實(shí)驗(yàn)三 細(xì)菌的染色及形態(tài)觀察

1、1實(shí)驗(yàn)三實(shí)驗(yàn)三 細(xì)菌染色及形態(tài)觀察細(xì)菌染色及形態(tài)觀察 1.1 1.1 掌握革蘭氏染色和芽胞染色的原理和方法。掌握革蘭氏染色和芽胞染色的原理和方法。1.2 1.2 鞏固無(wú)菌操作技術(shù)鞏固無(wú)菌操作技術(shù) 。1.3 1.3 掌握顯微鏡油鏡使用的方法。掌握顯微鏡油鏡使用的方法。1.4 1.4 初步掌握微生物學(xué)繪圖方法。初步掌握微生物學(xué)繪圖方法。 1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?2.1 2.1 觀察微生物細(xì)胞時(shí)，為什么要對(duì)微生物進(jìn)行染色觀察微生物細(xì)胞時(shí)，為什么要對(duì)微生物進(jìn)行染色? ?革蘭氏革蘭氏染色與細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)與成分有什么關(guān)系？芽胞染色的機(jī)理染色與細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)與成分有什么關(guān)系？芽胞染色的機(jī)理是什么？是什么？

2、2.2 2.2 顯微鏡油鏡為什么能增加照明亮度顯微鏡油鏡為什么能增加照明亮度? ?，為什么能增加分辨，為什么能增加分辨率？率？2 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理(通過(guò)了解下列問(wèn)題來(lái)掌握實(shí)驗(yàn)原理通過(guò)了解下列問(wèn)題來(lái)掌握實(shí)驗(yàn)原理)3革蘭氏染色法革蘭氏染色法芽胞染色法芽胞染色法43 3 材料與方法材料與方法3.1.1 藥品：革蘭氏染色液：革蘭氏染色液：草酸銨結(jié)晶紫染液、革蘭氏碘液、草酸銨結(jié)晶紫染液、革蘭氏碘液、95%95%乙醇、番紅染液，無(wú)菌生理鹽水。乙醇、番紅染液，無(wú)菌生理鹽水。 芽胞染色液：芽胞染色液：孔雀綠染色液，番紅染色液孔雀綠染色液，番紅染色液3.1.2 菌種： Escherichia coli（大腸桿菌

3、）、（大腸桿菌）、 Staphylococcus aureus（金黃色葡萄球菌）培養(yǎng)（金黃色葡萄球菌）培養(yǎng)18-24 h18-24 h菌落平板，菌落平板， Bacillus thuringiensis（蘇云金芽孢桿菌）培養(yǎng)（蘇云金芽孢桿菌）培養(yǎng)24 h24 h菌落平板。菌落平板。3.1.3 儀器：顯微鏡（顯微鏡（MODEL E100MODEL E100）3.1.4 其它物品：載玻片，鏡油，二甲苯，擦鏡紙，接種環(huán)，載玻片，鏡油，二甲苯，擦鏡紙，接種環(huán)，酒精燈等。酒精燈等。3.1 3.1 實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)器材53.2 3.2 方法方法 A. A. 革蘭氏染色法革蘭氏染色法3.2.1 3.2.1 制片。

4、制片。涂片涂片: :取一潔凈載片，用記號(hào)筆從中分成兩個(gè)區(qū)域，取一潔凈載片，用記號(hào)筆從中分成兩個(gè)區(qū)域，在兩區(qū)中央各滴一小滴生理鹽水，按無(wú)菌操作要求用接種環(huán)取平在兩區(qū)中央各滴一小滴生理鹽水，按無(wú)菌操作要求用接種環(huán)取平板菌落邊緣的菌體少許，置于生理鹽水中涂抹成約板菌落邊緣的菌體少許，置于生理鹽水中涂抹成約1.5 cm1.5 cm均勻薄均勻薄膜；膜；干燥干燥: :自然干燥自然干燥( (或電吹風(fēng)干燥或電吹風(fēng)干燥) )；固定：固定：將涂面朝上，通過(guò)將涂面朝上，通過(guò)火焰火焰2 23 3次次。（教師示范）。（教師示范）3.2.2 3.2.2 初染。滴加草酸銨結(jié)晶紫染液覆蓋涂菌部位，染色初染。滴加草酸銨結(jié)晶紫染

5、液覆蓋涂菌部位，染色1 12min2min后傾去染液，水洗后傾去染液，水洗。（教師示范）（教師示范）63.2.3 3.2.3 媒染。先用盧戈氏碘液沖去載片上殘留水跡，再用碘液媒染。先用盧戈氏碘液沖去載片上殘留水跡，再用碘液覆蓋覆蓋1 min，水洗。水洗。3.2.4 3.2.4 脫色。滴加脫色。滴加95%95%乙醇脫色乙醇脫色202030s ,30s ,立即水洗。立即水洗。3.2.5 3.2.5 復(fù)染。用吸水紙吸去載片上殘留水，用番紅復(fù)染液染色復(fù)染。用吸水紙吸去載片上殘留水，用番紅復(fù)染液染色2 min，水洗，吸干水跡。水洗，吸干水跡。73.2 3.2 方法方法 B. B. 芽胞染色法芽胞染色法3

6、.2.1 3.2.1 制片：按革蘭氏染色方法操作。制片：按革蘭氏染色方法操作。 （取菌落中央和邊緣的菌體）（取菌落中央和邊緣的菌體）3.2.2 3.2.2 染色。用試管夾夾住載片，滴加孔雀綠染液染色。用試管夾夾住載片，滴加孔雀綠染液3 35 5滴于涂菌滴于涂菌部位，置酒精燈火焰上加熱部位，置酒精燈火焰上加熱5 58 8 min ，加熱過(guò)程要隨時(shí)滴加染色加熱過(guò)程要隨時(shí)滴加染色液，防止煮沸或干涸。液，防止煮沸或干涸。3.2.3 3.2.3 水洗：載片冷卻后水洗。水洗：載片冷卻后水洗。3.2.4 3.2.4 復(fù)染。用番紅染色液染色復(fù)染。用番紅染色液染色1 min 。水洗，干燥。水洗，干燥。83.2

7、3.2 方法方法 C. C. 細(xì)菌形態(tài)觀察細(xì)菌形態(tài)觀察低倍鏡觀察低倍鏡觀察4，10 高倍鏡觀察高倍鏡觀察（40，找到合適觀察目標(biāo)，移至視野中心），找到合適觀察目標(biāo)，移至視野中心） 油鏡觀察（油鏡觀察（100）將高倍鏡轉(zhuǎn)離工作位置，在要觀察的涂菌部位滴加一滴將高倍鏡轉(zhuǎn)離工作位置，在要觀察的涂菌部位滴加一滴鏡油，將油鏡轉(zhuǎn)至工作位置，聚光器升至最高，調(diào)節(jié)照明鏡油，將油鏡轉(zhuǎn)至工作位置，聚光器升至最高，調(diào)節(jié)照明度，調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)節(jié)器，使物像清晰。度，調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)節(jié)器，使物像清晰。繪圖繪圖在所觀察的圖像中選取典型部位繪圖，要求左眼觀察圖像，在所觀察的圖像中選取典型部位繪圖，要求左眼觀察圖像，右眼觀察繪圖；球菌應(yīng)注意長(zhǎng)度與直徑之比，球菌應(yīng)注意排右眼觀察繪圖；球菌應(yīng)注意長(zhǎng)度與直徑之比，球菌應(yīng)注意排列狀況；有芽胞的細(xì)菌應(yīng)標(biāo)記芽胞和營(yíng)養(yǎng)體的位置；圖下方列狀況；有芽胞的細(xì)菌應(yīng)標(biāo)記芽胞和營(yíng)養(yǎng)體的位置；圖下方應(yīng)標(biāo)明圖的名稱、放大倍數(shù)、染色結(jié)果。應(yīng)標(biāo)明圖的名稱、放大倍數(shù)、染色結(jié)果。9實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告1 1 用文字描述實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒉牧吓c方法用文字描述實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒉牧吓c方法.