阿司匹林抗血小板凝集和抗血栓作用及機(jī)制研究ppt課件

1、阿司匹林抗血小板凝集和抗血栓作用及機(jī)制研討設(shè)計(jì)成員：設(shè)計(jì)成員：研討背景研討背景阿司匹林: 解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥； 對(duì)血小板聚集有抑制造用，阻止血 栓構(gòu)成； 臨床可用于預(yù)防暫時(shí)性腦缺血發(fā)作、心肌堵塞、心房顫抖、人工心臟瓣膜、動(dòng)靜脈瘺或其他手術(shù)后的血栓構(gòu)成研討背景研討背景血栓：活動(dòng)物機(jī)體在心臟或血管內(nèi)某一部分因血液成分發(fā)生析出、凝集和凝固所構(gòu)成的固體狀物質(zhì)血栓構(gòu)成的機(jī)理：心、血管內(nèi)膜損傷血流形狀改動(dòng)血液性質(zhì)改動(dòng)研討背景研討背景抗血栓藥分為：抗凝血藥、抗血小板聚集藥和溶血栓藥抗血小板聚集藥分為三代：阿司匹林為第一代，噻氯匹啶為第二代，血小板糖蛋白b/a受體拮抗劑為第三代。其中，血小板糖蛋白b/a受體拮抗劑

2、的問世是抗血小板治療中的一個(gè)重要里程碑。實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康挠懻摪⑺酒チ挚寡“宓木奂涂寡ㄗ饔眉皺C(jī)制實(shí)驗(yàn)資料實(shí)驗(yàn)資料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雄性實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：雄性SDSD大鼠大鼠4040只只, ,體體重重200g200g左右左右實(shí)驗(yàn)器材：微循環(huán)察看分析系實(shí)驗(yàn)器材：微循環(huán)察看分析系統(tǒng)，冷光源，統(tǒng)，冷光源， ChronoLog 591ChronoLog 591全血血小板聚全血血小板聚集儀及配套設(shè)備，集儀及配套設(shè)備， TXB2 TXB2和和6-6-keto-PGF1keto-PGF1放射免疫分析測(cè)定放射免疫分析測(cè)定盒，低速離心機(jī)，聚苯乙烯離盒，低速離心機(jī)，聚苯乙烯離心管，一次性無菌塑料注射器，心管，一次性無菌塑料注射

3、器，溫浴槽，胃管，開口器溫浴槽，胃管，開口器實(shí)驗(yàn)藥品：實(shí)驗(yàn)藥品：0.25mg/ml0.25mg/ml二磷酸二磷酸腺苷腺苷ADPADP，3.8%3.8%枸椽酸鈉枸椽酸鈉( (檸檬酸鈉檸檬酸鈉), ),阿司匹林注射液，阿司匹林注射液，生理鹽水，孟加拉紅溶液，生理鹽水，孟加拉紅溶液，0.3%0.3%戊巴比妥鈉戊巴比妥鈉TXB2和和6-keto-PGF1放射放射免疫分析測(cè)定盒免疫分析測(cè)定盒ChronoLog 591全血血小板全血血小板聚集儀聚集儀實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟復(fù)制血栓大鼠模型復(fù)制血栓大鼠模型尾部靜注孟加拉紅溶液尾部靜注孟加拉紅溶液15mg/kg15mg/kg；0.3%0.3%戊巴比妥鈉麻醉戊巴比妥鈉

4、麻醉60mg/kg60mg/kg；耳部平鋪，察看并記錄大鼠耳廓耳部平鋪，察看并記錄大鼠耳廓目的血管的血流形狀；目的血管的血流形狀；用波長(zhǎng)為用波長(zhǎng)為540nm540nm的冷光源照射大的冷光源照射大鼠耳廓目的血管，察看并記錄血鼠耳廓目的血管，察看并記錄血流形狀，以不同時(shí)間點(diǎn)血流速度流形狀，以不同時(shí)間點(diǎn)血流速度及血流完全停頓的時(shí)間作為評(píng)價(jià)及血流完全停頓的時(shí)間作為評(píng)價(jià)血栓構(gòu)成的目的。血栓構(gòu)成的目的。實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟阿司匹林抗血小板聚集測(cè)定阿司匹林抗血小板聚集測(cè)定 1. 1. 分組及給藥分組及給藥 3030只只SDSD雄性大鼠稱重標(biāo)志，雄性大鼠稱重標(biāo)志，隨機(jī)分為隨機(jī)分為6 6組，每組組，每組5 5只只

5、2 2血小板聚集率測(cè)定血小板聚集率測(cè)定 取阿司匹林灌胃前自每組取阿司匹林灌胃前自每組大鼠腹腔取血大鼠腹腔取血0.5ml0.5ml測(cè)定血小板聚測(cè)定血小板聚集率集率 3 3TXB2TXB2、6-keto-PGF16-keto-PGF1測(cè)定測(cè)定原理原理 膜磷脂膜磷脂磷脂酶磷脂酶A2環(huán)氧酶環(huán)氧酶COX-1花生四烯酸花生四烯酸PGG2,PGH2PGG2,PGH2TXA2合成酶合成酶PGI2合成酶合成酶PGI2TXA2促進(jìn)血小板聚集；促進(jìn)血小板聚集；收縮血管收縮血管抑制血小板凝集抑制血小板凝集;擴(kuò)張血管擴(kuò)張血管TXB26-keto-PGF1aTXB2TXB2、6-keto-PGF16-keto-PGF1測(cè)

6、測(cè)定定在以上結(jié)果中找出阿司匹林抗凝效果最正確時(shí)劑量。取十只老鼠分兩組，a空白組，b治療組，按原方法復(fù)制大鼠模型。第一天，空腹靜脈抽血0.5ml，試管3500r/min離心20min，取上清液，放射免疫法測(cè)定TXB2、6-keto-PGF1程度。a組大鼠生理鹽水灌胃7d，按上面選出的最正確時(shí)劑量;b組大鼠阿司匹林注射液灌胃7d，按上面選出的最正確時(shí)劑量。第8天，按照上述方法反復(fù)測(cè)定TXB2、6-keto-PGF1程度。免疫組化免疫組化SPSP法測(cè)定法測(cè)定COXCOX一一1 1在血小板中在血小板中表達(dá)表達(dá) 空腹，腹腔靜脈采血空腹，腹腔靜脈采血5 mL5 mL； 離心分別富血小板血漿；離心分別富血小

7、板血漿； 血小板制片血小板制片 SPSP染色染色 光鏡下結(jié)果判別：血小板染色呈棕褐光鏡下結(jié)果判別：血小板染色呈棕褐色或棕黃色為陽性色或棕黃色為陽性(cox-1(cox-1的定位的定位) )，每，每張切片高倍鏡下隨機(jī)取張切片高倍鏡下隨機(jī)取5 5個(gè)視野，經(jīng)圖個(gè)視野，經(jīng)圖像分析儀進(jìn)展定量吸光度掃描，求其像分析儀進(jìn)展定量吸光度掃描，求其陽性信號(hào)平均吸光度值。陽性信號(hào)平均吸光度值。察看記錄察看記錄阿司匹林抗血小板作用凝集率阿司匹林抗血小板作用凝集率組別組別 灌胃前灌胃前 灌胃后灌胃后minmin123450察看記錄察看記錄治療前后治療前后TXB2，6-keto-PGF2含量比較含量比較組別組別AB TX

8、B2 6-keto-PGF2 TXB2 6-keto-PGF2 治療前治療前 治療后治療后 治療前治療前 治療后治療后組別組別對(duì)照組對(duì)照組低凝組低凝組中凝組中凝組高凝組高凝組 吸光度值吸光度值 1 2 3 4 5 平均值平均值COX-1蛋白染色后吸光度測(cè)定值記錄表蛋白染色后吸光度測(cè)定值記錄表預(yù)期結(jié)果預(yù)期結(jié)果血小板聚集率的測(cè)定中，對(duì)照組的血小板聚集率的測(cè)定中，對(duì)照組的聚集率最大，實(shí)驗(yàn)組都不同程度地聚集率最大，實(shí)驗(yàn)組都不同程度地降低；降低；TXB2TXB2明顯下降，明顯下降，6-keto-PGF1a6-keto-PGF1a細(xì)細(xì)微下降；微下降；各組血小板各組血小板COXCOX一一1 1表達(dá)程度表達(dá)程度( (即吸即吸光度值光度值) )大小不一，其中對(duì)照組吸大小不一，其中對(duì)照組吸光度最小、其他三組吸光度值隨所光度最小、其他三組吸光度值隨所測(cè)血小板凝聚率值的增大而增大測(cè)血小板凝聚率值的增大而增大預(yù)期結(jié)論預(yù)期結(jié)論阿司匹林具有抗血小板凝集作用；阿司匹林具有抗血小板凝集作用；阿司