鼠尾提取DNA方法

1、轉(zhuǎn)基因小鼠篩選一一鼠尾提取基因組DNA方法1 .小鼠分籠后打耳標(biāo)，剪取小鼠尾尖3mm-5mm左右于1.5mL離心管中，標(biāo)記耳標(biāo)號(hào)。2 .配置消化液，每管加入消化液0.5mL,55C,3-5h,或放置過(guò)夜。（最長(zhǎng)可放置3天）。3 .加1倍體積（0.5mL）PCI（F層?體），上下顛倒10余次。（PCI可分裝出一些現(xiàn)用，以免操作不慎污染）。4 .室溫15000rpm離心，10min。5 .小心取上清約0.4mL入新管，依次標(biāo)號(hào)，加入異丙醇0.4mL,上下倒轉(zhuǎn)10次左右。6 .4，15000rpm離心，5min。7 .棄上清，濾紙吸干，加入70%ZJI0.5mL,將管底沉淀彈起，上下顛倒幾次，洗滌。

2、8 .4，15000rpm離心，5-7min。9 .棄上清，瞬時(shí)離心，用槍吸干剩余液體，后經(jīng)空氣干燥5-10min。10 .加入1*TE60-170人一般加100人振蕩30min溶解，于4c冰箱保存。注意事項(xiàng)：1 .小鼠耳標(biāo)與管號(hào)一一對(duì)應(yīng)，在剪尾或提取DNA過(guò)程中如發(fā)生混淆，則應(yīng)重新剪尾。2 .配置消化液時(shí)，最后加蛋白酶K,配置完成后混合均勻再分裝；分裝后依次檢查，確認(rèn)每管的鼠尾都浸入在消化液中。盡量多配一些消化液，以免不夠。3 .提取DNA之前，先檢查鼠尾消化情況，過(guò)夜消化后，一般只能觀察到少量骨骼及鼠尾毛發(fā)，如觀察到鼠尾組織，說(shuō)明消化不完全，可能是時(shí)間不夠或消化液配置不正確。4 .由于實(shí)驗(yàn)

3、中用到的PCI異丙醇等對(duì)身體有害，因此在提取DNA和配置PCI時(shí)，應(yīng)注意防護(hù)，戴好口罩和乳膠手套。5 .實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)輕拿輕放，避免液體灑出，沾濕手套，洗去Marker筆字跡等情況的發(fā)生。為了防止耳標(biāo)號(hào)被擦掉，最好連號(hào)擺放。6 .吸取上清一步中，應(yīng)保證上清質(zhì)量，避免下層雜質(zhì)的吸入，如不慎吸入，應(yīng)將樣品重新離心。7 .DNA沉淀一般呈白色或半透明膠狀，混有雜質(zhì)時(shí)可能帶有黑色，提取過(guò)程中如觀察不到沉淀，應(yīng)做好標(biāo)記，重新剪尾。8 .DNA樣品保存于4c冰箱，保存時(shí)應(yīng)標(biāo)明剪尾日期，小鼠品系等各項(xiàng)資料，以便查找。9 .使用離心機(jī)時(shí)，離心管盡量分散放。10 .吸取揮發(fā)有腐蝕性液體時(shí)，應(yīng)用帶過(guò)濾裝置的槍頭，

4、以免腐蝕槍。（如酚、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿等。）11 各管之間應(yīng)隔開(kāi)放，以免加液時(shí)混淆。12 .固定一把槍專(zhuān)用于吸取腐蝕性液體，如酚等。消化液配方1管20*SSC0.5MEDTA10%SDSMQH2025區(qū)L1 WL2/ 450L415lL0.1mL4L40L0.2mL20lL1磐10L0.1mL0.5mL50lL20r20L0.2mL1.0mL100lL4管1 mL40L0.4mL1.1 mL200lL6管1.5 mL3/ 460M0.6mL3.0mL300區(qū)L8管2mL80L0.8mL4.0mL400wL0.25mL0.5mL1MTris-Hcl101.66mL4.15mL8.3mL16.6mL25.8mL33.2mLProteinaseK5LPCI配方：Tris-TE配方