污染、洗板不干凈、標(biāo)本間的交叉污染。、標(biāo)本間的交叉污染。n處理措施：全自動加樣系統(tǒng)處理措施：全自動加樣系統(tǒng) 一次性吸頭的使用一次性吸頭的使用，洗板機(jī)的維護(hù)，洗液的定期更換，溫育溫度和，洗板機(jī)的維護(hù)，洗液的定期更換，溫育溫度和溫育時間的保證，加樣器的準(zhǔn)確，熒光顯微鏡的溫育時間的保證，加樣器的準(zhǔn)確，熒光顯微鏡的維護(hù)。維護(hù)。失控原因分析及處理失控原因分析及處理ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心微量加樣器的質(zhì)量保證微量加樣器

55、的質(zhì)量保證ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心檢定或校準(zhǔn)：檢定或校準(zhǔn)：至少每年至少每年1 1次次n加樣器的校準(zhǔn)加樣器的校準(zhǔn) 可依據(jù)可依據(jù)ISO/DIS8655ISO/DIS8655文件和國家技術(shù)監(jiān)督局頒文件和國家技術(shù)監(jiān)督局頒發(fā)的有關(guān)定量、可調(diào)移液器的中華人民共和國國發(fā)的有關(guān)定量、可調(diào)移液器的中華人民共和國國家計量檢定規(guī)程家計量檢定規(guī)程定量、可調(diào)移液器試行檢定規(guī)定量、可調(diào)移液器試行檢定規(guī)程程（JJG646-90JJG646-90）規(guī)定的重量測試方法。這是目）規(guī)定的重量測試方法。這是目前用于此類儀器有效的校

56、準(zhǔn)方法。前用于此類儀器有效的校準(zhǔn)方法。 微量加樣器的質(zhì)量保證微量加樣器的質(zhì)量保證ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n 測定波長：測定波長：400-750nm400-750nmn 吸光度范圍：吸光度范圍：0.0-4.00.0-4.0，線性誤差，線性誤差2.0%2.0%，精密，精密度度CV0.2%CV0.2%n 光學(xué)系統(tǒng)：垂直光路多通道（硅膠管或光導(dǎo)纖光學(xué)系統(tǒng)：垂直光路多通道（硅膠管或光導(dǎo)纖維）維）n 檢測速度：數(shù)秒檢測速度：數(shù)秒n 震板功能震板功能n 溫育功能溫育功能n 軟件功能軟件功能酶標(biāo)儀的質(zhì)量保證

57、：酶標(biāo)儀的性能酶標(biāo)儀的質(zhì)量保證：酶標(biāo)儀的性能ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n 酶標(biāo)儀校準(zhǔn)至少酶標(biāo)儀校準(zhǔn)至少1 1年年1 1次，可由計量部門或廠家次，可由計量部門或廠家完成，實驗室驗證完成，實驗室驗證酶標(biāo)儀的質(zhì)量保證：酶標(biāo)儀的校準(zhǔn)酶標(biāo)儀的質(zhì)量保證：酶標(biāo)儀的校準(zhǔn)核心：比色測定的核心：比色測定的 準(zhǔn)確性準(zhǔn)確性 線性線性 精密性精密性ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心熒光顯微鏡的質(zhì)量保證熒光顯微鏡的質(zhì)量保證穩(wěn)定激發(fā)光穩(wěn)定激發(fā)光優(yōu)質(zhì)光路優(yōu)質(zhì)光路光強(qiáng)校驗光強(qiáng)校驗ISO15189實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座實驗室認(rèn)可系列培訓(xùn)講座遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床檢驗中心n 校準(zhǔn)：至少每年校準(zhǔn)：至少每年1 1次，可有廠家完成，實驗室驗次，可有廠家完成，實驗室驗證證n 汞燈：壽