SMP-QC-0030-00細菌內(nèi)毒素標準品與檢測試劑標準管理規(guī)程

1、標題細菌內(nèi)毒素標準品與檢測試劑標準管理規(guī)程編寫部門頒發(fā)部門生效日期編碼質(zhì)量控制部質(zhì)量保證部日期：20年 月日SMP-QC-0030-00起草人：審核人：審核人：批準人：日期：20年 月日日期：20年 月日日期：20年 月日日期：20年 月日分發(fā)部門及份數(shù)：質(zhì)量保證部（）份，質(zhì)量控制部（）份，生產(chǎn)技術(shù)部（）份，工程設備部（）份，綜合管理部（）份。1.0目的1.1建立細菌內(nèi)毒素標準品與檢驗試劑的管理標準操作規(guī)程。2.0范圍2.1適用于公司細菌內(nèi)毒素標準品與檢測試劑的采購、接收、保存、使用、銷毀、去熱 原物品的存放、邕試劑靈敏度復核及工作標準品效價的標定。3.0職責3.1質(zhì)量控制（QC）部對本操作規(guī)

2、程實施負責。4.0定義4.1 細菌內(nèi)毒素國家標準品系自大腸埃希菌提取精制而成，用于標定、復核、仲裁邕試 劑靈敏度和標定細菌內(nèi)毒素工作標準品的效價。4.2 細菌內(nèi)毒素工作標準品系以細菌內(nèi)毒素國家標準品為基準物質(zhì)標定其效價，用于試 驗中靈敏度的復核、干擾試驗及各種陽性對照。4.3 細菌內(nèi)毒素國家標準品或細菌內(nèi)毒素工作標準品應使用由中國藥品生物制品檢定所 統(tǒng)一發(fā)放的標準品。5.0規(guī)程5.1 細菌內(nèi)毒素標準品與檢測試劑的采購5.1.1 細菌內(nèi)毒素國家標準品或細菌內(nèi)毒素工作標準品按一年的使用量做計劃。5.1.2 邕試劑、緩沖液、細菌內(nèi)毒素檢查用水、無熱原吸頭、無熱原安甑等按半年的使 用量做計劃，從可靠的

3、供應商處購買，如湛江安度斯生物有限公司、湛江博康海洋生 物有限公司。5.2 細菌內(nèi)毒素標準品與檢測試劑的接收5.2.1 細菌內(nèi)毒素標準品與檢測試劑購回后，由生測組組長協(xié)同采購管理人員驗收。5.2.2 驗收項目包括：運輸條件、內(nèi)包裝、名稱、數(shù)量、規(guī)格、有效期、生產(chǎn)廠家及外 觀檢查等是否復核請購要求或相應規(guī)定，如購買的是細菌內(nèi)毒素工作標準品，則必須標題細菌內(nèi)毒素標準品與檢測試劑標準管理 規(guī)程編碼SMP-QC-0030-00有廠家提供的內(nèi)毒素工作標準品效價分析證明書，驗收不合格的試劑或標準品直接由采購退貨處理或按相關標準操作規(guī)程銷毀處理。5.2.3 試劑登記項目包括：試劑名稱、批號、數(shù)量、規(guī)格、有效

4、期、生產(chǎn)廠家、接收時 問等。5.3 細菌內(nèi)毒素標準品與檢測試劑的保存5.3.1 登記過的試劑才能進行保存。5.3.2 標準品、緩沖液于冰箱中冷藏保存，不得冷凍。邕試劑的保存見廠家的說明書。5.3.3 細菌內(nèi)毒素檢查用水、無熱原吸頭、無熱原安甑等應存放在去熱原物品專柜中， 此柜僅存放已去熱原的物品。5.3.4 若使用的為細菌內(nèi)毒素國家標準品，復溶后應在瓶上貼上開口簽。標明開口日期和使用人，封口，直立于冰箱中冷藏28c保存，一般不得過14天,或根據(jù)生產(chǎn)廠家的建議進行保存。若為細菌內(nèi)毒素工作標準品，為一次性使用。5.3.5 使用過的緩沖液、復溶后的邕試劑在瓶上標明開瓶日期，用封口膜封口，保持直立，于

5、-20 C保存3個月，或根據(jù)生產(chǎn)廠家的建議進行。5.4 邕試劑復核及工作標準品的標定5.4.1 邕試劑靈敏度的復核見細菌內(nèi)毒素凝膠檢查法標準操作規(guī)程。5.4.1.1 每購入一批新的邕試劑應進行邕試劑靈敏度檢查，當邕試劑靈敏度復核要求， 方可用于細菌內(nèi)毒素檢查試驗。5.4.1.2 如果該批邕試劑靈敏度不符合要求，則換用國家標準品進行靈敏度復核試驗。5.4.1.3 換用國家標準品后，邕試劑靈敏度符合要求，則認為該批邕試劑符合要求。所 用到的工作標準品應進行銷毀，并將結(jié)果反饋給生產(chǎn)廠家。5.4.1.4 換用國家標準品后，邕試劑靈敏度仍不符合要求，判該批邕試劑不符合要求，不得使用。與生產(chǎn)廠家聯(lián)系退貨處

6、理。5.4.2 工作標準品標定5.4.2.1 以EU為單位的工作標準品標化5.4.2.1.1 國家標準品標準溶液的制備取國家標準品一支，輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，然后用砂輪在瓶頸上滑痕，75%酒精棉球擦拭后開啟，開啟過程中防止玻璃屑落入瓶內(nèi)。開啟后按規(guī)格加入規(guī)定量的無熱源水溶解內(nèi)容物，用封口膜封嚴，置旋渦混合器上混懸 30min。然后進行稀釋，制備標題細菌內(nèi)毒素標準品與檢測試劑標準管理 規(guī)程編碼SMP-QC-0030-00成2人、入、0.5入、0.25人四個濃度的細菌內(nèi)毒素標準溶液，每稀釋一步至少在旋渦混合器上混懸30秒。5.4.2.1.2 待標化工作標準品溶液的制備取工作標準品4支，輕彈瓶壁使

7、粉末落入瓶底，然后用砂輪在瓶頸上劃痕，75%酒精棉球擦拭后開啟，開啟過程中防止玻璃屑落入瓶內(nèi)。開啟后按規(guī)格加入規(guī)定量的無熱 源水溶解內(nèi)容物，用封口膜封嚴，置旋渦混合器上混懸15min。然后分別進行稀釋，制備成2卜 卜0.5卜0.25人四個濃度的細菌內(nèi)毒素溶液，每稀釋一步至少在旋渦混合 器上混懸30秒。每次臨用前先將對應的標準液混懸30秒。5.4.2.1.3 標化工作標準品用邕試劑的準備取規(guī)格為0.1ml/支的邕試劑84支，輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，然后用砂輪在瓶頸上滑痕，75%酒精棉球擦拭后開啟，開啟過程中防止玻璃屑落入瓶內(nèi)。每支加入 0.1ml檢 查用水使內(nèi)容物充分溶解，避免產(chǎn)生氣泡。如果邕試

8、劑規(guī)格不是0.1ml/支，取若干支按其標示量加入檢查用水按 0.1ml/支的方法充分溶解后混合在一起，然后分裝到凝集 管（10mrK 75mm）中，每支凝集管分裝0.1ml。要求至少分裝84管備用。5.4.2.1.4 加樣將已充分溶解的邕試劑84支放在試管架上，排成21列（每列4支管），其中前4列 每列每支管分別加入0.1ml的2入、入、0.5入、0.25人的內(nèi)毒素國家標準品標準溶液，第 5列以后每4列分別按每支工作標準品每列每支管分別加入0.1ml的2人入0.5人、0.25人待標化工作標準品溶液。第 21列4支管加如入0.1ml的檢查用水，然后用封口 膜封好凝集管管口，將該架子放回內(nèi)毒素檢查

9、儀上，同時調(diào)整每支凝集管的高度，使每支管內(nèi)的反應混合液液面全部沒入37c土C水浴液面以下2厘米，保溫 60min及min后觀察結(jié)果。5.4.2.1.5 觀察結(jié)果將每支凝集管分別輕輕取出，避免振動，緩緩倒轉(zhuǎn) 180。觀察：管內(nèi)形成凝膠，并且 凝膠不變形，不從管壁上脫落者為陽性，記錄為（+）;未形成凝膠或凝膠不能保持完整并從管壁上脫落者為陰性，記錄為（-）o5.4.2.1.6 試驗結(jié)果計算如果兩組最大濃度2.0人均為陽性，最低濃度0.25人均為陰性，陰性對照4管均為陰性 時，試驗結(jié)果才有效。此時按下式計算國家標準品溶液的反應終點濃度的幾何平均值標題細菌內(nèi)毒素標準品與檢測試劑標準管理 規(guī)程編碼SMP

10、-QC-0030-00Er和每個待標化工作標準品溶液的反應終點濃度的幾何平均值Eci。然后再取4個待標化工作標準品的平均值作為最終結(jié)果EC2。E R=lg-1 （EXr/4）E ci =lg-1 （EXc/4）式中Xr和Xc/分別國家標準品溶液的反應終點濃度的對數(shù)值（lg）和待標化工作標準 品溶液的反應終點濃度的對數(shù)值（lg）。反應終點是系列遞減的內(nèi)毒素標準溶液中最后 一個呈陽性結(jié)果的濃度。5.4.2.1.7 試驗結(jié)果的判定當Er在0.5入2.0入（包括0.5人和2.0入）范圍內(nèi)時，且當Ec2在0.5Er2.0 Er （包 括0.5Er和2.0 Er）時，則判定待標定工作標準品標化合格；否則判

11、為不合格。5.4.3 標示單位為ng的工作標準品的標化所有的處理程序和以 EU為單位的工作標準品的標化操作基本相同，只有結(jié)果判定如 下差異：以凝膠法確定了國家標準品和待標化工作標準品的終點，國家標準品以 EU/ml為單 位，工作標準品以ng/ml為單位，并且以4支工作標準品作為實驗的幾何平均值為結(jié) 果。然后進行相應的換算。舉例：國家標準品和工作標準品的凝膠終點濃度分別為0.3EU/ml和0.018ng/ml ,每ng相當?shù)腅U單位數(shù)計算如下：0.3EU/ml/0.018ng/ml=16.7 EU/ ng5.5 細菌內(nèi)毒素標準品與檢測試劑的使用5.5.1 使用前5.5.1.1 根據(jù)試驗所需的各試

12、劑的量向生測組組長領取，并在其對應的記錄上登記各試 劑的領取數(shù)量。5.5.1.2 冷凍保存的試劑平衡至室溫后才能用于試驗。5.5.1.3 檢查試劑是否澄清，如出現(xiàn)渾濁或絮狀物等現(xiàn)象，應廢棄或銷毀，不得使用過 期的試劑。5.5.2 使用過程中如出現(xiàn)標準品的灑落，馬上使用1N氫氧化鈉溶液來擦拭污染區(qū)域，再用自來水擦拭。5.5.3 使用過的吸頭、未使用完的無熱原水均直接廢棄。標題細菌內(nèi)毒素標準品與檢測試劑標準管理 規(guī)程編碼SMP-QC-0030-005.6 細菌內(nèi)毒素標準品的銷毀5.6.1 對過期的或不可用的細菌內(nèi)毒素標準品進行銷毀。5.6.2 以不可見形式存在(如吸附于瓶壁上)的標準品，鋁箔封口，

13、直接經(jīng) 250c下1 小時除熱原程序，進行銷毀。5.6.3 以干粉形式存在的標準品，加少量水溶解后于60c烘干，再按5.6.2銷毀。5.6.4 以溶液形式存在的標準品，于 60c烘干，按5.6.2銷毀。5.6.5 銷毀的細菌內(nèi)毒素標準品須在其接收與發(fā)放記錄上予以記錄。5.7 去熱原物品的存放5.7.1 取備用的試管、鋁箔于不銹鋼飯盒內(nèi)，鋁箔包裝后，置電熱恒溫干燥箱，用經(jīng)驗證的除熱原程序250 c干烤1小時去除熱原，自然冷卻。5.7.2 取出已除熱原的物品，做好標識，存放于貼有去熱原物品存放柜”的區(qū)域內(nèi)。5.7.3 細菌內(nèi)毒素檢查用水、無熱原吸頭、無熱原試管等也存放在去熱原物品專柜中。此柜僅存放

14、已去熱原的物品。5.7.4 試驗結(jié)束后，所有用過的試管均須用重銘酸鉀洗液清洗，用自來水沖洗至中性， 用純化水清洗三次。烘干，備用。如使用的是無熱原安甑，試驗結(jié)束后可直接棄去。5.7.5 開封后未使用完的細菌內(nèi)毒素檢查用水廢棄處理。5.7.6 未使用的試管放置24小時后重新去熱原處理。5.7.7 未使用的已剪開封口袋的吸頭，直接廢棄。5.7.8 已到保存期的細菌內(nèi)毒素檢查用水、無熱原吸頭直接廢棄。6.0附錄無7.0相關的記錄7.1 細菌內(nèi)毒素標準品驗收記錄(SMP-QC-0030-01 )7.2 細菌內(nèi)毒素標準品接收與發(fā)放記錄(SMP-QC-0030-02 )7.3 邕試劑接收與發(fā)放記錄(SMP-QC-0030-03 )7.4 細菌內(nèi)毒素檢查用水接收與發(fā)放記錄(SMP-QC-003