不同種類濃度的激素配合使用對銀斑百里香無菌苗生長的影響畢業(yè)論文

1、 . 畢業(yè)論文題目：不同種類、濃度的激素配合使用對銀斑百里香無菌苗生長的影響 學(xué) 院：農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院 專業(yè)： 園藝 目 錄河西學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）誠信聲明2河西學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）開題報(bào)告3論文進(jìn)度安排和采取的主要措施8主要參考資料和文獻(xiàn)8不同種類、濃度的激素配合使用對銀斑百里香無菌苗生長的影響10摘要10引言101. 試驗(yàn)材料與方法111.1 供試材料111.2 培養(yǎng)基配制111.3 培養(yǎng)條件111.4 接種條件與培養(yǎng)方法112.結(jié)果與分析112.1 不同濃度的NAA與6-BA配合使用對銀斑百里香的影響112.1.1NAA與6-BA配合使用對銀斑百里香種子發(fā)芽率的影響122.

2、1.2 NAA與6-BA配比對銀斑百里香無菌苗生長的影響132.2 不同濃度的2,4-D和6-BA配合使用對銀斑百里香的影響142.2.1 2,4-D和6-BA配合使用對銀斑百里香種子的影響142.2.2 2,4-D和6-BA配合使用對百里香無菌苗生長狀況的影響153.討論與結(jié)論164.參考文獻(xiàn)17附錄：18河西學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）題目審批表18河西學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院指導(dǎo)教師指導(dǎo)畢業(yè)論文情況登記表19河西學(xué)院畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）指導(dǎo)教師評審表20河西學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）答辯記錄表21致22河西學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）誠信聲明本人重聲明：所呈交的本科畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)），是本人在指導(dǎo)老

3、師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果，成果不存在知識產(chǎn)權(quán)爭議，除文中已經(jīng)注明引用的容外，本論文不含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。 作者簽名： 二O一二 年 六 月 十 日河西學(xué)院本科生畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）開題報(bào)告論文題目不同種類、濃度的激素配合使用對銀斑百里香無菌苗生長的影響學(xué)生亞萍所屬學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院專業(yè)園藝年級2008級指導(dǎo)教師春梅所在單位河西學(xué)院職稱副教授開題日期2011年3月選題的根據(jù)：選題的理論、實(shí)際意義并綜述有關(guān)本選題的研究動態(tài)和自己的見解1. 選題的理論、

4、實(shí)際意義百里香( Thymus mongolicus)，俗稱“地椒、地花椒”，是唇形科半灌木。全球百里香屬植物有400多個(gè)種與亞種，100多個(gè)栽培品種。 中國有12種，2變種，主要分布于我國西北高原，包括、東北與、北部、多石山地、黃土丘陵和沙地上(軍 2010)。百里香屬植物為世界名貴香料植物和芳香植物，是國際標(biāo)準(zhǔn)化組織(International Standard Organization，ISO)1970年就公布并被世界許多國家承認(rèn)的香辛料之一（樊明濤等2001）。不但可以鮮食、做調(diào)味保健品（軍勝2002），而且全草入藥，含有黃酮類成分，是一種廣譜性藥物，具有行氣止痛、防暑避暑、補(bǔ)肝明目、

5、滋胃潤肺、利尿排水、抗病毒、殺菌、通經(jīng)、抗痙攣、驅(qū)蠕蟲、升血壓、刺激白血球等功效，是強(qiáng)力的天然“抗生素”(穎等 2009)。由于含有芳香精油，還可用于香水、香皂、化妝品等日用工業(yè)品，在醫(yī)藥、傳統(tǒng)日用化工與精細(xì)化工等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。此外，百里香屬為旱生植物，多生于沙質(zhì)坡地、礫石坡地、沙質(zhì)草地等瘠薄土壤之上，適應(yīng)性強(qiáng)，冬季可抵御-30以下的低溫，夏季能耐受40以上的高溫，具有抗性強(qiáng)、耐旱、耐寒、耐瘠薄、耐風(fēng)蝕、耐鹽堿等優(yōu)良的生態(tài)特性。根系發(fā)達(dá)，細(xì)根如網(wǎng)，繁殖能力強(qiáng)，種群數(shù)量大，單株覆蓋面積可達(dá)0.8-1.2，常形成大面積的百里香草原，是不可多得的優(yōu)良地被植物。百里香花期長，花色艷麗，繁殖力強(qiáng)，可

6、建植花壇性質(zhì)草坪、疏林草坪、游憩草坪，養(yǎng)護(hù)管理粗放，更換周期長，在城市園林綠化中具有廣闊的應(yīng)用前景，是將來城市多樣綠化地被植物的一個(gè)重要發(fā)展方面。所以，加強(qiáng)百里香在城市園林綠化應(yīng)用方面的研究，對于豐富乃至全國城市園林綠化樹種選擇具有重要意義。目前，許多國外的百里香品種已經(jīng)在我國、和等省市廣泛栽培。與國外品種相比，我國本土的野生百里香適應(yīng)性較強(qiáng)，病蟲害較少，栽培成本低，因而是一種開發(fā)潛力較大的可持續(xù)利用的芳香植物。綜上所述，中國野生百里香屬植物資源豐富，分布廣，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，兼有較高的食用、藥用和化工應(yīng)用價(jià)值，同時(shí)還有香化，綠化和環(huán)保等作用。目前對河區(qū)百里香的生境、分布特點(diǎn)、種質(zhì)資源等至今還沒有人

7、進(jìn)行過系統(tǒng)調(diào)查，品種選育更是空白，生產(chǎn)上采用的品種仍為半野生或農(nóng)家品種。百里香的栽培非常粗放，對其栽培技術(shù)方面的研究甚少。因此，研究河區(qū)百里香高產(chǎn)栽培技術(shù)和在沙產(chǎn)業(yè)開發(fā)中的應(yīng)用，可改善生態(tài)環(huán)境，固土護(hù)坡，環(huán)境保護(hù)等意義重大，應(yīng)用前景十分廣闊。2.研究動態(tài)銀斑百里香是河區(qū)普遍生長的一種植物，屬于百里香屬唇形科半灌木。它資源豐富，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高，兼有較高的食用、藥用和化工應(yīng)用價(jià)值，同時(shí)還有香化，綠化和環(huán)保等作用，市場前景廣闊。但是現(xiàn)在對河區(qū)銀斑百里香的研究和應(yīng)用甚少。為了加快開發(fā)利用銀班百里香，本文研究了不同種類、濃度的激素配合使用對銀斑百里香無菌苗生長的影響，篩選出了最適宜無菌苗生長的激素配比，為其

8、今后的大面積利用和組織培養(yǎng)奠定基礎(chǔ)。2.1國的研究動態(tài)莉等(2010)以腋芽誘導(dǎo)的百里香（Thymus vulgaris L）不定芽進(jìn)行增殖培養(yǎng)條件篩選，采用NAA 和6-BA 組合進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明，高濃度的6-BA不適合不定芽的增殖，NAA0.25mg/L6-BA0.25mg/L的組合不僅能使不定芽快速增殖，而且不定芽增殖的綜合質(zhì)量也好，無畸形葉片產(chǎn)生。不定芽增殖最適宜的培養(yǎng)基為MSNAA0.25mg/L6-BA0.25mg/L，增殖系數(shù)高達(dá)5.97。不定芽在不同的培養(yǎng)基上的增殖效果也不一樣，在21d時(shí)液體光照的培養(yǎng)基增殖系數(shù)達(dá)到最大，生物量也達(dá)到最大；而固體培養(yǎng)基雖然在35d時(shí)增殖系數(shù)高

9、達(dá)19.59。從不定芽增殖的過程中可以看出，在液體光照培養(yǎng)基中培養(yǎng)21d的不定芽，用來提取精油是比較合適的。在21d時(shí)，培養(yǎng)基的電導(dǎo)率和pH值已不適應(yīng)不定芽的繼續(xù)增殖，此時(shí)可以通過添加培養(yǎng)基和營養(yǎng)物質(zhì)來改善不定芽的生長條件，讓其繼續(xù)增殖，以利于后續(xù)擴(kuò)大生產(chǎn)。艷等(2007)以百里香頂芽和腋芽為試材，MS為基本培養(yǎng)基；MS+6-BA1.5mg/L+IBA0.1 mg/L +0.6% 瓊脂+3%蔗糖為增殖培養(yǎng)；l/2MS+IBA0.5 mg/L +0.7%瓊脂+2%蔗糖生根培養(yǎng)基，對地區(qū)百里香進(jìn)行了組織培養(yǎng)。穎等(2009)為了得到優(yōu)良水土保持與資源型植物百里香的組織培養(yǎng)快繁技術(shù)，以MS培養(yǎng)基為基

10、礎(chǔ)，加入不同濃度的植物激素對百里香的莖尖和嫩枝進(jìn)行組織培養(yǎng)。結(jié)果表明：不同濃度的6-BA和NAA對百里香芽尖分化與增殖的影響有明顯差異，激素用量低于或高于最適濃度時(shí)分化率下降，百里香組培芽增殖的最適培養(yǎng)基為MS+BA0.6mg/L+NAA0.2mg/L。其最適生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.1mg/L。曉東等(2009)試驗(yàn)建立了一種普通百里香的快速繁殖方法。以帶腋芽的莖段為外植體，比較了不同濃度的IAA和6-BA組合對不定芽的誘導(dǎo)和增殖的效果，以與不同濃度的IBA 和多效唑組合對枝條生根的影響。試驗(yàn)表明：6-BA可以有效促進(jìn)普通百里香腋芽（Tvulgaris）的增殖，但是高濃度的6-BA會

11、使芽畸形，主要表現(xiàn)在葉片畸形和玻璃化現(xiàn)象上。而在培養(yǎng)基中適當(dāng)降低6-BA濃度，可以使芽伸長。如果更換培養(yǎng)基可提高芽增殖效率，不定芽在MSIAA0.25mg/L6-BA0.25mg/L培養(yǎng)基中28d質(zhì)量增加了30倍左右，因而在短時(shí)間就可以獲得大量普通百里香（Tvulgaris）枝條。有關(guān)普通百里香（Tvulgaris）的組織培養(yǎng)，國還鮮有報(bào)道。軍(2010)在亞洲百里香不定芽和愈傷組織的誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)研究中，以百里香的莖段、葉片等外植體進(jìn)行體外培養(yǎng)，利用多種不同培養(yǎng)基成功誘導(dǎo)出亞洲百里香(Thymus serpyllumvar. asiat icus Kitag)的不定芽和愈傷組織。從結(jié)果來看，愈傷組

12、織的誘導(dǎo)較為困難，特別是繼代培養(yǎng)的褐化死亡現(xiàn)象需進(jìn)行研究。在愈傷組織誘導(dǎo)中2,4-D與NAA的濃度比在0.8 1.6之間時(shí)誘導(dǎo)此種百里香的愈傷組織的效果較好；2,4-D與NAA濃度比大于或等于2時(shí)不能誘導(dǎo)出該種百里香的愈傷組織；2,4-D與NAA的濃度比小于0.8時(shí)也不能誘導(dǎo)出該種百里香的愈傷組織。員銘等(2007)在鋪地百里香增殖培養(yǎng)基優(yōu)化研究中，研究了IBA、6-BA、蔗糖與活性炭不同含量配合使用對鋪地百里香增殖快繁培養(yǎng)的影響，篩選出鋪地百里香最佳增殖培養(yǎng)基為MS+IBA1.0mg/L+6-BA0.1mg/L+蔗糖20%。沙紅(2004)在幾種藥用芳香植物組織培養(yǎng)快速繁殖的研究中對百里香(

13、Th. serpyllum)進(jìn)行了組織培養(yǎng)，試驗(yàn)表明：其最佳增殖培養(yǎng)基為MS+BA1.5mg/L+IBA0.08mg/L，平均增殖倍數(shù)4.24；最佳生根培養(yǎng)基以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，附加0.5mg/LIBA，2%蔗糖濃度，生根率可達(dá)100%。慶臻(2002)對五脈百里香進(jìn)行了組培快繁嘗試，采用野生帶腋芽莖段作為組培材料。雖百里香屬植物的組培快繁研究已歷時(shí)多年，但組培技還未得到廣泛應(yīng)用。春雁(1998)對于興安百里香葉和嫩莖進(jìn)行了愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，認(rèn)為MS+2,4-D2.0 mg/L培養(yǎng)基效果最好。1.2國外的研究狀況20世紀(jì)80年代，F(xiàn)urmanowa等（1992）對Th.vulgar

14、is 進(jìn)行了組織培養(yǎng)，并獲得了再生植株。Mendes.M.L.等(1999)以百里香(Th.mastichina L.)莖段為外植體，MS為基本培養(yǎng)基，認(rèn)為0.1mg/LBAP有利于百里香的增殖，1mg/LNAA有利于生根。3.自己對本試驗(yàn)的見解近十多年來，人們開始采用組織培養(yǎng)的方法獲得銀斑百里香的無菌幼苗或者誘導(dǎo)愈傷組織，篩選出不同培養(yǎng)目的下的優(yōu)良激素組合。此方法具有很多的優(yōu)點(diǎn)：1. 采用組織培養(yǎng)可大縮短生產(chǎn)周期；2. 組織培養(yǎng)不受環(huán)境條件的影響，可周年生產(chǎn)，提高了產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)效益；3. 百里香具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值、營養(yǎng)價(jià)值和化工應(yīng)用價(jià)值，同時(shí)還有香化，綠化和環(huán)保等作用；此外， 銀斑百里香可采用枝、莖

15、、葉、根和種子等作為外植體； 國外對不同地區(qū)的百里香都有研究，但河區(qū)的銀斑百里香的資源豐富，但研究尚未展開，其它百里香品種的研究現(xiàn)狀為基礎(chǔ)研究與應(yīng)用研究脫節(jié)（繼等 2010）。鑒于此，對銀斑百里香的資源有待開發(fā)利用，尤其在組織培養(yǎng)方面的研究即培養(yǎng)基的優(yōu)化研究應(yīng)備受重視。論文的主要容、基本要求與其主要的研究方法：1.論文主要容1.1試驗(yàn)材料與方法1.1.1試驗(yàn)材料銀斑百里香(T.vulgarisSilver Posie) 種子（于2011年9月采自市大滿鄉(xiāng)）。1.1.2試驗(yàn)驗(yàn)方法以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，NAA設(shè)0.1mg/L、0.15mg/L、0.2mg/L、0.25mg/L四個(gè)濃度，6-BA

16、設(shè)0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L、1.0mg/L四個(gè)濃度，2,4-D設(shè)0.3mg/L、0.6mg/L、0.9mg/L、1.2mg/L四個(gè)濃度。研究不同種類、濃度的生長激素配合使用對銀斑百里香無菌苗生長的影響。接種7d后檢查，移除被污染培養(yǎng)基，統(tǒng)計(jì)生長情況。1.2結(jié)果與分析1.2.1 不同濃度的NAA與6-BA配合使用對銀斑百里香無菌苗生長的影響1.2.2 不同濃度的2,4-D和6-BA配合使用對銀斑百里香無菌苗生長的影響1.3 結(jié)論與討論2.論文基本要求2.1試驗(yàn)實(shí)施試驗(yàn)設(shè)在河西學(xué)院生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)樓組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，試驗(yàn)于2011年3月下旬- 2011年12月結(jié)束。2.2選題要求（

17、1）選題后，認(rèn)真查閱相關(guān)文獻(xiàn)，閱讀領(lǐng)會畢業(yè)論文的容和要求，制定試驗(yàn)計(jì)劃、工作計(jì)劃和進(jìn)度表，做好各種準(zhǔn)備工作。（2）定期向指導(dǎo)教師匯報(bào)工作進(jìn)展情況，遇到的疑難問題爭取與時(shí)得到教師的指導(dǎo)。（3）畢業(yè)論文打印要字跡清楚，撰寫要符合本專業(yè)畢業(yè)論文撰寫規(guī)。3.論文主要研究方法組織培養(yǎng)的方法；論文進(jìn)度安排和采取的主要措施：1. 2010年5月至2011年2月，查找相關(guān)資料2. 2011年3月至2011年4月，文獻(xiàn)綜述撰寫；3. 2011年4月至2011年6月，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)；4. 2011年9月至2011年11月，實(shí)驗(yàn)實(shí)施；5. 2011年11月至2011年12月，畢業(yè)論文初稿的撰寫；6. 2012年6月，論文

18、答辯。主要參考資料和文獻(xiàn)：軍勝.百里香保健醬油的研制J.中國釀造, 2002 ,29-30.段繼功.紅枸杞百里香保健茶J.中國土特產(chǎn), 1994,(6):32.FURMANOWAM，OLSZOWSKAOMicropropagation of ThymeJIn：BajajYPS（Ed） Bioteclmology in Agriculture and Forestry,1992(2);230-243.黃健,馬莉,雷等,七種百里香精油的主成分分析與其化學(xué)型J. 交通大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)科學(xué)版), 2009,27(3) :207-209.曉東,王永飛,馬三梅等,普通百里香的組織培養(yǎng)與快素繁殖J. 農(nóng)業(yè)科學(xué)

19、, 2009,48(6):1294-1297.軍.亞洲百里香不定芽和愈傷組織的誘導(dǎo)J. 科技與經(jīng)濟(jì), 2010,207(5) :56-57.云斌.百里香天然資源與其園林應(yīng)用J. 林業(yè)實(shí)用技術(shù), 2005,(2):43-44.Mendes.M.L,Invitro cloning of Thymus mastichina L.J.Fieldgrown Plants ActaHorticulture,1999,502:303-306.樊明濤,錦屏.百里香提取物抑菌特性的研究J. 微生物學(xué)報(bào), 2001,41(4):499-504.沙紅.幾種藥用芳香植物組織培養(yǎng)快速繁殖的研究A碩士學(xué)位論文C. :農(nóng)業(yè)

20、大學(xué),2004.春雁.百里香研究M. :科學(xué)技術(shù), 2004:12-89.艷,聶艷霞,惠恩等.百里香的組織培養(yǎng)J. 植物生理學(xué)通訊, 2007,43(3):516.員銘,呂.鋪地百里香增殖培養(yǎng)基優(yōu)化研究J. 北方園藝,2007(9):198-199.繼,田玉汝,忠旺等.百里香屬植物研究進(jìn)展J. 北方園藝, 2010(1):226228.穎,武玲.百里香的組織培養(yǎng)與快速繁殖技術(shù)J. 林業(yè)科技, 2009(5);44-45. 周俊輝,周厚高,花全.植物組織培養(yǎng)中的生細(xì)菌污染問題J. 植物, 2003,23(1):41-47. 慶臻,閻華超,程霜等.地椒的組織培養(yǎng)與植株再生J. 植物生理學(xué)通訊, 2

21、002,38(4):357.指導(dǎo)教師意見：簽 名：年 月 日教研室意見負(fù)責(zé)人簽名：年 月 日學(xué) 院 意 見負(fù)責(zé)人簽名：年 月 日不同種類、濃度的激素配合使用對銀斑百里香無菌苗生長的影響亞萍指導(dǎo)老師 春梅 （河西學(xué)院農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院 734000）摘要：以銀斑百里香種子為試材，研究了不同濃度的NAA（萘乙酸）和2,4-D（2，4二氯苯氧乙酸）與6-BA（6-芐基氨基嘌呤）配合使用對銀斑百里香無菌苗生長的影響。結(jié)果表明，NAA在0.15（mg/L）和2,4-D在0.45(mg/L)是銀斑百里香種子萌發(fā)成無菌苗的適宜濃度；MS+ NAA(0.15mg/L)+6-BA(0.6mg/L)和MS+2,4

22、-D(0.45mg/L) +6-BA(0.6mg/L) 的培養(yǎng)基中銀斑百里香無菌苗生長最佳。關(guān)鍵詞：銀斑百里香；植物生長激素；無菌苗Effects on Different the growing ofAseptic seedlings on theThymus vulgarisSilver PosieZHANG Ya-ping Tutor: ZHANG Chun-mei (College of Agriculture and Biology Technology, HexiUniversity,ZhangYe, Gansu 734000)Abstract:The paper was to s

23、tudy the effects of various concentration of plant growth hormones such as NAA, 2,4-D and 6-BA on seeds of Thymus vulgarisSilver Posie. The results showed that the medium of MSNAA(0.15mg/L)6-BA(0.6mg/L) and MS2,4-D(0.45mg/L)6-BA(0.6mg/L) were suitable for inducingseedings. In addition, NAA(0.15mg/L)

24、 and 2,4-D(0.45 mg/L) were optimum concentration for inducing the seedings of Thymus vulgarisSilver Posie.Key words: Thymus vulgarisSilver Posie; plant growth hormones; seedlings引言百里香( Thymus mongolicus)，俗稱“地椒、地、地花椒、麝香草”，是唇形科半灌木芳香植物。原產(chǎn)于地中岸，全球約300-400個(gè)種，我國有11個(gè)種，2個(gè)變種，主要分布于西北高原，包括、東北與、北部、多石山地、黃土丘陵和沙地上(

25、云斌 2005)。 是世界許多國家承認(rèn)的香辛料之一(樊明濤等 2001)，不但可以鮮食、做調(diào)味保健品（軍勝2002;軍2010)，而且，因含有黃酮類成分而全草入藥，是一種廣譜性藥物，具有行氣止痛、防暑避暑、補(bǔ)肝明目、滋胃潤肺、利尿排水、抗病毒、殺菌、通經(jīng)、抗痙攣、驅(qū)蠕蟲、升血壓、刺激白血球等功效，是強(qiáng)力的天然“抗生素”(穎等 2009)，在醫(yī)藥、傳統(tǒng)日用化工與精細(xì)化工等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，具有極好的開發(fā)利用價(jià)值。通過植物組織培養(yǎng)方法快速繁殖百里香，不但加速品種繁殖速度，還可擴(kuò)大種質(zhì)資源，保持優(yōu)良品種的種性。種子是建立植物無菌體系的良好外植體(春雁 2004)，但百里香結(jié)實(shí)量低，種子敗育多(周俊輝

26、等 2003)。本試驗(yàn)以銀斑百里香種子為試材，探討了不同種類、濃度的激素配合使用，對銀斑百里香種子萌發(fā)的影響和無菌苗生長的影響，為銀斑百里香獲得無菌苗、誘導(dǎo)愈傷組織和資源的奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。1. 試驗(yàn)材料與方法1.1 供試材料銀斑百里香(T.vulgarisSilver Posie)( 黃健等 2009 )種子，于2011年9月采自市大滿鄉(xiāng)。1.2 培養(yǎng)基配制供試藥品有NAA、6- BA、2, 4-D，各設(shè)四個(gè)濃度梯度為：A為NAA設(shè)0.1、0.15、0.2、0.25mg/L四個(gè)濃度，B為6- BA設(shè)0.4、0.6、0.8、1.0mg/L四個(gè)濃度，C為2, 4-D設(shè)0.15、0.3、0.45、0

27、.6mg/L四個(gè)濃度?；九囵B(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，瓊脂含量0.6%，培養(yǎng)基滅菌前pH調(diào)至5.8。根據(jù)配比將激素NAA、2,4-D和6-BA配合使用。1.3 培養(yǎng)條件培養(yǎng)溫度（25±2），光照時(shí)間為12h/d，光照強(qiáng)度為2000Lx，培養(yǎng)30 d后調(diào)查其生長狀況。1.4 接種條件與培養(yǎng)方法將采集的銀斑百里香種子用紗布包好，在自來水上沖洗10min，瀝干水分后置于超凈工作臺上。將沖洗干凈的種子用75酒精浸泡消毒處理45s，取出后用無菌水沖洗3次，移入活性氯含量為8%9%的NaClO振蕩消毒4min，將種子再次取出置于無菌水中振蕩重復(fù)沖洗5次，而后瀝干置于接種盤上備用。在無菌操作室中，將滅菌后

28、的銀斑百里香種子，接種于含有不同濃度NAA、2,4-D與6-BA配比的MS培養(yǎng)基中，每處理重復(fù)3次，每重復(fù)接種10瓶，隨機(jī)抽取10株進(jìn)行數(shù)據(jù)的采集。隨時(shí)移除被污染培養(yǎng)基。2.結(jié)果與分析2.1 不同濃度的NAA與6-BA配合使用對銀斑百里香的影響2.1.1NAA與6-BA配合使用對銀斑百里香種子發(fā)芽率的影響以MS為基本培養(yǎng)基，使用不同濃度的NAA和6-BA配合使用，15-20d后統(tǒng)計(jì)銀斑百里香種子的發(fā)芽情況(見表1)。表1 NAA、6-BA對銀斑百里香種子發(fā)芽率(%)的影響Table 2 The effects of NAA and 6-BA on the germination rate of

29、 Thymus vulgarisSilver Posie seed處理發(fā)芽時(shí)間(月-日)重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3平均發(fā)芽率%0.05顯著水平0.01顯著水平A1B110-51816120.5111aABA1B210-62012230.6111abABA1B310-61816170.5667abABCA1B410-52017150.5778abABCA2B110-51824160.6444aAA2B210-52020180.6444aAA2B310-51819180.6111abABA2B410-52118190.6444aAA3B110-51816160.5556abABCA3B210-612212

30、00.5889abABA3B310-51616170.5444abABCA3B410-61614180.5333abcABCA4B110-61416170.5222abcABCA4B210-61214160.4667bcBCA4B310-61615150.5111abcABCA4B410-8912140.3889cCCk10-84100.0556dD注：表中所列數(shù)字為對應(yīng)培養(yǎng)基中種子的發(fā)芽個(gè)數(shù)。由表1可知，在NAA與6-BA各濃度配合使用下，對發(fā)芽率的影響A4B4和對照外其它各組合均無顯著差異性。結(jié)果表明，當(dāng)NAA在（0.10.25mg/L）和6- BA在（0.41.0mg/L）時(shí)，各處理組合

31、之間的發(fā)芽率無顯著差異性，對銀斑百里香種子萌芽的影響較小，但與對照相比，激素的使用提前了種子的發(fā)芽時(shí)間和提高了種子的發(fā)芽率。2.1.2NAA與6-BA配合使用對銀斑百里香無菌苗生長的影響表2 NAA和6-BA交互作用效果方差分析結(jié)果Table 2 The results of variance analysis of theInteraction of NAA and 6-BA變異來源DFSSMSFF0.01處理組合間150.432980.028864.9940*2.706-BA30.171560.0583910.1014*4.46NAA30.008660.002890.49934.46NAA

32、6-BA90.249000.027684.7889*3.02實(shí)驗(yàn)誤差320.184870.00578見表2可知，在NAA和6-BA的處理組合之間、6-BA與NAA和6-BA互作，均達(dá)到了極顯著水平，NAA作用無差異顯著性。表3 NAA和6-BA配合使用對銀斑百里香無菌苗的影響Table 3 The effects ofNAA and 6-BA on theseedlings ofThymus vulgarisSilver Posie序號6-BAmg/LNAA/mg/LA1(0.10)A2(0.15)A3(0.20)A4(0.25)1B1(0.4)1.15cC1.37cBC1.28cBC1.46

33、bcBC2B2(0.6)1.49cBC2.24aA1.85bAB1.26cBC3B3(0.8)1.34cBC1.21cBC1.05cC1.55bcBC4B4(1.0)1.30cBC0.89cC1.40cBC1.20cBC注：表中所列數(shù)字為對應(yīng)培養(yǎng)基中無菌苗的平均高度（cm）。由表3可知，A2 B2 和A2 B3處理與其他濃度組合間均達(dá)到極顯著水平，無菌苗生長狀況較好；A3B4、 A1B4和A2B1之間無差異顯著性；A4濃度下的各個(gè)濃度組合使下的幼苗生長狀況較差。因此，不同濃度的NAA對銀斑百里香無菌苗的影響都較小，6-BA 、NAA和6-BA處理組合之間、NAA對銀斑百里香無菌苗的影響都較大，

34、且培養(yǎng)基為MS+NAA(0.15mg/L)+6-BA(0.6mg/L時(shí)銀斑百里香無菌苗生長的較好。2.2不同濃度的2,4-D和6-BA配合使用對銀斑百里香的影響2.2.1 2,4-D和6-BA配合使用對銀斑百里香種子的影響以MS為基本培養(yǎng)基，使用不同濃度的NAA和6-BA配合使用，15-20d后統(tǒng)計(jì)銀斑百里香種子的發(fā)芽情況(見表4)。表4 2,4-D、6-BA對銀斑百里香種子發(fā)芽率(%)的影響Table 4 The effects of 2,4-D and6-BA on thegermination rate of Thymus vulgarisSilver Posieseed處理發(fā)芽時(shí)間（月

35、-日）重復(fù)1重復(fù)2重復(fù)3平均數(shù)發(fā)芽率0.05顯著水平0.01顯著水平C1B110-91614180.5333abcdABC1B210-91913140.5111abcdABC1B310-81818150.5667abcdABC1B410-71716210.6000abcdABC2B110-82019180.6333abABC2B210-81820170.6111abcABC2B310-81114150.4444cdBC2B410-81516190.5556abcdABC3B110-81921200.6667aAC3B210-81915200.6000abcdABC3B310-81620180.

36、6000abcdABC3B410-81315170.5000abcdABC4B110-81714130.4889abcdABC4B210-71514130.4667bcdABC4B310-71114130.4222dBC4B410-91413110.4222dBCk10-91120.0444eC由表4可知，2,4-D與6-BA各濃度配合使用下，各處理組合之間對銀斑百里香種子的發(fā)芽率影響差異不顯著，即2,4-D（0.150.60mg/L）和6- BA（0.41.0mg/L）配合使用對銀斑百里香種子發(fā)芽的無明顯影響。與對照相比，與其它各處理組合均達(dá)到極顯著水平。2.2.2不同濃度的2,4-D和6-

37、BA配合使用對百里香無菌苗的影響表5 2, 4-D和6-BA作用效果方差分析結(jié)果顯示Table 5 The results of variance analysis of Interaction effect of NAA and 6-BA變異來源DFSSMSFF0.01處理組合間150.52610.035078.7675*2.72, 4-D30.33320.11127.75*4.466-BA30.00410.001370.3004.462,4-D6-BA90.18890.020995.247*3.02實(shí)驗(yàn)誤差320.13010.004由表5可知，不同濃度的2,4-D和6-BA處理組合之間、2

38、,4-D與2,4-D和6-BA互作配合對于銀斑百里香無菌苗的影響，均達(dá)到了極顯著水平，6-BA作用差異不顯著。表6 不同濃度的2,4-D和6-BA配合使用對銀斑百里香無菌苗的影響Table 6 The effects of different concentrations of2,4-D and 6-BA on theseedlings ofThymus vulgarisSilver Posie序號2, 4-Dmg/L6-BA/mg/LB1(0.4)B2(0.6) B3(0.8) B4(1.0)1C1(0.15)1.37bcdB1.26cdBC0.73eD0.87feCD2C2(0.30)1.

39、64bB1.41bcdB1.29bcdBC1.23cdfBC3C3(0.45)2.18aA 1.59bcB1.2dfBC1.16dfBCD4C4(0.60)1.24cdBC1.31bcdBC1.2dfBC1.14dfBCD注：表中所列數(shù)字為對應(yīng)培養(yǎng)基中無菌苗的平均高度（cm）。由表6可知，C3 B3處理的顯著性高于與其他濃度組合間，達(dá)到極顯著水平，無菌苗生長狀況為最好；C3B1差異顯著性次之；C2、C3和C4濃度下的個(gè)濃度組合使用下的無菌苗生長都無顯著差異性，且幼苗生長不與C3 B3。結(jié)果表明，不同濃度的6-BA對銀斑百里香無菌苗的影響較小，2,4-D和6-BA的各處理組合間、2,4-D與2,

40、4-D和6-BA的互作都對銀斑百里香無菌苗生長的影響較大。當(dāng)MS+2, 4-D（0.45mg/L）+6-BA(0.4mg/L) 時(shí)銀斑百里香無菌苗生長的最好。3.討論與結(jié)論百里香的應(yīng)用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值等引起了人們的注意，關(guān)于河區(qū)銀斑百里香的應(yīng)用鮮有報(bào)道，關(guān)于銀斑百里香組織培養(yǎng)的研究資料甚少。Furmanowa(1992)等人對百里香進(jìn)行了組織培養(yǎng)，獲得了再生植株，穆丹等(2007)獲得了一樣結(jié)果。Mendes.M.L.等(1999)研究了百里香的生根。我國的學(xué)者在百里香屬植物的組織培養(yǎng)方面也取得了一定的進(jìn)展(沙紅. 2004; 慶臻等. 2002; 曉東等.2009)。曉東等(2009)分別以普

41、通百里香的帶腋芽的莖段和種子為外植體，比較了不同濃度的IAA和6-BA組合對不定芽的誘導(dǎo)和增殖的效果；2010年又設(shè)計(jì)了不定芽增殖培養(yǎng)基MS+NAA（00.15mg/L）+6-BA(02mg/L)，發(fā)現(xiàn)不定芽的增殖受6-BA的影響，當(dāng)NAA濃度為0.25mg/L時(shí)，隨6-BA濃度的增加，不定芽的增殖系數(shù)降低。當(dāng)MS+NAA（0.25mg/L）+6-BA(0.25mg/L)時(shí)最有利于不定芽增殖。在本實(shí)驗(yàn)的激素組合下，6-BA也對無菌苗的生長有影響，在所設(shè)濃度圍，當(dāng)6-BA和NAA組合時(shí)，6-BA的影響不明顯；當(dāng)6-BA和2,4-D組合時(shí)，6-BA的影響較大。軍(2010)采集了亞洲百里香的帶腋芽

42、莖段為試材，MS+NAA(0.10.8mg/L)+6-BA(1.0mg/L)誘導(dǎo)不定芽的增殖。試驗(yàn)表明：在百里香芽和根的誘導(dǎo)過程中對植物生長調(diào)節(jié)劑的要求不嚴(yán)格，大部分的培養(yǎng)基都能誘導(dǎo)出芽，且出芽率高。但培養(yǎng)10d后MS+NAA (0.1mg/L)+6-BA(1.0mg/L)的培養(yǎng)基長出新芽，其他均褐化。穎（2009）等采集百里香帶腋芽的莖段作試材，不定芽的增殖培養(yǎng)基為MS+NAA(0.2mg/L)+6-BA (0.5mg/L)和MS+NAA(0.2mg/L) +6-BA(0.6mg/L)，培養(yǎng)45-45d，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基都形成不定芽，但繁殖系數(shù)不高。低濃度的細(xì)胞分裂素有利于不定芽的生成。其與本實(shí)驗(yàn)有相似之處，所用的激素種類一樣，均表現(xiàn)出高濃度的6-BA不利于無菌苗的生長；不同的是激素的配比和試材不同，在不同的濃度組合下，6-BA的影響效果不同。銀斑百里香種子均發(fā)芽長成幼苗，雖然幼苗生長有一定的變化，但變化幅度并不大；不同種類激素的配合，影響效果不同。這與朱至清(2003)無菌苗生長的培養(yǎng)基中生長調(diào)節(jié)劑的種類、濃度與組合對無菌苗形成起著至關(guān)重要的作用不謀而合。綜上所述，試驗(yàn)在NAA為(0.1-