實(shí)驗(yàn)酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)

1、1實(shí)驗(yàn)七實(shí)驗(yàn)七 酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué) pH、溫度、激活劑、抑制劑、溫度、激活劑、抑制劑對酶促反應(yīng)速度的影響對酶促反應(yīng)速度的影響 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)之生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)之2【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹俊緦?shí)驗(yàn)?zāi)康摹?1. 了解了解pH、溫度、激活劑、溫度、激活劑、抑制劑對酶活力的影響。抑制劑對酶活力的影響。 2. 學(xué)習(xí)測定酶最適學(xué)習(xí)測定酶最適pH值的值的方法。方法。3【實(shí)驗(yàn)原理】【實(shí)驗(yàn)原理】 對環(huán)境酸堿度敏感是酶的特點(diǎn)之一。酶對環(huán)境酸堿度敏感是酶的特點(diǎn)之一。酶表現(xiàn)最大活力時(shí)的表現(xiàn)最大活力時(shí)的pH值稱為酶的最適值稱為酶的最適pH值。值。一般酶的最適一般酶的最適pH值在值在48之間。之間。酶的催化作用受溫度的影響很大，反

2、應(yīng)酶的催化作用受溫度的影響很大，反應(yīng)速度達(dá)到最大值時(shí)的溫度稱為酶的最適溫度。速度達(dá)到最大值時(shí)的溫度稱為酶的最適溫度。大多數(shù)動(dòng)物酶的最適溫度為大多數(shù)動(dòng)物酶的最適溫度為3740，大多，大多數(shù)植物酶的最適溫度為數(shù)植物酶的最適溫度為5060。4激活劑能增加酶的活力，抑制劑會(huì)激活劑能增加酶的活力，抑制劑會(huì)降低酶的活力。如降低酶的活力。如 ClCl- -: : 唾液淀粉酶的唾液淀粉酶的激活劑，激活劑，CuCu2+2+則是該酶的抑制劑。則是該酶的抑制劑。 在不同在不同pH、溫度以及激活劑、抑制、溫度以及激活劑、抑制劑存在下，唾液淀粉酶對淀粉水解活力劑存在下，唾液淀粉酶對淀粉水解活力的高低可通過水解混合物遇碘

3、呈現(xiàn)顏色的高低可通過水解混合物遇碘呈現(xiàn)顏色的不同來判斷。的不同來判斷。 5 淀粉及其水解產(chǎn)物遇碘呈現(xiàn)不同的淀粉及其水解產(chǎn)物遇碘呈現(xiàn)不同的顏色：顏色： 淀粉呈蘭色；淀粉呈蘭色； 大分子糊精（紫色糊精）呈紫色大分子糊精（紫色糊精）呈紫色 ； 其次的糊精（紅色糊精）呈紅色；其次的糊精（紅色糊精）呈紅色； 小分子糊精及麥芽精為無色。小分子糊精及麥芽精為無色。6【器材與試劑】【器材與試劑】（一）器材（一）器材 1.恒溫水浴鍋恒溫水浴鍋 2.試管試管 3.試管架試管架 4.錐形瓶（錐形瓶（50 ml或或100ml） 5.吸量管（吸量管（1、2、5、10ml） 6.秒表秒表 7.白瓷板白瓷板 8. pH試紙

4、試紙7（二）試劑（二）試劑 1.含有含有0.3NaCl的的0.5淀粉溶液淀粉溶液 2. 0.2molL Na2HPO4溶液溶液 3. 0.1molL檸檬酸溶液檸檬酸溶液 4. KII2溶液溶液 5. 新鮮唾液新鮮唾液8【實(shí)驗(yàn)步驟】【實(shí)驗(yàn)步驟】1. pH值對酶活力的影響值對酶活力的影響 (1)取干燥試管取干燥試管6支支, 編號(hào)，按下表制備編號(hào)，按下表制備 pH 5.0 8.0的的5種緩沖溶液。種緩沖溶液。編號(hào)編號(hào)試劑試劑0.2mol/L 0.2mol/L NaNa2 2HPOHPO4 4（mlml）0.1mol/L0.1mol/L檸檬酸（檸檬酸（mlml）緩沖液緩沖液pHpH1 11.551.5

5、51.451.455.05.02 21.91.91.11.16.06.03 32.32.30.70.76.86.84 42.82.80.20.27.67.65 52.92.90.10.18.08.06 62.32.30.70.76.86.89 (3) 測定淀粉完全水解所需的時(shí)間：測定淀粉完全水解所需的時(shí)間： 先向第先向第6號(hào)試管中加稀釋號(hào)試管中加稀釋50200倍的倍的唾液唾液2ml，搖勻后放入，搖勻后放入37恒溫水浴中保恒溫水浴中保溫溫,檢測淀粉水解程度檢測淀粉水解程度,并測定淀粉完全水并測定淀粉完全水解所需的時(shí)間。解所需的時(shí)間。 (2) 向每支試管中加入向每支試管中加入0.5%淀粉溶液淀粉溶

6、液2ml 。第。第6號(hào)試管與第號(hào)試管與第3號(hào)試管內(nèi)容物相號(hào)試管內(nèi)容物相同。同。10 按照第按照第6號(hào)試管的保溫時(shí)間，依次將各號(hào)試管的保溫時(shí)間，依次將各管迅速取出，并立即加入管迅速取出，并立即加入KII2溶液溶液2滴，充滴，充分搖勻。觀察各管呈現(xiàn)的顏色，分搖勻。觀察各管呈現(xiàn)的顏色， 觀察觀察pH對對唾液淀粉酶活力的影響，并確定其最適唾液淀粉酶活力的影響，并確定其最適pH。 (4) 測定淀粉酶的最適測定淀粉酶的最適pH： 每隔每隔1分鐘依次向第分鐘依次向第1至第至第5號(hào)試管中加入號(hào)試管中加入上述稀釋的唾液上述稀釋的唾液2ml，搖勻，依次將，搖勻，依次將5支試管支試管放入放入37恒溫水浴鍋中保溫。恒

7、溫水浴鍋中保溫。112. 溫度對酶活力的影響溫度對酶活力的影響 取試管取試管3支，編號(hào)后按下表加入試劑：支，編號(hào)后按下表加入試劑： 123. 激活劑和抑制劑對酶活力的影響激活劑和抑制劑對酶活力的影響（1）取試管）取試管3支，按下表編號(hào)加入相應(yīng)試劑：支，按下表編號(hào)加入相應(yīng)試劑： 試管試管編號(hào)編號(hào)試試 劑劑0.10.1淀粉淀粉(ml)(ml)1 1NaClNaCl(ml)(ml)1%CuSO1%CuSO4 4(ml)(ml)H H2 2O O(ml)(ml)1:201:20唾液唾液(ml)(ml)1 12 21 11 12 22 21 11 13 32 21 1 1 1(2)搖勻，置搖勻，置37水

8、浴中保溫，用稀碘液檢測水浴中保溫，用稀碘液檢測淀粉水解程度。淀粉水解程度。13【注意事項(xiàng)】【注意事項(xiàng)】pH值對酶活力的影響實(shí)驗(yàn)：值對酶活力的影響實(shí)驗(yàn)： 1.掌握第掌握第6號(hào)試管的水解程度是本實(shí)驗(yàn)成敗的號(hào)試管的水解程度是本實(shí)驗(yàn)成敗的 關(guān)鍵之一。關(guān)鍵之一。 2.嚴(yán)格控制溫度。在保溫期間，水浴溫度不能嚴(yán)格控制溫度。在保溫期間，水浴溫度不能 波動(dòng)，否則影響結(jié)果。波動(dòng)，否則影響結(jié)果。 3.嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間嚴(yán)格控制反應(yīng)時(shí)間, 保證每管反應(yīng)時(shí)間相同。保證每管反應(yīng)時(shí)間相同。激活劑、抑制劑對酶活力的影響：激活劑、抑制劑對酶活力的影響： 每管中加入的底物應(yīng)是不含每管中加入的底物應(yīng)是不含NaCl的的1淀粉淀粉 溶液。溶液。14【思考題】【思考題】 1. 高溫導(dǎo)致酶活性喪失的分子機(jī)理是什么？高溫導(dǎo)致酶活性喪失的分子機(jī)理是什么？如何在酶的分離純化中克服這種影響？如何在酶的分離純化中克服這種影響？ 2. 什么是酶的最適溫度？有何實(shí)踐意義？什么是酶的最適溫度？有何實(shí)踐意義？ 3.什么是酶的最適什么是酶的最適pH？它是否是一個(gè)常數(shù)？它是否是一