THP-單核細胞培養(yǎng)

1、這個是急性單核白血病細胞，懸浮的(如果養(yǎng)的時間很長了有的會貼壁)，培養(yǎng)基用普通的1640就可以了，這里是這個細胞株的詳細資料供參考。THP-1:humanacutemonocyticleukemiaOrigin:establishedfromtheperipheralbloodofa1-year-oldboywithacutemonocyticleukemia(AML)atrelapsein1978;thecellscanbeusedforinductionofdifferentiationstudies;thecellsweredescribedtoproducelysozymeandtob

2、ephagocytic;carriest(9;11)(p21;q23)leadingtoMLL-AF9fusiongeneMorphology:round,singlecellsinsuspension,partlyinclustersMedium:90%RPMI1640+10%FBSSubculture:maintainat0.1-1.0x106cells/ml;split1:2to1:3every3-4days;seedoutatca.0.5x106cells/mlIncubation:at37Cwith5%CO2Doublingtime:ca.35-50hoursHarvest:satu

3、rationdensityatabout1.0x106cells/mlStorage:frozenwith70%medium,20%FBS,10%DMSOatabout5x106cells/mlMycoplasma:contaminationwaseliminatedwithCiprobay(ciprofloxacin),thennegativeinDAPI,microbiologicalculture,PCRassaysImmunology:CD3-,CD4+,CD13+,CD14(+),CD15+,CD19-,CD33(+),CD34-,CD68+,HLA-DR+Fingerprint:m

4、ultiplexPCRofminisatellitemarkersrevealedauniqueDNAprofileSpecies:confirmedashumanwithIEFofAST,MDH,NPCytogenetics:humannear-tetraploidkaryotype-94(88-96)<4n>XY/XXY,-Y,+1,+3,+6,+6,-8,-13,-19,-22,-22,+2mar,add(1)(p11),del(1)(q42.2),i(2q),del(p21)x2-4,i(7p),der(9)t(9;11)(p22;q23)i(9)(p10)x2,der(1

5、1)t(9;11)(p22;q23)x2,add(12)(q24)x1-2,der(13)t(8;13)(p11;p12),add(?18)(q21)-carriest(9;11)associatedwithAMLM5Viruses:ELISA:reversetranscriptasenegative;PCR:EBV-,HBV-,HCV-,HHV-8-,HIV-,HTLV-I/II-THP-1單核細胞是懸浮生長的細胞，用1640+10%FBS是很容易養(yǎng)的，但復蘇的細胞可適當加量至20%FBS。國產(chǎn)與進口的血清都行。培養(yǎng)用的血清必須用胎牛血清，小牛血清中含有微量的膽紅素對THP-1單核細胞影響較

6、大。培養(yǎng)基中最好能夠加入足夠的L-GLn和丙酮酸，以與非必需氨基酸，特別是前兩者對于細胞的狀態(tài)至關重要。盡量使用一次性培養(yǎng)瓶，如果沒有條件，重復使用的培養(yǎng)瓶一定要洗干凈，切記，切記，否則THP-1單核細胞吞噬雜質后很容易活化死亡。THP-1單核細胞喜歡酸性環(huán)境，記住這一點寧酸勿堿。倍增時間小于24小時。THP-1細胞可以傳很多代，因此不要擔心細胞活性問題，只要耐心與細心。我正在培養(yǎng)兩種人B淋巴細胞，L721.221,Raji。對細胞狀態(tài)好壞的鑒別有一點心得，希望和大家討論。我們的配方是：（2x1000ml）RPMIMedium1640,10.4g,2x1袋L-Glutamine,2mmol/L

7、,2x300mg2-Mercapto-ethanol,50umol/L,2x3.9ulPyruvicacid,sodiumsalt,1mmol/L,2x110mgHepesFreeacid,-2x1.5gSodiumbicarbonate,-2x1.5gGentamyoinsulfateinjection,50U/ml,2x50000UDDW=>2x1000mlpH=>7.2立即，0.22um濾菌=>4度密封保存用前加10%NBS。一到兩個月，需要往保存的1640中加原量的L-Glutamine（分解了）。長的好的細胞有下面幾點特征：1.培養(yǎng)液：澄清，能很快變黃（5%CO2培

8、養(yǎng)箱，12h之內(nèi)），說明增殖快2.低倍鏡（10X10）:細胞透亮，晶晶亮”，大小均一，其中還有個別超級大個子”,是處于分裂前期的細胞，胞膜完整，不是細胞腫脹。3.低倍鏡（10X10）:聚集懸浮生長的細胞，通常能看到一簇一簇的細胞群，應該就是一個個克隆”吧。4.低倍鏡（10X10）:細胞容易懸浮，容易隨培養(yǎng)液四處飄蕩”，即使形成較大的細胞簇，也是飄飄蕩蕩”的。5.高倍鏡（10X40）:大小鈞一，形態(tài)規(guī)則，胞膜完整。長得不好的細胞正好與前面相反：1.培養(yǎng)液：有渾濁感，不變黃（幾天甚至幾星期都是紅的），細胞根本不在呼吸代謝。2.低倍鏡（10X10）:細胞黯淡無光，幾乎看不到大個頭”的細胞。3.低倍鏡（10X10）:很少有小簇細胞群，（若是細胞密度過大造成細胞狀態(tài)不好，只有很大的細胞群，