發(fā)酵生產(chǎn)的染菌及防治

1、關(guān)于發(fā)酵生產(chǎn)的染菌及防治現(xiàn)在學(xué)習的是第一頁，共101頁緒論緒論發(fā)酵染菌指在發(fā)酵過程中除了生產(chǎn)菌以外，還有其它微生發(fā)酵染菌指在發(fā)酵過程中除了生產(chǎn)菌以外，還有其它微生物浸入發(fā)酵系統(tǒng)生長繁殖，影響了純種培養(yǎng)過程。據(jù)報道內(nèi)青霉素物浸入發(fā)酵系統(tǒng)生長繁殖，影響了純種培養(yǎng)過程。據(jù)報道內(nèi)青霉素發(fā)酵染菌率為發(fā)酵染菌率為2%2%，鏈霉素、紅霉素、四環(huán)素發(fā)酵的染菌率為，鏈霉素、紅霉素、四環(huán)素發(fā)酵的染菌率為5%5%，谷氨酸發(fā)酵噬菌體感染率為，谷氨酸發(fā)酵噬菌體感染率為1%2%1%2%。 染菌對發(fā)酵過程有重大的影響，進而影響到發(fā)酵產(chǎn)率、提取染菌對發(fā)酵過程有重大的影響，進而影響到發(fā)酵產(chǎn)率、提取率、得率、產(chǎn)品質(zhì)量、三廢處理等

2、。率、得率、產(chǎn)品質(zhì)量、三廢處理等。在現(xiàn)有的科學(xué)技術(shù)條件下要做到完全不染菌是不可能在現(xiàn)有的科學(xué)技術(shù)條件下要做到完全不染菌是不可能。目前要做的是要提高生產(chǎn)技術(shù)水平，強化生產(chǎn)過程管理，。目前要做的是要提高生產(chǎn)技術(shù)水平，強化生產(chǎn)過程管理，防止發(fā)酵染菌的發(fā)生。如發(fā)生染菌，應(yīng)盡快找出污染的原因防止發(fā)酵染菌的發(fā)生。如發(fā)生染菌，應(yīng)盡快找出污染的原因，并采取相應(yīng)的有效措施，把發(fā)酵染菌造成的損失降低到最，并采取相應(yīng)的有效措施，把發(fā)酵染菌造成的損失降低到最小。小?，F(xiàn)在學(xué)習的是第二頁，共101頁1、染菌對發(fā)酵的影響 種子染菌 發(fā)酵染菌 (發(fā)酵前、中中、后）2、染菌檢查判斷 鏡檢 肉湯培養(yǎng) 平板/斜面培養(yǎng)現(xiàn)在學(xué)習的是第

3、三頁，共101頁3、染菌原因分析、染菌原因分析 菌體生長緩慢 種子培養(yǎng)異常 菌絲結(jié)團 泡沫多n異常現(xiàn)象 代謝不正常n 發(fā)酵異常 菌體生長差 PH過高或過低 溶解氧異常 菌濃過高或過低現(xiàn)在學(xué)習的是第四頁，共101頁4、常見染菌類型、常見染菌類型n青霉素青霉素 細短產(chǎn)氣桿菌、粗大產(chǎn)氣桿菌n鏈霉素鏈霉素 細短桿菌、假單孢桿菌、產(chǎn)氣桿菌、 粗大產(chǎn)氣桿菌n四環(huán)素四環(huán)素 雙球菌、芽孢桿菌、夾膜桿菌n檸檬酸檸檬酸 青霉菌n谷氨酸谷氨酸 噬菌體n酒類發(fā)酵酒類發(fā)酵 醋酸菌、乳酸菌規(guī)模規(guī)模：大量罐染菌，個別連續(xù)染菌、部分罐染菌現(xiàn)在學(xué)習的是第五頁，共101頁 無菌室 沙土管，試管 種子帶菌 培養(yǎng)基 空氣帶菌n污染途

4、徑 操作失誤 設(shè)備 噬菌體 種子培養(yǎng)期： 滅菌或棄之染菌挽救 發(fā)酵前期 ：滅菌后補加種子或分罐 中、后期：加殺菌劑或抗生素、通風攪拌 設(shè)備用12030min殺菌現(xiàn)在學(xué)習的是第六頁，共101頁6、污染不同種類和性質(zhì)的微生物的影響、污染不同種類和性質(zhì)的微生物的影響生產(chǎn)不同的品種，可污染不同種類和性生產(chǎn)不同的品種，可污染不同種類和性質(zhì)的微生物。不同污染時間，不同污染途質(zhì)的微生物。不同污染時間，不同污染途徑，污染不同菌量，不同培養(yǎng)基和培養(yǎng)條徑，污染不同菌量，不同培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件又可產(chǎn)生不同后果。件又可產(chǎn)生不同后果。現(xiàn)在學(xué)習的是第七頁，共101頁6.1、噬菌體的污染與防止、噬菌體的污染與防止 感染途徑：

5、 三個必要條件三個必要條件 環(huán)境帶菌、環(huán)境帶活菌、環(huán)境帶菌、環(huán)境帶活菌、 噬菌體與活菌接觸噬菌體與活菌接觸防止措施防止措施：（1）、以環(huán)境凈化為中心（2）、以“種”為中心（3）、以空氣凈化系統(tǒng)為中心（4）、以設(shè)備、管道為中心（5）、以管理為中心、輪換使用菌種Phage的主要生物學(xué)特征:（1）具有專一的寄主性，在菌體繁殖的情況下繁殖（2）不耐熱性，70 0C0C以上其基本失以上其基本失（3）pH穩(wěn)定性pH大于10，pH小于5 Phage急劇失活（4）不耐藥性（5）對干燥的穩(wěn)定性現(xiàn)在學(xué)習的是第八頁，共101頁現(xiàn)在學(xué)習的是第九頁，共101頁6.2污染其它雜菌污染其它雜菌 有些雜菌會使生產(chǎn)菌有些雜菌會

6、使生產(chǎn)菌自自溶溶產(chǎn)生大量泡產(chǎn)生大量泡沫，即使添加消泡劑也無法控制逃液，沫，即使添加消泡劑也無法控制逃液，影響發(fā)酵過程的通氣攪拌。影響發(fā)酵過程的通氣攪拌。 有的雜菌會使發(fā)酵液發(fā)臭、發(fā)酸，致有的雜菌會使發(fā)酵液發(fā)臭、發(fā)酸，致使使pH下降下降，使不耐酸的產(chǎn)品破壞。，使不耐酸的產(chǎn)品破壞。特別是特別是染芽孢桿菌，由于芽孢耐熱，不易殺死，染芽孢桿菌，由于芽孢耐熱，不易殺死，往往一次染菌后會反復(fù)染菌。往往一次染菌后會反復(fù)染菌。 現(xiàn)在學(xué)習的是第十頁，共101頁 n大罐染菌的挽救大罐染菌的挽救1、發(fā)酵前期；滅噬、易種法、用抗性菌2、發(fā)酵中期：易種、并罐3、發(fā)酵后期：實消放罐噬菌體的檢測噬菌體的檢測1、單層噬菌斑法

7、2、雙層噬菌斑3、平板交叉劃線法4、快速檢查法5、液體培養(yǎng)檢查法事前分別配制2%和1%瓊脂的兩種培養(yǎng)基，將2%的培養(yǎng)機作底層，鋪成平板待用，用生理鹽水洗下生長旺盛的細菌斜面，配制菌懸液。取此0.2ml和被測定的Phage液or待檢樣品液0.1ml于試管中，加入冷卻至45 0C0C的含的含1%1%的瓊脂培養(yǎng)基的瓊脂培養(yǎng)基34ml34ml混勻混勻后立即倒在后立即倒在2%2%的培養(yǎng)基平板上，保溫培養(yǎng)的培養(yǎng)基平板上，保溫培養(yǎng)1620hr1620hr，如有，如有Phage，在上層出現(xiàn)透明無菌的圓形or近圓形空斑。將Phage和菌懸液與含有0.50.8%瓊脂的培養(yǎng)基混合，在無菌載波片上凝固，經(jīng)過培養(yǎng)后在鏡

8、檢計數(shù)。用500ml三角瓶加50ml一級種子培養(yǎng)基，經(jīng)滅菌后，接入0.51ml需檢查之發(fā)酵液或種子液，置于搖床上培養(yǎng)1012hr,觀察液體渾濁度。若渾濁度OD正常，鏡檢無染菌，正常。若液體清，說明感染?，F(xiàn)在學(xué)習的是第十一頁，共101頁一、染菌對不同發(fā)酵過程的影響一、染菌對不同發(fā)酵過程的影響 第一節(jié)第一節(jié) 染菌對發(fā)酵的影響染菌對發(fā)酵的影響染菌對發(fā)酵過程的影響很大，但由于生產(chǎn)的產(chǎn)品不同、污染雜菌的種類染菌對發(fā)酵過程的影響很大，但由于生產(chǎn)的產(chǎn)品不同、污染雜菌的種類和性質(zhì)不同、染菌發(fā)生的時間不同以及染菌的途徑和程度不同，染菌造成的危害及和性質(zhì)不同、染菌發(fā)生的時間不同以及染菌的途徑和程度不同，染菌造成的

9、危害及后果不同。后果不同?，F(xiàn)在學(xué)習的是第十二頁，共101頁一、染菌對不同發(fā)酵過程的影響（續(xù)）：一、染菌對不同發(fā)酵過程的影響（續(xù)）： 放線菌由于生長的最適放線菌由于生長的最適pH為為7左右，因此染細菌為多左右，因此染細菌為多，而霉菌生長，而霉菌生長pH為為5左右，因此染酵母菌為多。左右，因此染酵母菌為多。 （1）抗生素：青霉素生產(chǎn)中污染產(chǎn)青霉素酶的雜菌（）抗生素：青霉素生產(chǎn)中污染產(chǎn)青霉素酶的雜菌（自身產(chǎn)生或誘導(dǎo)產(chǎn)生），在發(fā)酵過程中，都會使青霉素自身產(chǎn)生或誘導(dǎo)產(chǎn)生），在發(fā)酵過程中，都會使青霉素迅速分解破壞，使目的產(chǎn)物得率降低，危害十分嚴重。迅速分解破壞，使目的產(chǎn)物得率降低，危害十分嚴重。一般污染細

10、短產(chǎn)氣桿菌比粗大桿菌的危害大。一般污染細短產(chǎn)氣桿菌比粗大桿菌的危害大。 鏈霉素（污染細短桿菌、假單孢桿菌和產(chǎn)氣桿鏈霉素（污染細短桿菌、假單孢桿菌和產(chǎn)氣桿菌比粗大桿菌的危害大）、四環(huán)素（污染雙球菌菌比粗大桿菌的危害大）、四環(huán)素（污染雙球菌、芽孢桿菌和夾膜桿菌的危害較大）、紅霉素、芽孢桿菌和夾膜桿菌的危害較大）、紅霉素、卡那霉素等雖不象青霉素發(fā)酵染菌那樣一無所得卡那霉素等雖不象青霉素發(fā)酵染菌那樣一無所得，但也會造成不同程度的危害。灰黃霉素、制霉，但也會造成不同程度的危害。灰黃霉素、制霉菌素、克念菌素等抗生素抑制霉菌，對細菌幾乎菌素、克念菌素等抗生素抑制霉菌，對細菌幾乎沒有抑制和殺滅作用。沒有抑制和

11、殺滅作用。 現(xiàn)在學(xué)習的是第十三頁，共101頁 （2）核苷或核苷酸發(fā)酵過程：因生產(chǎn)菌多為營養(yǎng)缺）核苷或核苷酸發(fā)酵過程：因生產(chǎn)菌多為營養(yǎng)缺陷型微生物，其生長能力差，所需的培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，易陷型微生物，其生長能力差，所需的培養(yǎng)基營養(yǎng)豐富，易受到雜菌的污染，且染菌后，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分迅速被受到雜菌的污染，且染菌后，培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分迅速被消耗，嚴重抑制了生產(chǎn)菌的生長和代謝產(chǎn)物的生成，污染消耗，嚴重抑制了生產(chǎn)菌的生長和代謝產(chǎn)物的生成，污染芽孢桿菌的危害最大。芽孢桿菌的危害最大。 （3）檸檬酸等有機酸發(fā)酵過程：一般在產(chǎn)酸后發(fā)酵液）檸檬酸等有機酸發(fā)酵過程：一般在產(chǎn)酸后發(fā)酵液的的pH值比較低，雜菌生長十分困

12、難，在發(fā)酵中、后期不值比較低，雜菌生長十分困難，在發(fā)酵中、后期不太會發(fā)生染菌，主要是要預(yù)防發(fā)酵前期染菌，最怕污染青太會發(fā)生染菌，主要是要預(yù)防發(fā)酵前期染菌，最怕污染青霉菌。霉菌。 （4）谷氨酸發(fā)酵：周期短，生產(chǎn)菌繁殖快，培）谷氨酸發(fā)酵：周期短，生產(chǎn)菌繁殖快，培養(yǎng)基不太豐富，一般較少污染雜菌，但噬菌體污染養(yǎng)基不太豐富，一般較少污染雜菌，但噬菌體污染對谷氨酸發(fā)酵的影響較大。對谷氨酸發(fā)酵的影響較大。 （5）疫苗：多采用深層培養(yǎng)，是不經(jīng)提純直接使用的）疫苗：多采用深層培養(yǎng)，是不經(jīng)提純直接使用的產(chǎn)品，在其培養(yǎng)過程中，一旦污染雜菌，不論死菌、活菌產(chǎn)品，在其培養(yǎng)過程中，一旦污染雜菌，不論死菌、活菌或內(nèi)外毒素，

13、都應(yīng)全部廢棄?；騼?nèi)外毒素，都應(yīng)全部廢棄。現(xiàn)在學(xué)習的是第十四頁，共101頁三、染菌發(fā)生的不同時間對發(fā)酵的影響三、染菌發(fā)生的不同時間對發(fā)酵的影響 污染時間：是指用無菌檢測方法能檢測到的污染時間（污染時間：是指用無菌檢測方法能檢測到的污染時間（因為雜菌進入培養(yǎng)液后，需有足夠的生長、繁殖的時間才能顯現(xiàn)出來因為雜菌進入培養(yǎng)液后，需有足夠的生長、繁殖的時間才能顯現(xiàn)出來 ），不），不是雜菌浸入發(fā)酵系統(tǒng)的時間。是雜菌浸入發(fā)酵系統(tǒng)的時間。 顯現(xiàn)的時間又與污染菌量有關(guān)。顯現(xiàn)的時間又與污染菌量有關(guān)。3.1、種子培養(yǎng)期染菌、種子培養(yǎng)期染菌 種子培養(yǎng)期（主要是細胞生長繁殖期）：種子培養(yǎng)期（主要是細胞生長繁殖期）： 微生

14、物菌體濃度低、培養(yǎng)基營養(yǎng)十分豐富、培養(yǎng)液中幾微生物菌體濃度低、培養(yǎng)基營養(yǎng)十分豐富、培養(yǎng)液中幾乎沒有抗生素（產(chǎn)物）或只有很少抗生素（產(chǎn)物），故比乎沒有抗生素（產(chǎn)物）或只有很少抗生素（產(chǎn)物），故比較容易染菌，較容易染菌， 。措施：措施：一旦發(fā)現(xiàn)種子受到雜菌的污染，應(yīng)經(jīng)滅菌后棄去，一旦發(fā)現(xiàn)種子受到雜菌的污染，應(yīng)經(jīng)滅菌后棄去，并對種子罐、管道等進行仔細檢查和徹底滅菌。并對種子罐、管道等進行仔細檢查和徹底滅菌。現(xiàn)在學(xué)習的是第十五頁，共101頁3.2、發(fā)酵前期染菌、發(fā)酵前期染菌 雜菌與生產(chǎn)菌爭奪營養(yǎng)成分，干擾生產(chǎn)菌的繁殖和產(chǎn)物的形成雜菌與生產(chǎn)菌爭奪營養(yǎng)成分，干擾生產(chǎn)菌的繁殖和產(chǎn)物的形成，發(fā)酵前期最易染菌，

15、且危害最大。發(fā)酵前期最易染菌，且危害最大。措施：措施： 可以用降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整補料量，用酸堿調(diào)可以用降低培養(yǎng)溫度，調(diào)整補料量，用酸堿調(diào)pH值，縮值，縮短培養(yǎng)周期等措施予以補救。如果前期染菌，且培養(yǎng)基養(yǎng)料短培養(yǎng)周期等措施予以補救。如果前期染菌，且培養(yǎng)基養(yǎng)料消耗不多，可以重新滅菌，補加一些營養(yǎng)，重新接種再用。消耗不多，可以重新滅菌，補加一些營養(yǎng)，重新接種再用。現(xiàn)在學(xué)習的是第十六頁，共101頁3.3、發(fā)酵中期染菌、發(fā)酵中期染菌 嚴重干擾生產(chǎn)菌的繁殖和產(chǎn)物的生成嚴重干擾生產(chǎn)菌的繁殖和產(chǎn)物的生成。較嚴。較嚴重影響發(fā)酵液理化性質(zhì)，如雜菌大量產(chǎn)酸，重影響發(fā)酵液理化性質(zhì)，如雜菌大量產(chǎn)酸，pH下降；糖、氮消耗

16、快，發(fā)酵液發(fā)粘，菌絲自溶下降；糖、氮消耗快，發(fā)酵液發(fā)粘，菌絲自溶，產(chǎn)物分泌減少或停止，有時甚至會使已產(chǎn)生，產(chǎn)物分泌減少或停止，有時甚至會使已產(chǎn)生的產(chǎn)物分解。有時也會使發(fā)酵液發(fā)臭，產(chǎn)生大的產(chǎn)物分解。有時也會使發(fā)酵液發(fā)臭，產(chǎn)生大量泡沫。量泡沫。措施措施 降溫培養(yǎng)，減少補料，密切注意代謝降溫培養(yǎng)，減少補料，密切注意代謝變化情況。如果發(fā)酵單位到達一定水平可以變化情況。如果發(fā)酵單位到達一定水平可以提前放罐，或者抗生素生產(chǎn)中可以將高單位提前放罐，或者抗生素生產(chǎn)中可以將高單位的發(fā)酵液輸送一部分到染菌罐，抑制雜菌。的發(fā)酵液輸送一部分到染菌罐，抑制雜菌?，F(xiàn)在學(xué)習的是第十七頁，共101頁3.4、發(fā)酵后期染菌、發(fā)酵

17、后期染菌 發(fā)酵后期發(fā)酵液內(nèi)已積累大量的產(chǎn)物，特別發(fā)酵后期發(fā)酵液內(nèi)已積累大量的產(chǎn)物，特別是抗生素，對雜菌有一定的抑制或殺滅能力。是抗生素，對雜菌有一定的抑制或殺滅能力。 如雜菌量不大，可繼續(xù)發(fā)酵。如污染嚴重，如雜菌量不大，可繼續(xù)發(fā)酵。如污染嚴重，可采取措施提前放罐可采取措施提前放罐現(xiàn)在學(xué)習的是第十八頁，共101頁四、不同染菌途徑對發(fā)酵的影響四、不同染菌途徑對發(fā)酵的影響 種子帶菌：種子帶菌可使發(fā)酵染菌具有延續(xù)性種子帶菌：種子帶菌可使發(fā)酵染菌具有延續(xù)性 空氣帶菌：空氣帶菌也使發(fā)酵染菌具有延續(xù)性，導(dǎo)致空氣帶菌：空氣帶菌也使發(fā)酵染菌具有延續(xù)性，導(dǎo)致染菌范圍擴大至所有發(fā)酵罐染菌范圍擴大至所有發(fā)酵罐 培養(yǎng)基

18、或設(shè)備滅菌不徹底：一般為孤立事件，不具有延續(xù)性培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底：一般為孤立事件，不具有延續(xù)性 設(shè)備滲漏：這種途徑造成染菌的危害性較大設(shè)備滲漏：這種途徑造成染菌的危害性較大現(xiàn)在學(xué)習的是第十九頁，共101頁五、染菌對產(chǎn)物提取和產(chǎn)品質(zhì)量的影響五、染菌對產(chǎn)物提取和產(chǎn)品質(zhì)量的影響（1 1）對過濾的影響對過濾的影響 發(fā)酵液的粘度加大（菌體自溶、發(fā)酵不徹底）發(fā)酵液的粘度加大（菌體自溶、發(fā)酵不徹底）。 造成過濾時間拉長，影響設(shè)備的周轉(zhuǎn)使造成過濾時間拉長，影響設(shè)備的周轉(zhuǎn)使用，破壞生產(chǎn)平衡；大幅度降低過濾收率用，破壞生產(chǎn)平衡；大幅度降低過濾收率。（2 2）對提取的影響對提取的影響 溶媒萃?。阂装l(fā)生乳化溶媒萃

19、?。阂装l(fā)生乳化 離子交換：預(yù)處理分離不徹底的膠體物離子交換：預(yù)處理分離不徹底的膠體物質(zhì)（水溶性蛋白質(zhì)等）易粘附在離子交換質(zhì)（水溶性蛋白質(zhì)等）易粘附在離子交換樹脂表面或被離子交換樹脂吸附，大大降樹脂表面或被離子交換樹脂吸附，大大降低離子交換樹脂的交換量，洗脫時易混入低離子交換樹脂的交換量，洗脫時易混入產(chǎn)品中。產(chǎn)品中。現(xiàn)在學(xué)習的是第二十頁，共101頁（3 3）對產(chǎn)品質(zhì)量的影響對產(chǎn)品質(zhì)量的影響 因含有較多分離不徹底的蛋白質(zhì)等物因含有較多分離不徹底的蛋白質(zhì)等物質(zhì)，對產(chǎn)品的純度有較大影響，同時會使質(zhì)，對產(chǎn)品的純度有較大影響，同時會使產(chǎn)品放置一段時間后增大出現(xiàn)混濁的可能產(chǎn)品放置一段時間后增大出現(xiàn)混濁的可能

20、，影響產(chǎn)品的外觀。，影響產(chǎn)品的外觀。六、染菌對三廢處理的影響六、染菌對三廢處理的影響 使過濾后的廢菌體無法利用，發(fā)酵染菌的廢使過濾后的廢菌體無法利用，發(fā)酵染菌的廢液，生物需氧量（液，生物需氧量（BODBOD）增高，增加三廢治）增高，增加三廢治理費用和時間。理費用和時間?，F(xiàn)在學(xué)習的是第二十一頁，共101頁第二節(jié)第二節(jié) 發(fā)酵異?，F(xiàn)象及原因分析發(fā)酵異?，F(xiàn)象及原因分析一、種子培養(yǎng)和發(fā)酵的異?，F(xiàn)象一、種子培養(yǎng)和發(fā)酵的異?，F(xiàn)象 發(fā)酵過程中的種子培養(yǎng)和發(fā)酵的異?，F(xiàn)象是指發(fā)酵發(fā)酵過程中的種子培養(yǎng)和發(fā)酵的異?，F(xiàn)象是指發(fā)酵過程中某些物理參數(shù)、化學(xué)參數(shù)或生物參數(shù)發(fā)生與原過程中某些物理參數(shù)、化學(xué)參數(shù)或生物參數(shù)發(fā)生與原

21、有規(guī)律不同的改變，這些改變必然影響發(fā)酵水平，使有規(guī)律不同的改變，這些改變必然影響發(fā)酵水平，使生產(chǎn)蒙受損失。生產(chǎn)蒙受損失。1、種子培養(yǎng)異常（表現(xiàn)為培養(yǎng)的種子質(zhì)量不合格）：菌體、種子培養(yǎng)異常（表現(xiàn)為培養(yǎng)的種子質(zhì)量不合格）：菌體生長緩慢；菌絲結(jié)團；代謝不正常。生長緩慢；菌絲結(jié)團；代謝不正常。2、發(fā)酵異常：菌體生長差；、發(fā)酵異常：菌體生長差；pH值過高或過低；溶解氧水值過高或過低；溶解氧水平異常；泡沫過多；菌體濃度過高或過低；菌體生長平異常；泡沫過多；菌體濃度過高或過低；菌體生長差。差?，F(xiàn)在學(xué)習的是第二十二頁，共101頁現(xiàn)在學(xué)習的是第二十三頁，共101頁二、染菌的檢查和判斷二、染菌的檢查和判斷 1、檢

22、查的目的、意義、檢查的目的、意義 以無菌試驗的結(jié)果較以無菌試驗的結(jié)果較可靠、迅速的可靠、迅速的判斷染菌，以判斷染菌，以及時采取處理措施。每個工序或經(jīng)一定時間都應(yīng)進及時采取處理措施。每個工序或經(jīng)一定時間都應(yīng)進行取樣檢查。行取樣檢查。 無菌試驗的目的：無菌試驗的目的：（1）監(jiān)測培養(yǎng)基、發(fā)酵罐及附屬設(shè)備滅菌是否徹底）監(jiān)測培養(yǎng)基、發(fā)酵罐及附屬設(shè)備滅菌是否徹底（2）監(jiān)測發(fā)酵過程中是否有雜菌從外界侵入，生產(chǎn)）監(jiān)測發(fā)酵過程中是否有雜菌從外界侵入，生產(chǎn)過程中是否存在染菌的隱患和死角過程中是否存在染菌的隱患和死角 2、 生產(chǎn)上常用的檢查方法有：顯微鏡檢查（簡生產(chǎn)上常用的檢查方法有：顯微鏡檢查（簡便、快速，能及時

23、發(fā)現(xiàn)雜菌，但鏡撿取樣少，觀察面便、快速，能及時發(fā)現(xiàn)雜菌，但鏡撿取樣少，觀察面也小，則不易撿出早期雜菌）；平板劃線檢查；也小，則不易撿出早期雜菌）；平板劃線檢查；肉湯培養(yǎng)檢查。（肉湯培養(yǎng)檢查。（ 后兩種操作較繁瑣（需過夜培養(yǎng)）后兩種操作較繁瑣（需過夜培養(yǎng)），但能撿出比前者更少的雜菌，結(jié)果為主要依據(jù)，但能撿出比前者更少的雜菌，結(jié)果為主要依據(jù) ）現(xiàn)在學(xué)習的是第二十四頁，共101頁表表8-1 8-1 發(fā)酵過程的雜菌檢查發(fā)酵過程的雜菌檢查 除了上述方法外，還對參數(shù)的變化情況進行實時監(jiān)控除了上述方法外，還對參數(shù)的變化情況進行實時監(jiān)控，以參數(shù)的異常變化來判斷是否染菌。，以參數(shù)的異常變化來判斷是否染菌。 現(xiàn)在

24、學(xué)習的是第二十五頁，共101頁3、發(fā)酵染菌率計算基準、發(fā)酵染菌率計算基準 總?cè)揪手敢荒臧l(fā)酵染菌的批（次）數(shù)與總投料批（總?cè)揪手敢荒臧l(fā)酵染菌的批（次）數(shù)與總投料批（次）數(shù)之比的百分率。染菌批次數(shù)應(yīng)包括染菌后培養(yǎng)基次）數(shù)之比的百分率。染菌批次數(shù)應(yīng)包括染菌后培養(yǎng)基經(jīng)重新滅菌，又再次染菌的批次數(shù)在內(nèi)。是我國的統(tǒng)一經(jīng)重新滅菌，又再次染菌的批次數(shù)在內(nèi)。是我國的統(tǒng)一的習慣計算方法的習慣計算方法總?cè)揪士側(cè)揪?= 還用設(shè)備染菌率（還用設(shè)備染菌率（統(tǒng)計發(fā)酵罐或其他設(shè)備的染菌統(tǒng)計發(fā)酵罐或其他設(shè)備的染菌率率）、不同品種發(fā)酵的染菌率、不同發(fā)酵階段的染菌）、不同品種發(fā)酵的染菌率、不同發(fā)酵階段的染菌率、季節(jié)染菌率、

25、操作染菌率等統(tǒng)計，以很好地控制率、季節(jié)染菌率、操作染菌率等統(tǒng)計，以很好地控制生產(chǎn)。生產(chǎn)。%100*總投料批（次）數(shù)發(fā)酵染菌批（次）數(shù)現(xiàn)在學(xué)習的是第二十六頁，共101頁1、例如：、例如： 表表8-2 日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研究所多年來抗生素日本工業(yè)技術(shù)院發(fā)酵研究所多年來抗生素 發(fā)酵染菌原因分析發(fā)酵染菌原因分析 項目項目 百分率百分率%種子帶菌或懷疑種子帶菌種子帶菌或懷疑種子帶菌 9.64接種時罐壓跌零接種時罐壓跌零 0.19培養(yǎng)基滅菌不透培養(yǎng)基滅菌不透 0.79總空氣系統(tǒng)有菌總空氣系統(tǒng)有菌 19.96泡沫冒頂泡沫冒頂 0.48夾套穿孔夾套穿孔 12.36盤管穿孔盤管穿孔 5.89接種管穿孔接種管穿孔

26、 0.39閥門滲漏閥門滲漏 1.45攪拌軸密封滲漏攪拌軸密封滲漏 2.09罐蓋漏罐蓋漏 1.54其它設(shè)備滲漏其它設(shè)備滲漏 10.13操作原因操作原因 10.15 原因不明原因不明 24.94三、染菌原因三、染菌原因現(xiàn)在學(xué)習的是第二十七頁，共101頁 表表6-3 國內(nèi)一制藥廠染菌原因分析國內(nèi)一制藥廠染菌原因分析 現(xiàn)在學(xué)習的是第二十八頁，共101頁管理不善而染菌的有管理不善而染菌的有31個罐批，占個罐批，占25.08經(jīng)分析經(jīng)分析有下表所列原因：有下表所列原因： 表表8-4 8-4 管理不善染菌的原因管理不善染菌的原因現(xiàn)在學(xué)習的是第二十九頁，共101頁 表表8-5 國內(nèi)一抗生素生產(chǎn)廠鏈霉素發(fā)酵染菌原

27、因分析國內(nèi)一抗生素生產(chǎn)廠鏈霉素發(fā)酵染菌原因分析 項目項目 百分率百分率%外界帶入雜菌（取樣、補料）外界帶入雜菌（取樣、補料） 8.20設(shè)備穿孔設(shè)備穿孔 7.60空氣系統(tǒng)有菌空氣系統(tǒng)有菌 26.00停電罐壓跌零停電罐壓跌零 1.60接種接種 11.00蒸汽壓力不足或蒸汽量不足蒸汽壓力不足或蒸汽量不足 0.60管理問題管理問題 7.80 操作違反規(guī)程操作違反規(guī)程 1.60種子帶菌種子帶菌 0.60原因不明原因不明 35.00現(xiàn)在學(xué)習的是第三十頁，共101頁2 2、造成染菌的主要原因總結(jié)、造成染菌的主要原因總結(jié)（1 1）種子帶菌種子帶菌-P233-P233 種子帶菌又分為種子本身帶菌和種子培種子帶菌

28、又分為種子本身帶菌和種子培養(yǎng)過程中染菌。養(yǎng)過程中染菌?，F(xiàn)在學(xué)習的是第三十一頁，共101頁（2 2）、空氣帶菌）、空氣帶菌-P233-P233 無菌空氣帶菌是發(fā)酵染菌的主要原因之一（無菌空氣帶菌是發(fā)酵染菌的主要原因之一（19.9619.96，26%26%）。國內(nèi)外空氣除菌技術(shù)雖已有較。國內(nèi)外空氣除菌技術(shù)雖已有較大改善，但仍然沒有使染菌率降低到理想的程度大改善，但仍然沒有使染菌率降低到理想的程度。因為空氣除菌系統(tǒng)較為復(fù)雜，環(huán)節(jié)多，偶遇不。因為空氣除菌系統(tǒng)較為復(fù)雜，環(huán)節(jié)多，偶遇不慎便會導(dǎo)致空氣除菌失敗。慎便會導(dǎo)致空氣除菌失敗。（3）、）、設(shè)備滲漏設(shè)備滲漏-P234 -P234 設(shè)備滲漏包括冷卻夾套穿

29、孔、盤管穿孔、設(shè)備滲漏包括冷卻夾套穿孔、盤管穿孔、接種管穿孔、閥門滲漏、攪拌軸滲漏、罐蓋漏接種管穿孔、閥門滲漏、攪拌軸滲漏、罐蓋漏和其它設(shè)備漏等。（和其它設(shè)備漏等。（33.8533.85，37.537.5）。）。所以說加強設(shè)備本身及附屬零部件的嚴密度檢所以說加強設(shè)備本身及附屬零部件的嚴密度檢查。查?，F(xiàn)在學(xué)習的是第三十二頁，共101頁（4 4）、滅菌不徹底）、滅菌不徹底滅菌技術(shù)的好壞與滅菌質(zhì)量很有關(guān)系滅菌技術(shù)的好壞與滅菌質(zhì)量很有關(guān)系 蒸汽通入培養(yǎng)基，蒸汽通入培養(yǎng)基，升溫快慢、保溫時間升溫快慢、保溫時間 蒸汽總壓是否達到要求標準蒸汽總壓是否達到要求標準 環(huán)境中的環(huán)境中的雜菌數(shù)量因季節(jié)而有很大差別雜

30、菌數(shù)量因季節(jié)而有很大差別 原材料儲存和保管，如玉米漿、母液糖等有機原原材料儲存和保管，如玉米漿、母液糖等有機原料料雜菌的數(shù)量雜菌的數(shù)量 發(fā)酵罐、培養(yǎng)基配制罐等設(shè)備的清洗質(zhì)量發(fā)酵罐、培養(yǎng)基配制罐等設(shè)備的清洗質(zhì)量有無有無滅菌的死角滅菌的死角現(xiàn)在學(xué)習的是第三十三頁，共101頁（5 5）、生產(chǎn)技術(shù)管理不善）、生產(chǎn)技術(shù)管理不善 技術(shù)管理就是要對發(fā)酵每個環(huán)節(jié)嚴技術(shù)管理就是要對發(fā)酵每個環(huán)節(jié)嚴格控制，必須制定嚴格工藝衛(wèi)生管理制度格控制，必須制定嚴格工藝衛(wèi)生管理制度。否則發(fā)酵中稍有不慎就可能染菌，所以。否則發(fā)酵中稍有不慎就可能染菌，所以不能有僥幸心理而放松管理不能有僥幸心理而放松管理現(xiàn)在學(xué)習的是第三十四頁，共1

31、01頁四、發(fā)酵染菌原因分析四、發(fā)酵染菌原因分析 1 1、染菌的雜菌種類分析、染菌的雜菌種類分析表8-6 染菌的雜菌種類分析染菌的雜菌種類分析現(xiàn)在學(xué)習的是第三十五頁，共101頁2 2、發(fā)酵染菌的規(guī)模分析、發(fā)酵染菌的規(guī)模分析表8-7 大批量發(fā)酵罐染菌（情況較少，危害較大）大批量發(fā)酵罐染菌（情況較少，危害較大）現(xiàn)在學(xué)習的是第三十六頁，共101頁表表8-8 8-8 部分發(fā)酵罐染菌部分發(fā)酵罐染菌 個別發(fā)酵罐連續(xù)染菌（如果采用間歇滅菌工藝，一般個別發(fā)酵罐連續(xù)染菌（如果采用間歇滅菌工藝，一般不會發(fā)生）：大都由于設(shè)備滲漏造成（設(shè)備的腐蝕磨損不會發(fā)生）：大都由于設(shè)備滲漏造成（設(shè)備的腐蝕磨損所引起的染菌會出現(xiàn)每批

32、發(fā)酵的染菌時間向前推移的現(xiàn)所引起的染菌會出現(xiàn)每批發(fā)酵的染菌時間向前推移的現(xiàn)象，），應(yīng)仔細檢查閥門、罐體或罐器是否清潔等。象，），應(yīng)仔細檢查閥門、罐體或罐器是否清潔等?，F(xiàn)在學(xué)習的是第三十七頁，共101頁3 3、不同污染時間分析、不同污染時間分析 （1 1）、染菌發(fā)生在種子培養(yǎng)階段，或稱種子培養(yǎng)、染菌發(fā)生在種子培養(yǎng)階段，或稱種子培養(yǎng)期染菌。通常是由種子帶菌、培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹期染菌。通常是由種子帶菌、培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底，以及接種操作不當或設(shè)備因素等原因而引起染菌底，以及接種操作不當或設(shè)備因素等原因而引起染菌。 （2 2）在發(fā)酵過程的初始階段發(fā)生染菌，或稱在發(fā)酵過程的初始階段發(fā)生染菌，或稱發(fā)酵

33、前期染菌。大部分也是由于種子帶菌、培發(fā)酵前期染菌。大部分也是由于種子帶菌、培養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底，以及接種操作不當或養(yǎng)基或設(shè)備滅菌不徹底，以及接種操作不當或設(shè)備因素、無菌空氣等原因而引起。設(shè)備因素、無菌空氣等原因而引起。 （3 3）發(fā)酵后期染菌大部分是由空氣過濾不徹底發(fā)酵后期染菌大部分是由空氣過濾不徹底、中間補料染菌、設(shè)備滲漏、泡沫頂蓋以及操作問、中間補料染菌、設(shè)備滲漏、泡沫頂蓋以及操作問題而引起。題而引起?，F(xiàn)在學(xué)習的是第三十八頁，共101頁第三節(jié)第三節(jié) 發(fā)酵過程染菌的防止發(fā)酵過程染菌的防止一、種子帶菌的原因及防止一、種子帶菌的原因及防止 1 1、帶菌的原因帶菌的原因（1 1）無菌室的無菌條件

34、不符合要求；無菌室的無菌條件不符合要求；（2 2）培養(yǎng)基及用具滅菌不徹底；培養(yǎng)基及用具滅菌不徹底；（3 3）操作不當（移接、培養(yǎng)過程中受污染）。操作不當（移接、培養(yǎng)過程中受污染）。 2 2、種子帶菌的防治、種子帶菌的防治（1 1）無菌室和搖床間都要保持清潔。無菌室內(nèi)要）無菌室和搖床間都要保持清潔。無菌室內(nèi)要供給恒溫恒濕的無菌空氣，還要裝紫外燈用以供給恒溫恒濕的無菌空氣，還要裝紫外燈用以滅菌，或用化學(xué)藥品滅菌。滅菌，或用化學(xué)藥品滅菌?，F(xiàn)在學(xué)習的是第三十九頁，共101頁無菌室要求無菌室要求 接種、移種等無菌操作需要在無菌室內(nèi)進行。接種、移種等無菌操作需要在無菌室內(nèi)進行。 無菌室面積不宜過大，一般約

35、無菌室面積不宜過大，一般約46m46m2 2高約高約2.62.6米。為了減米。為了減少外界空氣的侵入，無菌室要有少外界空氣的侵入，無菌室要有1313個套間個套間( (緩沖過道緩沖過道)( )(參參照下圖照下圖) )。無菌室內(nèi)部的墻壁、天花板要涂白漆或采用瓷。無菌室內(nèi)部的墻壁、天花板要涂白漆或采用瓷磚，要求無裂縫，墻角最好做成圓弧形，便于揩擦清洗磚，要求無裂縫，墻角最好做成圓弧形，便于揩擦清洗以減少空氣中微生物的潛伏場所，室內(nèi)布置應(yīng)盡量簡單以減少空氣中微生物的潛伏場所，室內(nèi)布置應(yīng)盡量簡單，最好能安裝空氣調(diào)節(jié)裝置，通入無菌空氣并調(diào)節(jié)室內(nèi)，最好能安裝空氣調(diào)節(jié)裝置，通入無菌空氣并調(diào)節(jié)室內(nèi)的溫濕度。的溫

36、濕度。 在無菌室中裝有紫外燈，打開紫外燈，照半小時，關(guān)燈在無菌室中裝有紫外燈，打開紫外燈，照半小時，關(guān)燈后后15分鐘再接種。用消毒藥水如新潔而滅配成分鐘再接種。用消毒藥水如新潔而滅配成1/1000濃濃度擦桌子、拖地，開啟超凈臺的通風，度擦桌子、拖地，開啟超凈臺的通風， 接種時必須在接種時必須在超凈臺上操作，超凈臺裝有一臺鼓風機，進風口有一粗超凈臺上操作，超凈臺裝有一臺鼓風機，進風口有一粗過濾器，出風口有高效過濾器，保證無菌風從超凈臺吹過濾器，出風口有高效過濾器，保證無菌風從超凈臺吹出，外界有菌空氣不可能進入接種區(qū)域，保證無菌條件出，外界有菌空氣不可能進入接種區(qū)域，保證無菌條件。接種人員必須穿好

37、無菌服，戴好口罩，手用酒精棉球。接種人員必須穿好無菌服，戴好口罩，手用酒精棉球擦干凈。擦干凈。現(xiàn)在學(xué)習的是第四十頁，共101頁無菌室內(nèi)無菌度的要求是：把無菌培養(yǎng)無菌室內(nèi)無菌度的要求是：把無菌培養(yǎng)皿平板打開蓋子在無菌室內(nèi)放置皿平板打開蓋子在無菌室內(nèi)放置3030分鐘，根分鐘，根據(jù)一般工廠的經(jīng)驗，長出的菌落在據(jù)一般工廠的經(jīng)驗，長出的菌落在3 3個以下個以下為好。為好。 在種子的無菌條件不要求很高的情況下在種子的無菌條件不要求很高的情況下，可以不采用無菌室而直接用無菌箱進行操，可以不采用無菌室而直接用無菌箱進行操作，但無菌要求很高的情況下，即使在無菌作，但無菌要求很高的情況下，即使在無菌室內(nèi)還要用無菌

38、箱操作。室內(nèi)還要用無菌箱操作。現(xiàn)在學(xué)習的是第四十一頁，共101頁（2）在制備種子時對砂土管、斜面、三角）在制備種子時對砂土管、斜面、三角瓶及搖瓶均嚴格進行管理瓶及搖瓶均嚴格進行管理（3）對每一級種子的培養(yǎng)物均應(yīng)進行嚴格的）對每一級種子的培養(yǎng)物均應(yīng)進行嚴格的無菌檢查無菌檢查 （4）對菌種培養(yǎng)基或器具進行嚴格的滅菌處理）對菌種培養(yǎng)基或器具進行嚴格的滅菌處理 現(xiàn)在學(xué)習的是第四十二頁，共101頁二、空氣帶菌及其防治二、空氣帶菌及其防治 必須從空氣的凈化工藝和設(shè)備的設(shè)計、過濾介質(zhì)必須從空氣的凈化工藝和設(shè)備的設(shè)計、過濾介質(zhì)的選用和裝填、過濾介質(zhì)的滅菌和管理等方面完的選用和裝填、過濾介質(zhì)的滅菌和管理等方面完

39、善空氣凈化系統(tǒng)。善空氣凈化系統(tǒng)。 1 1、加強生產(chǎn)環(huán)境的衛(wèi)生管理，減少生產(chǎn)環(huán)、加強生產(chǎn)環(huán)境的衛(wèi)生管理，減少生產(chǎn)環(huán)境中空氣的含菌量。境中空氣的含菌量。 2 2、設(shè)計合理的空氣預(yù)處理工藝，盡可能減、設(shè)計合理的空氣預(yù)處理工藝，盡可能減少生產(chǎn)環(huán)境中空氣帶油、水量，提高進入過濾少生產(chǎn)環(huán)境中空氣帶油、水量，提高進入過濾器的空氣溫度，降低空氣的相對濕度，保持過器的空氣溫度，降低空氣的相對濕度，保持過濾介質(zhì)的干燥狀態(tài)，防止空氣冷卻器漏水，防濾介質(zhì)的干燥狀態(tài)，防止空氣冷卻器漏水，防止冷卻水進入空氣系統(tǒng)等。止冷卻水進入空氣系統(tǒng)等?，F(xiàn)在學(xué)習的是第四十三頁，共101頁3 3、設(shè)計和安裝合理的空氣過濾器，防止、設(shè)計和安

40、裝合理的空氣過濾器，防止過濾器失效。過濾器失效。 選用除菌效率高的過濾介質(zhì)，在過選用除菌效率高的過濾介質(zhì)，在過濾器滅菌時要防止過濾介質(zhì)被沖翻而濾器滅菌時要防止過濾介質(zhì)被沖翻而造成短路，防止過濾介質(zhì)的裝填不均造成短路，防止過濾介質(zhì)的裝填不均而使空氣走短路，保證一定的介質(zhì)充而使空氣走短路，保證一定的介質(zhì)充填密度。在操作中要防止空氣壓力的填密度。在操作中要防止空氣壓力的劇變和流速的急增。劇變和流速的急增?，F(xiàn)在學(xué)習的是第四十四頁，共101頁現(xiàn)在學(xué)習的是第四十五頁，共101頁 發(fā)酵設(shè)備及附件由于化學(xué)腐蝕、電化學(xué)腐蝕，物料與設(shè)發(fā)酵設(shè)備及附件由于化學(xué)腐蝕、電化學(xué)腐蝕，物料與設(shè)備摩擦造成機械磨損以及加工制作不

41、良等原因會導(dǎo)致設(shè)備備摩擦造成機械磨損以及加工制作不良等原因會導(dǎo)致設(shè)備及附件形成微小漏孔所發(fā)生的滲漏現(xiàn)象。及附件形成微小漏孔所發(fā)生的滲漏現(xiàn)象。1 1、發(fā)酵罐的滲漏、發(fā)酵罐的滲漏（1 1）冷卻管的滲漏）冷卻管的滲漏 是發(fā)酵罐中最容易滲漏的部件之一是發(fā)酵罐中最容易滲漏的部件之一 ，氣壓試驗和，氣壓試驗和水壓試驗水壓試驗 （2 2）罐體的穿孔）罐體的穿孔 每年大修時需檢查鋼板每年大修時需檢查鋼板減簿的程度。有夾套的發(fā)酵減簿的程度。有夾套的發(fā)酵罐可在夾套內(nèi)用水壓或氣壓罐可在夾套內(nèi)用水壓或氣壓的試驗方法檢查罐壁有無滲的試驗方法檢查罐壁有無滲漏。漏?，F(xiàn)在學(xué)習的是第四十六頁，共101頁2 2、管件的滲漏、管件

42、的滲漏 （1 1）閥）閥 據(jù)統(tǒng)計，因閥的滲漏引起的染菌占染菌率的比例據(jù)統(tǒng)計，因閥的滲漏引起的染菌占染菌率的比例很大，采用密封性較高的閥門。目前使用的大小閥門很大，采用密封性較高的閥門。目前使用的大小閥門大多采用截止閥和橡膠隔膜閥。大多采用截止閥和橡膠隔膜閥。 1)1)嚴密不漏。嚴密不漏。2)2)無填料。無填料。3)3)閥結(jié)構(gòu)為流閥結(jié)構(gòu)為流線型，流量大，阻力小，無死角，無堆線型，流量大，阻力小，無死角，無堆積物，在關(guān)閉時不會使緊密面軋壞。積物，在關(guān)閉時不會使緊密面軋壞。4)4)檢修方便。但須定期檢查隔膜有否老化檢修方便。但須定期檢查隔膜有否老化及脫落。及脫落。 現(xiàn)在學(xué)習的是第四十七頁，共101頁

43、 2 2、管路的連接管路的連接 管子的連接有螺紋連接、法蘭連接和焊接三管子的連接有螺紋連接、法蘭連接和焊接三種。種。 3 3、管路的配置、管路的配置 排氣管與下水管排氣管與下水管現(xiàn)在學(xué)習的是第四十八頁，共101頁現(xiàn)在學(xué)習的是第四十九頁，共101頁4 4、發(fā)酵罐與管件的死角、發(fā)酵罐與管件的死角 所謂死角是指滅菌時因某些原因使滅菌溫度達不到所謂死角是指滅菌時因某些原因使滅菌溫度達不到或不易達到的局部地區(qū)?；虿灰走_到的局部地區(qū)。（1 1）法蘭連接的死角）法蘭連接的死角現(xiàn)在學(xué)習的是第五十頁，共101頁（2 2）渣滓在罐底與用環(huán)式空氣分布管所形成的死角）渣滓在罐底與用環(huán)式空氣分布管所形成的死角圖A圖B圖

44、C現(xiàn)在學(xué)習的是第五十一頁，共101頁（3 3）不銹鋼襯里的死角）不銹鋼襯里的死角 小型發(fā)酵罐通常采用不銹鋼制造。對于大型發(fā)酵罐小型發(fā)酵罐通常采用不銹鋼制造。對于大型發(fā)酵罐，一般都采用不銹鋼襯里的方法。可采用復(fù)合鋼板，一般都采用不銹鋼襯里的方法?？刹捎脧?fù)合鋼板( (將兩種不同材質(zhì)的鋼板軋合為一體的鋼板將兩種不同材質(zhì)的鋼板軋合為一體的鋼板) )制造發(fā)酵制造發(fā)酵罐。罐?，F(xiàn)在學(xué)習的是第五十二頁，共101頁(4) (4) 接種罐管路的死角接種罐管路的死角現(xiàn)在學(xué)習的是第五十三頁，共101頁(6) (6) 壓力表安裝壓力表安裝不合理形成的死角不合理形成的死角 另外，須注意罐內(nèi)結(jié)垢形成的死角，對于不銹另外，須

45、注意罐內(nèi)結(jié)垢形成的死角，對于不銹鋼罐及普通碳鋼罐的處理不同。鋼罐及普通碳鋼罐的處理不同。現(xiàn)在學(xué)習的是第五十四頁，共101頁5、設(shè)備與管道的清洗與殺菌、設(shè)備與管道的清洗與殺菌管件和閥門清洗清水漂洗清水漂洗510min常溫洗滌劑洗滌洗滌劑洗滌1520min常溫70清洗漂洗清洗漂洗常溫510min消毒劑處理消毒劑處理1520min常溫清水漂洗清水漂洗(1520min，常溫)現(xiàn)在學(xué)習的是第五十五頁，共101頁CIP 清洗系統(tǒng)定義： CIP ，是英文，是英文Clean-In-Place的縮寫，的縮寫，即就地清洗或稱為原位清洗即就地清洗或稱為原位清洗, 其定義為不拆卸其定義為不拆卸設(shè)備或元件設(shè)備或元件,

46、在密閉的條件下在密閉的條件下, 用一定溫度和濃用一定溫度和濃度的清洗液對清洗裝置加以強力作用度的清洗液對清洗裝置加以強力作用, 使與食使與食品接觸的表面洗凈和殺菌的方法。品接觸的表面洗凈和殺菌的方法?，F(xiàn)在學(xué)習的是第五十六頁，共101頁與傳統(tǒng)的手工拆卸機器零件的清洗方式相比與傳統(tǒng)的手工拆卸機器零件的清洗方式相比,CIP 的的優(yōu)點優(yōu)點主要主要有有: (1) 能維持一定的清洗效果能維持一定的清洗效果, 保證產(chǎn)品的安全性。保證產(chǎn)品的安全性。 (2) 節(jié)約操作時間、提高效率節(jié)約操作時間、提高效率, 以實現(xiàn)商業(yè)的最以實現(xiàn)商業(yè)的最 大利潤。大利潤。 (3) 節(jié)省勞動力節(jié)省勞動力, 保證操作的安全性。保證操作

47、的安全性。 (4) 節(jié)省清洗用水和蒸汽。節(jié)省清洗用水和蒸汽。相比之下, 常規(guī)拆卸清洗的缺點是: 費時、費力, 易損壞聯(lián)接件; 設(shè)備停機時間長, 設(shè)備利用率低; 清洗不徹底, 有時對操作者也不十分安全。 CIP CIP 的優(yōu)點的優(yōu)點現(xiàn)在學(xué)習的是第五十七頁，共101頁清洗程序分7個步驟：預(yù)沖洗：30s，10次；堿預(yù)洗：16分；中間清洗：清水4分；清水噴沖：3次，每次30S ；堿噴沖：15分；清水沖洗；酸性水沖洗?，F(xiàn)在學(xué)習的是第五十八頁，共101頁6、設(shè)備及管路的殺菌、設(shè)備及管路的殺菌發(fā)酵罐及容器的殺菌過程容器的氣密性試驗，打開所有的冷凝水排除閥，開啟進蒸汽閥。容器的氣密性試驗，打開所有的冷凝水排除

48、閥，開啟進蒸汽閥。一定壓強后，打開排空氣閥，把容器中原有的空氣排除干凈。一定壓強后，打開排空氣閥，把容器中原有的空氣排除干凈。當罐內(nèi)壓強升至當罐內(nèi)壓強升至0.1MPa(121)，計滅菌時間，殺菌過程中不斷，計滅菌時間，殺菌過程中不斷排除蒸汽管路及罐內(nèi)的蒸汽冷凝水。排除蒸汽管路及罐內(nèi)的蒸汽冷凝水。結(jié)束滅菌操作時，先關(guān)閉所有排污閥及排氣閥，然后關(guān)蒸汽進口閥結(jié)束滅菌操作時，先關(guān)閉所有排污閥及排氣閥，然后關(guān)蒸汽進口閥，打開無菌空氣進口閥，以確保罐內(nèi)壓強。，打開無菌空氣進口閥，以確保罐內(nèi)壓強?，F(xiàn)在學(xué)習的是第五十九頁，共101頁設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌空氣分布器的蒸汽滅菌管路布置導(dǎo)流筒導(dǎo)流筒空氣分

49、布器空氣分布器BA無菌空氣無菌空氣蒸汽蒸汽現(xiàn)在學(xué)習的是第六十頁，共101頁設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌浸沒管路與旁路進口管的殺菌布管蒸汽蒸汽蒸汽蒸汽AB蒸汽蒸汽進料管進料管ABC現(xiàn)在學(xué)習的是第六十一頁，共101頁蒸汽滅菌蒸汽滅菌無菌排料無菌排料ABCEDF蒸汽蒸汽冷凝水冷凝水排污或排污或CIP返回返回排料系統(tǒng)蒸汽殺菌現(xiàn)在學(xué)習的是第六十二頁，共101頁設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌罐的CIP清洗系統(tǒng)蒸汽殺菌配管CIPABC蒸汽蒸汽現(xiàn)在學(xué)習的是第六十三頁，共101頁設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌發(fā)酵罐攪拌器密封裝置的蒸汽滅菌配管現(xiàn)在學(xué)習的是第六十四頁，共101頁設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的

50、殺菌空氣過濾器的殺菌止逆閥止逆閥現(xiàn)在學(xué)習的是第六十五頁，共101頁設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌閥門的殺菌(2) 隔膜閥隔膜閥現(xiàn)在學(xué)習的是第六十六頁，共101頁設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌取樣閥門的殺菌現(xiàn)在學(xué)習的是第六十七頁，共101頁保證管道徹底滅菌的設(shè)計要求管道應(yīng)有一定的斜度，通常取1/100或更大；凹陷低點安裝排污閥；管路有足夠的支撐點；盡可能減少和簡化管路，盡可能少用彎頭管件和閥門；盡可能減少最高與最低點，且在每個最高點裝設(shè)蒸汽進管，在最低點均裝冷水閥；每個罐及管道盡可能分開滅菌。這樣才能保證蒸汽殺菌的嚴密性與穩(wěn)定安全性。設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌現(xiàn)在學(xué)習的是第六十八頁，共

51、101頁1罐罐2罐罐兩個罐及連接管的蒸汽殺菌兩個罐及連接管的蒸汽殺菌ACBDEF現(xiàn)在學(xué)習的是第六十九頁，共101頁冷凝水的排放自由排放用汽水閥自動排放利用計算機自動控制排除冷凝水設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌現(xiàn)在學(xué)習的是第七十頁，共101頁空罐滅菌空罐滅菌 滅菌溫度和滅菌時間的要求是高溫長時滅菌溫度和滅菌時間的要求是高溫長時( (121121，6060分鐘分鐘) ) ，既合理經(jīng)濟，又能殺滅設(shè)備中各死角，既合理經(jīng)濟，又能殺滅設(shè)備中各死角殘存的雜菌或芽孢。殘存的雜菌或芽孢。 設(shè)備及管路的殺菌設(shè)備及管路的殺菌現(xiàn)在學(xué)習的是第七十一頁，共101頁通氣發(fā)酵罐清洗與滅菌管路圖止回閥止回閥現(xiàn)在學(xué)習的是第七十

52、二頁，共101頁三路進汽三路進汽：在對培養(yǎng)基滅菌時，在對培養(yǎng)基滅菌時，直接蒸汽從通風、取樣和出料口直接蒸汽從通風、取樣和出料口進入罐內(nèi)直接加熱，直到所進入罐內(nèi)直接加熱，直到所規(guī)定規(guī)定的溫度，并維持一定的時間的溫度，并維持一定的時間, ,達達到培養(yǎng)基滅菌之目的。到培養(yǎng)基滅菌之目的。實罐滅菌的進汽和排氣原則實罐滅菌的進汽和排氣原則: :“非進即出非進即出”，就是說所有進入，就是說所有進入發(fā)酵罐的管道在滅菌過程中如果發(fā)酵罐的管道在滅菌過程中如果不進入蒸汽就一定要進行排氣，不進入蒸汽就一定要進行排氣，使所有管道都被蒸汽（或二次蒸使所有管道都被蒸汽（或二次蒸汽）通過，得以滅菌。不能有既汽）通過，得以滅菌

53、。不能有既不進汽也不排汽的管道（死角）不進汽也不排汽的管道（死角）存在。存在。 發(fā)酵罐實罐滅菌發(fā)酵罐實罐滅菌現(xiàn)在學(xué)習的是第七十三頁，共101頁四、操作失誤導(dǎo)致染菌及其防治四、操作失誤導(dǎo)致染菌及其防治1 1、通常對于淀粉質(zhì)培養(yǎng)基的滅菌采用實罐滅菌較、通常對于淀粉質(zhì)培養(yǎng)基的滅菌采用實罐滅菌較好，先配料，過濾大顆粒物之后，在進行滅菌。好，先配料，過濾大顆粒物之后，在進行滅菌。2 2、在滅菌升溫時，要打開排氣閥門，使蒸汽能、在滅菌升溫時，要打開排氣閥門，使蒸汽能通過并驅(qū)除罐內(nèi)冷空氣，一般可避免通過并驅(qū)除罐內(nèi)冷空氣，一般可避免“假壓假壓”造造成染菌成染菌（自動控溫自動控溫） 。3 3、為加快升溫速度，、

54、為加快升溫速度，凡能進蒸汽的管路在滅菌時凡能進蒸汽的管路在滅菌時都可同時進汽，但各管路的阻力不同，易造成蒸都可同時進汽，但各管路的阻力不同，易造成蒸汽短路現(xiàn)象，使物料受熱不勻，需調(diào)整各進汽管汽短路現(xiàn)象，使物料受熱不勻，需調(diào)整各進汽管的流量。的流量。4 4、滅菌蒸汽要求采用飽和蒸汽，冷凝水越少越滅菌蒸汽要求采用飽和蒸汽，冷凝水越少越好，滅菌時蒸汽壓力要求平穩(wěn)。好，滅菌時蒸汽壓力要求平穩(wěn)?，F(xiàn)在學(xué)習的是第七十四頁，共101頁5 5、泡沫問題、泡沫問題 培養(yǎng)基和水的傳熱系數(shù)比空氣的傳熱系數(shù)大，如果培養(yǎng)基和水的傳熱系數(shù)比空氣的傳熱系數(shù)大，如果滅菌時升溫太快，培養(yǎng)基急劇膨脹，發(fā)酵罐內(nèi)的空氣滅菌時升溫太快，

55、培養(yǎng)基急劇膨脹，發(fā)酵罐內(nèi)的空氣排出較慢，就會產(chǎn)生大量泡沫，泡沫上升到發(fā)酵罐頂排出較慢，就會產(chǎn)生大量泡沫，泡沫上升到發(fā)酵罐頂，泡沫中的耐熱菌就不能與蒸汽直接接觸，未被殺死，泡沫中的耐熱菌就不能與蒸汽直接接觸，未被殺死。4 4、其他操作問題其他操作問題 實罐滅菌時，罐內(nèi)因蒸汽冷凝而使罐壓突然降低甚實罐滅菌時，罐內(nèi)因蒸汽冷凝而使罐壓突然降低甚至會形成真空，所以此時必須將無菌空氣通入罐內(nèi)至會形成真空，所以此時必須將無菌空氣通入罐內(nèi)保持一定壓力，并注意壓力變化，隨時進行調(diào)節(jié)。保持一定壓力，并注意壓力變化，隨時進行調(diào)節(jié)。5 5、發(fā)酵過程越來越多的采用自動控制，一些控制儀、發(fā)酵過程越來越多的采用自動控制，一

56、些控制儀器逐漸被應(yīng)用。一般常采用化學(xué)試劑浸泡等方法來滅器逐漸被應(yīng)用。一般常采用化學(xué)試劑浸泡等方法來滅菌。菌?，F(xiàn)在學(xué)習的是第七十五頁，共101頁五、發(fā)酵染菌后的措施五、發(fā)酵染菌后的措施1、如果種子培養(yǎng)或種子罐中發(fā)現(xiàn)污染、如果種子培養(yǎng)或種子罐中發(fā)現(xiàn)污染倒罐倒罐2、 發(fā)酵早期染菌發(fā)酵早期染菌可以適當添加營養(yǎng)物質(zhì)，重新可以適當添加營養(yǎng)物質(zhì)，重新滅菌后再接種發(fā)酵。或采用加大接種量的辦法滅菌后再接種發(fā)酵?；虿捎眉哟蠼臃N量的辦法3、中、后期染菌，如果雜菌的生長將影響發(fā)酵的正常進、中、后期染菌，如果雜菌的生長將影響發(fā)酵的正常進行或影響產(chǎn)物的提取時，應(yīng)該提早放罐。但對發(fā)酵液中的行或影響產(chǎn)物的提取時，應(yīng)該提早放罐

57、。但對發(fā)酵液中的碳、氮源還較多，此時應(yīng)先設(shè)法使碳、氮源消耗，再放罐碳、氮源還較多，此時應(yīng)先設(shè)法使碳、氮源消耗，再放罐提取?；蛟谌揪陌l(fā)酵液內(nèi)添加抑菌劑提取?；蛟谌揪陌l(fā)酵液內(nèi)添加抑菌劑(如小劑量的抗菌如小劑量的抗菌素或醛類素或醛類)用以抑制雜菌的生長也是一種辦法。用以抑制雜菌的生長也是一種辦法?，F(xiàn)在學(xué)習的是第七十六頁，共101頁5 5、染菌后的培養(yǎng)基必須滅菌后才可放下水、染菌后的培養(yǎng)基必須滅菌后才可放下水道。道。 滅菌方法：可通蒸汽滅菌，也可滅菌方法：可通蒸汽滅菌，也可加入過氧乙酸等化學(xué)滅菌劑攪拌半小時，加入過氧乙酸等化學(xué)滅菌劑攪拌半小時，才放下水道。否則由于各罐的管道相通，才放下水道。否則由

58、于各罐的管道相通，會造成其它罐的染菌，而且直接放下水道會造成其它罐的染菌，而且直接放下水道也會造成空氣的污染而導(dǎo)致其它罐批染菌也會造成空氣的污染而導(dǎo)致其它罐批染菌。6 6、染菌厲害時，車間環(huán)境（罐內(nèi)、原料儲罐、染菌厲害時，車間環(huán)境（罐內(nèi)、原料儲罐等）要用石灰或等）要用石灰或甲醛熏蒸甲醛熏蒸消毒。消毒。7 7、凡染菌的罐要找染菌的原因，對癥下藥、凡染菌的罐要找染菌的原因，對癥下藥?，F(xiàn)在學(xué)習的是第七十七頁，共101頁六、染噬菌體的防治六、染噬菌體的防治1 1、染噬菌體對發(fā)酵的影響、染噬菌體對發(fā)酵的影響 發(fā)酵過程中如果受噬菌體的侵染，一發(fā)酵過程中如果受噬菌體的侵染，一般發(fā)生溶菌，隨之出現(xiàn)發(fā)酵遲緩或停

59、止，而般發(fā)生溶菌，隨之出現(xiàn)發(fā)酵遲緩或停止，而且受噬菌體感染后，往往會反復(fù)連續(xù)感染，且受噬菌體感染后，往往會反復(fù)連續(xù)感染，使生產(chǎn)無法進行，甚至使種子全部喪失。使生產(chǎn)無法進行，甚至使種子全部喪失?，F(xiàn)在學(xué)習的是第七十八頁，共101頁2 2、染噬菌體表現(xiàn)為：、染噬菌體表現(xiàn)為：（1 1）、鏡檢可發(fā)現(xiàn)菌體數(shù)量明顯減少，菌體不規(guī)）、鏡檢可發(fā)現(xiàn)菌體數(shù)量明顯減少，菌體不規(guī)則，嚴重時完全看不到菌體，且在短時間內(nèi)菌則，嚴重時完全看不到菌體，且在短時間內(nèi)菌體自溶。體自溶。（2 2）、發(fā)酵）、發(fā)酵pHpH值逐漸上升，值逐漸上升，4848小時之內(nèi)可達小時之內(nèi)可達8.08.0以上，不再下降。以上，不再下降。（3 3）、發(fā)酵液殘?zhí)歉?，有刺激臭味，粘度大，泡）、發(fā)酵液殘?zhí)歉?，有刺激臭味，粘度大，泡沫多。?/p>