實(shí)驗(yàn)八.中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)

1、實(shí)驗(yàn)七思考題：為何常用密度為實(shí)驗(yàn)七思考題：為何常用密度為1.077土土0.002的分層液分離人單個(gè)核細(xì)胞？的分層液分離人單個(gè)核細(xì)胞？答：這和人外周血中各類成分密度有關(guān)。答：這和人外周血中各類成分密度有關(guān)。 血小板：血小板： 1.030-1.035，淋巴細(xì)胞：，淋巴細(xì)胞： 1.075-1.090，粒細(xì)胞，粒細(xì)胞 : 1.092，紅細(xì)胞：，紅細(xì)胞： 1.093，因此將血液疊加在因此將血液疊加在1.077土土0.002的分層液上面，的分層液上面，經(jīng)離心會(huì)單個(gè)核細(xì)胞會(huì)處于血漿和分離液中間，經(jīng)離心會(huì)單個(gè)核細(xì)胞會(huì)處于血漿和分離液中間，從而達(dá)到分離目的。從而達(dá)到分離目的。實(shí)驗(yàn)八實(shí)驗(yàn)八 中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè)

2、中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測(cè) 臨床微生物及免疫學(xué)檢驗(yàn)教研室臨床微生物及免疫學(xué)檢驗(yàn)教研室一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?.1.掌握中性粒細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)的原理。掌握中性粒細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)的原理。2.2.熟悉中性粒細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)的操作方法。熟悉中性粒細(xì)胞吞噬功能試驗(yàn)的操作方法。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理 中性粒細(xì)胞具有吞噬細(xì)菌和異物顆粒的能力。中性粒細(xì)胞具有吞噬細(xì)菌和異物顆粒的能力。 在體外將中性粒細(xì)胞與細(xì)菌或異物顆粒共同孵育在體外將中性粒細(xì)胞與細(xì)菌或異物顆粒共同孵育后，即可被中性粒細(xì)胞吞噬、攝入，顯微鏡觀察可后，即可被中性粒細(xì)胞吞噬、攝入，顯微鏡觀察可見(jiàn)中性粒細(xì)胞內(nèi)有細(xì)菌或異物顆粒。見(jiàn)中性粒細(xì)胞內(nèi)有細(xì)菌或異

3、物顆粒。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理l計(jì)算吞噬有細(xì)菌或異物顆粒的中性粒細(xì)胞數(shù)占計(jì)算吞噬有細(xì)菌或異物顆粒的中性粒細(xì)胞數(shù)占中性粒細(xì)胞總數(shù)的百分率和每個(gè)中性粒細(xì)胞平中性粒細(xì)胞總數(shù)的百分率和每個(gè)中性粒細(xì)胞平均吞噬細(xì)菌或異物顆粒數(shù)，可反應(yīng)中性粒細(xì)胞均吞噬細(xì)菌或異物顆粒數(shù)，可反應(yīng)中性粒細(xì)胞的吞噬功能。的吞噬功能。 三、實(shí)驗(yàn)器材三、實(shí)驗(yàn)器材1.1.標(biāo)本：人抗凝血標(biāo)本：人抗凝血2.2.被吞噬物被吞噬物 ： 金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌3.3.培養(yǎng)基：肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)基：肉湯培養(yǎng)基4.4.試劑：瑞吉氏染液、無(wú)菌生理鹽水試劑：瑞吉氏染液、無(wú)菌生理鹽水5.5.器材：枸櫞酸鈉抗凝管、試管、載玻片、器材：枸櫞酸鈉抗凝管、試管

4、、載玻片、 恒溫箱、顯微鏡等。恒溫箱、顯微鏡等。1.1.制備被吞噬物：制備被吞噬物：金葡菌接種于肉湯培養(yǎng)金葡菌接種于肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng)基中培養(yǎng)12h12h后，置后，置44備用。備用。2. 2. 準(zhǔn)備被檢測(cè)標(biāo)本：準(zhǔn)備被檢測(cè)標(biāo)本：枸櫞酸鈉抗凝血枸櫞酸鈉抗凝血1ml1ml。四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)步驟3.3. 混合培養(yǎng)：混合培養(yǎng)：在在1ml1ml抗凝血中加入金葡菌懸抗凝血中加入金葡菌懸液液3-53-5滴，混勻，置滴，混勻，置37 37 水浴箱中，孵育水浴箱中，孵育30min30min，期間每，期間每10min10min搖勻搖勻1 1次。次。4.4. 制備細(xì)胞推片，瑞制備細(xì)胞推片，瑞- -吉

5、染色：吉染色：5.5. 油鏡觀察：油鏡觀察：計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)200200個(gè)中性粒細(xì)胞，記錄個(gè)中性粒細(xì)胞，記錄吞噬細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)和每個(gè)中性粒細(xì)胞吞入吞噬細(xì)菌的細(xì)胞數(shù)和每個(gè)中性粒細(xì)胞吞入的細(xì)菌數(shù)。的細(xì)菌數(shù)。五、結(jié)果判斷五、結(jié)果判斷l(xiāng)中性粒細(xì)胞核深染且分葉，胞漿淡紅色，細(xì)菌呈紫色中性粒細(xì)胞核深染且分葉，胞漿淡紅色，細(xì)菌呈紫色-l吞噬百分率（吞噬百分率（% %）= = 100100l吞噬指數(shù)吞噬指數(shù)= =l參考區(qū)間：吞噬率參考區(qū)間：吞噬率（9191 + + 5.85.8）% %；吞噬指數(shù)大于；吞噬指數(shù)大于1 1計(jì)數(shù)的中性粒細(xì)胞吞噬細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)的中性粒細(xì)胞吞噬細(xì)菌總數(shù)計(jì)數(shù)的中性粒細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)的中性粒細(xì)胞總數(shù)吞噬細(xì)

6、菌的中性粒細(xì)胞數(shù)吞噬細(xì)菌的中性粒細(xì)胞數(shù)計(jì)數(shù)的中性粒細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)的中性粒細(xì)胞總數(shù) -六、注意事項(xiàng)六、注意事項(xiàng)1.1.抗凝劑的選擇：抗凝劑的選擇：肝素抗凝時(shí)白細(xì)胞著色不佳，肝素抗凝時(shí)白細(xì)胞著色不佳，經(jīng)瑞經(jīng)瑞- -吉染色后易出現(xiàn)深藍(lán)色背景；吉染色后易出現(xiàn)深藍(lán)色背景；EDTAEDTA影響影響 白細(xì)胞的吞噬功能；構(gòu)椽酸鈉抗凝最合適。白細(xì)胞的吞噬功能；構(gòu)椽酸鈉抗凝最合適。2.2.細(xì)菌的濃度和孵育溫度：細(xì)菌的濃度和孵育溫度：3.3.血涂片的質(zhì)量：血涂片的質(zhì)量：七、應(yīng)用與評(píng)價(jià)七、應(yīng)用與評(píng)價(jià)l本試驗(yàn)可用于檢測(cè)有吞噬功能障礙的病癥，如結(jié)合本試驗(yàn)可用于檢測(cè)有吞噬功能障礙的病癥，如結(jié)合NBTNBT（硝基藍(lán)四氮唑還原試驗(yàn)），在一定程度上可（硝基藍(lán)四氮唑還原試驗(yàn)），在一定程度上可反映機(jī)體的免疫功能狀態(tài)，也可用于有免疫調(diào)節(jié)活反映機(jī)體的免疫功能狀態(tài)，也可用于有免疫調(diào)節(jié)活性藥物的篩選。性藥物的篩選。l此法操作簡(jiǎn)便，不需特殊設(shè)備，省時(shí)，費(fèi)用低廉。此法操作簡(jiǎn)便，不需特殊設(shè)備，省