概述中藥指紋圖譜在質(zhì)量評價中的作用

1、概述中藥指紋圖譜在質(zhì)量評價中的作用一個理想的指紋圖譜不僅能到達(dá)定性鑒別的作用，色譜圖中大部分色譜峰應(yīng)到達(dá)基線別離，對大部分成分應(yīng)可進(jìn)展定量分析。指紋圖譜技術(shù)自20世紀(jì)70年代出現(xiàn)開展至今，已由研究階段進(jìn)入到實際應(yīng)用階段，并從總體上對中藥質(zhì)量控制起到了推動作用1。國家食品藥品監(jiān)視管理局已公布了?中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)?，中藥指紋圖譜有望作為一種強迫執(zhí)行的質(zhì)量措施載入?中華人民共和國藥典?，為實現(xiàn)中藥走向世界提供有力的質(zhì)量保證。1、指紋圖譜在中藥質(zhì)量控制中的意義及目的中藥指紋圖譜能全面反映中藥內(nèi)在化學(xué)成分的種類與數(shù)量，進(jìn)而反映中藥的質(zhì)量?，F(xiàn)階段中藥的有效成分絕大多數(shù)沒有明確，采用

2、中藥指紋圖譜的方式，將有效地表征中藥質(zhì)量。指紋圖譜已為國際社會所認(rèn)可，有利于中藥進(jìn)入國際市場。1.1 控制中藥原材料質(zhì)量，標(biāo)準(zhǔn)中藥GAP標(biāo)準(zhǔn)由于全球氣候變暖、環(huán)境污染加劇、農(nóng)藥殘留超標(biāo)、品種退化及混雜等原因，中藥原材料的平安穩(wěn)定性已成為亟待解決的關(guān)鍵問題2。建立國家中藥材GAP基地，可實現(xiàn)中藥農(nóng)業(yè)消費的平安、可控。而中藥指紋圖譜是實現(xiàn)中藥GAP的必要標(biāo)準(zhǔn)。以標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜為根據(jù)，可以對中藥消費過程進(jìn)展監(jiān)視指導(dǎo)，保證原材料質(zhì)量的穩(wěn)定性。1.2 對中藥質(zhì)量控制的補充和進(jìn)步一個理想的指紋圖譜不僅能到達(dá)定性鑒別的作用，色譜圖中大部分色譜峰應(yīng)到達(dá)基線別離，對大部分成分應(yīng)可進(jìn)展定量分析。在沒有對照品的情況下

3、，也可以標(biāo)準(zhǔn)品針對其他未知或無標(biāo)準(zhǔn)品的色譜峰進(jìn)展定量。因此，中藥指紋圖譜是對現(xiàn)行中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制方法的進(jìn)步。1.3 控制中間體、成品的一致性，減少批間差異通過指紋圖譜研究，可以掌握每一個批次的原藥材、中間體成分變化，進(jìn)展有指導(dǎo)的合理勾兌，保證成品在成分含量、組成比例上一致，減少批間差異。無論是原藥材、中間體還是成品，因組方已固定、消費工藝相對恒定，藥品的平安性不可能直接通過指紋圖譜來保障，但中藥指紋圖譜可直接解決中間體、成品的批間一致性及穩(wěn)定性問題，從而可以間接并最終保障成品的平安性和有效性。2、中藥指紋圖譜質(zhì)量評價的研究進(jìn)展近年來，運用現(xiàn)代分析技術(shù)，對中藥質(zhì)量評價方法進(jìn)展了大量的研究工作，并

4、獲得了可喜的成果。較為常用的分析技術(shù)包括光譜、波譜、色譜、核磁共振、X射線衍射及各種技術(shù)的聯(lián)用，尤其對色譜指紋圖譜的研究最為廣泛、深化。2.1 薄層色譜指紋圖譜薄層色譜(TLC)法操作簡單，分析速度快，但提供信息量有限，對分析含有幾十種或上百種化學(xué)成分的復(fù)雜體系有困難，可作為中藥指紋圖譜研究的借鑒與補充。而采用了更細(xì)更勻吸附劑的高效薄層色譜(HPTLC)因其較好的別離效果，近年來有較為廣泛的應(yīng)用。高氏等3對不同產(chǎn)地的何首烏藥材進(jìn)展TLC分析，建立了能區(qū)別不同產(chǎn)地何首烏藥材的TLC指紋圖譜，適用于何首烏藥材的質(zhì)量控制與鑒定。顏氏等4對24個批次的三七藥材進(jìn)展研究，建立了三七藥材的TLC指紋圖譜，

5、能快速有效地評價三七藥材的質(zhì)量。2.2 高效液相色譜指紋圖譜高效液相色譜(HPLC)具有別離效能高、選擇性高、檢測靈敏度高、分析速度快等特點，所以，該方法應(yīng)用范圍最為廣泛，方法也最為成熟。目前，三七、蘆根、蛇床子、牡丹皮、銀柴胡、葛根、川芎、丹參、黃芩、天麻、靈芝等原藥材及其提取物都建立了指紋圖譜，許多學(xué)者也對中成藥的指紋圖譜進(jìn)展構(gòu)建，如保濟丸、茵陳注射液、玄麥甘桔顆粒等。石氏等5采用HPLC法建立了葛根及其提取物的指紋圖譜，能有效控制提取物的質(zhì)量。傅氏等6采用梯度洗脫HPLC分析，建立了注射用三七通舒的HPLC指紋圖譜，能有效地控制注射用三七通舒的質(zhì)量。羅氏等7采用HPLC法對13批巖黃連注

6、射液進(jìn)展研究，建立了巖黃連注射液的指紋圖譜，能有效地評價其質(zhì)量。2.3 氣相色譜指紋圖譜氣相色譜(GC)主要用于揮發(fā)油、極性較小的成分或衍生化后可揮發(fā)性成分的分析。該法靈敏度高、別離度好、分析速度快、定量分析的精細(xì)度優(yōu)于1%，其分析范圍只局限于低沸點成分，但不失為中藥指紋圖譜研究的主要方法之一。張氏等8采用GC法對16批澤瀉藥材進(jìn)展研究，建立了澤瀉藥材的指紋圖譜，能有效反映不同來源澤瀉中揮發(fā)油的差異。李氏等9對野菊花注射液進(jìn)展研究，建立了指紋圖譜，并確定了22個共有峰，為野菊花注射液的質(zhì)量控制提供了根據(jù)。2.4 毛細(xì)管電泳指紋圖譜毛細(xì)管電泳(EC)適用于中藥帶電荷的化合物、有機酸、單糖及一些中

7、性分子的別離分析，特別是大分子物質(zhì)肽和蛋白質(zhì)的別離。但其重現(xiàn)性有待進(jìn)步，可作為中藥指紋圖譜研究的補充。苗氏等10應(yīng)用EC技術(shù)，對益母草注射液進(jìn)展分析并建立指紋圖譜，可用于其質(zhì)量控制。2.5 色譜聯(lián)用技術(shù)將色譜法較強的別離才能與光譜和波譜法良好的構(gòu)造鑒別才能相結(jié)合，進(jìn)而采用化學(xué)計量學(xué)方法進(jìn)展分析，可對大部分中藥的化學(xué)成分進(jìn)展定性和相對定量的分析。目前，用于中藥指紋圖譜研究最為廣泛的聯(lián)用技術(shù)是色譜-質(zhì)譜(MS)聯(lián)用技術(shù)，HPLC-MS、GC-MS、LC-MS及EC-MS等聯(lián)用技術(shù)都已用于中藥質(zhì)量評價的研究。此外，紅外光譜、核磁共振、X射線衍射技術(shù)和DNA分子技術(shù)由于其各自的特點，在中藥指紋圖譜的研

8、究中也有較為廣泛的應(yīng)用。仇氏等11應(yīng)用核磁共振技術(shù)，對復(fù)方人參注射液的中間體和注射液樣品進(jìn)展檢測分析，獲得了各自標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜及特征標(biāo)記值，建立了復(fù)方人參注射液的核磁共振指紋圖譜，以控制其質(zhì)量。鄭氏等12建立了板藍(lán)根顆粒的X射線衍射Fourier指紋圖譜，根據(jù)指紋圖譜的幾何拓?fù)鋱D形與衍射特征標(biāo)記峰值，可鑒別出不同廠家消費的板藍(lán)根顆粒。趙氏等13采用HPLC-UV/ELSD串聯(lián)檢測技術(shù)，對中藥復(fù)智散進(jìn)展指紋圖譜研究，建立的指紋圖譜能同時反映復(fù)智散復(fù)方中主要化學(xué)組分特征，可全面有效地進(jìn)展質(zhì)量監(jiān)控和評價。3、中藥色譜指紋圖譜質(zhì)量評價的應(yīng)用3.1 藥材真?zhèn)握鐒e中的應(yīng)用通過建立藥材指紋圖譜，能有效全面地對

9、中藥材的質(zhì)量進(jìn)展控制。色譜指紋圖譜反映全貌的共有峰形式，能有效地對不同產(chǎn)地、不同季節(jié)、不同采收期的藥材進(jìn)展表達(dá)，從而能起到藥材真?zhèn)握鐒e的作用。陳氏等14通過建立半枝蓮藥材的指紋圖譜，可以有效地識別出半枝蓮及其混淆品。熊氏等15采用HPLC法建立指紋圖譜，能有效地區(qū)分滇黃芩與黃芩。章氏等16采用RP-HPLC法建立的白芷指紋圖譜，能有效地鑒別出白芷和杭白芷。3.2 消費過程中的質(zhì)量控制中成藥在消費過程中，由于經(jīng)過提取、濃縮和精制的階段，處方藥材中的主要有效成分被提取別離出來，但部分有效成分也會損失，如何減少有效成分流失，進(jìn)步產(chǎn)品質(zhì)量，越來越多的學(xué)者采用指紋圖譜技術(shù)對消費過程進(jìn)展控制。王氏等17采

10、用指紋圖譜技術(shù)和均勻設(shè)計相結(jié)合的方法，對茵陳的提取工藝進(jìn)展研究，能很好地提取到茵陳藥材的有效部位。董氏等18采用HPLC指紋圖譜方法，對穿心蓮注射液的消費工藝進(jìn)展優(yōu)化，有利于穿心蓮注射液的質(zhì)量改進(jìn)。3.3 中藥色譜指紋圖譜與譜效學(xué)研究隨著色譜指紋圖譜技術(shù)的廣泛應(yīng)用，對中成藥質(zhì)量的控制也更加全面和有效。但指紋圖譜的指紋共有峰是否為主要有效成分，是控制產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵。由于指紋圖譜中成分較多，大部分研究均未能對各指紋峰進(jìn)展一一鑒定。因此，選擇正確的有效成分作為指紋共有峰就顯得尤為重要，中藥指紋圖譜研究中的譜效關(guān)系研究也因此逐漸得到開展。尹氏等19采用指紋圖譜結(jié)合藥效實驗，對加味四妙丸有效部位群GC指

11、紋圖譜進(jìn)展譜效關(guān)系及配伍變化研究，發(fā)現(xiàn)指紋圖譜譜效關(guān)系是表征復(fù)方整體成分-配伍-藥效的相關(guān)性的有效途徑。盧氏等20采用GC指紋圖譜結(jié)合抗炎作用，對魚腥草注射液的譜效學(xué)進(jìn)展研究，得出了魚腥草注射液的抗炎藥效是一些化學(xué)物質(zhì)的協(xié)同作用效果，并確定了該類物質(zhì)。4、小結(jié)目前，雖然可以利用各種分析儀器把中藥成分的圖譜特征表征出來，但還不清楚每一個波峰波谷的詳細(xì)含義，也不清楚每一成分確實切療效。盡管指紋圖譜應(yīng)用于中藥質(zhì)量控制還存在上述問題，但筆者認(rèn)為，評價指紋圖譜應(yīng)著眼于宏觀規(guī)律性的特征分析，即著重識別完好色譜的圖貌，而不是求索細(xì)枝末節(jié)。因此，目前應(yīng)從實際出發(fā)，結(jié)合我國現(xiàn)階段的分析技術(shù)和設(shè)備程度而開展相應(yīng)的研究工作，并逐步將研究成果應(yīng)用于藥品消費過程的質(zhì)量控制、藥材鑒別等方面。隨著我國分析技術(shù)的快速開展、譜效