專題2 課題1 微生物的實驗室培養(yǎng)

1、 專題專題2 2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 課題課題1 1 微生物的實驗室培養(yǎng)微生物的實驗室培養(yǎng)需要為微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件需要為微生物提供合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件 需要無菌操作需要無菌操作 課題目標：課題目標：1.1.了解了解有關(guān)微生物種類、培養(yǎng)方法和培養(yǎng)基有關(guān)微生物種類、培養(yǎng)方法和培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識。的基礎(chǔ)知識。2 2進行進行無菌技術(shù)的操作。無菌技術(shù)的操作。3 3進行微生物的培養(yǎng)。進行微生物的培養(yǎng)。生物技術(shù)實踐：生物技術(shù)實踐：微生物培養(yǎng)與利用：微生物培養(yǎng)與利用： 利用微生物進行發(fā)酵生產(chǎn)特定的產(chǎn)物。利用微生物進行發(fā)酵生產(chǎn)特定的產(chǎn)物。生物學(xué)研究中的科學(xué)思想和一般方法：生物學(xué)研究中

2、的科學(xué)思想和一般方法： 設(shè)計可行的實驗方案和實驗裝置設(shè)計可行的實驗方案和實驗裝置 對簡單的實驗方案做出恰當?shù)脑u價和修訂對簡單的實驗方案做出恰當?shù)脑u價和修訂考試說明考試說明從近年情況看，這部分知識在各區(qū)的模從近年情況看，這部分知識在各區(qū)的模擬考查中多次涉及！尤其是關(guān)于擬考查中多次涉及！尤其是關(guān)于滅菌方法滅菌方法和和接種方法接種方法的選擇是高頻考點的選擇是高頻考點 知識梳理：細菌知識梳理：細菌大腸桿菌大腸桿菌淋病球菌淋病球菌肉毒梭菌肉毒梭菌霍亂弧菌霍亂弧菌（單單細胞細胞原核原核生物）生物）1.1.細菌的形態(tài)細菌的形態(tài)（球、球、 桿、桿、 弧、弧、 旋旋）2.2.細菌的結(jié)構(gòu)細菌的結(jié)構(gòu) 知識梳理：細菌

3、知識梳理：細菌 知識梳理：細菌知識梳理：細菌2.2.細菌的結(jié)構(gòu)細菌的結(jié)構(gòu)（6 6）芽孢）芽孢2.2.細菌的結(jié)構(gòu)細菌的結(jié)構(gòu) 知識梳理：細菌知識梳理：細菌 某些細菌在其生長發(fā)育后期，在細胞內(nèi)某些細菌在其生長發(fā)育后期，在細胞內(nèi)形成一個圓形或橢圓形、形成一個圓形或橢圓形、厚壁厚壁、含水量極低含水量極低、抗逆性極強抗逆性極強的的休眠體休眠體，稱為芽孢，稱為芽孢( (內(nèi)生孢內(nèi)生孢子）。子）。 能夠使細菌度過不良的環(huán)境。每一個細能夠使細菌度過不良的環(huán)境。每一個細菌形成一個芽孢，所以其菌形成一個芽孢，所以其沒有沒有繁殖功能。繁殖功能。芽孢芽孢 知識梳理：細菌知識梳理：細菌3 3、細菌的繁殖：、細菌的繁殖：細菌

4、的主要繁殖方式：細菌的主要繁殖方式：分裂生殖（二分裂）分裂生殖（二分裂）分裂中的鏈球菌分裂中的鏈球菌分裂中的大腸桿菌分裂中的大腸桿菌4.4.菌落菌落P18P18（高三考查較多）高三考查較多）（1 1）定義：是）定義：是單個或少數(shù)細菌單個或少數(shù)細菌在在固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基上大量繁殖，形成肉眼可見具有一定形態(tài)結(jié)上大量繁殖，形成肉眼可見具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的構(gòu)的子細胞群體子細胞群體。舉例：有莢膜細菌：菌落光滑。舉例：有莢膜細菌：菌落光滑。S S型型 無莢膜細菌：菌落粗糙。無莢膜細菌：菌落粗糙。R R型型（2 2）特征：表現(xiàn)在菌落的）特征：表現(xiàn)在菌落的大小、形狀、光澤大小、形狀、光澤度、顏色、硬度透明度度

5、、顏色、硬度透明度等方面。等方面。（3 3）功能：菌落特征是）功能：菌落特征是鑒別菌種鑒別菌種的重要依據(jù)的重要依據(jù) 知識梳理：細菌知識梳理：細菌( (二二) )微生物培養(yǎng)基微生物培養(yǎng)基1.1.培養(yǎng)基概念：培養(yǎng)基概念：人工配制人工配制的用于培養(yǎng)微生物（或動物、植的用于培養(yǎng)微生物（或動物、植物的細胞、組織）的物的細胞、組織）的營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)。2.2.培養(yǎng)基的成分：培養(yǎng)基的成分：微生物的元素組成：微生物的元素組成：微生物生長需要的物質(zhì)微生物生長需要的物質(zhì)營養(yǎng)要素營養(yǎng)要素C C 、H H 、O O 、N N 、P P碳源、氮源、無機鹽、水碳源、氮源、無機鹽、水1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成

6、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基組分培養(yǎng)基組分提供的主要營養(yǎng)提供的主要營養(yǎng)牛肉膏牛肉膏 5g碳源、氮源、磷酸鹽、碳源、氮源、磷酸鹽、維生素維生素蛋白胨蛋白胨 10g碳源、氮源和維生素碳源、氮源和維生素Nacl 5g無機鹽無機鹽H2O 定容至定容至1000ml氫元素、氧元素氫元素、氧元素同一種物質(zhì)可能既為碳源又為氮源嗎？同一種物質(zhì)可能既為碳源又為氮源嗎？可能，如牛肉膏，可提供氮源和碳源可能，如牛肉膏，可提供氮源和碳源牛肉膏牛肉膏（Beef Extract）又稱牛肉浸膏，是采）又稱牛肉浸膏，是采用新鮮牛肉經(jīng)過剔除脂肪、消化、過濾、濃縮用新鮮牛肉經(jīng)過剔除脂肪、消化、過濾、濃縮而得到的一種棕黃色至棕

7、褐色的膏狀物。而得到的一種棕黃色至棕褐色的膏狀物。蛋白胨蛋白胨是將肉、酪素（酪蛋白水解得到）或明是將肉、酪素（酪蛋白水解得到）或明膠用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外觀呈淡黃膠用酸或蛋白酶水解后干燥而成的外觀呈淡黃色的粉劑，具有肉香的特殊氣息。色的粉劑，具有肉香的特殊氣息。u思考：思考：1.1.大腸桿菌，硝化細菌，藍細菌，乳酸菌分大腸桿菌，硝化細菌，藍細菌，乳酸菌分別選用哪種別選用哪種碳源碳源？糖類，二氧化碳，二氧化碳，糖類糖類，二氧化碳，二氧化碳，糖類( (二二) )微生物培養(yǎng)基微生物培養(yǎng)基2.2.培養(yǎng)基的成分：培養(yǎng)基的成分：（2 2）氮源）氮源n概念：能為微生物提供所需氮元素的營養(yǎng)概念：能為微

8、生物提供所需氮元素的營養(yǎng) 物質(zhì)物質(zhì)n種類：種類：無機氮源：無機氮源：N N2 2、NHNH3 3、銨鹽、硝酸鹽、銨鹽、硝酸鹽、 尿素；尿素； 有機氮源：有機氮源：牛肉膏、蛋白胨牛肉膏、蛋白胨p培養(yǎng)根瘤菌、大腸桿菌、硝化細菌時分培養(yǎng)根瘤菌、大腸桿菌、硝化細菌時分別需要哪一類氮源？別需要哪一類氮源？u思考：思考：N N2 2，銨鹽或硝酸鹽，銨鹽或硝酸鹽，NHNH3 3( (二二) )微生物培養(yǎng)基微生物培養(yǎng)基2.2.培養(yǎng)基的成分：培養(yǎng)基的成分： u注意：關(guān)于能量來源注意：關(guān)于能量來源u自養(yǎng)型：自養(yǎng)型： 光能自養(yǎng)：太陽光光能自養(yǎng)：太陽光 化能自養(yǎng)：無機物化能自養(yǎng)：無機物（氧化放能）（氧化放能）異養(yǎng)型：

9、異養(yǎng)型：有機物（氧有機物（氧化分解放能）化分解放能）（3 3）水）水（4 4）無機鹽）無機鹽u思考思考p若乳酸菌、根瘤菌、固氮藍藻、硝化細菌若乳酸菌、根瘤菌、固氮藍藻、硝化細菌混合在一起，我們配制什么樣的培養(yǎng)基可混合在一起，我們配制什么樣的培養(yǎng)基可以將三種微生物分離？以將三種微生物分離？碳源碳源氮源氮源能源能源( (物質(zhì)物質(zhì)) )乳酸菌乳酸菌根瘤菌根瘤菌硝化細菌硝化細菌糖類等含糖類等含碳有機物碳有機物N N2 2有機物有機物 銨鹽、硝酸鹽、銨鹽、硝酸鹽、有機氮有機氮糖類等含糖類等含碳有機物碳有機物有機物有機物氨氨氨的氧化氨的氧化COCO2 2( (二二) )微生物培養(yǎng)基微生物培養(yǎng)基3.3.滿足

10、微生物生長的條件：滿足微生物生長的條件： 培養(yǎng)基除培養(yǎng)基除要提供上述幾種主要營養(yǎng)物要提供上述幾種主要營養(yǎng)物質(zhì)外，還質(zhì)外，還滿足微生物生長的滿足微生物生長的 pH pH 、 特殊特殊營養(yǎng)物質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì) 和和氧氣氧氣 等要求。等要求。pHpH：真菌：真菌 5.06.0 酸性酸性 細菌細菌 6.57.5中性或微堿性中性或微堿性( (二二) )微生物培養(yǎng)基微生物培養(yǎng)基（1 1）按物理性質(zhì)劃分：）按物理性質(zhì)劃分：5.5.培養(yǎng)基的種類：培養(yǎng)基的種類：u（固體、半固體培養(yǎng)基需添加（固體、半固體培養(yǎng)基需添加凝固劑凝固劑，如如瓊脂瓊脂；兩者的差別是添加量的；兩者的差別是添加量的多、少多、少）液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半

11、固體半固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基（用于工業(yè)生產(chǎn)）（用于工業(yè)生產(chǎn)）（用于觀察微生物的運動、（用于觀察微生物的運動、鑒定菌種）鑒定菌種）（用于微生物的（用于微生物的分離、計數(shù)分離、計數(shù)）微生物在其表面生長可形成菌落微生物在其表面生長可形成菌落進行選擇培養(yǎng)可以進行選擇培養(yǎng)可以增增加所需目的菌的濃度加所需目的菌的濃度( (二二) )微生物培養(yǎng)基微生物培養(yǎng)基5.5.培養(yǎng)基的種類：培養(yǎng)基的種類：選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基P22P22：鑒別培養(yǎng)基：鑒別培養(yǎng)基：加入加入某化學(xué)物質(zhì)某化學(xué)物質(zhì)，以，以抑制抑制不需要的微生物不需要的微生物的生長，的生長，促進促進所需要微生物的生長。所需要微生物的生長。加入某種加

12、入某種指示劑或化學(xué)藥品指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，配制而成的，用以用以鑒定鑒定不同種類的微生物。特定菌種顯色，不同種類的微生物。特定菌種顯色，其他菌種其他菌種不受抑制不受抑制、但不顯色。、但不顯色。（3 3）按用途劃分：）按用途劃分：（作用：（作用：分離微生物、分離微生物、進行選擇培養(yǎng)進行選擇培養(yǎng)） （作用：（作用：鑒別微生物鑒別微生物） 青霉素青霉素抗青霉素基因抗青霉素基因選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基在基因工程中，對導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌的篩選在基因工程中，對導(dǎo)入重組質(zhì)粒的大腸桿菌的篩選伊紅美藍伊紅美藍鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基大腸桿菌大腸桿菌在在伊紅美藍伊紅美藍培養(yǎng)基上菌落呈現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落呈現(xiàn)黑色黑色

13、u常見的選擇培養(yǎng)基舉例：常見的選擇培養(yǎng)基舉例：（1 1）添加：）添加：青霉素青霉素 ：抑制細菌、放線菌抑制細菌、放線菌保留（分離）真菌，如霉菌、酵母菌保留（分離）真菌，如霉菌、酵母菌高濃度高濃度NaClNaCl：抑制多種細菌，：抑制多種細菌，分離分離金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌( (二二) )微生物培養(yǎng)基微生物培養(yǎng)基5.5.培養(yǎng)基的種類：培養(yǎng)基的種類：（3 3）按用途劃分：）按用途劃分：u常見的選擇培養(yǎng)基舉例：常見的選擇培養(yǎng)基舉例：（2 2）缺少：）缺少：培養(yǎng)基培養(yǎng)基缺少有機碳源缺少有機碳源分離分離自養(yǎng)型微生物自養(yǎng)型微生物（利用（利用COCO2 2 ）培養(yǎng)基培養(yǎng)基缺少氮源缺少氮源分離分離固氮微

14、生物固氮微生物（利用（利用N N2 2 ）( (二二) )微生物培養(yǎng)基微生物培養(yǎng)基5.5.培養(yǎng)基的種類：培養(yǎng)基的種類：（3 3）按用途劃分：）按用途劃分：（三）無菌技術(shù)（三）無菌技術(shù)1.1.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵( (目的）是目的）是 防止外防止外來雜菌的入侵來雜菌的入侵 。（三）無菌技術(shù)（三）無菌技術(shù)2.2.無菌技術(shù)包括：無菌技術(shù)包括：（1 1）對實驗操作空間、操作者的衣著和手）對實驗操作空間、操作者的衣著和手進行進行 清潔和消毒清潔和消毒 ；（2 2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行具進行 滅菌滅菌 ；（3 3）為避免周圍微生物污染

15、，實驗操作應(yīng)）為避免周圍微生物污染，實驗操作應(yīng)在在 酒精燈火焰附近酒精燈火焰附近 旁進行；旁進行；（4 4）避免已滅菌處理的材料用具與）避免已滅菌處理的材料用具與 周圍物周圍物品品 相接觸。相接觸。u思考思考p無菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外，還具無菌技術(shù)除了防止培養(yǎng)物被污染外，還具有什么目的？有什么目的？有效避免操作者自身被微生物感染有效避免操作者自身被微生物感染u思考：思考：p消毒和滅菌的區(qū)別？哪一個更徹底？消毒和滅菌的區(qū)別？哪一個更徹底？p什么時候需要消毒，什么時候需要滅菌？什么時候需要消毒，什么時候需要滅菌？消毒消毒是指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法是指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物

16、體表面或內(nèi)部的僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物營養(yǎng)體部分微生物營養(yǎng)體（不包括（不包括芽孢和孢子芽孢和孢子）。）。滅菌滅菌是指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)是指使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外外所有的微生物所有的微生物，包括芽孢和孢子。，包括芽孢和孢子。滅菌滅菌效果更徹底，用于各種效果更徹底，用于各種金屬、金屬、 玻璃器玻璃器具具。消毒消毒用于各種用于各種實驗操作空間、操作者的實驗操作空間、操作者的衣衣著和手著和手。（三）無菌技術(shù)（三）無菌技術(shù)2.2.無菌技術(shù)包括：無菌技術(shù)包括：（三）無菌技術(shù)（三）無菌技術(shù)3.3.消毒方法：消毒方法：（1 1）日常生活經(jīng)常用到的是）日常生活經(jīng)常用到的是 煮沸煮沸 消

17、毒法；消毒法；（2 2）對一些不耐高溫的液體，則使用）對一些不耐高溫的液體，則使用 巴氏巴氏 消毒法，如牛奶。消毒法，如牛奶。（3 3）對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴）對接種室、接種箱或超凈工作臺首先噴灑灑 石炭酸或煤酚皂石炭酸或煤酚皂 等溶液以增強消毒效等溶液以增強消毒效果，然后使用果，然后使用 紫外線紫外線 進行物理消毒。進行物理消毒。（4 4）實驗操作者的雙手使用）實驗操作者的雙手使用70%70%酒精酒精 進行消進行消毒。毒。（5 5）飲水水源用）飲水水源用 氯氣氯氣 進行消毒。進行消毒。（三）無菌技術(shù)（三）無菌技術(shù)4.4.滅菌方法：滅菌方法：（1 1）灼燒灼燒滅菌法：用于金屬用具（

18、滅菌法：用于金屬用具（接種環(huán)接種環(huán)、接種針、接種針）、）、試管口和瓶口試管口和瓶口的滅菌；的滅菌；（三）無菌技術(shù)（三）無菌技術(shù)4.4.滅菌方法：滅菌方法：（2 2）干熱干熱滅菌法：用于滅菌法：用于耐高溫耐高溫、需要保持、需要保持干燥干燥的物品。玻璃器皿、金屬用具的滅菌的物品。玻璃器皿、金屬用具的滅菌 ，所用設(shè)備是，所用設(shè)備是 干熱滅菌箱干熱滅菌箱 ；160170 ，12小時小時（三）無菌技術(shù)（三）無菌技術(shù)4.4.滅菌方法：滅菌方法：（3 3）高壓蒸汽高壓蒸汽滅菌法：用于滅菌法：用于培養(yǎng)基、無菌水培養(yǎng)基、無菌水等的滅菌等的滅菌 ，所用設(shè)備是，所用設(shè)備是 高壓蒸汽滅菌鍋高壓蒸汽滅菌鍋 高壓滅菌鍋高

19、壓滅菌鍋121121，100kPa100kPa，15-3015-30分鐘分鐘二、實驗操作二、實驗操作（一）制備（一）制備牛肉膏蛋白胨牛肉膏蛋白胨固體固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基1.1.計算：計算：2.2.稱量：稱量：3.3.溶化：溶化： 加水定容，調(diào)加水定容，調(diào)pHpH4.4.滅菌：滅菌：5.5.倒平板：（或擱置斜面培養(yǎng)基）倒平板：（或擱置斜面培養(yǎng)基）包好再高壓蒸汽滅菌（包好再高壓蒸汽滅菌（121121，100100kPakPa，15-3015-30分鐘）分鐘）。培養(yǎng)基冷卻到培養(yǎng)基冷卻到5050 ，酒精燈火焰酒精燈火焰旁操作。旁操作。稱量稱量調(diào)調(diào)pHpH培養(yǎng)基分裝培養(yǎng)基分裝1/51/5加棉塞加棉塞2/32

20、/3包扎包扎滅菌滅菌擱置斜面擱置斜面斜面不超過試管總長的斜面不超過試管總長的1/21/2倒平板倒平板夾夾倒倒灼灼倒倒u思考：思考：（1 1）培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到）培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到5050左右時，左右時，才能用來倒平板?？捎貌拍苡脕淼蛊桨??？捎胈的辦法估計培養(yǎng)基的溫度。的辦法估計培養(yǎng)基的溫度。（2 2）為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？）為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 灼燒滅菌，防止瓶口被微生物污染。灼燒滅菌，防止瓶口被微生物污染。 感覺盛有培養(yǎng)基感覺盛有培養(yǎng)基的錐形瓶不燙手的錐形瓶不燙手(3)(3)平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，皿蓋

21、上會凝結(jié)水珠，凝固平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也較高，將平板倒后的培養(yǎng)基表面的濕度也較高，將平板倒置，置，既可以防止培養(yǎng)基水分過快蒸發(fā)，既可以防止培養(yǎng)基水分過快蒸發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。造成污染。u思考：思考：u思考：思考：(4)(4)在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？不能；空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底不能；空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培

22、養(yǎng)基上滋生。之間的培養(yǎng)基上滋生?！咎嵝殃P(guān)于斜面培養(yǎng)的問題提醒關(guān)于斜面培養(yǎng)的問題】l配制斜面培養(yǎng)基中，試管要加塞棉塞的配制斜面培養(yǎng)基中，試管要加塞棉塞的目的是目的是保持通氣并防止雜菌感染保持通氣并防止雜菌感染。l試管培養(yǎng)基形成斜面的作用是試管培養(yǎng)基形成斜面的作用是增大接種增大接種面積面積。（二）純化大腸桿菌：（二）純化大腸桿菌：1.1.純化培養(yǎng)技術(shù)：純化培養(yǎng)技術(shù)：自然環(huán)境中，微生物混在一起生長，要想自然環(huán)境中，微生物混在一起生長，要想純培養(yǎng)，首先要純培養(yǎng)，首先要將單個細胞與其他細胞分離將單個細胞與其他細胞分離開，進而培養(yǎng)成可見的群體（即菌落）開，進而培養(yǎng)成可見的群體（即菌落）。2.2.常見接種方

23、法：常見接種方法：（高頻考點）（高頻考點）平板劃線法平板劃線法：主要用于純化培養(yǎng)主要用于純化培養(yǎng)稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法：主要用于分離菌種并計數(shù)主要用于分離菌種并計數(shù)（二）純化大腸桿菌：（二）純化大腸桿菌：2.2.常見接種方法：常見接種方法：(1)(1)平板劃線法：平板劃線法：通過接種環(huán)在通過接種環(huán)在固體固體培養(yǎng)基表面培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線連續(xù)劃線操操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在表面。在數(shù)次劃線數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可分離到由后培養(yǎng)，可分離到由一個一個細胞細胞繁殖而來的菌落。繁殖而來的菌落。此法此法主要用于主要用于純化培養(yǎng)純化培養(yǎng)接種環(huán)接種環(huán)模

24、擬平板劃線：模擬平板劃線： 平板劃線平板劃線u思考思考為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？接種環(huán)嗎？為什么？第一步灼燒：第一步灼燒：消滅接種環(huán)上的微生物避免污染培消滅接種環(huán)上的微生物避免污染培養(yǎng)物；養(yǎng)物；每次劃線前灼燒：每次劃線前灼燒：為了殺死上一次劃線結(jié)束后，為了殺死上一次劃線結(jié)束后，接種環(huán)殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上接種環(huán)殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過

25、劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。少，以便得到菌落。操作結(jié)束后灼燒：操作結(jié)束后灼燒：殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境及感染操作者。免細菌污染環(huán)境及感染操作者。u思考思考在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？再進行劃線？避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種在作第二次及其后的劃線操作時，為什么在作第二次及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？總是從上一次劃線的末端開始劃線？劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始劃線

26、后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。（二）純化大腸桿菌：（二）純化大腸桿菌：2.2.常見接種方法：常見接種方法：(2)(2)稀釋涂布平板法：稀釋涂布平板法：將將菌液菌液進行進行一系列的梯度稀釋一系列的梯度稀釋后，分別涂后，分別涂布到布到固體固體培養(yǎng)基表面。稀釋度足夠高時，能培養(yǎng)基表面。稀釋度足夠高時，能培養(yǎng)出培養(yǎng)出單個菌落單個菌落。主要用于主要用于分離菌種并計數(shù)分離菌種并計數(shù)。涂布器涂布器n系列稀釋系列稀釋9ml 稀釋液稀釋液1ml9ml 稀釋液稀釋液1ml10-110-29ml 稀釋液稀釋液9ml 稀釋液稀釋液9ml 稀釋液稀釋液9ml 稀釋液稀釋液1ml1ml1ml1ml10-310-410-510-6n涂布平板涂布平板滴滴灼灼試試涂涂涂布器末端浸在體積分數(shù)涂布器末端浸在體積分數(shù)為為70%70%的酒精中的酒精中三、結(jié)果分析與評價三、結(jié)果分析與評價u思考：思