常規(guī)的石蠟包埋過(guò)程包括五個(gè)基本步驟

1、常規(guī)的石蠟包埋過(guò)程包括五個(gè)基本步驟，即固定，脫水，透明，浸蠟和包埋制作石蠟切片，切片前須將石蠟滲透組織包埋于石蠟中，而水與石蠟又是不相混合的， 所以在浸蠟，包埋前必須將組織內(nèi)所含的水分脫去。而大多數(shù)的組織固定劑是水溶液，隨后的水沖洗也使其含有大量水分，因此必須先行脫水， 一般是浸入逐級(jí)增加濃度的酒精來(lái)完成。由于酒精和石蠟不能混合，須再用一種石蠟的溶劑來(lái)置換酒精，因大多數(shù)石蠟溶劑有使組織的折光率增高并表現(xiàn)為透明或半透明狀，所以此步驟又稱透明。最后用石蠟浸漬組織并鑄制成堅(jiān)實(shí)的蠟塊。常規(guī)的石蠟包埋過(guò)程包括五個(gè)基本步驟，即固定，脫水，透明，浸蠟和包埋，前一章中已述 過(guò)固定。第一節(jié)脫水脫水就是用脫水劑完

2、全除去組織內(nèi)的水分，為下一步透明及浸蠟創(chuàng)造條件。此外，脫水還可以使組織再次發(fā)生一定的硬化，脫水劑必須是與水在任何比例下均能混合的液體。一.常用的脫水劑1.酒精：是制片最常用的 試劑，可與水在任何比例下相混合，酒精的脫水能力比較強(qiáng)，又 能硬化組織。但是酒精的船頭速度很快，對(duì)于組織會(huì)有明顯的收縮作用。因此在以酒精作為脫水劑時(shí)，應(yīng)該先從濃度較低的酒精開始，然后遞增其濃度，這樣可以避免組織過(guò)度收縮。第一瓶酒精濃度隨固定劑，脫水組織的大小和種類而異，經(jīng)水溶性固定劑固定的細(xì)柔組織需 要慢慢脫水，從50 %酒精開始。如眼球，組胚組織等大多數(shù)組織標(biāo)本則是從70 %酒精開始，再經(jīng)80%, 95 %以至無(wú)水酒精。

3、但是有時(shí)為了某種特殊要求，例如要做糖元的切片標(biāo)本或 是要做尿酸結(jié)晶染色切片標(biāo)本，為了防止糖元和尿酸結(jié)晶在水中消失卻要直接投入無(wú)水酒精 中固定，而不需要經(jīng)過(guò)水洗和低濃度酒精的脫水過(guò)程。經(jīng)無(wú)水酒精固定后的組織只需要再經(jīng)過(guò)換一次無(wú)水酒精脫水即可。用AAF固定液固定的組織可直接置于95%酒精開始脫水。用醇性固定劑（如Carnoy）則可置于高濃度無(wú)水酒精內(nèi)，但應(yīng)多次換液以除酸。一般情況下，組織經(jīng)過(guò) 70%, 80%, 90%, 95%,以至無(wú)水酒精的脫水程序，即可達(dá)到脫 水的要求。但是為了能使大量的組織塊同時(shí)進(jìn)行脫水， 則要求保持液體的濃度以保證脫水的 作用，最好是以兩次 95%酒精，兩次100 %酒精

4、重復(fù)進(jìn)行脫水，以保證組織的水分脫凈。脫水時(shí)間應(yīng)視組織種類， 組織塊大小，厚薄和固定劑的不同而異。如脫鈣的骨組織，實(shí)質(zhì)性臟器等的脫水過(guò)程宜短， 而疏松結(jié)締組織，脂肪組織等，脫水過(guò)程則宜適當(dāng)延長(zhǎng)。 水分必須脫干凈，脂肪必須溶去。 含有銘酸的固定劑固定的組織，脫水時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，而鍍銀組織更應(yīng)注意，脫水時(shí)間應(yīng)比為鍍銀的同類組織要短。脫水的基本原則：從低濃度酒精開始逐漸升到高濃度酒精，以保持組織中的水分完全脫凈。一般1cmX1cmX0.2cm 大小的組織，脫水全過(guò)程僅需要數(shù)小時(shí)即可達(dá)到完全脫水。在各級(jí)濃度酒精內(nèi)處理的最短時(shí)間分別減少到24小時(shí)也能獲得滿意的結(jié)果。如果組織脫水不盡，隨后的透明，浸蠟都會(huì)受到

5、影響，致使切片很難以完成。較差質(zhì)量的切片，很容易造成在染色時(shí) 脫片，這樣的組織蠟塊，因其含有一定的水分，一經(jīng)與空氣接觸即干燥而凹陷。脫水不盡的組織是不能切出很好的切片的。外檢標(biāo)本的制作，目前都采用快速脫水的方法。 科研標(biāo)本，教學(xué)標(biāo)本的脫水時(shí)間比較長(zhǎng)，其目的 在于更充分脫水，并適當(dāng)加強(qiáng)了組織的硬度。酒精脫水劑使用不宜太久，應(yīng)適時(shí)更換新液。當(dāng)酒精混濁 ，變黃或酒精滴于水中出現(xiàn)乳白色混 濁時(shí)，說(shuō)明酒精中溶解了過(guò)量的脂類，這種情況一出現(xiàn)，將會(huì)影響脫水，則應(yīng)及時(shí)更換。各種濃度酒精的配制：切片室內(nèi)應(yīng)常備有 70%,80%,85%等各種濃度的酒精。配制時(shí)應(yīng)以95%酒精作為基液加水稀釋,不要用無(wú)水酒精去配制，

6、因無(wú)水酒精的價(jià)格較高，極不經(jīng)濟(jì)。配制方法如下：1 .先將高濃度酒精注入量杯，其量同將要稀釋酒精濃度數(shù)字相等。2 .加入蒸儲(chǔ)水，致總量達(dá)到原酒精濃度的數(shù)字量。例如：（一）用95%酒精配制成70%酒精時(shí)：取95%酒精70毫升；（2）加蒸儲(chǔ)水使達(dá)到95毫升；稀釋后的酒精既為 70%的酒精。（二）用80%酒精配制成60%酒精時(shí)：取80%酒精60毫升；（2）加蒸儲(chǔ)水使達(dá)到80毫升；稀釋后的酒精既為濃度為 60%的酒精.其余類推，其他的試劑的稀釋也均可以參照此方法進(jìn) 行配制。2 .丙酮（Acetone）：可用作固定液，也是一種比較好的脫水劑。脫水能力強(qiáng)、速度快，可配制不同濃度進(jìn)行脫水。但一般情況下，多用在

7、無(wú)水酒精的補(bǔ)充脫水。丙酮脫水時(shí)間比酒精強(qiáng)，但容易使組織過(guò)度硬化，所以應(yīng)適當(dāng)掌握脫水時(shí)間。3 .正丁醇（-Buty alcohol）:正丁醇脫水能力較酒精弱 ，可與水、酒精相混合，而且也能溶解石 蠟,因此正丁醇不僅可以替代酒精使組織脫水，還可以代替二甲苯使組織透明。平常在稀釋時(shí)都與酒精按照一定比例配制使用，或?qū)⒔M織脫水至90%酒精后移入正丁醇，正丁醇再脫水后 可直接投入石蠟。用正丁醇脫水，組織比較少引起收縮和硬化等不良結(jié)果。4 .二氧乙環(huán)（Dioxan）:二氧乙環(huán)是一種有毒物質(zhì) ，易揮發(fā)（使用場(chǎng)所必'須通風(fēng)，能同水、酒精、 二甲苯相混合并能溶解石蠟 ，是一種既可以脫水，也具有透明效果的液

8、體。 脫水一般可以70% 開始，再經(jīng)過(guò)90%至純二氧乙環(huán)，然后浸入石蠟。二氧乙環(huán)脫水對(duì)組織無(wú)收縮和硬化等不良現(xiàn) 象,對(duì)較硬的組織或易收縮的組織可使用二氧乙環(huán)。二.組織的搖震為加快脫水進(jìn)程可將標(biāo)本放入各級(jí)酒精內(nèi)借助機(jī)器或手工震搖，還可以加溫促進(jìn)脫水。 即將標(biāo)本裝在塞緊的玻璃瓶置于包埋箱或溫箱內(nèi)，因液體受熱產(chǎn)生的正壓可增加溶液的對(duì)流。 但熱酒精會(huì)使組織過(guò)硬，并有爆裂危險(xiǎn)，除急診外，最好不用此方法。第二節(jié)透明組織脫水后，還要經(jīng)過(guò)一個(gè)浸蠟的媒劑透明過(guò)程。目的是使石蠟滲透到組織中去，達(dá)到包埋的支持作用。=常用的脫水劑如酒精等，=不能溶解石蠟與之相混合，因此必須使用一種既可以= 同酒精又能同石蠟相混合的媒

9、劑，當(dāng)組織脫水后，浸蠟之前將組織投入這種媒劑中。由于兩劑能相混合，另一方面也由于這種媒劑比酒精比重大，組織中的酒精就被該媒劑取代，待酒精完全被該媒劑完全取代后，組織即成透明狀態(tài)，因此我們長(zhǎng)稱這種媒劑為透明劑，在制片中的這一過(guò)程就稱為透明過(guò)程。實(shí)質(zhì)上透明僅是一種過(guò)程而非目的，其所以出現(xiàn)透明現(xiàn)象使因其折光系數(shù)改變的緣故。從組織的狀態(tài)上看，由于組織經(jīng)過(guò)媒劑的作用之后，其折射系數(shù)近于組織蛋白的折射系數(shù)，從而顯示出透明狀態(tài)。 組織一旦呈現(xiàn)透明狀態(tài)， 也說(shuō)明脫水劑已被媒劑所取代。透明后就可以將組織浸入溶解的石蠟進(jìn)行浸蠟。透明劑透明劑很多，一般常用的有二甲苯，苯，甲苯，氯仿，香柏油等。1 .二甲苯：是最為常

10、用的一種透明劑，它能與酒精，丙酮相混合，又是石蠟的溶劑。在透 明過(guò)程中，組織繼續(xù)發(fā)生硬化，由于二甲苯對(duì)組織的收縮性強(qiáng)，作用迅速，因此，組織在二 甲苯中時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)， 否則組織容易變脆變硬， 一般是達(dá)到組織的透明為度，小塊組織在半至一小時(shí)內(nèi)透明。為了不使組織過(guò)度硬化，苯則。是更好的一種透明劑，它較甲苯和二甲苯的作用稍緩，對(duì)組織收縮較少，不易變脆。但苯較二甲苯毒性大，揮發(fā)快，故應(yīng)注意安全使 用。2 .氯仿：也是一種很好的媒劑，它的作用緩和。組織在此液內(nèi)過(guò)夜也不至于過(guò)硬變脆，這 一點(diǎn)較苯，二甲苯和甲苯優(yōu)良。但氯仿比重較大，折光率較小，不能改變組織的折光率，組 織在氯仿中不易呈現(xiàn)二甲苯那樣的透明現(xiàn)象，

11、所以組織要比實(shí)際需要浸漬更長(zhǎng)一些時(shí)間保證完全滲透和置換出酒精。3 .香柏油：是研究處理細(xì)柔組織的最佳透明劑，因它的硬化作用極小，組織在此液體內(nèi)較長(zhǎng)時(shí)間甚至幾個(gè)月也可無(wú)妨。過(guò)硬的組織脫水后，（如皮膚和致密纖維組織）用香柏油透明， 經(jīng)此處理后的組織容易切片。不過(guò)香柏油的濃度大，滲透力弱，同石蠟混合不及其他透明劑 效果好，故常規(guī)石蠟切片一般不用。透明時(shí)間的長(zhǎng)短因組織的大小而異。例如腦組織和有血塊的組織，就應(yīng)該縮短在二甲苯內(nèi)留置時(shí)間，而一些肌肉組織和胃腸組織則應(yīng)該稍延長(zhǎng)在二甲苯內(nèi)留置時(shí)間，最好先投入酒精和透明劑等量混合液半小時(shí)，再入透明劑，并更換一次透明劑，待組織完全透明后進(jìn)行浸蠟， 一般需要半小時(shí)至

12、 2- 3小時(shí)。脂肪組織由于其結(jié)構(gòu)不同透明最快，但是這并不能說(shuō)明組織中脫水劑已完全被透明劑取代， 因脂肪組織本身折光率與透明劑（二甲苯）相近，所以應(yīng)在透明劑中多浸一段時(shí)間使脂肪組織盡可能為透明劑所溶解，才有利于石蠟的侵入。透明過(guò)久是否會(huì)導(dǎo)致組織過(guò)度硬化變脆，這取決于脫水的徹底與否， 如果組織脫水完全徹底，則不會(huì)導(dǎo)致過(guò)度硬化和變脆，個(gè)別含膠樣物質(zhì)過(guò)多的組織例外。第三節(jié)浸蠟組織經(jīng)媒劑的透明作用之后， 移入熔化的石蠟內(nèi)浸漬，石蠟逐漸浸入組織間隙，取代透明劑， 這一程序就叫浸蠟。根據(jù)所用石蠟的熔點(diǎn)，浸蠟需要能夠保持于54-60.C溫箱內(nèi)進(jìn)行。石蠟的質(zhì)量和熔度與切片質(zhì)量密切相關(guān)，因此對(duì)石蠟的選擇應(yīng)以注意

13、。用作浸蠟的石蠟不應(yīng)含有塵粒，雜質(zhì)及其他異物，不含水分，質(zhì)地均勻成半透明狀，觸之感覺滑而不膩，結(jié)晶及顆粒少。石蠟中如有水分會(huì)結(jié)晶而變?yōu)榘装呖捎眉訜釘嚢璧姆椒ǔ?。所有的蠟在使用前按常?guī)必須用標(biāo)準(zhǔn)濾紙?jiān)诼┒穬?nèi)過(guò)濾到搪瓷杯里儲(chǔ)存于浸蠟箱中。最好將石蠟于小鍋中加熱煮至近沸，冷卻再煮反復(fù)數(shù)次后空氣可以排除，揮發(fā)性油脂類在煮的過(guò)程中揮發(fā)。處置后的石蠟置于 恒溫箱中保持液體狀態(tài)備用。所用的石蠟有一定的熔點(diǎn)和硬度,熔點(diǎn)高，硬度大。一般要求在52-56 C之間，這既可以支持硬組織也可使切片成條。使用時(shí)應(yīng)根據(jù)組織類型以及制片時(shí)的溫度和氣候而異。夏季采用高熔點(diǎn)的石蠟，冬季則采用低熔點(diǎn)的石蠟。石蠟的熔點(diǎn)越低，其質(zhì)地

14、相應(yīng)的較為疏松。硬蠟（熔點(diǎn)60 C）用于硬纖維組織。軟蠟用于胎兒和乳腺組織，這些盡為研究工作的需要。 為了增加石蠟的韌性， 可在石蠟中加入一些混 合劑，常用蜂蠟，硬脂酸，松香等。1 .蜂蠟：又叫黃蠟，是蜜蜂用來(lái)造巢的淡黃色蠟，熔點(diǎn)在54 c左右，質(zhì)地柔軟，滑潤(rùn)有韌性。為了使低熔點(diǎn)的石蠟硬一些，可加入1020%的蜂蠟。它能增加蠟的熔點(diǎn)而不必使組織浸在高溫內(nèi)，便于切片。也要根據(jù)組織的種類而異，一般常規(guī)用量不超過(guò)5 %為度。2 .硬脂酸：為有光澤的白色片狀結(jié)晶體， 不溶于水，而溶于乙醇，醍和氯仿。熔點(diǎn)64 71%, 在浸蠟中加入少量的硬脂酸可增加石蠟的滲透性。有人用硬脂酸和石蠟混合液置于溫箱中代替二

15、甲苯透明。3 .松香：為棕黃色半透明的固體。質(zhì)硬而脆，遇熱熔解，呈膠體狀，同石蠟混合時(shí)，可增加 石蠟的硬度，由于松香質(zhì)脆，混合后可增加硬度但韌性不足。組織浸蠟時(shí)間也應(yīng)視組織種類大小和結(jié)構(gòu)不同而異。在整個(gè)浸蠟過(guò)程中，標(biāo)本大小對(duì)完成浸蠟所需的時(shí)間有很大影響。 較厚的組織需要較長(zhǎng)時(shí)間才能使蠟浸入中心，而且厚的組織常帶入的透明劑比較多，故需要多次浸蠟才能將透明劑除去。即使少量透明劑也會(huì)沾污石蠟而產(chǎn)生結(jié)晶，致使切片時(shí)切片易碎裂。也要考慮組織的種類，骨，皮膚和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等致密組織要比軟組織如肝腎等需要加倍時(shí)間。含血多的組織，肌肉和纖維束在蠟內(nèi)易過(guò)硬而發(fā)脆， 故浸蠟時(shí)間應(yīng)縮短。 疏松組織，脂肪，消化道組織

16、等浸蠟時(shí)間可以適當(dāng)延長(zhǎng)一些。為了盡可能排除透明劑，浸蠟可以分兩級(jí)或三級(jí)進(jìn)行。以熔點(diǎn)較低的軟石蠟作為第一步，然后再換為熔點(diǎn)較高的石蠟作為第二步，第三步。浸蠟時(shí)間1-4小時(shí)，或更長(zhǎng)，并使之過(guò)夜則較易切割，如此浸漬的組織切片在干燥箱內(nèi)干燥也不易卷曲和龜裂。第四節(jié)包埋包埋，就是將已經(jīng)經(jīng)過(guò)固定，脫水，透明，浸蠟的組織塊從最后的蠟浴取出置入充滿熔融石蠟的包埋框內(nèi)，包埋成塊，使組織和包埋劑相熔一體并迅速冷卻，這個(gè)程序稱為包埋。包埋劑凝固后，進(jìn)一步加強(qiáng)了組織的硬度和韌度而便于進(jìn)行切片。一.石蠟包埋法石蠟包埋法是制作光學(xué)顯微鏡切片的常規(guī)方法，它有許多優(yōu)點(diǎn)，操作簡(jiǎn)易便于掌握， 可進(jìn)行連續(xù)切片，包埋后的組織可以長(zhǎng)期

17、保存。 二|包埋的方法有自動(dòng)包埋機(jī)包埋和手工包埋兩種。手工包埋的步驟如下：1 .組織浸入石蠟后，包埋前將組織移入包埋用石蠟杯內(nèi)。從恒溫箱取出置于三角架上，其下點(diǎn)燃酒精燈，以保持石蠟的溶解狀態(tài)?！? .準(zhǔn)備好包埋框，將包埋用的鐐子在酒精燈上加溫（防止鐐子粘蠟）后，左手持蠟杯，右手把加溫的鐐子放在蠟口（直立狀）倒蠟時(shí)讓石蠟沿鐐子注入包埋框內(nèi)。3 .迅速鐐?cè)〗M織塊放入包埋框石蠟內(nèi)，切面朝下放正置入框底并輕輕壓平，以保證不再有氣 泡。4 .待石蠟表面凝固前將標(biāo)簽貼于其上，需注意勿使標(biāo)簽與標(biāo)本混淆，當(dāng)蠟塊冷至蠟面有一層透明蠟?zāi)r(shí)，浸入冷水中迅速使其冷卻，否則蠟內(nèi)常形成結(jié)晶。5 .蠟塊完全硬固后除去銅框，

18、以保證蠟徹底凝固，立即修切，準(zhǔn)備制成切片或儲(chǔ)藏備用。二.石蠟包埋的注意事項(xiàng)1 .作為包埋組織使用的石蠟不僅由于氣候的不同需要加以選擇，而且與組織的硬度也有密切關(guān)系，過(guò)硬的組織最好用硬度較高的石蠟包埋，反之，軟組織則應(yīng)以硬度較低的石蠟包埋。其熔點(diǎn)一般要求再 60。C左右。2 .包埋用石蠟加溫不可過(guò)高，以保持其不凝固為度，溫度過(guò)高容易將組織燙壞，使得組織變 硬，變脆，并發(fā)生卷曲，收縮變形而不利于切片，甚至影響診斷。另外注意埋蠟的溫度和組 織本身的溫度，兩者是否合適，溫度不一致?？稍斐山M織與周圍石蠟脫裂的現(xiàn)象，而達(dá)不到包埋的作用。3 .包埋用石蠟應(yīng)掌握用量，以組織全部包埋完畢，石蠟也恰好用完為宜。4

19、 .包埋應(yīng)注意組織病變面放在下面，并盡可能使組織放平， 在不損傷組織的情況下可用鐐子輕壓。5 .囊壁和消化道等組織包埋時(shí)更應(yīng)注意組織方位，應(yīng)將組織塊直立拉平，不要卷曲。6 .相同組織如包埋于一個(gè)蠟塊時(shí)，除包平外，還要注意方向的一致，以利切片。7 .多塊組織和碎組織包埋于一個(gè)蠟塊內(nèi)時(shí)，組織的排列一定要密擠靠攏，以求成直線或方塊行，這樣有利于切片。8 .石蠟包埋后，不宜冷凝過(guò)慢，特別是室溫較高時(shí)，石蠟?zāi)毯髴?yīng)立即投入冷水中加速冷卻 可增加石蠟密度，韌性和硬度。但冷凝過(guò)速也會(huì)因?yàn)閮?nèi)外溫差過(guò)大造成蠟塊裂損。三.石蠟包埋程序多少而減少或延長(zhǎng)，如要在酒精中過(guò)夜最好是在低濃度酒精中浸泡，透明過(guò)程一定適當(dāng)掌握,不要時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。更換脫水酒精，如從節(jié)約的角度考慮