層析技術(shù)簡介

1、層析技術(shù)簡介 一、層析技術(shù)的原理 層析法是利用不同物質(zhì)理化性質(zhì)的差異而建立起來的技術(shù)。所有的層析系統(tǒng)都由兩個相組成：一是固定相，另一是流動相。當待分離的混合物隨流動相通過固定相時。由于各組分的理化性質(zhì)存在差異，與兩相發(fā)生相互作用（吸附、溶解、結(jié)合等）的能力不同，在兩相中的分配（含量比）不同，且隨流動相向前移動，各組分不斷地在兩相中進行再分配。分部收集流出液，可得到樣品中所含的各單一組分，從而達到將各組分分離的目的。 二、層析法分類 而按層析原理還可將層析分為： 1. 凝膠層析：又稱分子篩過濾或排阻層析等。醫(yī)|學教育網(wǎng)搜集整理固定相是多孔凝膠，各組分的分子大小不同，因而在凝膠上受阻滯的程度也不同

2、。 本法的優(yōu)點是所用凝膠屬于惰性載體，吸附力弱，操作條件溫和，不需要有機溶劑，對高分子物質(zhì)有很好的分離效果。常用的凝膠有Sephadex G系列。凝膠層析可用于脫鹽、分離提純、測定高分子物質(zhì)的分子量、高分子溶液的濃縮等。 2. 離子交換層析：采用具有離子交換性能的物質(zhì)作固定相，利用它與流動相中的離子能進行可逆交換的性質(zhì)來分離離子型化合物的方法。主要用于分離氨基酸、多肽及蛋白質(zhì)，也可用于分離核酸、核苷酸及其他帶電荷的生物分子。 3. 高效液相層析（HPLC）：在經(jīng)典液相層析法基礎(chǔ)上，引進氣相層析的理論而發(fā)展起來的一項新穎快速的分離技術(shù)。 具有分離能力強、測定靈敏度高、可在室溫下進行、應用范圍廣等

3、優(yōu)點，對分離蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、生物堿、類固醇和類脂等尤其有利，根據(jù)流動相和固定相相對極性，高效液相色譜分析可分為正相和反相兩種。 4. 親和層析：利用待分離物質(zhì)和它的特異性配體間具有特異的親和力，醫(yī)|學教育網(wǎng)搜集整理從而達到分離的目的。將可親和的一對分子中的一方以共價鍵形式與不溶性載體相連作為固定相吸附劑，當含混合組分的樣品通過此固定相時，只有和固定相分子有特異親和力的物質(zhì)，才能被固定相吸附結(jié)合，性無關(guān)組分隨流動相流出。 改變流動相組分，可將結(jié)合的親和物洗脫下來。親和層析中所用的載體稱為基質(zhì)，與基質(zhì)共價連接的化合物稱配基。具有專一親和力的生物分子對主要有：抗原與抗體，DNA與互補DNA或RNA，酶與底物、激素與受體、維生素與特異結(jié)合蛋白、糖蛋白與植物凝集素等。