T細(xì)胞斑點試驗

1、.1T-SPOT.TB楊中平.2結(jié)核感染結(jié)核感染T細(xì)胞斑點檢測細(xì)胞斑點檢測vT細(xì)胞斑點試驗（T-SPOT），又叫作結(jié)核感染干擾素釋放試驗（Interferon Gamma Release Assays，IGRAs .3結(jié)核的現(xiàn)狀結(jié)核的現(xiàn)狀 結(jié)核病是全球嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一。據(jù)結(jié)核病是全球嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題之一。據(jù)WHO統(tǒng)計，全球約有統(tǒng)計，全球約有20億人感染結(jié)核分枝桿菌，每年有約億人感染結(jié)核分枝桿菌，每年有約200萬人死于結(jié)核。萬人死于結(jié)核。 我國是世界上我國是世界上22個結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一，結(jié)核個結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家之一，結(jié)核感染導(dǎo)致的死亡人數(shù)是其他傳染性疾病總死亡人數(shù)的感染導(dǎo)致的死亡人數(shù)是

2、其他傳染性疾病總死亡人數(shù)的2倍以上。倍以上。.4基于基于T淋巴細(xì)胞檢測淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理結(jié)核感染的原理vT-SPOT.TB在診斷結(jié)核感染方面具有良好的敏在診斷結(jié)核感染方面具有良好的敏感性和特異性，在現(xiàn)有結(jié)核診斷方法存在缺陷感性和特異性，在現(xiàn)有結(jié)核診斷方法存在缺陷的今天，的今天， T-SPOT.TB 可以給臨床診斷提供參可以給臨床診斷提供參考?？?。v基于結(jié)核抗原特異性基于結(jié)核抗原特異性T細(xì)胞向病變部位集中的細(xì)胞向病變部位集中的特點，特點， T-SPOT.TB的檢測物已不局限于靜脈血，的檢測物已不局限于靜脈血，支氣管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、腦脊液等支氣管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、腦脊液等

3、也可用于對肺內(nèi)及肺外結(jié)核的診斷。也可用于對肺內(nèi)及肺外結(jié)核的診斷。.5T-SPOT的意義v1:菌陰，結(jié)核病患者的輔助診斷v2：肺外結(jié)合的鑒別診斷v3：免疫力低下/受抑制患者的結(jié)核診斷/感染篩查v4：兒童結(jié)核病的輔助診斷.6T-SPOT注意事項v1:肝素抗凝全血，常溫保存,不得冷凍或冷藏。v2:采血量：三歲以下2ML，3-9歲4ML，9歲以上6ML，免疫力低下或白細(xì)胞低下采6ML（本公司一律兩管）v3:樣本必須4小時內(nèi)送達(dá)。v4：輸血受試者或PET-CT受試者，兩周后檢測。v5：受試者需閱讀知情同意書并填寫申請單。.7基于基于T淋巴細(xì)胞檢測淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理結(jié)核感染的原理.8結(jié)核的傳統(tǒng)診斷

4、手段結(jié)核的傳統(tǒng)診斷手段結(jié)核菌素皮試：結(jié)核菌素皮試：低敏感性：低敏感性：免疫力低下人群中其敏感性大大降低。低特異性：低特異性：與卡介苗接種和其他環(huán)境分枝桿菌有交叉，易造成“假陽性”結(jié)果。細(xì)菌學(xué)檢查：細(xì)菌學(xué)檢查：常規(guī)培養(yǎng)：2月；快速培養(yǎng)：1周； 陽性率取決于采集標(biāo)本中細(xì)菌數(shù)量，不利于早期診斷。病理學(xué)檢查：病理學(xué)檢查：陽性率低，對取材標(biāo)本有較高要求，有創(chuàng)傷，對肉芽腫性病變需進(jìn)一步鑒別。.9基于基于T淋巴細(xì)胞檢測淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理結(jié)核感染的原理v結(jié)核感染的免疫應(yīng)答反應(yīng)以結(jié)核感染的免疫應(yīng)答反應(yīng)以細(xì)胞免疫細(xì)胞免疫為主，結(jié)為主，結(jié)核感染后體內(nèi)長期存在核感染后體內(nèi)長期存在抗原特異性的記憶性抗原特異性的

5、記憶性T細(xì)胞細(xì)胞v當(dāng)再次遇到抗原刺激時，能迅速活化增殖，釋當(dāng)再次遇到抗原刺激時，能迅速活化增殖，釋放放r r干擾素干擾素vr r干擾素干擾素是結(jié)核分枝桿菌感染后機(jī)體免疫應(yīng)答是結(jié)核分枝桿菌感染后機(jī)體免疫應(yīng)答中最重要的細(xì)胞因子中最重要的細(xì)胞因子.10基于基于T淋巴細(xì)胞檢淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理測結(jié)核感染的原理T-SPOT.TB技術(shù)：技術(shù)：v利用結(jié)核桿菌感染者利用結(jié)核桿菌感染者外周血單個核細(xì)胞（外周血單個核細(xì)胞（PBMC）中中存在存在結(jié)核特異性結(jié)核特異性T T細(xì)胞細(xì)胞，這些淋巴細(xì)胞在受到，這些淋巴細(xì)胞在受到結(jié)核特異結(jié)核特異 抗原刺激抗原刺激后后分泌分泌r r干擾素干擾素而設(shè)計的而設(shè)計的T T細(xì)胞免

6、疫斑點試驗。細(xì)胞免疫斑點試驗。v檢測外周血中受檢測外周血中受結(jié)核特異抗原刺激結(jié)核特異抗原刺激釋放釋放r r干擾素干擾素的的T T淋淋巴細(xì)胞巴細(xì)胞，經(jīng)酶聯(lián)免疫顯色后，通過，經(jīng)酶聯(lián)免疫顯色后，通過ELISPOTELISPOT分析系統(tǒng)分析系統(tǒng) 對斑點進(jìn)行計數(shù)，對斑點進(jìn)行計數(shù)，1 1個斑點代表一個細(xì)胞，計算出抗原個斑點代表一個細(xì)胞，計算出抗原特異性細(xì)胞的頻率。特異性細(xì)胞的頻率。.11基于基于T淋巴細(xì)胞檢測淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理結(jié)核感染的原理v空白對照孔內(nèi)斑點數(shù)小于空白對照孔內(nèi)斑點數(shù)小于10且陽性對照孔內(nèi)斑且陽性對照孔內(nèi)斑點數(shù)大于點數(shù)大于20時視為試驗有效時視為試驗有效vT-SPOT.TB試驗結(jié)果用每試驗結(jié)果用每106 PBMCs中斑點形中斑點形成細(xì)胞（成細(xì)胞（SFCs）的數(shù)目來描述，即）的數(shù)目來描述，即SFCs/106 PBMCs.12基于基于T淋巴細(xì)胞檢淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理測結(jié)核感染的原理包包.13基于基于T淋巴細(xì)胞檢淋巴細(xì)胞檢測結(jié)核感染的原理測結(jié)核感染的原理.14T-SPOT.TB的臨床意義的臨床意義vT-SPOT.TB