原生質(zhì)體的分離與融合

1、關(guān)于原生質(zhì)體的分離與融合關(guān)于原生質(zhì)體的分離與融合現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一頁(yè)，共37頁(yè)什么是原生質(zhì)體什么是原生質(zhì)體 原生質(zhì)體，是指出去細(xì)胞壁的植物細(xì)胞的部分。原生質(zhì)體，是指出去細(xì)胞壁的植物細(xì)胞的部分。由由Hanstein 1980年提出年提出在適當(dāng)條件下，原生質(zhì)體可以成功培養(yǎng)長(zhǎng)出細(xì)胞壁，并通過(guò)細(xì)胞在適當(dāng)條件下，原生質(zhì)體可以成功培養(yǎng)長(zhǎng)出細(xì)胞壁，并通過(guò)細(xì)胞分裂。分裂。原生質(zhì)體不僅對(duì)細(xì)胞融合研究有價(jià)值，且能通過(guò)裸露的質(zhì)膜獲得外原生質(zhì)體不僅對(duì)細(xì)胞融合研究有價(jià)值，且能通過(guò)裸露的質(zhì)膜獲得外源源DNA、細(xì)胞器、細(xì)菌和病毒顆粒等。、細(xì)胞器、細(xì)菌和病毒顆粒等?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二頁(yè)，共37頁(yè)一、原生質(zhì)體分離一、原生質(zhì)體分離

2、原生質(zhì)體分離的基本原則是原生質(zhì)體分離的基本原則是 保證原生質(zhì)體不受傷害并不損害其再生能力保證原生質(zhì)體不受傷害并不損害其再生能力。1. 機(jī)械法機(jī)械法 只有儲(chǔ)藏組織中較大的、高度液泡化的細(xì)胞才能用于分離原生質(zhì)只有儲(chǔ)藏組織中較大的、高度液泡化的細(xì)胞才能用于分離原生質(zhì)體，如洋蔥球莖鱗片、蘿卜根、甜菜根等；體，如洋蔥球莖鱗片、蘿卜根、甜菜根等； 缺點(diǎn)：產(chǎn)量低；方法枯燥無(wú)力；因破碎細(xì)胞釋放物的存在，原生缺點(diǎn)：產(chǎn)量低；方法枯燥無(wú)力；因破碎細(xì)胞釋放物的存在，原生質(zhì)體活力低。質(zhì)體活力低。2. 酶法酶法 Cocking 在在1960年證實(shí)了可用酶分離原生質(zhì)體。年證實(shí)了可用酶分離原生質(zhì)體。Takabe等等1968年

3、首次用商業(yè)酶試劑分離原生質(zhì)體，并在年首次用商業(yè)酶試劑分離原生質(zhì)體，并在1971年獲得再生年獲得再生植株。植株。缺點(diǎn)是：不純酶制劑所含的雜質(zhì)可能會(huì)對(duì)原生質(zhì)體產(chǎn)生不同程度缺點(diǎn)是：不純酶制劑所含的雜質(zhì)可能會(huì)對(duì)原生質(zhì)體產(chǎn)生不同程度的毒害作用。的毒害作用。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三頁(yè)，共37頁(yè)原生質(zhì)體的分離原生質(zhì)體的分離現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四頁(yè)，共37頁(yè)二、影響原生質(zhì)體分離的因素二、影響原生質(zhì)體分離的因素原生質(zhì)體分離時(shí)主要考慮取材、酶的種類、純度、酶液的滲透原生質(zhì)體分離時(shí)主要考慮取材、酶的種類、純度、酶液的滲透壓、酶解時(shí)間、溫度等。壓、酶解時(shí)間、溫度等。1 組織和細(xì)胞材料的生理狀態(tài)組織和細(xì)胞材料的生理狀態(tài) 植物植物幼苗

4、或新生枝的完全伸展葉片幼苗或新生枝的完全伸展葉片的葉肉組織是分離原生質(zhì)體的葉肉組織是分離原生質(zhì)體的最方便、最合適的植物材料。葉肉細(xì)胞排列松散，酶試劑很的最方便、最合適的植物材料。葉肉細(xì)胞排列松散，酶試劑很容易達(dá)到細(xì)胞壁。用于分離原生質(zhì)體的愈傷組織或懸浮細(xì)胞應(yīng)容易達(dá)到細(xì)胞壁。用于分離原生質(zhì)體的愈傷組織或懸浮細(xì)胞應(yīng)當(dāng)處于生長(zhǎng)早期或指數(shù)生長(zhǎng)期。當(dāng)處于生長(zhǎng)早期或指數(shù)生長(zhǎng)期。 采用采用愈傷組織或懸浮細(xì)胞愈傷組織或懸浮細(xì)胞，采用其材料可以避免植株生長(zhǎng)環(huán)境，采用其材料可以避免植株生長(zhǎng)環(huán)境的不良影響，可以常年供應(yīng)，易于控制新生細(xì)胞的年齡，處理的不良影響，可以常年供應(yīng)，易于控制新生細(xì)胞的年齡，處理時(shí)操作方便，無(wú)

5、需消毒。時(shí)操作方便，無(wú)需消毒?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五頁(yè)，共37頁(yè)二、影響原生質(zhì)體分離的因素二、影響原生質(zhì)體分離的因素2 酶酶纖維素和半纖維素是細(xì)胞壁的初生結(jié)構(gòu)和次生結(jié)構(gòu)的成分，纖維素和半纖維素是細(xì)胞壁的初生結(jié)構(gòu)和次生結(jié)構(gòu)的成分，果膠類物質(zhì)是連接細(xì)胞胞間層的成分。果膠類物質(zhì)是連接細(xì)胞胞間層的成分。纖維素酶（降解構(gòu)成細(xì)胞壁的纖維素）、半纖維素酶、果膠纖維素酶（降解構(gòu)成細(xì)胞壁的纖維素）、半纖維素酶、果膠酶（使細(xì)胞從組織中分開(kāi)，以及細(xì)胞與細(xì)胞分開(kāi)）酶（使細(xì)胞從組織中分開(kāi)，以及細(xì)胞與細(xì)胞分開(kāi)）酶活性與酶活性與pH有關(guān)，有關(guān)，4.76.0，溫度一般在，溫度一般在2530現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六頁(yè)，共37頁(yè)二、影響原生質(zhì)

6、體分離的因素二、影響原生質(zhì)體分離的因素3 滲透劑滲透劑 原生質(zhì)體直接釋放到培養(yǎng)基中會(huì)破裂，因此，在分離原生質(zhì)體直接釋放到培養(yǎng)基中會(huì)破裂，因此，在分離原生質(zhì)體期間，須對(duì)原來(lái)細(xì)胞壁機(jī)械維持壓力用原生質(zhì)體原生質(zhì)體期間，須對(duì)原來(lái)細(xì)胞壁機(jī)械維持壓力用原生質(zhì)體分離混合液以及后來(lái)培養(yǎng)基的適當(dāng)滲透壓代替。在合適的分離混合液以及后來(lái)培養(yǎng)基的適當(dāng)滲透壓代替。在合適的滲透壓溶液中，剛分離的原生質(zhì)體看起來(lái)是球狀的滲透壓溶液中，剛分離的原生質(zhì)體看起來(lái)是球狀的?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七頁(yè)，共37頁(yè)二、影響原生質(zhì)體分離的因素二、影響原生質(zhì)體分離的因素4 原生質(zhì)體的純化原生質(zhì)體的純化 酶消化后得到的混合物含有亞細(xì)胞碎片、未消化的細(xì)胞

7、、酶消化后得到的混合物含有亞細(xì)胞碎片、未消化的細(xì)胞、破碎的和完整的原生質(zhì)體。可通過(guò)對(duì)此混合物通過(guò)過(guò)濾、離心、破碎的和完整的原生質(zhì)體。可通過(guò)對(duì)此混合物通過(guò)過(guò)濾、離心、漂洗聯(lián)合的方法進(jìn)行純化。漂洗聯(lián)合的方法進(jìn)行純化。1） 收集：原生質(zhì)體混合液用濾網(wǎng)（收集：原生質(zhì)體混合液用濾網(wǎng)（40100m）去掉沒(méi)）去掉沒(méi)有降解的細(xì)胞及組織，收集濾液。有降解的細(xì)胞及組織，收集濾液。2）洗滌：將網(wǎng)下物低速離心，去掉上清液，再加無(wú)酶液的）洗滌：將網(wǎng)下物低速離心，去掉上清液，再加無(wú)酶液的CPW液懸起起原生質(zhì)體，再離心，棄上清，重復(fù)幾次即可。液懸起起原生質(zhì)體，再離心，棄上清，重復(fù)幾次即可。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八頁(yè)，共37頁(yè)3）純

8、化（上浮法和下沉法）純化（上浮法和下沉法）上浮法是將酶解的原生質(zhì)體與蔗糖溶液上浮法是將酶解的原生質(zhì)體與蔗糖溶液（23%左右）混合。左右）混合。下沉法是講原生質(zhì)體與下沉法是講原生質(zhì)體與13%的甘露醇混合，的甘露醇混合，然后加到然后加到23%的蔗糖溶液頂部，形成一個(gè)的蔗糖溶液頂部，形成一個(gè)界面。界面。兩種方法中，均在離心兩種方法中，均在離心510分鐘后，在蔗分鐘后，在蔗糖溶液頂部形成一條原生質(zhì)體帶。用吸管糖溶液頂部形成一條原生質(zhì)體帶。用吸管將帶輕輕吸出來(lái)，懸浮離心，稀釋后用于將帶輕輕吸出來(lái)，懸浮離心，稀釋后用于培養(yǎng)。培養(yǎng)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九頁(yè)，共37頁(yè)二、影響原生質(zhì)體分離的因素二、影響原生質(zhì)體分離的

9、因素5 原生質(zhì)體的活力測(cè)定和密度原生質(zhì)體的活力測(cè)定和密度 原生質(zhì)體的真正活力使原生質(zhì)體有能力通過(guò)持續(xù)有絲分原生質(zhì)體的真正活力使原生質(zhì)體有能力通過(guò)持續(xù)有絲分裂，再生成愈傷組織，并最終再生成植株。裂，再生成愈傷組織，并最終再生成植株。 測(cè)定原生質(zhì)體活力的方法主要有：測(cè)定原生質(zhì)體活力的方法主要有：FDA（熒光素二乙酸）（熒光素二乙酸）染色法；酚藏紅花（染色法；酚藏紅花（CFW）染色法；測(cè)定呼吸強(qiáng)度法等。）染色法；測(cè)定呼吸強(qiáng)度法等?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十頁(yè)，共37頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十一頁(yè)，共37頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十二頁(yè)，共37頁(yè)影響原生質(zhì)體分離的因素影響原生質(zhì)體分離的因素6 培養(yǎng)基成分培養(yǎng)基成分 培養(yǎng)基中應(yīng)當(dāng)去

10、除銨，因?yàn)樗鼘?duì)原生質(zhì)體的生存是有害的，而鐵、鋅培養(yǎng)基中應(yīng)當(dāng)去除銨，因?yàn)樗鼘?duì)原生質(zhì)體的生存是有害的，而鐵、鋅的含量也應(yīng)當(dāng)減少。另外，鈣的濃度應(yīng)當(dāng)比通常培養(yǎng)細(xì)胞所需的的含量也應(yīng)當(dāng)減少。另外，鈣的濃度應(yīng)當(dāng)比通常培養(yǎng)細(xì)胞所需的 濃度增加濃度增加24倍，提高鈣的濃度能改善膜的穩(wěn)定性。倍，提高鈣的濃度能改善膜的穩(wěn)定性。 葡萄糖是最好最可靠的碳源，其次為蔗糖。葡萄糖是最好最可靠的碳源，其次為蔗糖。7 環(huán)境因子環(huán)境因子 一般來(lái)說(shuō)，剛開(kāi)始培養(yǎng)時(shí)高光強(qiáng)會(huì)抑制原生質(zhì)體的生長(zhǎng)，因此應(yīng)先一般來(lái)說(shuō)，剛開(kāi)始培養(yǎng)時(shí)高光強(qiáng)會(huì)抑制原生質(zhì)體的生長(zhǎng)，因此應(yīng)先在黑暗或弱光下培養(yǎng)幾天，再將其轉(zhuǎn)移到一般光強(qiáng)下培養(yǎng)。溫度范圍在黑暗或弱光下培

11、養(yǎng)幾天，再將其轉(zhuǎn)移到一般光強(qiáng)下培養(yǎng)。溫度范圍2028度適宜，度適宜，pH范圍范圍5.55.9適宜。適宜。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十三頁(yè)，共37頁(yè)三、原生質(zhì)體培養(yǎng)三、原生質(zhì)體培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)1. 液體淺層培養(yǎng)（液體淺層培養(yǎng)（Liquid thin layer culture）原生質(zhì)體純化后，將原生質(zhì)體懸浮于液體培養(yǎng)基中，取少許于原生質(zhì)體純化后，將原生質(zhì)體懸浮于液體培養(yǎng)基中，取少許于培養(yǎng)皿底部形成很薄的一層，封口培養(yǎng)。培養(yǎng)皿底部形成很薄的一層，封口培養(yǎng)。2. 固體培養(yǎng)（固體培養(yǎng)（Solid culture）也叫瓊脂糖平板法或包埋培養(yǎng)法。將原生質(zhì)體懸浮于液體培養(yǎng)也叫瓊脂糖平板法或包埋培養(yǎng)法。將原生

12、質(zhì)體懸浮于液體培養(yǎng)基后，與凝固劑（瓊脂或瓊脂糖）按一定比例混合，在培養(yǎng)皿基后，與凝固劑（瓊脂或瓊脂糖）按一定比例混合，在培養(yǎng)皿底部形成一薄層，凝固后封口培養(yǎng)。底部形成一薄層，凝固后封口培養(yǎng)。3. 固液雙層培養(yǎng)法（固液雙層培養(yǎng)法（Solid over liquid culture）即先在培養(yǎng)皿底部鋪一層固體培養(yǎng)基，待凝固后再在其上進(jìn)行液體淺層培養(yǎng)。即先在培養(yǎng)皿底部鋪一層固體培養(yǎng)基，待凝固后再在其上進(jìn)行液體淺層培養(yǎng)。固體培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分可以被液體層中的原生質(zhì)體吸收利用，而原生質(zhì)體固體培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分可以被液體層中的原生質(zhì)體吸收利用，而原生質(zhì)體產(chǎn)生的有毒物質(zhì)可以被固體培養(yǎng)基吸收。產(chǎn)生的有毒物質(zhì)可

13、以被固體培養(yǎng)基吸收?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十四頁(yè)，共37頁(yè)細(xì)胞再生細(xì)胞再生 （1）細(xì)胞壁形成）細(xì)胞壁形成不同植物原生質(zhì)體再生細(xì)胞壁所需時(shí)間不一樣，從幾小時(shí)到幾天。原生質(zhì)體失去其圓不同植物原生質(zhì)體再生細(xì)胞壁所需時(shí)間不一樣，從幾小時(shí)到幾天。原生質(zhì)體失去其圓球形特征表明了新細(xì)胞壁的再生。簡(jiǎn)單鑒別壁再生的方法是用熒光增白劑（球形特征表明了新細(xì)胞壁的再生。簡(jiǎn)單鑒別壁再生的方法是用熒光增白劑（CFW）染）染色法檢測(cè)到。色法檢測(cè)到。（2）細(xì)胞分裂）細(xì)胞分裂第一次細(xì)胞分裂一般發(fā)生在第一次細(xì)胞分裂一般發(fā)生在27d內(nèi)，分裂活躍的細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的原生質(zhì)體與葉片內(nèi)，分裂活躍的細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的原生質(zhì)體與葉片高度分化細(xì)胞的原生質(zhì)體相

14、比，前者進(jìn)入第一次細(xì)胞分裂較快。高度分化細(xì)胞的原生質(zhì)體相比，前者進(jìn)入第一次細(xì)胞分裂較快。（3）植株再生）植株再生具有再生能力的原生質(zhì)體就會(huì)不斷分裂形成多細(xì)胞團(tuán)。當(dāng)細(xì)胞團(tuán)進(jìn)一步發(fā)育成為具有再生能力的原生質(zhì)體就會(huì)不斷分裂形成多細(xì)胞團(tuán)。當(dāng)細(xì)胞團(tuán)進(jìn)一步發(fā)育成為肉眼可見(jiàn)的小愈傷組織，要及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基（肉眼可見(jiàn)的小愈傷組織，要及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基（Differentiation medium）中，培養(yǎng)與再生過(guò)程同一般的愈傷組織培養(yǎng)。中，培養(yǎng)與再生過(guò)程同一般的愈傷組織培養(yǎng)。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十五頁(yè)，共37頁(yè)體細(xì)胞雜交體細(xì)胞雜交 離體條件下，通過(guò)分離體細(xì)胞原生質(zhì)體融合產(chǎn)生雜合離體條件下，通過(guò)分離體細(xì)胞原生質(zhì)

15、體融合產(chǎn)生雜合體，再通過(guò)其異核體的發(fā)育形成雜種植株的技術(shù)被稱體，再通過(guò)其異核體的發(fā)育形成雜種植株的技術(shù)被稱為為體細(xì)胞雜交體細(xì)胞雜交。這個(gè)程序消除了雜交中性別因素?？朔挥H和性障這個(gè)程序消除了雜交中性別因素。克服不親和性障礙，成為植物基因的遺傳操作方法。礙，成為植物基因的遺傳操作方法。在體細(xì)胞雜交中，親本的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)在雜種細(xì)胞在體細(xì)胞雜交中，親本的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)在雜種細(xì)胞中融合了。有時(shí)，融合的雜合體中只有一個(gè)親本的核中融合了。有時(shí)，融合的雜合體中只有一個(gè)親本的核基因，而有兩個(gè)親本的細(xì)胞質(zhì)基因，這樣的雜種叫胞基因，而有兩個(gè)親本的細(xì)胞質(zhì)基因，這樣的雜種叫胞質(zhì)雜種。質(zhì)雜種。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十六頁(yè)，共

16、37頁(yè)體細(xì)胞雜交體細(xì)胞雜交 物種間生殖隔離阻礙了物種之間的基因交流，從而給作物種間生殖隔離阻礙了物種之間的基因交流，從而給作物育種帶來(lái)很大的局限性。原生質(zhì)體融合技術(shù)是實(shí)現(xiàn)基因重物育種帶來(lái)很大的局限性。原生質(zhì)體融合技術(shù)是實(shí)現(xiàn)基因重組的一條新途徑，目前利用細(xì)胞融合已從很多物種、屬間，組的一條新途徑，目前利用細(xì)胞融合已從很多物種、屬間，甚至科間獲得體細(xì)胞雜種，創(chuàng)造了一些自然界不存在的植物甚至科間獲得體細(xì)胞雜種，創(chuàng)造了一些自然界不存在的植物類型。類型。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十七頁(yè)，共37頁(yè)原生質(zhì)體融合技術(shù)體系大致包括三大環(huán)節(jié)：原生質(zhì)體融合技術(shù)體系大致包括三大環(huán)節(jié)：誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合選擇融合體或

17、雜種細(xì)胞選擇融合體或雜種細(xì)胞1.雜種植株的再生與鑒定雜種植株的再生與鑒定現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十八頁(yè)，共37頁(yè)(一一) 原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合 原生質(zhì)體融合（原生質(zhì)體融合（Protoplast fusion）是指不同種類的原生質(zhì)體）是指不同種類的原生質(zhì)體不經(jīng)過(guò)有性階段，在一定條件下融合創(chuàng)造雜種的過(guò)程。不經(jīng)過(guò)有性階段，在一定條件下融合創(chuàng)造雜種的過(guò)程。1 自然融合（自然融合（Spontaneous fusion） 來(lái)源于分裂旺盛細(xì)胞的原生質(zhì)體，自發(fā)融合的頻率較高。小孢來(lái)源于分裂旺盛細(xì)胞的原生質(zhì)體，自發(fā)融合的頻率較高。小孢子來(lái)源的原生質(zhì)體融合率可高達(dá)子來(lái)源的原生質(zhì)體融合率可高達(dá)5070%。實(shí)際上自然條件下

18、受精就。實(shí)際上自然條件下受精就是一種自發(fā)融合是一種自發(fā)融合。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十九頁(yè)，共37頁(yè)(一一) 原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合2 誘發(fā)融合誘發(fā)融合1) NaNO3處理法處理法 Power 于于1970年采用年采用NaNO3溶液誘導(dǎo)燕麥與玉米根尖原生質(zhì)體溶液誘導(dǎo)燕麥與玉米根尖原生質(zhì)體融合，首次得到融合體。融合，首次得到融合體。1972年，美國(guó)學(xué)者年，美國(guó)學(xué)者Carlson等采用此法獲等采用此法獲得郎氏煙草與粉藍(lán)得郎氏煙草與粉藍(lán) 煙草體細(xì)胞雜種，這是植物中首例體細(xì)胞雜種。煙草體細(xì)胞雜種，這是植物中首例體細(xì)胞雜種。 缺點(diǎn)是缺點(diǎn)是Na+造成膜電位的改變。融合頻率低。造成膜電位的改變。融合頻率低。2) 高

19、高pH-高鈣法高鈣法 Keller和和Melchers于于1973年報(bào)道采用高濃度年報(bào)道采用高濃度Ca2+的強(qiáng)堿溶液的強(qiáng)堿溶液處理煙草葉肉原生質(zhì)體，可以使融合頻率大幅度增加，達(dá)到處理煙草葉肉原生質(zhì)體，可以使融合頻率大幅度增加，達(dá)到50%。之后，采用此方法成功獲得了煙草種間和屬間體細(xì)胞雜。之后，采用此方法成功獲得了煙草種間和屬間體細(xì)胞雜種。種。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十頁(yè)，共37頁(yè)3)水溶性多聚體水溶性多聚體聚乙二醇（聚乙二醇（PEG）法）法 最成功的原生質(zhì)體融合技術(shù)。最成功的原生質(zhì)體融合技術(shù)。1976年年Kao發(fā)現(xiàn)用含高濃度發(fā)現(xiàn)用含高濃度Ca2+的強(qiáng)堿溶液清洗的強(qiáng)堿溶液清洗PEG誘導(dǎo)和原生質(zhì)誘導(dǎo)和原生

20、質(zhì)體時(shí)，融合頻率得到到進(jìn)一步提高，因而發(fā)展起高體時(shí)，融合頻率得到到進(jìn)一步提高，因而發(fā)展起高pH-PEG法。法。PEG誘導(dǎo)小麥與玉米融合產(chǎn)生不育雜種誘導(dǎo)小麥與玉米融合產(chǎn)生不育雜種現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十一頁(yè)，共37頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十二頁(yè)，共37頁(yè)4)電融合法（電融合法（Electrofusion）主要是雙向電泳法，其基本原理：主要是雙向電泳法，其基本原理：與與PEG融合比較起來(lái)，電融合有三大優(yōu)點(diǎn)：一是不存在對(duì)細(xì)胞的毒害問(wèn)題；融合比較起來(lái)，電融合有三大優(yōu)點(diǎn)：一是不存在對(duì)細(xì)胞的毒害問(wèn)題；二是融合效率高；三是融合技術(shù)操作簡(jiǎn)便。二是融合效率高；三是融合技術(shù)操作簡(jiǎn)便?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十三頁(yè)，共37頁(yè)電融合的基

21、本過(guò)程：電融合的基本過(guò)程：細(xì)胞膜的接觸：當(dāng)原生質(zhì)體置于電導(dǎo)率很低的溶液中時(shí)，電場(chǎng)細(xì)胞膜的接觸：當(dāng)原生質(zhì)體置于電導(dǎo)率很低的溶液中時(shí)，電場(chǎng)通電后，電流即通過(guò)原生質(zhì)體而不是通過(guò)溶液，其結(jié)果是原生通電后，電流即通過(guò)原生質(zhì)體而不是通過(guò)溶液，其結(jié)果是原生質(zhì)體在電場(chǎng)作用下極化而產(chǎn)生偶極子，從而使原生質(zhì)體緊密接質(zhì)體在電場(chǎng)作用下極化而產(chǎn)生偶極子，從而使原生質(zhì)體緊密接觸排列成串；觸排列成串；a.膜的擊穿：原生質(zhì)體成串排列后，立即給予高頻直流脈膜的擊穿：原生質(zhì)體成串排列后，立即給予高頻直流脈沖就可以使原生質(zhì)膜擊穿，從而導(dǎo)致兩個(gè)緊密接觸的細(xì)沖就可以使原生質(zhì)膜擊穿，從而導(dǎo)致兩個(gè)緊密接觸的細(xì)胞融合在一起。胞融合在一起?，F(xiàn)

22、在學(xué)習(xí)的是第二十四頁(yè)，共37頁(yè)體細(xì)胞雜種的特點(diǎn)體細(xì)胞雜種的特點(diǎn) 形態(tài)上的趨中性形態(tài)上的趨中性 變異幅度大變異幅度大 非整倍性非整倍性 雙親性狀的共顯性雙親性狀的共顯性 偏親現(xiàn)象偏親現(xiàn)象現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十五頁(yè)，共37頁(yè)雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)與雜種植株的鑒定雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)與雜種植株的鑒定 1雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng)雜種細(xì)胞的選擇系統(tǒng) 外觀選擇外觀選擇 互補(bǔ)選擇互補(bǔ)選擇 熒光標(biāo)記選擇熒光標(biāo)記選擇現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十六頁(yè)，共37頁(yè)2體細(xì)胞雜種的鑒定體細(xì)胞雜種的鑒定任何兩個(gè)種的原生質(zhì)體都可以融合在一起。然而，高等植物體細(xì)任何兩個(gè)種的原生質(zhì)體都可以融合在一起。然而，高等植物體細(xì)胞雜交的廣泛利用收到一些限制，包括非

23、整倍體、雜交的種障礙胞雜交的廣泛利用收到一些限制，包括非整倍體、雜交的種障礙和不可能從原生質(zhì)體再生成植株等。和不可能從原生質(zhì)體再生成植株等。雜種性的鑒定要求有證明兩個(gè)融合親本遺傳貢獻(xiàn)的清楚證據(jù)，而雜種雜種性的鑒定要求有證明兩個(gè)融合親本遺傳貢獻(xiàn)的清楚證據(jù)，而雜種性只能來(lái)源于整倍體，而不能來(lái)源于非整倍體。性只能來(lái)源于整倍體，而不能來(lái)源于非整倍體?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十七頁(yè)，共37頁(yè)形態(tài)鑒定：根據(jù)雙親形態(tài)鑒定：根據(jù)雙親的形態(tài)學(xué)性狀觀察進(jìn)的形態(tài)學(xué)性狀觀察進(jìn)行鑒定。行鑒定。雜種在形態(tài)上往往介雜種在形態(tài)上往往介于雙親之間，包括株于雙親之間，包括株型、葉形、花器官等型、葉形、花器官等現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十八頁(yè)，共3

24、7頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十九頁(yè)，共37頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十頁(yè)，共37頁(yè)細(xì)胞學(xué)鑒定：細(xì)胞器鑒定、染色體鑒定細(xì)胞學(xué)鑒定：細(xì)胞器鑒定、染色體鑒定。染色體計(jì)數(shù)：染色體數(shù)目是雙親之和，或少染色體計(jì)數(shù)：染色體數(shù)目是雙親之和，或少1至幾條染色體。所以，細(xì)胞至幾條染色體。所以，細(xì)胞融合可以創(chuàng)造非整倍體。代換系、染色體片段置換系等珍貴的遺傳學(xué)研究融合可以創(chuàng)造非整倍體。代換系、染色體片段置換系等珍貴的遺傳學(xué)研究材料。這些遺傳材料對(duì)于基因定位、確定染色體與分子標(biāo)記連鎖群的關(guān)系、材料。這些遺傳材料對(duì)于基因定位、確定染色體與分子標(biāo)記連鎖群的關(guān)系、育種等有重要應(yīng)用價(jià)值。育種等有重要應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十一頁(yè)，共37頁(yè)生

25、化鑒定：同功酶鑒定生化鑒定：同功酶鑒定分子鑒定：分子鑒定：RFLP鑒定、鑒定、RAPD標(biāo)記鑒定標(biāo)記鑒定是最有效的檢測(cè)手段，尤其是細(xì)胞學(xué)無(wú)法確定是雜種的是最有效的檢測(cè)手段，尤其是細(xì)胞學(xué)無(wú)法確定是雜種的時(shí)候，分子標(biāo)記更有用，它能檢測(cè)出遺傳物質(zhì)的細(xì)小重時(shí)候，分子標(biāo)記更有用，它能檢測(cè)出遺傳物質(zhì)的細(xì)小重組。組?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十二頁(yè)，共37頁(yè)體細(xì)胞雜種的遺傳特性體細(xì)胞雜種的遺傳特性 1細(xì)胞分裂與染色體丟失細(xì)胞分裂與染色體丟失 如果細(xì)胞分裂而核不發(fā)生融合，在以后的發(fā)育過(guò)程中就會(huì)有兩種結(jié)果，如果細(xì)胞分裂而核不發(fā)生融合，在以后的發(fā)育過(guò)程中就會(huì)有兩種結(jié)果，一是細(xì)胞分裂幾次以后即停止生長(zhǎng)從而導(dǎo)致死亡；二是在發(fā)育過(guò)程中某一一是細(xì)胞分裂幾次以后即停止生長(zhǎng)從而導(dǎo)致死亡；二是在發(fā)育過(guò)程