遺傳病的診斷精

1、會計學1遺傳病的診斷精遺傳病的診斷精遺傳病的常規(guī)診斷Chapter 01病史、癥狀和體征病史、癥狀和體征細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查Chapter 01 遺傳病的常規(guī)診斷助孕情況助孕情況( (接受供卵或供精接受供卵或供精) )，流產(chǎn)史，死胎，終止妊娠，流產(chǎn)史，死胎，終止妊娠，兒童的收養(yǎng)或過繼，近親婚配和非婚生情況；兒童的收養(yǎng)或過繼，近親婚配和非婚生情況；對于先天畸形，還需采集懷孕時父母身體健康情況和年齡對于先天畸形，還需采集懷孕時父母身體健康情況和年齡、妊娠早期歷史、暴露致畸物的情況、胎兒生長和活動情、妊娠早期歷史、暴露致畸物的情況、胎兒生長和活動情況、詳細的出生記錄，家庭其他成員的異常

2、、發(fā)病年齡、況、詳細的出生記錄，家庭其他成員的異常、發(fā)病年齡、病程特點，未受累者現(xiàn)在的年齡、種族等有關資料。病程特點，未受累者現(xiàn)在的年齡、種族等有關資料。l智力發(fā)育不全智力發(fā)育不全l毛發(fā)黃毛發(fā)黃l腐臭味腐臭味l副性征發(fā)育不良副性征發(fā)育不良l繼發(fā)繼發(fā)/ /原發(fā)性閉經(jīng)原發(fā)性閉經(jīng)l身體矮小身體矮小l肘外翻肘外翻病史、癥狀和體征細胞遺傳學檢查系譜分析系譜分析生物化學檢查Chapter 01 遺傳病的常規(guī)診斷1.孟德爾遺傳病（1 1）常染色體顯性遺傳?。┏Ｈ旧w顯性遺傳病(AD)(AD)（2 2）常染色體隱性遺傳病）常染色體隱性遺傳病(AR)(AR)（3 3）X X連鎖隱性遺傳病連鎖隱性遺傳病(XR)(

3、XR)（4 4）X X連鎖顯性遺傳病連鎖顯性遺傳病(XD)(XD)（5 5）Y Y連鎖遺傳病連鎖遺傳病基因多效性基因多效性(pleiotropy)：是指某一基因與多種不同的看起來是指某一基因與多種不同的看起來似乎無關的表型有關。似乎無關的表型有關。多效性等位基因的每種效應都可表現(xiàn)為不同的外顯率和不多效性等位基因的每種效應都可表現(xiàn)為不同的外顯率和不同的表現(xiàn)度。同的表現(xiàn)度。環(huán)境因素的影響：環(huán)境因素的影響：內在的和外在的內在的和外在的體細胞突變：體細胞突變：體細胞突變的體細胞突變的“二次打擊二次打擊”動態(tài)突變：動態(tài)突變：不穩(wěn)定的三核苷酸重復序列的預期現(xiàn)象不穩(wěn)定的三核苷酸重復序列的預期現(xiàn)象遺傳背景的影

4、響：遺傳背景的影響：與其他基因座發(fā)生相互作用與其他基因座發(fā)生相互作用遺傳異質性遺傳異質性是產(chǎn)生是產(chǎn)生ARAR表型表達不規(guī)律的原因表型表達不規(guī)律的原因先天聾啞先天聾啞X X連鎖的女性雜合子，由于連鎖的女性雜合子，由于X X染色體的染色體的LyonLyon化導致化導致的染色體隨機失活使女性的癥狀不像男性那么嚴重的染色體隨機失活使女性的癥狀不像男性那么嚴重。臨床表型雜合子臨床表型雜合子(manifesting heterzygote)(manifesting heterzygote)：X X連鎖基連鎖基因的女性雜合攜帶者，由于因的女性雜合攜帶者，由于X X染色體的隨機染色體的隨機LyonLyon化，

5、導致化，導致部分組織的細胞大部分突變基因所在的染色體處于活躍部分組織的細胞大部分突變基因所在的染色體處于活躍狀態(tài)而患病。狀態(tài)而患病。很少見。很少見。全男性傳遞。全男性傳遞。2. 非孟德爾遺傳?。? 1）線粒體遺傳?。┚€粒體遺傳病 (2) (2) 多基因病多基因病許多出生缺陷和慢性晚發(fā)型疾病，家族性聚集性類似于孟許多出生缺陷和慢性晚發(fā)型疾病，家族性聚集性類似于孟德爾遺傳，但不嚴格遵循孟德爾分離率。德爾遺傳，但不嚴格遵循孟德爾分離率。近期研究結果表明：原來認為是多基因病的一些疾病中，近期研究結果表明：原來認為是多基因病的一些疾病中，相當一部分是由于遺傳異質性所致。相當一部分是由于遺傳異質性所致。遺

6、傳印記遺傳印記動態(tài)突變動態(tài)突變3.1 遺傳印記來自父母雙親的等位基因和染色體區(qū)域的表達不來自父母雙親的等位基因和染色體區(qū)域的表達不是等同的，這些等位基因在雙親的配子細胞中經(jīng)過修是等同的，這些等位基因在雙親的配子細胞中經(jīng)過修飾，在子代中的表達不一樣。飾，在子代中的表達不一樣。等位基因按孟德爾方式遺傳，但在表達上受傳遞等位基因按孟德爾方式遺傳，但在表達上受傳遞的雙親性別影響。的雙親性別影響。母源印記：母源印記：母源的等位基因處于失活狀態(tài)母源的等位基因處于失活狀態(tài)父源印記：父源印記：父源的等位基因處于失活狀態(tài)父源的等位基因處于失活狀態(tài)3.2 3.2 動態(tài)突變動態(tài)突變在三核苷酸重復序列擴展所致的疾病中

7、，處于突變狀態(tài)在三核苷酸重復序列擴展所致的疾病中，處于突變狀態(tài)的基因在世代傳遞甚至在體細胞的世代傳遞中表現(xiàn)為不穩(wěn)定的基因在世代傳遞甚至在體細胞的世代傳遞中表現(xiàn)為不穩(wěn)定，其重復單元的數(shù)目會發(fā)生改變。，其重復單元的數(shù)目會發(fā)生改變。AUGCGGGAACAGCTGCGGTAAFra XFraXE11BGlnHDSCA1DRPLAMJDSBMAFRDAXF16ADM細胞遺傳學檢查細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查Chapter 01 遺傳病的常規(guī)診斷病史、癥狀和體征骨髓骨髓, ,胸腹水胸腹水, ,活檢組織活檢組織( (如絨毛膜如絨毛膜, ,手術手術取材的腫瘤組織等取材的腫瘤組織等),),組織培養(yǎng)物組織培

8、養(yǎng)物( (如原如原代培養(yǎng)的細胞代培養(yǎng)的細胞) )羊水等都可以作為檢查羊水等都可以作為檢查材料材料. .人外周血淋巴細胞培養(yǎng)人外周血淋巴細胞培養(yǎng)PHA淋巴母細胞淋巴母細胞秋水仙素秋水仙素分裂中期的細胞分裂中期的細胞X染色體染色體Y染色體染色體13號染色體號染色體18號染色體號染色體21號染色體號染色體細胞遺傳學檢查系譜分析生物化學檢查生物化學檢查Chapter 01 遺傳病的常規(guī)診斷病史、癥狀和體征 苯苯 丙丙 酮酮 尿尿 癥癥 酶活性檢查酶活性檢查 苯丙氨酸羥化酶苯丙氨酸羥化酶 肝肝 臟臟 血液濾片法血液濾片法 枯草桿菌抑制試驗枯草桿菌抑制試驗 FeCl3顯色反應顯色反應 苯丙酮酸苯丙酮酸 綠

9、綠 色色 上海：上海：1981198119871987年對年對284,396284,396名新生兒進行名新生兒進行PKUPKU篩篩查，查出查，查出PKUPKU患兒患兒1515名，高苯丙氨酸血癥名，高苯丙氨酸血癥4 4名。名。苯丙酮尿癥的生化檢查遺傳病的基因診斷Chapter 02原理：原理：將待檢測的將待檢測的DNADNA分子用分子用/ /不用限制性內切酶消化不用限制性內切酶消化后，通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離，繼而將其變性并后，通過瓊脂糖凝膠電泳進行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜按其在凝膠中的位置轉移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標記物標

10、記的上，固定后再與同位素或其它標記物標記的DNADNA或或RNARNA探針進行反應。如果待檢物中含有與探針互補的序列探針進行反應。如果待檢物中含有與探針互補的序列，則二者通過堿基互補的原理進行結合，游離探針洗，則二者通過堿基互補的原理進行結合，游離探針洗滌后用自顯影或其它合適的技術進行檢測，從而顯示滌后用自顯影或其它合適的技術進行檢測，從而顯示出待檢的片段及其相對大小。出待檢的片段及其相對大小。用途：用途：檢測樣品中的檢測樣品中的DNADNA及其含量，了解基因的狀態(tài)及其含量，了解基因的狀態(tài), , 如是否有點突變、擴增重排等。如是否有點突變、擴增重排等。 Southern Blot 操作步驟：操

11、作步驟：DNA 瓊脂糖電泳瓊脂糖電泳 印跡轉移印跡轉移 預雜交預雜交 雜交（變性探針）雜交（變性探針） 洗膜洗膜 放射自顯影或顯色放射自顯影或顯色鐮形紅細胞貧血癥的分子診斷鐮形紅細胞貧血癥的分子診斷1.35Kb1.15Kb脯纈谷脯纈谷脯谷谷脯谷谷第號第號染色體染色體Mst II識別順序識別順序Mst IIMst IIC C T N A G G1.35Kb1.15Kb凝凝 膠膠 電電 泳泳 圖圖HbAHbAHbAHbSHbSHbS操作過程操作過程 mRNAmRNA提取提取 甲醛變性電泳甲醛變性電泳 印跡轉移印跡轉移 預雜交預雜交 雜交（變性探針）雜交（變性探針） 洗膜洗膜 放射自顯影或化學發(fā)光放

12、射自顯影或化學發(fā)光1989年，年，Orita等建立的等建立的PCR產(chǎn)物單鏈產(chǎn)物單鏈DNA凝凝膠電泳技術。膠電泳技術。1 2 3 4 5a b1：正常人：正常人 2,4,5：純合體患者：純合體患者 3：雜合體：雜合體(2的弟弟的弟弟)左為泳動變位模式：左為泳動變位模式：a 正常人；正常人；b 純合體患者純合體患者應用PCR-RFLP法檢測軟骨發(fā)育不全 家系STR位點名稱DXS102DXS8094DXS1192DXS1211DXS8013DXS1227家系AYYNYNN家系BYYYYYN家系CNYYYYN1 1，6 6，1111：待診胎兒外祖父；：待診胎兒外祖父；2 2，7 7，1212：孕婦；：

13、孕婦；3 3，8 8，1313：待診胎兒：待診胎兒4 4，9 9，1414：待診胎兒外祖母；：待診胎兒外祖母；5 5，1010，1515：先證者（待診胎兒舅舅：先證者（待診胎兒舅舅）家系家系A產(chǎn)前診斷電泳分析圖譜產(chǎn)前診斷電泳分析圖譜基因芯片（基因芯片（gene chipgene chip）是利用點樣機等機械裝置，在玻璃等）是利用點樣機等機械裝置，在玻璃等支持物表面整齊地點上高密度的、成千上萬個支持物表面整齊地點上高密度的、成千上萬個“點點”，每個，每個“點點”含有可與一種基因雜交的一條探針。由于芯片含有可與一種基因雜交的一條探針。由于芯片上有序地排列著探針，因此也被稱為微陣列（上有序地排列著探

14、針，因此也被稱為微陣列（）。在芯片上滴加樣品后，在合適的條件下）。在芯片上滴加樣品后，在合適的條件下，樣品中含有的各種核酸片段（或）就與，樣品中含有的各種核酸片段（或）就與相應的探針雜交。由于核酸片段上已標記有熒光素，激發(fā)后相應的探針雜交。由于核酸片段上已標記有熒光素，激發(fā)后產(chǎn)生的熒光強度就與樣品中所含有的相應核酸片段的量成正產(chǎn)生的熒光強度就與樣品中所含有的相應核酸片段的量成正比，也就代表該基因的表達量。經(jīng)激光共聚焦掃描儀等裝置比，也就代表該基因的表達量。經(jīng)激光共聚焦掃描儀等裝置掃描后，所獲得的信息經(jīng)專用軟件分析處理，即可獲得成千掃描后，所獲得的信息經(jīng)專用軟件分析處理，即可獲得成千上萬種基因的表達情況。上萬種基因的表達情況。遺傳病診斷的三個層次遺傳病診斷的三個層次Chapter 03現(xiàn)癥病人診斷現(xiàn)癥病人診斷癥狀前診斷癥狀前診斷產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷Thanks youfor your attention!2. 非孟德爾遺傳?。? 1）線粒體遺傳?。┚€粒體遺傳病 (2) (2) 多基因病多基因病 Southern Blot 操作步驟：操作步驟：DNA 瓊脂糖電泳瓊脂糖電泳 印跡轉移印跡轉移 預雜交預雜交 雜交（變性探針）雜交（變性探針） 洗膜洗膜 放射自顯影或顯色放射自顯影或顯色1 1，6 6，1111：待診胎兒外