生物電鏡重點

1、 生物電鏡重點1、 亞顯微結(jié)構(gòu)：介于細(xì)胞水平和大分子水平之間的結(jié)構(gòu)，簡稱亞微結(jié)構(gòu)，亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，細(xì)微結(jié)構(gòu)。2、 超微結(jié)構(gòu)：嚴(yán)格的講是指分子水平的結(jié)構(gòu)。 #3、 分辨率：D=0.61/N*sin(/2)，其中D為分辨率，為光波波長，N為介質(zhì)折射率，為物鏡鏡口角。1m=10dm=100cm=1000mm=106um=109nm=1012pm=1015fm=1018am #4、 光學(xué)顯微鏡分辨本領(lǐng)為光源波長的一半。（用香柏油的情況下）#5、 分辨本領(lǐng)指一個顯微鏡能分辨的最小微體，從理論上而言，指能力。由于各種原因，在像中所再現(xiàn)的最小細(xì)微部分可能大于或小于儀器的分辨本領(lǐng)，叫做分辨率，指效果。肉眼分辨率0

2、.2mm，光鏡的分辨率0.2um，電鏡的分辨率0.2nm。M有效=肉眼/儀器，指分辨率，肉眼的分辨率為0.2mm，電鏡的分辨率為0.2nm，故而該電鏡的分辨率為100W倍。#6、 電子顯微鏡的分類：一，透射電鏡（tem）：收集直接透過樣品的電子并成像。二，掃描式電子顯微鏡（sem）：將從樣品表面反射出的電子收集并使他們成像。三：掃描透射電子顯微鏡：兼具以上二者功能。#7、 電鏡技術(shù)的應(yīng)用：一，線粒體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、溶酶體、中心體等細(xì)胞器還有細(xì)胞骨架系統(tǒng)；二，生物大分子：核酸，蛋白質(zhì)，脂質(zhì)；三，細(xì)胞中的化學(xué)成分：ATP、CAMP、含硫蛋白質(zhì)，粘多糖、Ca2+，Mg2+，F(xiàn)e2+，Na2+，K

3、+；四，病毒；五，直接研究活細(xì)胞。#8、 電鏡技術(shù)的未來：一，縱向聯(lián)系不斷深入，用不同手段對同一種材料多角度的觀察，如超薄切片法，冷凍蝕刻法。二，橫向聯(lián)系不斷擴展，多種顯微技術(shù)和其他物理技術(shù)與電鏡技術(shù)相結(jié)合，研究某一課題，如掃描隧道顯微鏡，原子力顯微術(shù)。三，儀器將繼續(xù)更新，四，樣品制備技術(shù)不斷完善。#9、 Airy盤半徑通常以第一級暗環(huán)的半徑R表示，R=0.612/n*sin，其中表示光在真空中的波長，表示入射孔徑角的一半，n表示透鏡與物體間介質(zhì)的折射系數(shù)。#10、 分辨本領(lǐng)等于Airy盤的半徑r，即Abbe公式=0.612/nsin，數(shù)值孔徑=nsin，提高分辨本領(lǐng)的方法：增大數(shù)值孔徑，減小

4、波長。#11、 光學(xué)顯微鏡的極限分辨本領(lǐng)不小于0.2um。放大極限倍數(shù)2000倍，提高分辨本領(lǐng)只能減小波長，可見光（0.39-0.76um）#12、 德布羅意波=h/mv，h普朗克常量，m指物質(zhì)質(zhì)量，v指物體速度#13、 電子波的波長比可見光短得多，這是電鏡分辨本領(lǐng)高的根本原因。對電子顯微鏡來說限制分辨本領(lǐng)的不是波長是透鏡像差。透鏡的極限分辨本領(lǐng)1.4A，點分辨本領(lǐng)3A。#14、 電子透鏡原理：帶電粒子在電場或磁場中發(fā)生偏轉(zhuǎn)，沿一光軸成旋轉(zhuǎn)對稱的電磁場，可以使從軸上一點發(fā)出的電子重新匯聚在中心軸的另一點上。電磁場對電子顯示出透鏡的作用，所以稱為電子透鏡?，F(xiàn)代電子顯微鏡主要利用磁透鏡。#15、

5、長磁透鏡能得到清晰的像，但是不能放大，對電子束有匯聚特性。短磁透鏡能放大像，其也能對電子束有匯聚特性。短磁透鏡是電鏡中實際采用的透鏡，但是其放大倍數(shù)較小。#16、 磁浸沒透鏡：將物體放在接近焦點的地方，即物體浸沒在透鏡的磁場中，強磁透鏡為電子顯微鏡采用。17、 透射電子顯微鏡結(jié)構(gòu)：鏡筒，真空系統(tǒng)，電子學(xué)系統(tǒng)。與光學(xué)顯微鏡相比，電子槍代替光源，玻璃透鏡用磁透鏡代替，觀察和記錄系統(tǒng)相似。#18、 鏡筒：包括電子束照明系統(tǒng)（電子槍，聚光鏡），樣品室，真空系統(tǒng)，成像系統(tǒng)（物鏡，中間鏡，投影鏡），記錄系統(tǒng)。19、 電子槍發(fā)射和加速電子，鎢絲為常用燈絲發(fā)射電子，電流加熱鎢絲至2200-2500K時產(chǎn)生熱電

6、子發(fā)射，電子發(fā)生在很大程度上取決于溫度。#20、 陽極：對電子起加速作用，采用負(fù)高壓，陽極為地電位，陰極負(fù)高壓。21、 柵極：又叫控制極，控制電子束的形狀和發(fā)射強度，穩(wěn)定燈絲加熱電流。22、 聚光鏡：將電子槍發(fā)射的電子束匯聚到樣品上，調(diào)節(jié)電子束孔徑角，電流密度和照明光斑的大小，一級聚光鏡能減小電子束直徑20-80倍，二級聚光鏡擴大電子束直徑1-2倍。#23、 換樣品室：又稱樣品室，載體為具有200目小孔的銅網(wǎng)，銅網(wǎng)直徑3mm，厚50-100um。具有氣鎖裝置，換樣品室可以只允許少量的空氣進(jìn)入鏡筒，以便在短時間內(nèi)回復(fù)工作真空。#24、 成像與放大裝置：物鏡：放大50倍；中間鏡放大3倍；中間鏡放大

7、15倍；投影鏡放大200倍，總共能放大500000倍。#25、 成像系統(tǒng)：物鏡，中間鏡，投影鏡等成像透鏡和消像散器組成，采用三級或四級成像系統(tǒng)，也有五級。成像原理：高壓電子槍高速電子束電磁透鏡樣品電子束發(fā)生投射熒光屏濃淡不同的圖像（濃淡不同的圖像反應(yīng)了樣品不同部位的物質(zhì)結(jié)構(gòu)）#26、 物鏡：對樣品的成像和放大。決定電鏡的分辨本領(lǐng)。27、 物鏡光闌：擋住散射的電子，提高圖像的反差，故又叫反差光闌。#28、 中間鏡：一個可變倍率的弱透鏡，以物鏡鏡像為物在投影鏡或第三透鏡的物平面上形成一個像，高分辨本領(lǐng)的電鏡有兩個中間鏡。29、 投影鏡：最后一級放大鏡。中間鏡和投影鏡也有光闌。30、 消像散器：減少

8、像散，物鏡必須要有消像散器，有時聚光鏡和中間鏡也有。31、 觀察室：內(nèi)有熒光屏與鉛玻璃窗。內(nèi)涂熒光物質(zhì)，電子束照射下可呈現(xiàn)終像，在主觀察窗外有兩個觀察放大鏡，可以把終像放大3-10倍。32、 照相裝置：電鏡照相與普通照相不同，圖像反襯度最低時才是正聚焦，底片還要經(jīng)過預(yù)干燥處理。33、 攝影室：在觀察室下方，把選擇好的像記錄在涂有電子感光乳膠的玻璃平板、軟片或膠卷上，在觀察室和攝影室之間裝有氣鎖裝置。34、 真空系統(tǒng)：從鏡筒中排出空氣和其他氣體。要求真空的原因：電子在行程內(nèi)不與任何粒子碰撞，不被散射；如果有氣體，會產(chǎn)生電離和放電；氣體分子腐蝕燈絲；殘余氣體聚集到樣品和光闌上會污染樣品，增加像散。

9、一般電鏡要求10-410-5。#35、 1托=1mmhg=133.32pa 1atm=760mmhg36、 真空系統(tǒng)采用兩級串聯(lián)，超高真空要三級串聯(lián)。從大氣壓獲得低真空，再從低真空獲得高真空。系統(tǒng)包括：前置泵，油擴散泵，真空系統(tǒng)電源，輔助電源。37、 前置泵：獲得低真空，簡單的旋片式機械泵。38、 油擴散泵：利用油分子在快速運動中能把較輕的空氣分子或水蒸氣分子帶到前置泵里，從而逐漸達(dá)到高真空。再次被加熱循環(huán)工作。在此泵內(nèi)，要有一定的冷卻水，防止油蒸汽過多污染鏡筒，前置泵需要開啟一段時間后才能開啟油泵。真空度能達(dá)10-639、 成像過程：有四種物理過程：吸收，散射，干涉，衍射。樣品室薄膜樣品，吸

10、收少，如果吸收過多會燒毀樣品。40、 彈性散射：一個高速運動的電子打入薄膜樣品的原子核，由于原子核的質(zhì)量比電子大很多，入射電子與核發(fā)生彈性碰撞，即彈性散射。電子不損失能量，方向偏轉(zhuǎn)。#41、 非彈性散射：一個電子與原子核外的一個電子碰撞，相互作用后快速電子將一部分能量交給核外電子。改變速度和方向。散射角越大，電子在物鏡后的焦面上離軸越遠(yuǎn)。當(dāng)散射角大到一定程度，被物鏡后焦面上的物鏡光闌所攔截，樣品的像就有一個暗點。電子散射形成圖像反差。#42、 影響散射的因素：一，總散射量與樣品厚度、密度、質(zhì)量與厚度的乘積成正比；二，原子核越大，被散射的可能行也就越大。質(zhì)量與厚度的乘積為質(zhì)量厚度。43、 振幅反

11、差：樣品各處質(zhì)量厚度不同，在熒光屏上就形成明暗不同的黑白圖像。44、 非染色情況下：原子間距是1A或更大些，原子核和電子的大小是10-510-6A，樣品對于入射電子來說幾乎是全空的空間，大量入射電子打在熒光屏上形成亮背景。45、 電子的運動可以看做電子波，則在電子與樣品的作用中形成投射波和散射波。#46、 相位反差：干涉波和透射波在振幅上表現(xiàn)出差別，在最終的像中就會出現(xiàn)亮暗不同的區(qū)域，這種反差就是相位反差。#47、 反差：指底片上相鄰的兩部分亮度的比，即樣品的像與其背景在亮度上的差別。透射電鏡圖像反差由振幅反差和相位反差兩部分組成。低原子序數(shù)的樣品（生物樣品），相位反差幾乎成了唯一的反差來源。

12、#48、 衍射：可以加強圖像的反差，但是像的分辨率下降。49、 生物樣品的圖像主要由振幅反差提供。彈性散射對提供反差有利，非彈性散射對提供反差不利。提高反差的方法：一，加入物鏡光闌（攔截部分大角度散射電子，使散射強的部位變暗，形成振幅反差限制照明孔徑角，提高分辨本領(lǐng)）二，提高樣品中某些部分的原子序數(shù)（用重金屬鹽染色鈾，鉛，鋨，比如正染色和負(fù)染色，或者重金屬投影噴涂法金，鉑對樣品進(jìn)行噴涂）三，選用較低的加速電壓（降低加速電壓可以增大彈性散射，有利于反差的提高，但是會使色差加大，分辨本領(lǐng)降低，故一般適用于低放大倍數(shù)）四，暗場顯微法：亮場像是直接透過樣品的電子和部分散射電子成像；暗場像是利用樣品的散

13、射電子所成的像，明暗與亮場像相反。暗場像反差高，但強度很低。五，適當(dāng)控制切片厚度，要高反差，就要切片厚些，但是太高電子束穿不過，而且增大色差。在50-60KV下，切片厚度在500-600A反差好。50、 由于電子透鏡存在的一系列缺陷，所引起的圖像偏離理想成像的現(xiàn)象叫做像差，包括幾何像差，色差和像散三種。#51、 幾何像差：在電子顯微鏡中，實際上電子束滿足旁軸條件并不夠好，引起的像差叫做幾何像差。#52、 色差：各個電子的速度嚴(yán)格來說是不同的，與速度對應(yīng)的電子波長就有一定的分散度，因而引起的像差成為色差。#53、 像散：因各種原因引起磁場不嚴(yán)格軸對稱，產(chǎn)生的像差叫做像散。#54、 掃描電鏡的基本

14、結(jié)構(gòu)（sem）：電子光學(xué)系統(tǒng)（電子槍、電磁透鏡、掃描線圈），樣品室，信號收集及顯示系統(tǒng)，真空系統(tǒng)，供電保護系統(tǒng)等。#55、 透射電鏡主要步驟：固定脫水塊染滲透和包埋聚合切片撈片染色鏡檢。#56、 固定：其目的是殺死組織，保存活體形態(tài)、結(jié)構(gòu)及其組成，防止在固定后的可能損傷，如自溶或被微生物侵襲。#57、 固定的方法：物理固定法：高溫、冷凍、干燥等物理手段?；瘜W(xué)固定法：用化學(xué)試劑來固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)。#58、 透射電鏡樣品主要的制備方法：滴樣法、投影法、超薄切片法、冷凍蝕刻法、電鏡放射自顯影、免疫電鏡和電鏡細(xì)胞化學(xué)。59、 固定劑：四氧化鋨、戊二醛、多聚甲醛、高錳酸鉀和重鉻酸鉀等。#60、 四氧化鋨：唯

15、一脂肪性物質(zhì)固定劑，對磷脂蛋白質(zhì)和核蛋白保護好。固定的組織不收縮、不膨脹、不變硬發(fā)脆。缺點是對糖原、核酸、微管固定作用較差，不適于超微細(xì)胞化學(xué)工作，分子量大，滲透能力差，大于1mm3組織塊固定不好，有揮發(fā)性，對粘膜有毒性，四氧化鋨固定之后必須用緩沖液或水沖洗后才能轉(zhuǎn)到酒精中脫水。#61、 戊二醛：對糖原，核酸，微管。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細(xì)胞基質(zhì)固定作用好。適于超微細(xì)胞化學(xué)研究，能較好保存蛋白質(zhì)。缺點是對脂類保護不好，不提供電子反差，對緩沖液要求高。62、 雙固定法：先用戊二醛固定后，再用四氧化鋨固定，兩種固定劑相互補充，取得好的固定效果。63、 甲醛：固定迅速，對酶活性保護比戊二醛好，經(jīng)濟方便。缺點是脫水

16、時細(xì)胞中的某些物質(zhì)流失，超微結(jié)構(gòu)保存不好，形成長度不均的聚合物，影響滲透結(jié)構(gòu)。其可作為前固定劑或與戊二醛組成混合固定液。#64、 緩沖液：常采用醋酸巴比妥緩沖液（為四氧化鋨緩沖液，不適用于戊二醛），磷酸緩沖液（臨時配制）。65、 脫水：除去細(xì)胞和組織中的游離液態(tài)水。用既能和水，也能和包埋介質(zhì)中單體相混合的液體（酒精和丙酮）代替樣品中的游離態(tài)水。在低溫（4）進(jìn)行，時間盡可能短。原因：為使包埋介質(zhì)完全滲入組織塊，水溶性包埋介質(zhì)可以不經(jīng)過脫水，濕樣品本身的反差很低。常用的有乙醇和丙酮，其他還有甲醇，異丙醇，包埋介質(zhì)。#66、 塊染：提高圖像的反差，脫水前或脫水時對組織塊的染色叫做塊染，切成片后的染色

17、叫做片染。#67、 滲透和包埋：用一種溶液或者混合液逐漸取代組織內(nèi)的脫水劑（或前介質(zhì)）使細(xì)胞內(nèi)外所有空隙都被這種液體充填叫做滲透，包埋是指將滲透好的樣品放入適當(dāng)?shù)哪＞咧校嗌习褚喊?，?jīng)加溫聚合形成一種固體基質(zhì)，牢固的支持組織，又不混亂其空間聯(lián)系。#68、 包埋介質(zhì)：現(xiàn)在常用的有環(huán)氧樹脂，還有聚酯樹脂和水溶性包埋介質(zhì)。環(huán)氧樹脂：指一族加熱后變硬的含有環(huán)氧基團的脂肪族合成樹脂，淡黃色或蜜糖色。#69、 增塑劑：又叫柔韌劑，防止組織太脆，增加聚合快的塑性，改善切割性能，常用鄰苯二甲酸二丁酯，其缺點是粘度較大，滲透過程慢，包埋塊機械彈性小，較硬，提供的反差小，必須進(jìn)行電子染色，其優(yōu)點是保存組織超微

18、結(jié)構(gòu)好。#70、 切片：切出500A左右厚的切片。準(zhǔn)備工作：載網(wǎng)的清洗，支持膜的制備，包埋塊的修整，切片刀的制作等。#71、 載網(wǎng)一般是銅網(wǎng)，其作用是，承載支持膜和樣品，照射到網(wǎng)孔中的電子，穿過樣品，成像，放大，樣品上的熱量傳走，減少樣品的熱漂移。#72、 銅網(wǎng)的網(wǎng)孔不足以平坦的支持切片。要在銅網(wǎng)上覆蓋一層透明的薄膜支持膜，其材料有火棉膠和聚乙烯醇縮甲醛，碳膜。#73、 切片刀的制備：玻璃刀，制作簡單價格便宜。#74、 修塊：將包埋快修成一定的形狀和大小，修成四邊角錐形。目的是除去組織塊周圍多余的包埋介質(zhì)，或不感興趣的部分，有一定的形狀，大小適合包埋塊，才能切出理想連續(xù)切片。75、 切片：超薄

19、切片機分為機械推進(jìn)式，熱膨脹式和冷縮式。#76、 撈片：用眉毛筆把碎片和厚片去掉。使超薄切片匯集于刀槽中間。用鑷子夾住銅網(wǎng)邊緣，使邊稍稍彎曲，而銅網(wǎng)是水平的。有膜面的朝下，水平至切片上方，讓銅網(wǎng)和切片平行，切片都集中在銅網(wǎng)的中央部位，快速讓銅網(wǎng)與切片接觸，切片牢固粘在銅網(wǎng)上，取出。切片面朝上，放在墊有干凈濾紙的培養(yǎng)皿中。77、 電子染色：對樣品進(jìn)行增強反差的處理，一般用重金屬鹽類做染色劑。在固定脫水時進(jìn)行塊染，在切成薄片時進(jìn)行片染。影響因素：包埋劑種類，染液PH值，濃度，染色溫度和時間等。#78、 常用的電子染色劑：鈾染色劑，鉛染色劑（應(yīng)用最廣泛，與含有還原鋨組織最有親和力），高錳酸鉀，磷鎢酸

20、，后兩個不常用。#79、 染色機理：染色劑和生物樣品成分以靜電力結(jié)合；絡(luò)合物或復(fù)合物的方式結(jié)合，金屬粒子選擇性沉著在特定部位上。最常用的染色劑是鉛鹽和鈾鹽。#80、 染色方法：高密度的重金屬染色劑和樣品的細(xì)微結(jié)構(gòu)成分結(jié)合，增加樣品局部的電子散射能力，是圖像反差增強。熒光屏上顯示正像，叫正染色。#81、 負(fù)染色：利用高密度的重金屬染色劑把生物樣品包繞，作為襯托，增加背景對電子的散射作用，生物樣品結(jié)構(gòu)卻相對多的通過電子，在熒光屏上形成暗背景的亮像。常用的負(fù)染色劑：磷鎢酸和磷鎢酸鉀。82、 透射電鏡制樣技術(shù)新進(jìn)展：冷凍電鏡技術(shù)：快速冷凍，冷凍超薄切片技術(shù)，冷凍斷裂和蝕刻技術(shù)。快速冷凍的目的是不讓樣品

21、內(nèi)形成大冰晶，避免細(xì)胞形態(tài)被破壞。#83、 冷凍斷裂和蝕刻原理：樣品冷凍真空噴鍍儀中冷凍斷裂斷面上細(xì)胞器和已凍結(jié)水分。加熱升溫冰升華細(xì)胞器膜結(jié)構(gòu)暴露出來蝕刻，切面上噴鍍一層鉑-碳投影膜復(fù)型，把復(fù)型膜下組織腐蝕掉復(fù)型膜撈到銅網(wǎng)上電鏡觀察。（圖像立體感強，分辨率高，并且樣品可長期保存。）#84、 掃描電鏡（SEM）樣品要求：固定和干燥狀態(tài)優(yōu)良，導(dǎo)電性能良好。#85、 常規(guī)制樣法：取樣緩沖液漂洗戊二醛固定鋨酸后固定梯度脫水醋酸戊酯代換液體二氧化碳臨界點干燥真空噴涂儀或離子濺射儀噴金等觀察。（常用來研究物體表面結(jié)構(gòu)）#86、 膠體金的好處：金化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，不影響樣品結(jié)構(gòu)，又有導(dǎo)電性；能產(chǎn)生大量二次電子

22、，提高圖像質(zhì)量；加強樣品對電子束轟擊抵抗力，減少電子束的損傷。#87、 酶細(xì)胞化學(xué)的基本原理：某種底物經(jīng)過酶的專一性作用初級反應(yīng)產(chǎn)物捕獲劑（重金屬離子）最終反應(yīng)產(chǎn)物（為不溶性電子致密物沉淀），在特定條件下，細(xì)胞內(nèi)某種酶在原位與特定的底物發(fā)生反應(yīng)后，再與捕獲劑進(jìn)行反應(yīng)，產(chǎn)生電鏡下能檢測到的電子致密物沉淀；沉淀部位代表了酶在細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)中定位；定位精確性決定于酶與底物反應(yīng)特異性。#88、 ATPase、腺苷酸環(huán)化酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、DNA酶、RNA酶、轉(zhuǎn)氨酶和酯酶等可以用鉛鹽沉淀法檢測。89、 酶電鏡細(xì)胞化學(xué)流程：取材固定（不用之前兩種電鏡方法中的固定劑，易傷酶，多采用多聚甲醛固定）孵育（

23、孵育液里有酶反應(yīng)底物和捕獲劑，如鉛，銅，鋇等）漂洗脫水包埋超薄切片與染色對照試驗（一定要有，與前兩種電鏡方法不同）。ATP經(jīng)過ATP酶反應(yīng)ADP+磷酸根鉛鹽捕獲磷酸鉛沉淀（可被電鏡檢出）90、 氧化酶反應(yīng)原理：雙氧水氧化酶氧化水+氧氣氧氣與DAB（四鹽酸3,3，二氨基聯(lián)苯胺）結(jié)合生成強嗜鋨性物質(zhì)，再經(jīng)過鋨固定后生成鋨黑為高電子密度物質(zhì)，被電鏡檢出。#91、 孚爾根-六亞甲四胺銀染色法（染DNA有一定的特異性）：作用機理，濃鹽酸處理樣品，使DNA水解并暴露醛基，醛基與底物中的銀離子發(fā)生沉淀反應(yīng)，生成還原銀電子致密物。具體方法：1，多聚甲醛或戊二醛固定，2，常規(guī)脫水包埋，超薄切片，撈片，3,5mo

24、l/L的鹽酸處理，20，1h，重蒸水清洗，4，六亞甲基胺銀溶液孵育，60，避光，1-2h。對照組是省去HCL水解。#92、 碳水化合物（淀粉，糖原，粘多糖，黏蛋白）染色方法：過碘酸氧化法，測定與糖殘基相鄰的醛基，羥基，氨基。步驟：多聚甲醛固定，包埋，切片，撈片至銅網(wǎng)上，1%過碘酸20-30min，室溫，水洗，六亞甲基胺銀溶液，避光，60，40-60min，自然冷卻，水洗：5%-10%硫代硫酸鈉溶液洗（除去表面螯合銀）。對照組是省去過碘酸水溶液處理。#93、 無機離子電鏡細(xì)胞化學(xué)：金屬離子與無機離子發(fā)生特異性結(jié)合的反應(yīng)，生成電子致密物沉淀，有沉淀的區(qū)域即是該無機離子在細(xì)胞中的定位。#94、 Ca

25、離子的定位：高度隔室化的，形成鈣離子濃度不同的鈣池；正常情況下，細(xì)胞質(zhì)，線粒體，核部位都有鈣的分布。原理：磷酸鹽或草酸鹽與鈣離子反應(yīng)，在原位形成沉淀，再與焦銻酸鹽反應(yīng)，替代磷酸鹽或草酸鹽形成焦銻酸鈣，焦銻酸鈣在電子顯微鏡下為電子致密物。操作流程：組織塊用0.09mol/L磷酸鉀與3%戊二醛固定，4，0.09mol/L磷酸鉀與4%蔗糖漂洗2-4h，三次。1.5%-2%焦銻酸鉀與1%鋨酸固定2h，4。蒸餾水漂洗3次，10min，脫水包埋切片染色或不染色。#95、 免疫電鏡細(xì)胞化學(xué)：免疫學(xué)技術(shù)與電鏡技術(shù)有機結(jié)合的產(chǎn)物。定義：利用抗體和抗原特異性結(jié)合的原理和免疫電鏡技術(shù)，在超微結(jié)構(gòu)水平上定位，定性及半

26、定量顯示抗原的技術(shù)方法。原理：使抗原與已標(biāo)記了電子致密物的抗體結(jié)合，在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生專一的免疫化學(xué)反應(yīng)，在用高分辨率的電子顯微鏡檢測免疫反應(yīng)產(chǎn)物。研究細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)抗原的定位和定性。應(yīng)用：抗原-抗體復(fù)合物的精細(xì)結(jié)構(gòu)；鑒定免疫損傷引起的細(xì)胞病理變化；研究細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及其功能。#96、 標(biāo)記的免疫球蛋白G：免疫球蛋白G能通過雙功能試劑（戊二醛）與鐵蛋白或某種酶結(jié)合，形成被電子致密物體標(biāo)記的抗體，分別稱為鐵蛋白標(biāo)記抗體和某種酶標(biāo)記抗體等。標(biāo)記物：鐵蛋白，鈾，金。辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶等酶類。#97、 免疫電鏡細(xì)胞化學(xué)發(fā)展：鐵蛋白標(biāo)記技術(shù)酶標(biāo)記免疫電鏡技術(shù)膠體金標(biāo)記免疫電鏡技術(shù)。#98、 免疫電鏡包埋前、后染色流程圖：包埋前染色：組織固定厚切片免疫染色包埋超薄切片透射電鏡觀察；包埋后染色：組織固定包埋超薄切片免疫染色透射電鏡觀察。#9