可見光分光光度計的操作方法

1、可見光分光光度計的操作方法學(xué)時：2學(xué)時一、實驗原理利用可見光等測定物質(zhì)的吸收光譜，利用此光譜對物質(zhì)進行定性定量分析和物質(zhì)結(jié)構(gòu)分析的方法，稱為分光光度法，使用的儀器是分光光度計。分光光度計靈敏度高，測定速度快，應(yīng)用范圍廣，是生物化學(xué)研究中必不可少的基本手段之一。 可見光光譜：光是電磁波，可用波長“”表示，電磁波譜是由不同性質(zhì)的連續(xù)波長的光譜所組成，對于生物化學(xué)來說，最重要的波長區(qū)域是可見光和紫外光。光的波長是二個相鄰的波峰之間的距離。=C/V 其中，-波長；C-光速；V-頻率；單位時間要通過一個定點的波數(shù)?？梢娢展庾V是由于分子中的某些基團吸收了可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。

2、它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息。可以用標準光圖譜再結(jié)合其它手段進行定性分析。根據(jù)朗伯-比爾（Lambert- Beer）定律：A=bc，（A為吸光度，為摩爾吸光系數(shù)，b為液池厚度，c為溶液濃度）可以對溶液進行定量分析。越大，吸收光的能力越強，相應(yīng)的分光光度法測定的靈敏度就越高。值越大，說明電子躍遷的幾率越大，通常=10105：一般認為>104為強吸收；=103104為較強吸收；<102為弱吸收，此時分光光度法不靈敏。通常使用分光光度計可檢測出的最小吸收度A=0.001，所以b=1cm，=105時，可檢測的溶液最小濃度是C=10-8mol/L。二、分光光度計的基本參數(shù)和組成

3、與構(gòu)造1. 722S可見光分光光度計的基本參數(shù)波長范圍：340-1000nm波長精度：±2nm（360-600nm）表面刻度：（T）0-100%（A）0-22. 組成與結(jié)構(gòu)各種型號的分光光度計不論是何種型式，基本上都是由五部分組成：（1）光源；（2）單色器（包括產(chǎn)生平行光和把光引向檢測器的光學(xué)系統(tǒng)）；（3）樣品室；（4）接受檢測放大系統(tǒng)；（5）顯示或記錄器。光源單色器樣品室檢測放大系統(tǒng)顯示器三、實驗試劑 NaCl : 1mol/lL 、5mol/L ；NaOH: 1mol/lL、10mol/L；其他溶液。四、實驗步驟1. 將波長調(diào)至550nm，打開樣品池蓋；2. 開啟電源開關(guān)，預(yù)熱2

4、0 min ；l 測定透明材料的透射比 測定透明溶液的吸光度預(yù)熱設(shè)定波長設(shè)置空白置標尺為“透射比”調(diào)100%置入樣品讀出數(shù)據(jù) 預(yù)熱設(shè)定波長設(shè)置空白置標尺為“吸光度”調(diào)0%置入樣品讀出數(shù)據(jù)l 用標準曲線法對物質(zhì)定量取已知含量的標準樣品按樣品各自的分析規(guī)定制備樣品溶液及背景溶液設(shè)波長，置空白，條；調(diào)零，置“吸光度”，讀出樣品吸光度重復(fù)上述讀出各標準溶液的吸光度繪制已知含量及讀得吸光度繪制坐標圖并畫出最佳曲線讀未知樣品的吸光度，在曲線表上找出對應(yīng)的濃度l 直接使用濃度直讀功能l 直接使用濃度因子功能五、注意事項：1、儀器在運行中禁止將樣品池蓋長時間蓋上，以防光電管疲勞；2、使用時必須把比色皿外面的液

5、體用濾紙吸干，方可放入樣品池架內(nèi)；3 、儀器使用完后，必須關(guān)閉電源，并將比色皿用高純水沖洗干凈，將外部的水用濾紙吸干后放入樣品池架內(nèi)待用。六、實驗結(jié)果與分析1. 已知溶液的吸光度和透射比的測定（波長為：550nm）溶液名程濃度透射比吸光度NaCl1mol/lL5mol/LNaOH1mol/lL10mol/L乙醇溶液95%（質(zhì)量分數(shù)）飽和Na2CO32. 繪制NaOH的標準曲線（濃度梯度：10mol/lL，5mol/lL， 1mol/lL，0.1mol/lL，0.01mol/lL）七、說明NaCl：分子量：58.44性質(zhì)：密度2.165g/ml；熔點801 °C；沸點1461 °C；水溶性360 g/L (20°C)。純凈的氯化鈉晶體是無色透明的立方晶體，由于雜質(zhì)的存在使一般情況下的氯化鈉為白色立方晶體或細小的晶體粉末，密度為2.165（25/4），熔點801，沸點1442，味咸，PH值呈中性，易融于水和甘油，難融于乙醇。常溫下，100克水中溶解36克氯化鈉固體。NaOH：固體溶于水放熱；又稱燒堿、火堿、苛性鈉，是常見的、重要的堿，英文名稱sodiun hydroxide（別名Caustic soda）。 化學(xué)式：NaOH 分子量：40.01。密度2.130克/厘米3，熔點318.4，沸點1390。純的無水氫氧化鈉為白色半透