單克隆抗體與動(dòng)物細(xì)胞融合

1、 為什么滅活的為什么滅活的病毒能作誘導(dǎo)劑病毒能作誘導(dǎo)劑？滅活喪失感染性滅活喪失感染性保留融合活性保留融合活性鼠鼠B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞鼠骨髓瘤細(xì)胞鼠骨髓瘤細(xì)胞人工誘導(dǎo)人工誘導(dǎo)雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞 動(dòng)物細(xì)胞融合（動(dòng)物細(xì)胞融合（技術(shù)技術(shù)）：是指）：是指（在一定的條件下在一定的條件下）兩個(gè)或多個(gè)細(xì)）兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞融合形成一個(gè)單核細(xì)胞的過(guò)程。胞融合形成一個(gè)單核細(xì)胞的過(guò)程。問(wèn)題：?jiǎn)栴}：抗體由什么抗體由什么細(xì)胞產(chǎn)生？其化學(xué)細(xì)胞產(chǎn)生？其化學(xué)本質(zhì)是什么？與抗本質(zhì)是什么？與抗原作用的特點(diǎn)？主原作用的特點(diǎn)？主要分布在哪里？要分布在哪里？2.1單克隆抗體的概念單克隆抗體的概念 一個(gè)天然一個(gè)天然抗原物質(zhì)可有抗原物質(zhì)可有多

2、種和多個(gè)決多種和多個(gè)決定簇定簇。教材中。教材中所說(shuō)的抗原分所說(shuō)的抗原分子刺激淋巴細(xì)子刺激淋巴細(xì)胞，說(shuō)的也就胞，說(shuō)的也就是是抗原決定簇抗原決定簇刺激刺激B B淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞，使其分裂胞，使其分裂分化出分化出特異性特異性的效應(yīng)的效應(yīng)B B細(xì)胞細(xì)胞，分泌分泌特異性抗特異性抗體。體。抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從從血血清清中中分分離離抗抗體體該法制備抗體的特點(diǎn)：該法制備抗體的特點(diǎn)： 產(chǎn)量低、純度低，且抗產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。體的特異性差、靈敏度低。多多種種效效應(yīng)應(yīng)B細(xì)細(xì)胞胞動(dòng)動(dòng)物物體體內(nèi)內(nèi)多多種種抗抗體體抗抗原原 讀下面一段文字資料，讀下面一段文字資料，找出單克隆抗體的概

3、念找出單克隆抗體的概念 人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過(guò)程中，體內(nèi)的人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過(guò)程中，體內(nèi)的B B細(xì)胞細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的特異性抗體，但是每個(gè)可以產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的特異性抗體，但是每個(gè)B B細(xì)胞只細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)單一抗體，必須用單個(gè)B B細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖，即克隆。細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖，即克隆。2.1單克隆抗體的概念單克隆抗體的概念 單單: : 單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞 克隆克隆: : 無(wú)性繁殖無(wú)性繁殖 單克隆單克隆抗體抗體: :單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的

4、化學(xué)性質(zhì)單一化學(xué)性質(zhì)單一特異性強(qiáng)特異性強(qiáng)的抗體的抗體提示提示1 1：對(duì)：對(duì)B B細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？提示提示2 2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無(wú)限增殖：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無(wú)限增殖的？的？問(wèn)題：?jiǎn)栴}：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？2.2單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備一個(gè)一個(gè)B B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計(jì)方案：設(shè)計(jì)方案：動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)單克隆單克隆抗體抗體 既能產(chǎn)生特異性抗體，既能產(chǎn)生特異性抗體， 又能

5、大量繁殖的細(xì)胞又能大量繁殖的細(xì)胞 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康? :制備單克隆抗體制備單克隆抗體. . 實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)原理： 實(shí)驗(yàn)過(guò)程：實(shí)驗(yàn)過(guò)程：2.2單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備 看書(shū)上看書(shū)上53頁(yè)圖，分組討論，單抗制備過(guò)程分哪幾步？頁(yè)圖，分組討論，單抗制備過(guò)程分哪幾步？請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過(guò)程步驟的圖解的請(qǐng)用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過(guò)程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來(lái)。順序是？字母按正確順序連接起來(lái)。順序是？ 描述單克隆描述單克隆抗體制備過(guò)抗體制備過(guò)程步驟程步驟注射抗原注射抗原B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合融合多種雜多種雜交細(xì)胞交細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 篩選

6、篩選1 1專一抗專一抗體檢測(cè)體檢測(cè)克隆化克隆化單克隆單克隆抗體抗體有限稀釋法培養(yǎng)有限稀釋法培養(yǎng) 篩選篩選2 21.注射抗原的目的注射抗原的目的是什么？是什么？注射抗原注射抗原B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合融合多種雜多種雜交細(xì)胞交細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 篩選篩選1 1專一抗專一抗體檢測(cè)體檢測(cè)克隆化克隆化單克隆單克隆抗體抗體有限稀釋法培養(yǎng)有限稀釋法培養(yǎng) 篩選篩選2 22.誘導(dǎo)細(xì)胞融合的誘導(dǎo)細(xì)胞融合的手段有哪些？手段有哪些？注射抗原注射抗原B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合融合多種雜多種雜交細(xì)胞交細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 篩選篩選1 1專一抗專一抗體檢測(cè)體檢測(cè)克

7、隆化克隆化單克隆單克隆抗體抗體有限稀釋法培養(yǎng)有限稀釋法培養(yǎng) 篩選篩選2 23.若細(xì)胞兩兩融合后，若細(xì)胞兩兩融合后，有幾種融合情況？有幾種融合情況？注射抗原注射抗原B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合融合多種雜多種雜交細(xì)胞交細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基 篩選篩選1 1專一抗專一抗體檢測(cè)體檢測(cè)克隆化克隆化單克隆單克隆抗體抗體有限稀釋法培養(yǎng)有限稀釋法培養(yǎng) 篩選篩選2 24.第一次篩選出的雜交瘤第一次篩選出的雜交瘤細(xì)胞為何需進(jìn)行克隆化培細(xì)胞為何需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測(cè)？養(yǎng)和專一抗體檢測(cè)？5.5.實(shí)際操作中如何經(jīng)過(guò)兩次篩選獲得能產(chǎn)生特異實(shí)際操作中如何經(jīng)過(guò)兩次篩選獲得能產(chǎn)生特異性抗體的雜交

8、瘤細(xì)胞？性抗體的雜交瘤細(xì)胞？ 有限稀釋法有限稀釋法稀釋多次稀釋多次稀釋稀釋將培養(yǎng)皿孔內(nèi)的上清液取出，檢測(cè)抗體。常用的方法將培養(yǎng)皿孔內(nèi)的上清液取出，檢測(cè)抗體。常用的方法有：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和免疫熒光測(cè)定。有：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和免疫熒光測(cè)定。問(wèn)題：?jiǎn)栴}：?jiǎn)慰寺】贵w的突出優(yōu)點(diǎn)是什么？單克隆抗體的突出優(yōu)點(diǎn)是什么？特異性強(qiáng)、靈敏度高特異性強(qiáng)、靈敏度高 克隆單個(gè)雜交瘤細(xì)胞，可制備克隆單個(gè)雜交瘤細(xì)胞，可制備抗一種抗原抗一種抗原決定簇的決定簇的特異單克隆抗體。特異單克隆抗體。2.3單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用診斷試劑診斷試劑最廣泛應(yīng)用最廣泛應(yīng)用準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速 (“生物導(dǎo)彈生物

9、導(dǎo)彈” 單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭)1、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)診斷試劑診斷試劑目前，應(yīng)用單克隆抗體制作的商品化試劑盒廣泛應(yīng)用于：目前，應(yīng)用單克隆抗體制作的商品化試劑盒廣泛應(yīng)用于：病原微生物抗原、抗體的檢測(cè)；腫瘤抗原的檢測(cè)；免疫細(xì)胞病原微生物抗原、抗體的檢測(cè)；腫瘤抗原的檢測(cè)；免疫細(xì)胞及其亞群的的檢測(cè)；激素測(cè)定；細(xì)胞因子的測(cè)定。及其亞群的的檢測(cè)；激素測(cè)定；細(xì)胞因子的測(cè)定。2、蛋白質(zhì)的提純、蛋白質(zhì)的提純單克隆抗體是親和層析中重要的配體。將單克隆抗體吸附在一個(gè)惰單克隆抗體是親和層析中重要的配體。將單克隆抗體吸附在一個(gè)惰性的固相基質(zhì)上，并制備成層析柱。當(dāng)樣品流經(jīng)層析柱時(shí)，待分離性的固相基質(zhì)上，并

10、制備成層析柱。當(dāng)樣品流經(jīng)層析柱時(shí)，待分離的抗原可與固相的單克隆抗體發(fā)生特異性結(jié)合，其余成分不能與之的抗原可與固相的單克隆抗體發(fā)生特異性結(jié)合，其余成分不能與之結(jié)合。將層析柱充分洗脫后，改變洗脫液的離子強(qiáng)度或結(jié)合。將層析柱充分洗脫后，改變洗脫液的離子強(qiáng)度或PH，欲分，欲分離的抗原與抗體解離，收集洗脫液便可得到欲純化的抗原。離的抗原與抗體解離，收集洗脫液便可得到欲純化的抗原。3、腫瘤的導(dǎo)向治療和放射免疫顯像技術(shù)、腫瘤的導(dǎo)向治療和放射免疫顯像技術(shù)將針對(duì)某一腫瘤抗原的單克隆抗體與化療藥物或放療物質(zhì)連接，利將針對(duì)某一腫瘤抗原的單克隆抗體與化療藥物或放療物質(zhì)連接，利用單克隆抗體的導(dǎo)向作用，將藥物或放療物質(zhì)攜帶至靶器官，直接用單克隆抗體的導(dǎo)向作用，將藥物或放療物質(zhì)攜帶至靶器官，直接殺傷靶細(xì)胞，稱為腫瘤導(dǎo)向治療。另外，將放射性標(biāo)記物與單克隆殺傷靶細(xì)胞，稱為腫瘤導(dǎo)向治療。另外，將放射性標(biāo)記物與單克隆抗體連接，注入患者體內(nèi)可進(jìn)行放射免疫顯像，協(xié)助腫瘤的診斷?？贵w連接，注入患者體內(nèi)可進(jìn)行放射免疫顯像，協(xié)助腫瘤的診斷。目前單克隆抗體主要為鼠源性抗體，異種動(dòng)物血清可引起人體過(guò)敏目前單克隆抗體主要為鼠源性抗體，異種動(dòng)物血清可引起人體過(guò)敏反應(yīng)。因此，制備人反應(yīng)。因此，制備人-人單克隆抗體或人源化抗