實(shí)驗(yàn)十二去蛋白苦味酸法測(cè)定血清肌酐-副本

1、速率法和苦味酸法測(cè)定血清肌酐比較速率法原理肌酐在肌酸脒基水解酶作用下生成肌氨酸，肌氨酸在肌氨酸氧化酶作用下生成過氧化氫，后者在過氧化氫酶作用下與4-氨基安替比林、ESPAS反應(yīng)生成呈色產(chǎn)物紫紅色醌亞胺，在546nm處引起吸光度增高，通過監(jiān)測(cè)546nm處吸光度值的上升來測(cè)定肌酐的濃度過程過程結(jié)果計(jì)算：肌酐濃度(umol/L)= （A測(cè)定 / A標(biāo)準(zhǔn)） C標(biāo)準(zhǔn) (其中A為吸光度的變化,C標(biāo)準(zhǔn)為標(biāo)準(zhǔn)品濃度。)注意事項(xiàng)必須嚴(yán)格的控制反應(yīng)的時(shí)間，以盡量避免快速或慢速反應(yīng)假肌酐物質(zhì)的干擾溶血產(chǎn)生的紅細(xì)胞內(nèi)非特異性物質(zhì)將干擾反應(yīng)膽紅素可引起負(fù)偏差。某些全自動(dòng)生化分析儀，能設(shè)置空白速率參數(shù)，能去除膽紅素負(fù)干擾

2、。評(píng)價(jià)特異性 本法基本上可消除生理濃度的葡萄糖、維生素C和蛋白質(zhì)等的干擾?；厥赵囼?yàn)96.7% 100.4%，平均98.5%。線性范圍 肌酐在1760mol/L范圍內(nèi)線性良好。去蛋白苦味酸法測(cè)定血清肌酐去蛋白苦味酸法原理血漿或血清標(biāo)本經(jīng)除蛋白處理后，肌酐與堿性苦味酸產(chǎn)生Jaffe反應(yīng)，生成橙紅色的苦味酸肌酐復(fù)合物，在510nm和520nm間測(cè)定吸光度，與肌酐含量呈正比。尿液標(biāo)本可稀釋后直接測(cè)定。試劑步驟結(jié)果計(jì)算注意事項(xiàng)堿性肌酐苦味酸復(fù)合物的最大吸光度在485nm，過量苦味酸離子存在于反應(yīng)液中，在波長低于500nm時(shí)會(huì)產(chǎn)生明顯的吸收。反應(yīng)溫度以1525為宜，10以下，會(huì)抑制Jaffe反應(yīng)。溫度升高，可使堿性苦味酸溶液顯色增深，但測(cè)定管較標(biāo)準(zhǔn)管更為明顯。呈色后標(biāo)準(zhǔn)管色澤穩(wěn)定，但測(cè)定管吸光度隨時(shí)間延長而增加，可能與血標(biāo)本中存在的非特異性物質(zhì)有關(guān)，故在加入顯色劑后30分鐘內(nèi)比色為宜?？辔端嵋欢ㄒ?，否則要純化。若含有雜質(zhì)，則使試劑空白吸光度增加而影響測(cè)定結(jié)果。評(píng)價(jià)特異性血漿中的蛋白質(zhì)和糖、丙酮、維生素、丙酮酸、乙酰乙酸等均能與堿性苦味酸發(fā)生非特異性反應(yīng)，反應(yīng)速度稍慢。紅細(xì)胞中這類物質(zhì)最多，約有60，血漿或血清約20，尿約5，故血清和血漿需制備無蛋白濾液后測(cè)定。回收率受無蛋白濾液PH影響，濾液PH在34.5時(shí)，回收率為85