生化檢驗基礎培訓-V1.0-CN

1、 2010 Mindray Confidential生化產(chǎn)品生化產(chǎn)品全球全球技術支持部技術支持部 2011 Mindray Confidentialn 1n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞目錄目錄一、一、生化檢驗分析對象生化檢驗分析對象二、生化項目分類二、生化項目分類三、生化檢測原理三、生化檢測原理四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算五、幾個臨床生化測試概念五、幾個臨床生化測試概念 2011 Mindray Confidentialn 2n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞一、生化檢驗的對象一、生化檢驗的對象血清是指血液凝固析出的淡黃色透明液體

2、。血清是指血液凝固析出的淡黃色透明液體。在凝血過程中，纖維蛋白原轉變成纖維蛋在凝血過程中，纖維蛋白原轉變成纖維蛋白塊，所以血清中無纖維蛋白原，白塊，所以血清中無纖維蛋白原，這一點這一點是與血漿最大的區(qū)別是與血漿最大的區(qū)別。其他樣本：血漿、。其他樣本：血漿、尿液、腦脊液等。尿液、腦脊液等。 1.1.生化檢驗的對象生化檢驗的對象血清血清 2011 Mindray Confidentialn 3n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞一、生化檢驗的對象一、生化檢驗的對象靜脈采血方式靜脈采血方式離心血樣離心血樣 2011 Mindray Confidentialn 4n 2022-4-7全球信

3、賴的邁瑞全球信賴的邁瑞二、生化項目分類二、生化項目分類肝功能肝功能 腎功能腎功能心肌酶譜心肌酶譜 血糖血糖胰腺炎胰腺炎 血脂血脂痛風痛風 免疫性疾病免疫性疾病按臨床分類按臨床分類 2011 Mindray Confidentialn 5n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞二、生化項目分類二、生化項目分類酶類酶類 底物代謝類底物代謝類無機離子類無機離子類特種蛋白類特種蛋白類按化學性質(zhì)分類按化學性質(zhì)分類 2011 Mindray Confidentialn 6n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞三、生化檢測原理三、生化檢測原理1.1.光譜常識光譜常識 2011 Mindra

4、y Confidentialn 7n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞三、生化檢測原理三、生化檢測原理如把兩種光以適當比例混合而產(chǎn)如把兩種光以適當比例混合而產(chǎn)生白光感覺時，則這兩種光的顏生白光感覺時，則這兩種光的顏色互為補色。下圖中處于同一直色互為補色。下圖中處于同一直線關系的兩種色光（如綠與紫、線關系的兩種色光（如綠與紫、黃與藍）互為補色。黃與藍）互為補色。例如，例如，CuSO4CuSO4、K2MnO4K2MnO42.2.互為補色光的概念互為補色光的概念 /nm/nm顏色顏色互補光互補光400-450400-450紫黃綠450-480450-480藍藍黃黃480-490480-4

5、90綠藍綠藍橙橙490-500490-500藍綠藍綠紅紅500-560500-560綠綠紅紫紅紫560-580560-580黃綠黃綠紫紫580-610580-610黃黃藍藍610-650610-650橙橙綠藍綠藍650-760650-760紅紅藍綠藍綠 2011 Mindray Confidentialn 8n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞三、生化檢測原理三、生化檢測原理為透光率，一般用為透光率，一般用T T表示表示3.3.吸光度的定義吸光度的定義otIILgAotII 2011 Mindray Confidentialn 9n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞三、

6、生化檢測原理三、生化檢測原理當入射光的波長、溶液的濃度、溫度一定時，溶液的吸光度與液體當入射光的波長、溶液的濃度、溫度一定時，溶液的吸光度與液體的厚度成正比。的厚度成正比。4 4、朗伯定律、朗伯定律 2011 Mindray Confidentialn 10n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞三、生化檢測原理三、生化檢測原理當入射光的波長、液層厚度和溶液的溫度固定時當入射光的波長、液層厚度和溶液的溫度固定時, ,溶液的吸光度與溶溶液的吸光度與溶液的濃度成正比。液的濃度成正比。5.5.比爾定律比爾定律 2011 Mindray Confidentialn 11n 2022-4-7全球

7、信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞三、生化檢測原理三、生化檢測原理描述為被測物質(zhì)溶液描述為被測物質(zhì)溶液( (均勻非散射均勻非散射) )在一定濃度范圍內(nèi)對一定波長單在一定濃度范圍內(nèi)對一定波長單色平行的吸光度與被測物質(zhì)濃度和溶液厚度的乘積成比。數(shù)學式為：色平行的吸光度與被測物質(zhì)濃度和溶液厚度的乘積成比。數(shù)學式為：其中其中A A為溶液的吸光度，為溶液的吸光度，C C被測物濃度，被測物濃度，L L為光徑，為光徑， 為摩爾吸光為摩爾吸光系數(shù)，單位是系數(shù)，單位是L/molL/molcmcm，指當吸光物質(zhì)的濃度為，指當吸光物質(zhì)的濃度為1 mol/L1 mol/L，吸收池，吸收池厚為厚為1cm1cm，以一定波長的光通過

8、時，所引起的吸光度值，以一定波長的光通過時，所引起的吸光度值A A。值取值取決于入射光的波長和吸光物質(zhì)的吸光特性，亦受溶劑和溫度的影決于入射光的波長和吸光物質(zhì)的吸光特性，亦受溶劑和溫度的影響。顯然，顯色反應產(chǎn)物的響。顯然，顯色反應產(chǎn)物的值愈大，基于該顯色反應的光度測值愈大，基于該顯色反應的光度測定法的靈敏度就愈高。定法的靈敏度就愈高。 6.6.朗伯朗伯比爾定律（比爾定律（ Lambert-Beers Law Lambert-Beers Law ）CLA 2011 Mindray Confidentialn 12n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞三、生化檢測原理三、生化檢測原理7.

9、7.吸收曲線吸收曲線 2011 Mindray Confidentialn 13n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞三、生化檢測原理三、生化檢測原理右圖為不同濃度的右圖為不同濃度的KMnO4KMnO4的吸收曲線，可見，不同的吸收曲線，可見，不同濃度的濃度的KMnO4KMnO4的吸光度不的吸光度不同，但是吸收峰的波長相同，但是吸收峰的波長相同。同。7.7.吸收曲線吸收曲線 2011 Mindray Confidentialn 14n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞三、生化檢測原理三、生化檢測原理8.8.透射比濁法透射比濁法IoIL顆粒大小與光源波長接近LoeIIKCLI

10、ILgo 2011 Mindray Confidentialn 15n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞吸光度的定義吸光度的定義朗伯比爾定理的必須條件朗伯比爾定理的必須條件小結小結 2011 Mindray Confidentialn 16n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算n 1、生化試劑n與樣品中的有效成分發(fā)生化學反應，反應后生成一種對光敏感的物質(zhì)，再通過用特定的光去照射最終化學反應的反應液，接收并檢測光線照射前后發(fā)光強度變化，從而計算出被測物的濃度信息。n 比如：比如：ALBALB（白蛋白）測試，通常情況

11、下（白蛋白）測試，通常情況下n 我們使用溴甲酚綠這種物質(zhì)和我們使用溴甲酚綠這種物質(zhì)和ALBALB混合在混合在n 一起，在酸性條件下，兩者就發(fā)生化學一起，在酸性條件下，兩者就發(fā)生化學n 反應：反應：n 2011 Mindray Confidentialn 17n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞 NAD+-NADHNAD+-NADH系統(tǒng)系統(tǒng)p-NPp-NP（p-NAp-NA）系統(tǒng)）系統(tǒng)H2O2H2O2偶聯(lián)的指示系統(tǒng)偶聯(lián)的指示系統(tǒng)抗原抗體反應指示系統(tǒng)抗原抗體反應指示系統(tǒng)其它顯色反應其它顯色反應2.2. 試劑顯色指示系統(tǒng)試劑顯色指示系統(tǒng)四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和

12、濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 18n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞終點法終點法動力學法動力學法 （零級動力學法、連續(xù)檢測法）（零級動力學法、連續(xù)檢測法）固定動力學法固定動力學法 （兩點法、一級動力學法、初速率法）（兩點法、一級動力學法、初速率法）3.3.生化測定方法生化測定方法四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 19n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞終點法的定義終點法的定義指經(jīng)過一段時間指經(jīng)過一段時間( (一般為幾分鐘一般為幾分鐘) )的反應，反應進行

13、到完全，的反應，反應進行到完全，使全部底物使全部底物( (被測物被測物) )轉變成產(chǎn)物，稱終點法，更確切地說應稱平衡轉變成產(chǎn)物，稱終點法，更確切地說應稱平衡法，這是最理想的分析類型。整個反應達到平衡，由于正向反應的法，這是最理想的分析類型。整個反應達到平衡，由于正向反應的平衡常數(shù)很大，可認為所有的被測定物已轉變?yōu)楫a(chǎn)物，反應液的吸平衡常數(shù)很大，可認為所有的被測定物已轉變?yōu)楫a(chǎn)物，反應液的吸光度不再增加光度不再增加( (或降低或降低) )，吸光度的增加，吸光度的增加( (或降低或降低) )程度與被測定物的程度與被測定物的濃度成正比。濃度成正比。終點法對反應條件終點法對反應條件( (如酶量、如酶量、p

14、HpH、溫度、溫度) )小的改變不敏感，只小的改變不敏感，只要這種改變不影響在一定時間內(nèi)反應達到平衡即可。要這種改變不影響在一定時間內(nèi)反應達到平衡即可。 3.3.生化測定方法生化測定方法終點法終點法四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 20n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞終點法3.3.生化測定方法生化測定方法終點法終點法四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 21n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞零級動力學法定義

15、零級動力學法定義動力學法即通常所說的零級動力學法，也被稱為連續(xù)監(jiān)測法。指反動力學法即通常所說的零級動力學法，也被稱為連續(xù)監(jiān)測法。指反應過程中反應速度維持不變，與底物濃度無關，因此，在整個反應應過程中反應速度維持不變，與底物濃度無關，因此，在整個反應過程中，反應物可以勻速地生成某個產(chǎn)物，導致被測定溶液在某一過程中，反應物可以勻速地生成某個產(chǎn)物，導致被測定溶液在某一波長下吸光度均勻地減小或增加，減小或增加的速度波長下吸光度均勻地減小或增加，減小或增加的速度( (A/min)A/min)與被與被測物的活性或濃度成正比，主要用于酶活性的測定。測物的活性或濃度成正比，主要用于酶活性的測定。 實際上，由于

16、底物濃度不可能足夠大，隨著反應的進行，底實際上，由于底物濃度不可能足夠大，隨著反應的進行，底物消耗到一定程度后，反應速度不再維持不變，同樣，由于血清成物消耗到一定程度后，反應速度不再維持不變，同樣，由于血清成份復雜，反應剛啟動時反應較復雜，雜反應較多，因此，零級動力份復雜，反應剛啟動時反應較復雜，雜反應較多，因此，零級動力學法是針對于特定時間段而言的，各試劑商對這段時間有嚴格規(guī)定。學法是針對于特定時間段而言的，各試劑商對這段時間有嚴格規(guī)定。 4.4.生化測定方法生化測定方法動力學法動力學法四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confident

17、ialn 22n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞動力學法（零級動力學法、連續(xù)檢測法）動力學法（零級動力學法、連續(xù)檢測法）4.4.生化測定方法生化測定方法動力學法動力學法四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 23n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞固定時間法定義固定時間法定義固定時間法又被稱為一級動力學法固定時間法又被稱為一級動力學法(first order kinetic)(first order kinetic)、初速率法初速率法(initial rate)(initial rate)、二

18、點法、二點法(two point rate)(two point rate)等。等。在一定的反應時間內(nèi)，反應速度與底物在一定的反應時間內(nèi)，反應速度與底物( (被測物被測物) )濃度的一次濃度的一次方成正比方成正比, ,由于底物由于底物( (被測物被測物) )在不斷的消耗，因此整個反應速度在不在不斷的消耗，因此整個反應速度在不斷的減小，表現(xiàn)為吸光度的增加斷的減小，表現(xiàn)為吸光度的增加( (或降低或降低) )速度越來越小，這類反應速度越來越小，這類反應達到平衡的時間很長，理論上可以在任意時間段進行監(jiān)測，但由于達到平衡的時間很長，理論上可以在任意時間段進行監(jiān)測，但由于血清成份復雜，反應剛啟動時反應較復

19、雜，雜反應較多，經(jīng)過一段血清成份復雜，反應剛啟動時反應較復雜，雜反應較多，經(jīng)過一段延遲時間才能進入穩(wěn)定反應期，必需在特定時間段內(nèi)進行監(jiān)測。延遲時間才能進入穩(wěn)定反應期，必需在特定時間段內(nèi)進行監(jiān)測。5.5.生化測定方法生化測定方法固定時間法固定時間法四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 24n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞固定時間法（兩點法、固定時間法、初速率法）固定時間法（兩點法、固定時間法、初速率法）5.5.生化測定方法生化測定方法固定時間法固定時間法四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法

20、和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 25n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞單試劑終點法生化儀是如何得到結果濃度的？生化儀是如何得到結果濃度的？6 6、反應度的計算、反應度的計算23AAR四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 26n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞生化儀是如何得到結果濃度的？生化儀是如何得到結果濃度的？6 6、反應度的計算、反應度的計算RBKAARBRSR34其中其中RBRB為混合試劑吸光度，為混合試劑吸光度，K K為體積校正因數(shù)為體積校正因數(shù)雙

21、試劑終點法雙試劑終點法四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 27n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞動力學法動力學法生化儀是如何得到結果濃度的？生化儀是如何得到結果濃度的？6 6、反應度的計算、反應度的計算 22)(iiiiiiTTnTATAnR四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 28n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞生化儀是如何得到結果濃度的？生化儀是如何得到結果濃度的？6 6、反應度的計算、反應度的計算454

22、5ttAAR固定時間法固定時間法四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 29n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞定標的意義：定標的意義：濃度濃度C C 反應度反應度R R 吸光度吸光度A A 線性定標：比色法線性定標：比色法定標的分類：定標的分類： 非線性定標：比濁法非線性定標：比濁法7.7.定標定標四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 30n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞線性定標線性定標7.7.定標定標四、臨床生

23、化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 31n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞非線性定標非線性定標Logistic-Log 4PLogistic-Log 4P7.7.定標定標RCC1C2C3C4四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 32n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞非線性定標非線性定標 Exponential5P Exponential5P7.7.定標定標RCC1C2C3C4C5四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化

24、測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 33n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞Polynomial 5P Polynomial 5P Parabola Parabola SplineSpline 7.7.定標定標即描點法，由于是分段擬合，其擬和程度在所有定標類型中最高。即描點法，由于是分段擬合，其擬和程度在所有定標類型中最高。四、臨床生化測定方法和濃度換算四、臨床生化測定方法和濃度換算 2011 Mindray Confidentialn 34n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞五、幾個臨床生化測試概念五、幾個臨床生化測試概念酶類簡介

25、酶類簡介1.1.酶類項目酶類項目 2011 Mindray Confidentialn 35n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞酶的活性酶的活性酶的單位：酶的單位： 1 1分鐘能轉化分鐘能轉化1 1微摩爾底物（微摩爾底物（ ）的酶量為）的酶量為一個國際單位，以一個國際單位，以IUIU表示。表示。活性的計算：活性的計算：K K為計算因數(shù)，與光徑、稀釋比、毫摩爾吸光系數(shù)有關為計算因數(shù)，與光徑、稀釋比、毫摩爾吸光系數(shù)有關1.1.酶類項目酶類項目KAVLVALUCstmin/1000min/)/(1minmol五、幾個臨床生化測試概念五、幾個臨床生化測試概念 2011 Mindray Co

26、nfidentialn 36n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞酶促反應動力學酶促反應動力學影響因素：影響因素：1 1、底物濃度、底物濃度2 2、溫度、溫度3 3、 pHpH值值4 4、酶濃度、酶濃度1.1.酶類項目酶類項目五、幾個臨床生化測試概念五、幾個臨床生化測試概念 2011 Mindray Confidentialn 37n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞酶促反應動力學酶促反應動力學影響因素：溫度的影響影響因素：溫度的影響1.1.酶類項目酶類項目五、幾個臨床生化測試概念五、幾個臨床生化測試概念 2011 Mindray Confidentialn 38n 20

27、22-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞酶促反應動力學酶促反應動力學影響因素：影響因素：pHpH值的影響值的影響1.1.酶類項目酶類項目五、幾個臨床生化測試概念五、幾個臨床生化測試概念 2011 Mindray Confidentialn 39n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞酶促反應動力學酶促反應動力學影響因素：影響因素：酶濃度的影響酶濃度的影響1.1.酶類項目酶類項目五、幾個臨床生化測試概念五、幾個臨床生化測試概念 2011 Mindray Confidentialn 40n 2022-4-7全球信賴的邁瑞全球信賴的邁瑞吸光度、反應度、濃度之間的關系吸光度、反應度、濃度之間的