自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)

1、自考現(xiàn)代生物制藥技術(shù)一、 名詞概念二、知識(shí)點(diǎn)第一章 緒論第二章 基因工程第三章 微生物工程第四章 細(xì)胞工程第五章 酶工程第六章 細(xì)胞因子三、重點(diǎn)問(wèn)題1重組DNA技術(shù)通常包括2載體的基本條件3可作為載體的有4選擇裂解細(xì)菌的方法取決于：5選擇裂解細(xì)胞的一般準(zhǔn)則：6噬菌體作為克隆載體的特點(diǎn)是：7科斯質(zhì)粒的特點(diǎn)是:8M13載體的優(yōu)點(diǎn)9T4DNA連接酶的作用機(jī)制：10DNA連接反應(yīng)中的注意事項(xiàng)：11受體細(xì)胞一般具有的性能：12DNA分子轉(zhuǎn)化機(jī)理：13基因表達(dá)的三個(gè)基本條件：14堿裂解法制備質(zhì)粒DNA的方法：15配制工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基的一般要求：16培養(yǎng)基的配制原則：17工業(yè)微生物篩選一般要求：18工業(yè)微生物

2、常用的分離篩選途徑：19單孢子懸液的制備方法：20原生質(zhì)體融合技術(shù)的特點(diǎn)：21微生物菌種保存方法：22工業(yè)微生物表面培養(yǎng)法的優(yōu)缺點(diǎn):23工業(yè)發(fā)酵中提高發(fā)酵液的溶氧水平的措施：24影響微生物原生質(zhì)體制備的因素：25微生物工程產(chǎn)品主要類(lèi)型： 26微生物工程在醫(yī)藥工業(yè)中的應(yīng)用：27植物細(xì)胞培養(yǎng)的特性：28種質(zhì)保存意義：29植物原生質(zhì)體制備的預(yù)處理方法：30植物細(xì)胞生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)成份：30制備原生質(zhì)常用酶31測(cè)定植物原生質(zhì)體活力的方法：32植物細(xì)胞分化培養(yǎng)基與原生質(zhì)體培養(yǎng)基的差別：33植物細(xì)胞融合的特點(diǎn)：34篩選植物雜種細(xì)胞的方法；35動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)包括：36二倍體細(xì)胞特征：37動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程的促融因

3、素：38動(dòng)物細(xì)胞融合的基本過(guò)程：39脂質(zhì)體介導(dǎo)的細(xì)胞融合過(guò)程：40雜種動(dòng)物細(xì)胞篩選系統(tǒng)及方法：41動(dòng)物雜種細(xì)胞遺傳表現(xiàn)型：42MCAb的基本特性：43單克隆抗體生產(chǎn)技術(shù)；44無(wú)血清培養(yǎng)基分類(lèi)45微載體培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：46利用有限稀法篩選雜交瘤細(xì)胞的過(guò)程：47動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中所具有的特性：48深凍植物細(xì)胞復(fù)蘇后測(cè)其生命活力與存活率的三種方法：49動(dòng)物細(xì)胞固定化培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：50中空纖維培養(yǎng)器優(yōu)點(diǎn)：511961年，醇學(xué)委員會(huì)將酶分成六類(lèi)：52固定化醇的優(yōu)點(diǎn)：53固定化選用的載體或基質(zhì)需符合的條件：54共價(jià)結(jié)合制備固定化酶的方法：55選擇固定化方法時(shí)的注意事項(xiàng)：56天然酶固定化后話力下降的原因：57包埋

4、法制備固定化醇的具體方法：58. 固定化酶反應(yīng)器：59固定化酶的形狀：60細(xì)胞固定化技術(shù)61固定化細(xì)胞及其特點(diǎn)：62終止酶反應(yīng)的方法：63酶與一般催化劑相比，所具有的優(yōu)點(diǎn)：64自分泌效應(yīng)：65細(xì)胞因子發(fā)生作用的過(guò)程：66細(xì)胞因子的四大系別：67IL-4的生物學(xué)活性：68IL-4的生物學(xué)活性：69IL-9的功能的主要表現(xiàn)：70TNF與一般化療藥品相比，其不同點(diǎn)是：71干擾素的主要作用：72人類(lèi)國(guó)種CST：73集落刺激因子的生物學(xué)作用：74集落刺激因子的臨床應(yīng)用：75細(xì)胞因子受體的信息傳遞途徑：76用于制備細(xì)胞因子的培養(yǎng)細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)十分嚴(yán)格，對(duì)這些細(xì)胞的要求包括：77干擾素的基本特性：78真核基因在原

5、核細(xì)胞中獲得表達(dá)必須具備的三個(gè)條件：79IL-2的生物學(xué)作用：80集落刺激因子的功能：81三種檢測(cè)重組基因工程CSF的方法（1）生物學(xué)檢測(cè)法；82TNF抗腫瘤作用的可能機(jī)制：83細(xì)胞因子共有特性：84細(xì)胞因子的受體，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和功能分類(lèi)：85基因工程細(xì)胞因子制備的基本步驟：86干擾素的生物功能本質(zhì)87基因工程干擾素的制備方法：88集落刺激因子的檢測(cè)方法89CSFs制檢的一般步驟：90紅細(xì)胞生成素的測(cè)定方法：91腫瘤壞死因子生物學(xué)活性：92IL-13的作用：93基因工程重組細(xì)胞因子的制備質(zhì)控：94細(xì)胞因子的分子生物學(xué)測(cè)定法：95干擾素的定義及含義：96人淋巴細(xì)胞幾2的制備產(chǎn)物檢定方法：97L

6、AK細(xì)胞的殺腫瘤細(xì)胞作用：98集落刺激因子的功能：99CCSF和GMCSF的異同點(diǎn)：100CSFs三種檢測(cè)方法的特點(diǎn)：101TNF的炎癥活性：102EP0的生物體外測(cè)定吉林大學(xué)現(xiàn)代生物制藥技術(shù))一、名詞概念1.生物工程：應(yīng)用生物科學(xué)的理論、方法，按照人們?cè)O(shè)計(jì)的藍(lán)圖，改良加工生物或用生物及其制備物作為加工原料，以提供所需生物制品為人類(lèi)社會(huì)服力的綜合性科學(xué)技術(shù)。2.第一代生物過(guò)程：以非純科微生物自然發(fā)酵工藝為標(biāo)志的生物技術(shù)。3.第二代生物過(guò)程：以純種微生物發(fā)酵工藝為標(biāo)志的生物技術(shù)。4.第三代生物過(guò)程：以基因工程誕生為標(biāo)志的生物技術(shù)。5.基因工程：指在體外將核酸分子插入病毒、質(zhì)?；蚱渌d體分子，構(gòu)成

7、遺傳物質(zhì)的新組合，并使之慘入到原先沒(méi)有這類(lèi)分子寄生的細(xì)胞內(nèi)，而能持續(xù)穩(wěn)定地繁殖，并通過(guò)工程化為人類(lèi)提供有用產(chǎn)品及服務(wù)的技術(shù)。6.分子克?。涸诜肿铀习凑杖藗?cè)O(shè)計(jì)的藍(lán)圖對(duì)基因進(jìn)行人工操作的技術(shù)。7.載體：攜帶外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞的工具即載體。8.質(zhì)粒：在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)作為與宿主染色體有別的復(fù)制子而進(jìn)行復(fù)制，并且在細(xì)胞分裂時(shí)能恒定地傳遞給子代細(xì)胞的獨(dú)立遺傳因子。9.科斯質(zhì)粒：一種由人工構(gòu)建的含有噬菌體粘性末端及質(zhì)粒復(fù)制子的雜種質(zhì)粒。10基因文庫(kù)：利用基因工程方法將某生物的全部基因幾乎都制備成克隆細(xì)胞系，這一組克隆的總體（無(wú)性繁殖系）叫該生物的基因文庫(kù)。11.酶促合成法：以某一目的基因的mRNA為模板，

8、用逆轉(zhuǎn)錄酶合成其互補(bǔ)DNA，再進(jìn)而合成雙鏈DNA的方法。12.體外重組：就是將目的DNA分子與載體DNA在DNA，連接酶的作用下連接成重組DNA分子。13.感受態(tài)：就是細(xì)菌吸收轉(zhuǎn)化因子（周?chē)h(huán)境中的DNA分子）的生理狀態(tài)。14.轉(zhuǎn)化：就是將攜帶某種遺傳信息的DNA分子引入宿主細(xì)胞；通過(guò)DNA之間同源重組作用，獲得具有新遺傳信息并傳遞到另一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。15.轉(zhuǎn)導(dǎo)：通過(guò)噬菌體或病毒的感染作用將一個(gè)細(xì)胞的遺傳信息傳遞到另一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。16.基因表達(dá)：指結(jié)構(gòu)基因在生物體中的轉(zhuǎn)錄、翻譯以及所有加工過(guò)程。17微細(xì)胞：是某些細(xì)菌的突變株在生長(zhǎng)期間產(chǎn)生的一類(lèi)微小的圓形的無(wú)核細(xì)胞，它具細(xì)胞壁及細(xì)胞膜、核糖體

9、及能量產(chǎn)生系統(tǒng)，但不含有染色體DNA。18.HbsAg：即乙肝表面抗原，是乙型肝炎病毒表面包被的抗原。19.HGH：是人腦下垂體前葉分泌的是191個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)類(lèi)激素，分子量為22KD，可促進(jìn)人及動(dòng)物的生長(zhǎng)。20.微生物工程：在應(yīng)用微生物中，所有通過(guò)微生物培養(yǎng)而生產(chǎn)的對(duì)人類(lèi)有益的產(chǎn)品或提供服務(wù)的技術(shù)。21.微生物：指一切形體微小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單的低等生物的總稱。22.病毒：一類(lèi)比細(xì)菌還小，沒(méi)有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，不能營(yíng)獨(dú)立生活的微生物。23.培養(yǎng)基：人工按一定比例配制的供微生物生產(chǎn)繁殖和合成各種代謝產(chǎn)物所需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的混合物。24.碳源：凡是用于構(gòu)成微生物細(xì)胞和代謝產(chǎn)物中碳素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。25.氮源：是指構(gòu)

10、成微生物細(xì)胞和代謝產(chǎn)物中的氮素營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。26.生長(zhǎng)因素：指某些微生物在生命活動(dòng)過(guò)程中必須從外界環(huán)境中攝取的某些微量有機(jī)化合物。27.防腐：一種抑菌作用，使物體內(nèi)外的微生物暫還處于不生長(zhǎng)，不繁殖但又未死亡的狀態(tài)。28消毒：殺死或消除所有病原微生物的措施。29.滅菌：用物理或化學(xué)因子，使存在于物體內(nèi)外的所有生活微生物，永久性地喪失其生活力，包括最耐熱的牙孢。30.死亡：對(duì)微生物而言，不可逆地喪失了生長(zhǎng)繁殖的能力，即使再放到合適的環(huán)境中也不再繁殖。31.干熱滅菌：指在高溫條件下，微生物細(xì)胞內(nèi)的各種與溫度有關(guān)的化學(xué)反應(yīng)速度增加，使微生物的致死率迅速增高的過(guò)程。32.自然選育：根據(jù)菌種自發(fā)突變而進(jìn)行的菌

11、種篩選的過(guò)程。33誘變育種：指用物理、化學(xué)因素處理微生物細(xì)胞，使細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)在結(jié)構(gòu)上發(fā)生變化，從而導(dǎo)致微生物遺傳性狀的改變，根據(jù)育種的目的要求，挑選出有價(jià)值的變異菌株的技術(shù)。34原生質(zhì)體融合育種：指用人工方法在離體條件下得到所需的外源基因，然后把這個(gè)外源基因連在載體DNA上，并引入受體細(xì)胞，從而可使受體細(xì)胞獲得外源基因的遺傳信息，并進(jìn)行正常的復(fù)制，表達(dá)和遺傳。36.分批補(bǔ)料培養(yǎng)法：在分批式操作基礎(chǔ)上，不全部取出反應(yīng)系，剩余部分重新補(bǔ)充新的營(yíng)養(yǎng) 成分，再按分批式操作的方式進(jìn)行的培養(yǎng)方法。37種子制備：指將固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)的孢子或菌體轉(zhuǎn)到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使其大量繁殖成菌絲或菌體的過(guò)程。38植物

12、細(xì)胞工程：根據(jù)生物學(xué)原理及工程學(xué)原理定向改革植物細(xì)胞遺傳性，利用植物細(xì)胞為人類(lèi)生產(chǎn)名貴藥品提供服務(wù)的技術(shù)。39植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)：在一定條件下，通過(guò)人工供給營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及生長(zhǎng)因子，令離體植物細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖的方法。40懸浮培養(yǎng)法：游離植物細(xì)胞懸浮于液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)的方法。41平板培養(yǎng)法：分散的植物細(xì)胞接種于含薄層固體培養(yǎng)基器車(chē)皿內(nèi)培養(yǎng)的方法。42細(xì)胞突變：指遺傳物質(zhì)在一級(jí)結(jié)構(gòu)上發(fā)生永久而能遺傳的變化。43直接篩選法：利用選擇條件下細(xì)胞突變體可優(yōu)先生長(zhǎng)的新表型或感觀上可測(cè)定的差異進(jìn)行選擇的方法。44復(fù)蘇：深凍冷藏細(xì)胞經(jīng)化凍再培養(yǎng)的過(guò)程。45植物原生質(zhì)體：除去纖維素外壁且具有生活力的裸體植物細(xì)胞。46植物細(xì)

13、胞融合：在外界因素作用下，令兩上或兩上以上植物細(xì)胞合并成一個(gè)多核細(xì)胞的過(guò)程。47遺傳互補(bǔ)篩選法：利用每一親本貢獻(xiàn)一個(gè)功能正常等位基因，糾正另一親本的缺陷，令雜種細(xì)胞表現(xiàn)正常功能的原理選擇雜種細(xì)胞的方法。48微室培養(yǎng)法：此為懸浮單細(xì)胞接種于凹玻片或玻璃環(huán)與蓋玻片組成的微室內(nèi)固體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)方法。49抗性互補(bǔ)篩選法：利用親本原生質(zhì)體對(duì)抗生素、除草劑及其它有毒物質(zhì)抗性差異選擇雜種細(xì)胞的方法。50利用生長(zhǎng)特性篩選法：利用原生質(zhì)體對(duì)培養(yǎng)基成分要求與反應(yīng)的差異選擇雜種細(xì)胞的方法稱為利用生長(zhǎng)特性篩選法。51植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)：在人工控制下高密度大量培養(yǎng)有益植物細(xì)胞即植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)。52半連續(xù)培養(yǎng)法：在

14、反應(yīng)器中投料和接種，培養(yǎng)一段時(shí)間后，將培養(yǎng)液和新鮮培養(yǎng)液進(jìn)行交換的掊養(yǎng)方法，稱為半連續(xù)培養(yǎng)法。53動(dòng)物細(xì)胞工程：根據(jù)細(xì)胞生物學(xué)及工程學(xué)原理定向改造動(dòng)物細(xì)胞遺傳性、創(chuàng)造新物種，通過(guò)工程化為人類(lèi)提供名貴藥品服務(wù)的技術(shù)，稱為動(dòng)物細(xì)胞工程。54動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)：在一定條件下，通過(guò)人工供給營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及生長(zhǎng)因子，使離體動(dòng)物細(xì)胞或組織生長(zhǎng)繁殖的方法，稱為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。55細(xì)胞塊培養(yǎng)法：將動(dòng)物組織切成直徑12mm小塊，進(jìn)行培養(yǎng)的方法，稱為組織塊培養(yǎng)法。56細(xì)胞單層培養(yǎng)法：動(dòng)物組織塊經(jīng)銷(xiāo)化分散成單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)塊后，粘附于培養(yǎng)容器表面培養(yǎng)成新生細(xì)胞單層的培養(yǎng)法，稱為細(xì)胞單層培養(yǎng)法。57單細(xì)胞分離培養(yǎng)：動(dòng)物組織

15、分散后，將其單個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)成純系細(xì)胞集群的技術(shù)，稱之為單胞分離培養(yǎng)。58確立細(xì)胞株：正常細(xì)胞在移植繼代過(guò)程中，有些細(xì)胞增殖力突增強(qiáng)，在特定條件下可無(wú)限繁殖，與初代細(xì)胞相比，其形態(tài)、生理生化特性，病毒敏感生，抗原性及染色體結(jié)構(gòu)均發(fā)生變化，具有致癌性，這些細(xì)胞稱為確立細(xì)胞株。59動(dòng)物體細(xì)胞雜交技術(shù)：在外力作用下，令兩上或兩上以上異源細(xì)胞合并為一個(gè)多核細(xì)胞的過(guò)程，稱為動(dòng)物體細(xì)胞雜交技術(shù)。60核體：細(xì)胞核連同其外表薄層細(xì)胞質(zhì)構(gòu)成的顆粒稱為核體。61胞質(zhì)體：不具有細(xì)胞核的細(xì)胞稱為胞質(zhì)體。62微核雜種細(xì)胞：按完整細(xì)胞之間的融合方式，將微核與另一完整細(xì)胞融合，使后者獲得另一種細(xì)胞中的若干個(gè)染色體，所獲融合子稱

16、為微核雜種細(xì)胞。63抗藥性篩選系統(tǒng)：利用生物細(xì)胞對(duì)藥物敏感性差異篩選雜種細(xì)胞的方法。64營(yíng)養(yǎng)缺陷型細(xì)胞：在一些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的合成能力上出現(xiàn)缺陷，因此必須在基本培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的有機(jī)成分才能正常生長(zhǎng)的變異細(xì)胞。65營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)選擇法：利用兩種親本細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)作用原理篩選雜種細(xì)胞的方法稱為營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)選擇法。66雜交瘤技術(shù)：骨髓瘤細(xì)胞與免疫淋巴細(xì)胞融合制備雜種細(xì)胞的方法為雜交瘤技術(shù)。67雜合瘤：骨髓瘤細(xì)胞與免疫淋巴細(xì)胞融合制備的雜種細(xì)胞稱為雜合瘤。68微載體培養(yǎng)法：將細(xì)胞吸附于微載體表面的培養(yǎng)方法。69酶工程：應(yīng)用酶的特異性催化功能并通過(guò)工程化為人類(lèi)生產(chǎn)有用產(chǎn)品及提供有益服備的技術(shù)為本酶工程。70酶：生物體內(nèi)

17、具有特殊催化功能的蛋白質(zhì)稱為酶。71固定比酶：限制或定位于特定空間位置的酶稱為固定化醇。72固定化細(xì)胞：被限制或定位于特定空間位置的細(xì)胞稱為固定化細(xì)胞。73載體結(jié)合法：將細(xì)胞懸浮液直接與水不溶性轂體相結(jié)合的固定化方法。74包埋法：將細(xì)胞定位于凝膠網(wǎng)格內(nèi)的技術(shù)稱為包埋法。75偶聯(lián)效率：偶聯(lián)固定化反應(yīng)過(guò)程中載體結(jié)合蛋白質(zhì)的能力稱為偶聯(lián)效率。QQ：80623535676酶活力：醇類(lèi)催化特定化學(xué)反應(yīng)的能力稱為酶活力。77酶比活：指每毫克酶蛋白所表現(xiàn)的活力。78固定化反應(yīng)的酶活力回收串：固定醇所顯示的活力與加入偶聯(lián)液中酶總活力的比值稱為固定化反應(yīng)的酶活力回收率。79酶試劑盒；將酶、反應(yīng)試劑、穩(wěn)定劑、激活

18、劑，填充劑、及緩沖劑等配成檢測(cè)用的混合制劑稱酶試劑盒。80細(xì)胞因子：是人類(lèi)或動(dòng)物的各類(lèi)細(xì)胞分泌的具有多樣生物活性的因子，是可溶性物質(zhì)，是一組不均一的蛋白質(zhì)分子，能調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)與分化。81白細(xì)胞介素：由白細(xì)胞或其它細(xì)胞產(chǎn)生的又在白細(xì)胞間起調(diào)節(jié)作用和介導(dǎo)作用的因子。82.IL-3：即白細(xì)胞介素3，由激活的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，能刺激多能造血干細(xì)胞和各系細(xì)胞的分化和增殖，促進(jìn)和維持肥大細(xì)胞的增殖，增殖中性粒細(xì)胞、酸性粒細(xì)胞的活性，促進(jìn)NX細(xì)胞殺傷實(shí)體瘤的活性。83.IL-10：由TH2細(xì)胞產(chǎn)生，能抑制TH1細(xì)胞合成因子的能力，是一種糖蛋白。84.IL-12：是由B淋巴細(xì)胞分泌的一種細(xì)胞因子，分子量為75

19、KD的糖蛋白，其主要作有得促進(jìn)PHA活化的PBMC增殖以及亞適劑量IL-2協(xié)同促進(jìn)作用。85腫瘤壞死因子：是一種由巨噬細(xì)胞分泌能產(chǎn)生細(xì)胞素，使腫瘤細(xì)胞溶解的因子。86干擾素：是一類(lèi)在同種細(xì)胞上具有廣譜抗病毒活性的蛋白質(zhì)，其活性的發(fā)揮又受細(xì)胞基因組的調(diào)節(jié)和控制，涉及RNA和蛋白質(zhì)的合成。87集落刺激因子：CSF為一組糖蛋白物質(zhì)，由淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞自然產(chǎn)生，有刺激紅細(xì)胞系以外造血細(xì)胞增殖和分化的作用。88超誘導(dǎo)：是指細(xì)胞在某種大分子合成抑制物的適當(dāng)作用，誘生蛋白合成增加的現(xiàn)象。89生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑：是生物體體內(nèi)的某些細(xì)胞和某些分子，它們既是機(jī)體對(duì)內(nèi)外環(huán)境刺激應(yīng)答的效應(yīng)機(jī)制，也是機(jī)體維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定

20、因素。二、知識(shí)點(diǎn)第一章 緒論1發(fā)現(xiàn)發(fā)酵過(guò)程是微生物作用的結(jié)果的人是巴斯德。2在現(xiàn)代生物過(guò)程中，基因工程是定向改造生物遺傳性的主導(dǎo)性技術(shù)。3現(xiàn)代生物工程根據(jù)操作對(duì)象及目的，可分為基因工程、微生物工程、細(xì)胞工程、酶工程等。4細(xì)胞融合是改造生物遺傳性的重要途徑。5原始生物工程以非純種微生物自然發(fā)酵工藝為標(biāo)志。6近代生物工程是采用純種微生物的發(fā)酵工藝。第二章 基因工程1基因工程是在發(fā)現(xiàn)細(xì)菌限制性核酸內(nèi)切酶、DNA重級(jí)及DNA順序分析獲笪成功基礎(chǔ)發(fā)展和成熟的。2DNA順序分析技術(shù)，為基因結(jié)構(gòu)分析，基因圖譜制備及基因合成提供了重要分析手段。3基因工程最大特點(diǎn)是打破生物種屬界限，進(jìn)行種屬內(nèi)外基因重組，遺傳信

21、息交換和轉(zhuǎn)移。4基因工程技術(shù)也稱重組DNA或分子克隆。6重組DNA技術(shù)通常包括：載體的選擇和制備，目的基因的分離純化。目的基因與載體的重組，重組體的轉(zhuǎn)化、重組克隆的篩選、基因表達(dá)與產(chǎn)物純化。7質(zhì)粒是指能在細(xì)胞內(nèi)寄生和復(fù)制的復(fù)制子。8質(zhì)粒的復(fù)制不受宿主染色體控制。9質(zhì)粒為雙鏈閉鴿不狀DNA分子。10質(zhì)?？煞譃樽陨韨鬟f性質(zhì)粒。11雄性大腸桿菌表面的性纖毛是一種接合質(zhì)粒形成的表面物質(zhì)。12根據(jù)質(zhì)粒在細(xì)胞中拷貝數(shù)的不同，可把質(zhì)粒分為松馳型質(zhì)粒和嚴(yán)緊型質(zhì)粒。13嚴(yán)緊質(zhì)粒大多為具有自身傳遞能力的大質(zhì)粒。14分子量較大，自身傳遞上嚴(yán)緊型質(zhì)粒的特點(diǎn)。15分子量較小，不具自身傳遞性是松馳型質(zhì)粒的特點(diǎn)。16基因工

22、程中使用的質(zhì)粒都是松馳型質(zhì)粒。17松馳型質(zhì)?？杀宦让顾?cái)U(kuò)增。18細(xì)菌收獲可通過(guò)離心進(jìn)行。19細(xì)菌裂爭(zhēng)可采用：非離子型或離子型去污劑，有機(jī)溶劑，堿處理及加熱處理。20噬菌體長(zhǎng)約48.5kb。21野生型噬菌體為雙鏈線形分子，具有12個(gè)堿基的粘性末端，進(jìn)入大腸桿菌之后可以互補(bǔ)成環(huán)。22噬菌體既可溶菌生長(zhǎng)，又可溶源生長(zhǎng)。23噬菌體適于克隆大片段DNA及組建原核基因文庫(kù)。24科期質(zhì)粒是一種人工質(zhì)粒。25科斯質(zhì)粒是克隆大片段DNA及組建真核基因文庫(kù)的有效手段。26M13噬菌體是一種單鏈DNA噬菌體。27M13噬菌體只能感染雄性大腸肝菌。28M13噬菌體形成渾濁斑。29汞離子可以特異地與dA、dT結(jié)合。30

23、目前分離目的基因的方法主要有直接分離法，構(gòu)建基因文庫(kù)法，酶促合法及化學(xué)合成法。31構(gòu)建基因文庫(kù)法主要應(yīng)用于原核生物。32酶促合成法主要應(yīng)用于真核生物。33酶促合成法的前提是必須首先得到該目的基因的mRNA。34化學(xué)合成法必須已知該基因的核長(zhǎng)苷酸順序或蛋白質(zhì)的氨基酸序列。35DNA連接酶可催化DNA連接酶可催化DNA鏈的5，-磷酸基與另一條DNA鏈的3，-羥基生成磷酸二酯鍵。36大腸桿菌DNA連接酶以DAN為輔因子。37T4DNA連接酶以ATP為輔因子。38T4DNA可以催化DNA-DNA，DNA-RNA，RNA-RNA，雙鏈DNA的粘末端或鈍端連接。39大腸桿菌DNA連接酶只能催化DNA雙鏈的

24、單鏈缺口和帶粘性末端的雙鏈DNA。40TDT即末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶。41DNA連接酶的最適溫度是370C。42連接反應(yīng)溫度應(yīng)介于催化反應(yīng)與末端粘合之間。43根據(jù)受體系統(tǒng)不同，基因工程可分為微生物基因工程、動(dòng)物基因工程和植物基因工程。44關(guān)于感受態(tài)本質(zhì)的假說(shuō)包括局部原生質(zhì)體化假說(shuō)及酶受體假說(shuō)。45大腸桿菌感受的制備方法包括Hanahan法，氯化鈣法及電轉(zhuǎn)化法。46局限性轉(zhuǎn)導(dǎo)只能轉(zhuǎn)導(dǎo)宿主染色體上少數(shù)基因。47普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)可轉(zhuǎn)導(dǎo)宿主染色體上任何基因。48-半乳糖基因插入失活法的重組質(zhì)粒產(chǎn)生白色菌落。49不帶-半糖苷酶活性蛋白的菌落中央也可出現(xiàn)淡藍(lán)色斑點(diǎn)。50動(dòng)植物病毒也可作為外源基因的載體。51目的基

25、因重組克隆的篩選方法包括：根據(jù)重組體表型篩選，重組體結(jié)構(gòu)分析法，檢測(cè)目的基因法及檢測(cè)目的基因表達(dá)產(chǎn)的法。52原核生物中基因表達(dá)以操縱子形式進(jìn)行。53原核生物細(xì)胞沒(méi)有核膜，因此表達(dá)過(guò)程中的轉(zhuǎn)錄與翻譯往往同時(shí)進(jìn)行。54原核生物的mRNA在翻譯完畢之后，隨即被水解掉。55真核生物轉(zhuǎn)錄成不均-RNA之后，還需加工，如去掉內(nèi)含子，修飾，加工5，末端和3，末端。56基因工程中基因表達(dá)的研究，是指外源基因在某一種細(xì)胞中的表達(dá)活動(dòng)。57大腸桿菌，酵母與哺乳動(dòng)物細(xì)胞三大基因表達(dá)體系已成為當(dāng)前基因工程工業(yè)性生產(chǎn)的核心。58基因表達(dá)合成功能蛋白的基本條件是依賴于基因的有效轉(zhuǎn)錄，mRNA正確的轉(zhuǎn)譯和轉(zhuǎn)譯后的加工。59

26、閱讀框架是由起始密碼子決定的。60用于保證目的基因處于正確的閱讀框架中的方法有：選用適當(dāng)?shù)拿盖形稽c(diǎn)；用人工接頭調(diào)節(jié)閱讀框架；構(gòu)建一組適合不同閱讀框架的載體。61基因的表達(dá)受到啟動(dòng)子等調(diào)控元件的控制。62基因的高效表達(dá)必須依賴一個(gè)強(qiáng)的啟動(dòng)子。63適當(dāng)?shù)膯?dòng)子，只能保證目的基因的正確轉(zhuǎn)錄，而并不能保證基因的完全正確表達(dá)。64對(duì)已知功能的基因表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)，可以采用蛋白質(zhì)電泳，免疫擴(kuò)散和凝集，酶聯(lián)免疫和放射免疫等方法。65對(duì)未知目的基因功能的表達(dá)產(chǎn)物的檢測(cè)方法是在攜帶有重組體分子的細(xì)胞中尋找新合成的蛋白質(zhì)。66應(yīng)用大細(xì)胞系統(tǒng)檢測(cè)基因表達(dá)時(shí)，主要是利用質(zhì)?；蜉d體擴(kuò)增的途徑。67微細(xì)胞不含有染色體DNA

27、。68.HbsAg是指乙肝表面抗原。69HGH是指人生長(zhǎng)激素。70HGH可以治療侏儒癥，促進(jìn)燒傷及骨折等創(chuàng)傷性組織的恢復(fù)。第三章 微生物工程1發(fā)酵工程包括天然微生物培養(yǎng)過(guò)程和人工控制培養(yǎng)過(guò)程兩種方法。2細(xì)菌為單細(xì)胞原核生物。3常用工業(yè)微生物主要有細(xì)菌、放線菌、酵母菌、霉菌、大型真菌和病毒。4工業(yè)生產(chǎn)中應(yīng)用最多的細(xì)菌為桿菌。5螺旋菌根據(jù)其彎曲情況不同可分了孤菌及螺旋菌。6細(xì)菌大小一般為1m之間。7放線菌菌絲分為基內(nèi)菌絲、氣生菌絲和孢子絲。8放線菌最大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值是產(chǎn)生抗生素。9酵母菌的主要繁殖方式為芽殖。10霉菌為多細(xì)胞真核生物。11病毒的復(fù)制包括吸附、浸入、脫殼、生物合成、裝配與釋放五個(gè)階段。1

28、2培養(yǎng)基的組成菌體生長(zhǎng)繁殖、產(chǎn)物生物合成、產(chǎn)品的分離精制以及產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量都有重要影響。13培養(yǎng)基的原材料包括碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、水和生產(chǎn)因子等五大類(lèi)。14碳源在微生物細(xì)胞內(nèi)的主要功能是構(gòu)成細(xì)胞結(jié)構(gòu)物質(zhì)，供給能源及為次生代謝提供原料。15氮源的生理功能主要是作為合成細(xì)胞原生質(zhì)、生活活性物質(zhì)、細(xì)胞結(jié)構(gòu)物質(zhì)和某謝代謝產(chǎn)物的原料。16無(wú)機(jī)鹽的微量元素的主要生理功能是某些生產(chǎn)活性物質(zhì)的組成成分，參與細(xì)胞滲透壓、氫離子濃度，氧化還原電位的調(diào)節(jié)等。17水常以游離狀態(tài)和結(jié)合狀態(tài)存在于生物體內(nèi)。18水的主要生理功能是參與代謝反應(yīng)，作為反應(yīng)的價(jià)質(zhì)，提供氫、氧元素；參與物質(zhì)運(yùn)輸；傳遞熱量，調(diào)節(jié)體溫。19培養(yǎng)基中

29、的生長(zhǎng)因素的主要功能是作為酶的重要組成成分。20化學(xué)物質(zhì)來(lái)菌只適用于局部空間或某些器械消毒。21用于輻射滅菌的射線有X射線，射線和紫外線。22紫外線殺菌最有效波長(zhǎng)為2537oA。23干熱滅菌主要用于器械、溶器的滅菌。24濕熱滅菌是直接采用蒸汽滅菌。25工業(yè)微生物選育的目的是改良菌種的特性，使其符合工業(yè)生產(chǎn)的要求。26工業(yè)微生物選育的方法主要有自然選育、誘變育種、雜交育種、原生質(zhì)體融合育種、基因工程育種技術(shù)。27誘變育種的誘變因素主要分物理、化學(xué)和生物學(xué)三類(lèi)。28誘變育種整個(gè)過(guò)程就是誘變和篩選的重復(fù)。29通過(guò)基因工程改造后的菌株稱為工程菌。30斜面低溫保藏微生物菌種是利用低溫短期保存菌種方法。3

30、1液體石蠟封存法保存菌種不適用于能利用石蠟的微生物。32砂士管保存菌種的方法僅適用于產(chǎn)孢子的放線菌、霉菌以及產(chǎn)芽孢的細(xì)菌。33冷凍干燥保存法適用于各種菌種的保存。34超低溫保藏菌種的方法有表面培養(yǎng)法、深層培養(yǎng)法、透析法和萃取培養(yǎng)法。35工業(yè)微生物細(xì)菌的培養(yǎng)方法有表面培養(yǎng)法、深層培養(yǎng)法、透析法和萃取培養(yǎng)法。36微生物細(xì)胞的液體表面培養(yǎng)方法都是氣體在基質(zhì)表面上進(jìn)行交換。37液體表面培養(yǎng)法的優(yōu)點(diǎn)就是簡(jiǎn)單易行，投資少及適用于小型生產(chǎn)。38液體深層培養(yǎng)法又可分為需氧深層培養(yǎng)和厭氧深層培養(yǎng)。39深層透氣培養(yǎng)是在純種條件下，強(qiáng)制通入無(wú)菌空氣到密團(tuán)發(fā)酵罐中進(jìn)行培養(yǎng)的方式。40在分批培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞生長(zhǎng)大致有四

31、個(gè)階段：遲滯期；對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期；平衡期；死亡期。41連續(xù)培養(yǎng)法的優(yōu)點(diǎn)是設(shè)備利用率高，缺點(diǎn)是易于染菌。42碳源豐富造成的生理酸性營(yíng)養(yǎng)環(huán)境不利于放線菌孢子形成。43一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)放線菌孢子形成。44霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麥米、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。45細(xì)菌的斜面基多采用碳源限量而氮源豐富的配方。46微生物培養(yǎng)基，培養(yǎng)溫度、pH值，溶解氧、培養(yǎng)時(shí)間、泡沫、CO2、菌濃及產(chǎn)物濃度等有關(guān)。47微生物培養(yǎng)的溫度應(yīng)略低于微生物生長(zhǎng)的最適溫度。48大多數(shù)細(xì)菌適于中性或微堿性環(huán)境，放線菌喜微堿性，而酵母菌和霉菌則喜酸性。49發(fā)酵液的需氧量，受菌體濃度，基質(zhì)的種類(lèi)和濃

32、度以及培養(yǎng)條件等因素的影響。50供融合用的親株要求性能穩(wěn)定并帶有遺傳標(biāo)記，采用的遺傳標(biāo)記一般為營(yíng)養(yǎng)缺陷型和抗生素抗性等遺傳性狀。51細(xì)菌和放線菌主要采用溶菌酶制備原生質(zhì)體。52對(duì)于酵母菌和霉菌原生質(zhì)體的制備，則一般采用蝸牛酶和纖維素酶。53高滲培養(yǎng)基稱為原生質(zhì)體穩(wěn)定液。54一般原生質(zhì)體融合選用40006000分子量的聚乙二醇較好。55影響原生質(zhì)體再生的因素主要有菌種的特性，原生質(zhì)體制備條件，再生培養(yǎng)基成份，再生培養(yǎng)條件等。56酵母原生質(zhì)體融合主要分為原生質(zhì)體制備，原生質(zhì)體融合及融合子的選擇。57放線菌原生質(zhì)體融合中相關(guān)培養(yǎng)基為SI培養(yǎng)基，GPYG培養(yǎng)基，P3培養(yǎng)基，PWP液，P培養(yǎng)基R培養(yǎng)基，

33、R2培養(yǎng)基及R3培養(yǎng)基。58R2、R3培養(yǎng)基屬于放線菌原生質(zhì)體再生培養(yǎng)基。597，8-二甲基-10-（D-1，-核糖基）異咯嗪即維生素B260氫化可的松屬于糖皮質(zhì)激素，臨床上主要用于抗炎、抗過(guò)敏等。第四章 細(xì)胞工程1植物細(xì)胞工程包括植物細(xì)胞及其原生質(zhì)體的培養(yǎng)，植物原生質(zhì)體融合，細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)及次生代謝物的生產(chǎn)。2植物培養(yǎng)細(xì)胞無(wú)錨地依賴性及接觸抑制性。3植物細(xì)胞生長(zhǎng)的最適pH通常為5.86.0。4植物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)法是懸浮、微室、平板、看護(hù)、懸滴及單花粉等多種培養(yǎng)方式。5懸浮培養(yǎng)特點(diǎn)是培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞總數(shù)不斷增加，一定時(shí)間后產(chǎn)量達(dá)最高點(diǎn)，生長(zhǎng)趨于停止。6植物細(xì)胞接種濃度通常為2.5×1

34、045.0×104細(xì)胞/毫升。7植物細(xì)胞單細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)有平板培養(yǎng)法，微室培養(yǎng)法、看護(hù)培養(yǎng)法等。8微室培養(yǎng)法的優(yōu)點(diǎn)是可直接觀察分裂繁殖及分化全過(guò)程，胞質(zhì)環(huán)流規(guī)律及線粒體生長(zhǎng)與分裂活動(dòng)，亦可進(jìn)行連續(xù)觀察原生質(zhì)體融合，細(xì)胞壁再生及融合后細(xì)胞分裂活動(dòng)，同時(shí)可進(jìn)行顯微攝像。9看護(hù)培養(yǎng)法培養(yǎng)時(shí)間較微室培養(yǎng)長(zhǎng)。10細(xì)胞突變的主要原因是染色體缺失、重復(fù)、倒位、異位、堿基順序轉(zhuǎn)換、顛換及移碼所引起。11植物細(xì)胞培養(yǎng)物易發(fā)生自發(fā)突變，其突變頻率在10-710-6之間。12人工誘發(fā)植物細(xì)胞突變的化學(xué)因素主要有堿基類(lèi)似物、烷化劑、抗生素等。13篩選植物突變細(xì)胞的目的在于獲得某些藥物高產(chǎn)細(xì)胞株或某些物質(zhì)轉(zhuǎn)化的

35、高產(chǎn)酶細(xì)胞株。14篩選細(xì)胞突變體主要依據(jù)細(xì)胞表型變化。15自離體植物細(xì)胞培養(yǎng)物中篩選細(xì)胞突變體的方法有直接選擇法，間接選擇法及綠島法。16植物細(xì)胞培養(yǎng)物處于無(wú)組織無(wú)器官分化的分散狀態(tài)時(shí)許多重要基因并不表達(dá)。17目前已建立植物細(xì)胞種質(zhì)保存法有：干燥保存法，液體石蠟覆蓋法，低溫保存法，低壓低氧保存法及超低溫深凍保存法。18超低溫深凍保存法系將植物種質(zhì)于-1960C的液氮中保存。19常用的凍凍保護(hù)劑有DMSO，甘油，PEG，葡萄糖、山梨糖及蔗糖。20為提高存活力，凍存材料應(yīng)選用抗寒力強(qiáng)的幼齡培養(yǎng)細(xì)胞。21對(duì)于種子、花粉、球莖等高度脫水材料可以采用快速降溫的凍存。22對(duì)于不耐寒植物細(xì)胞需采用慢速冰凍法

36、。23對(duì)于木本植物冬芽?jī)龃嫖镄栌?0C慢速化凍。24深凍細(xì)胞活力及存活率測(cè)定的方法有再培養(yǎng)法、二醋酸熒光素染色法及氯化三笨四氮唑還原法。25再培養(yǎng)法是檢查細(xì)胞活力的根本方法。26植物原生質(zhì)體制備的材料應(yīng)用較多的是葉片，愈傷組織及懸浮培養(yǎng)細(xì)胞。27高等植物細(xì)胞壁主要成分為纖維素，其次為半纖維素，果膠質(zhì)及蛋白質(zhì)。28植物原生質(zhì)體制備時(shí)的脫壁酶有纖維素酶，果膠酶，斗纖維素酶，蝸牛酶及崩潰酶。29纖維素酶使用時(shí)的pH值為5.4。30果膠酶最適pH值為5.8。31纖維素酶及果膠酶混合使用的pH值為5.45.6之間。32脫壁酶液采用0.45m微孔濾膜過(guò)濾除菌。33純化植物原生質(zhì)體的方法有離心法、飄浮法、界

37、面法及滴洗法。34植物原生質(zhì)體活力測(cè)定方法有：根據(jù)形態(tài)特征判斷其活力，活體染色法及光染料活體染色法。35大多數(shù)植物原生質(zhì)培養(yǎng)13day，即再生新細(xì)胞壁。36大多數(shù)植物原生質(zhì)體通常在12周內(nèi)發(fā)生第一次分裂。37誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基含有低濃度生長(zhǎng)素，而不含有分裂素。38植物細(xì)胞融合實(shí)質(zhì)是其原生質(zhì)體融合。39PEG誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合時(shí)，關(guān)鍵是PEG作用時(shí)間。40PEG誘導(dǎo)植物細(xì)胞融時(shí)，PEG規(guī)格和純度影響結(jié)果。41植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)的目的在于通過(guò)規(guī)模培養(yǎng)，獲得細(xì)胞，初級(jí)及次級(jí)代謝產(chǎn)物，為藥品、食品及化工行為提供服務(wù)。42植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)設(shè)備有漿式攪拌罐，多孔板式攪拌罐、卡普蘭式螺旋漿攪拌罐及空氣提升式培

38、養(yǎng)罐。43動(dòng)物細(xì)胞工程的內(nèi)容十分廣泛，包括人工受精、胚胎移植、體外受精、性別選擇、細(xì)胞融合等。44原代動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞一般繁殖50代即退化死亡。45動(dòng)物細(xì)胞所需營(yíng)養(yǎng)要求高，其碳源不可為無(wú)機(jī)物。46開(kāi)發(fā)動(dòng)物細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基，將促進(jìn)動(dòng)物細(xì)胞工程的發(fā)展。47動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基是培養(yǎng)動(dòng)物器官，組織及細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)液體，只有維持液及生長(zhǎng)液之分。48動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基的維持液含低濃度或不含小牛血清，生長(zhǎng)液含4%20%的小牛血清。49以組織塊為材料的培養(yǎng)方法叫組織塊培養(yǎng)法。50細(xì)胞培養(yǎng)包括細(xì)胞及細(xì)胞團(tuán)塊單層培養(yǎng)及單細(xì)胞克隆培養(yǎng)。51細(xì)胞培養(yǎng)又分初代培養(yǎng)，二倍體細(xì)胞培養(yǎng)及確立細(xì)胞株培養(yǎng)。52人皮膚細(xì)胞分散較難，適宜于用組織塊

39、培養(yǎng)法培養(yǎng)。53人皮膚細(xì)胞分散較難，適宜于組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)。54組織塊培養(yǎng)法又分為血漿凝固培養(yǎng)法，膠原固著培養(yǎng)法及無(wú)基質(zhì)固著培養(yǎng)法。55動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件一般為37，5CO2。56小牛血清可以保護(hù)動(dòng)物細(xì)胞免受胰酶的消化。57動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)通入CO2以維持培養(yǎng)基的pH值。58正常組織原代單層細(xì)胞不能無(wú)限期繁殖。59微量板細(xì)胞克隆法是分離混雜細(xì)胞的優(yōu)良方法。60微量板細(xì)胞克隆法是可以用于建立純細(xì)胞系，檢查細(xì)胞遺性的一致性，分離細(xì)胞變種，評(píng)價(jià)藥物及毒物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，篩選淋巴細(xì)胞雜交瘤及基因工程細(xì)胞，制備單克隆抗體并用于病毒學(xué)研究。61二倍體細(xì)胞培養(yǎng)壽命是用群體倍數(shù)（PD）表示，如二倍體細(xì)胞培養(yǎng)后，

40、其總數(shù)增加一倍時(shí)，即稱為1個(gè)PD。62影響二倍體細(xì)胞培養(yǎng)的因素主要是分種率，繼代壽命及pH值等。63二倍體細(xì)胞保留著原位組織正常的細(xì)胞性狀，并已用于生產(chǎn)疫苗，尿激酶及干擾素等藥物，也用于細(xì)胞遺傳學(xué)，細(xì)胞分化及衰老研究，以及藥物毒性和環(huán)境污染物的檢測(cè)。64傳代細(xì)胞不具有錨地依賴性，接角抑制性及群體效應(yīng)酬，喪失了組織分化組力及臟器物異性，僅具有種屬特異性。65動(dòng)物細(xì)胞種質(zhì)保存的形式有組織性，細(xì)胞懸浮物及細(xì)胞單層培養(yǎng)物等。66動(dòng)物細(xì)胞種質(zhì)保存方法有常溫，低溫及超低溫冰凍法3種。67超低溫法是保存種質(zhì)細(xì)胞最有效和最重要的方法。68甘油使用濃度一般為5-20。69DMSO使用濃度一般為5-12.5。70

41、目前改變膜蛋白分布狀態(tài)及膜脂質(zhì)分子重新排布的因素有病毒，PEG，電場(chǎng)力及離心力。71在一定條件下，通過(guò)電脈沖作用使細(xì)胞融合的過(guò)程謂之電場(chǎng)誘導(dǎo)融合作用。72完整細(xì)胞間融合是擴(kuò)大生物變異的有效手段。73兩種完整細(xì)胞融合時(shí)，所轉(zhuǎn)移的遺傳物質(zhì)有整套染色體組，核外DNA及胞質(zhì)因子等。74完整細(xì)胞間的融合是擴(kuò)大生物變異的有效手段。75在細(xì)胞融合時(shí)，完整細(xì)胞一方相當(dāng)于一個(gè)微型反應(yīng)器。76影響動(dòng)物細(xì)胞融合的因素有促融劑、細(xì)胞性質(zhì)、溫度、pH值，離子強(qiáng)度及離子種類(lèi)。77兩種親本細(xì)胞融合混合物至少含有雙核或多核異型融合子，雙核或多核同型親本融合子及親本五種類(lèi)型細(xì)胞。78篩選的目的是獲得性能優(yōu)良的雜種細(xì)胞。79雜種

42、動(dòng)物細(xì)胞篩選系統(tǒng)及方法有HAT選擇系統(tǒng)，抗藥性篩選系統(tǒng)，互補(bǔ)選擇法，原位雜交法及基因探針選擇法。80HAT是含有效黃嘌呤、氨基喋呤及胞腺嘧啶核苷的一種選擇性培養(yǎng)基。81HPRT即次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶。82控制雜種細(xì)胞遺傳表現(xiàn)型的作用機(jī)制從表現(xiàn)上可分為互補(bǔ)作用，激活作用，消失作用及激活與消失作用。83雜種細(xì)有生物學(xué)特性實(shí)質(zhì)上是通過(guò)基因重組與表達(dá)調(diào)控實(shí)現(xiàn)的。84免疫反應(yīng)是機(jī)體對(duì)自己和異已物質(zhì)的種種識(shí)別反應(yīng)。85免疫反應(yīng)分體液免疫與細(xì)胞免疫。86B淋巴細(xì)胞與體液免疫有關(guān)。87T淋巴細(xì)胞主要與細(xì)胞免疫有關(guān)。88骨髓瘤細(xì)胞應(yīng)選擇不分泌瘤蛋白，體外能無(wú)限繁殖和連續(xù)移植繼代培養(yǎng)者，且為HPRT-或T

43、K-的親本。90單克隆抗體生產(chǎn)分法分體外法及體內(nèi)法兩種。91大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)系指人工條件下高度大量培養(yǎng)有用動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)珍貴藥品的技術(shù)。92無(wú)血清培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)是：可用于培養(yǎng)不同種類(lèi)的細(xì)胞及含血清培基中不能生長(zhǎng)細(xì)胞，可用于雜種細(xì)胞，基因工程細(xì)胞及突變體細(xì)胞培養(yǎng)，生產(chǎn)有用物質(zhì)。93細(xì)胞懸浮培養(yǎng)法適用于培養(yǎng)確立細(xì)胞株、雜交瘤細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、血液細(xì)胞及淋巴細(xì)胞。94細(xì)胞固定化方法有吸附和包埋法。95微載體培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)在于兼有固定化培養(yǎng)與懸浮培養(yǎng)的雙重特點(diǎn)。95動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，又具有錨地依賴依。96組織纖維溶酶原激活劑是一川絲氨酸蛋白酶。97抗乙型肝炎表現(xiàn)抗原單克隆抗體是專一性識(shí)別HbsAg的單一抗體。98體

44、外法生產(chǎn)單克隆抗體是使雜交瘤細(xì)胞在人工反應(yīng)器內(nèi)大規(guī)模培養(yǎng)并表達(dá)相應(yīng)抗體。99體內(nèi)法生產(chǎn)克隆抗體是利用生物體為細(xì)胞反應(yīng)器大規(guī)模培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞生產(chǎn)抗體的方法。100檢出分泌特異抗體細(xì)胞后，應(yīng)即時(shí)進(jìn)行克隆化篩選與鑒定，以免非必需細(xì)胞過(guò)分生長(zhǎng)。QQ：806235356第五章 酶工程1酶工程主要是研究酶在工業(yè)、瞄等各個(gè)領(lǐng)域中的應(yīng)用。2酶是生物體產(chǎn)生的具有催化活性的蛋白質(zhì)。3酶工程的主要內(nèi)容包括：酶的發(fā)酵生產(chǎn)，酶的分離純化酶的分子修飾，酶和細(xì)胞固定化酶反應(yīng)器。4酶在一定條件下僅能影響化學(xué)反應(yīng)速度，而不改變化學(xué)反應(yīng)平衡點(diǎn)。5酶工程的核心內(nèi)容是酶和細(xì)胞的固定化技術(shù)6判斷酶固定化方法優(yōu)劣的指標(biāo)是酶偶聯(lián)效率及固定

45、化酶活力。7定化酶偶聯(lián)效率的測(cè)定方法有殘留法和水解法。81972年，國(guó)際酶學(xué)委員會(huì)提出新的酶活單位，稱為Katal單位。9固定化醇活力的測(cè)定方法有分批測(cè)定法和連續(xù)測(cè)定法。10管狀固定化酶稱為酶管。11固定化酶操作穩(wěn)定性的表示方法為半衰期。12當(dāng)醇固定化后，對(duì)于高分子底物的括性明顯下降，13固定化酶體外應(yīng)用主要是床式反應(yīng)器。14編號(hào)為EC3231的酶是水解酶。15利用固定化黃色短扦菌可以生產(chǎn)L-蘋(píng)果酸。16包埋法固定酶可利用的載體是硅膠等。17交聯(lián)法可用于制備固定化酶，戊醛不能作為交聯(lián)劑。18制備固定化酶的交聯(lián)法中，常用的交聯(lián)劑有已主酰更胺二甲酯、1，5 - 二氟 - 2，4 - 二硝基苯，雙重

46、氮聯(lián)苯胺 - 2，2 - 二磺酸。19在制備固定化酶的過(guò)程中，加入比活1500Uhi的酶液50mi，反應(yīng)一段時(shí)間后，用緩沖掖洗脫，得到活力為50Umi的醇緩沖液400mi，則偶聯(lián)效率為733。201961年，國(guó)際酶學(xué)會(huì)議規(guī)定1個(gè)酶活單位指特定條件下1分鐘內(nèi)能轉(zhuǎn)化ltamo底物的酶量。21國(guó)際單位U與Klual之間的換算關(guān)系為lkata=6x1107u。22在固定化酶的過(guò)程中，測(cè)固定化酶總活力為I0 000U，在固定化前加入酶的總活力為20 000U，現(xiàn)在上清液余酶itd力為2000U，則固定化酶的相對(duì)活力為556。23用分批法測(cè)定固定化醇活力，若攢拌過(guò)快會(huì)導(dǎo)致醇活力變大。24酶珠、酶塊、醇片都

47、屬于顆粒狀固定化酶。25天冬氨酸酶包埋時(shí)，在延胡常酸銨存在下可獲得高活力固定化天冬氨酸酶。26大多數(shù)天然酶經(jīng)固定化后對(duì)蛋白酶耐受力有所提高原因是空間位阻。27當(dāng)酶固定化后對(duì)于高分子底物的恬性變小。28酶固定化后其反應(yīng)最適pH值可能變大，也可能變小。29用聚丙酰胺包埋的轉(zhuǎn)化酶，其Vmax較天然酶小10%30SOD屬于消炎酶類(lèi)。31可治療腫瘤的醇有L天冬酰胺酶、谷氮酰胺酶、羧基肽酶、L-精氨酸酶等。32現(xiàn)在固定化酶的物理形狀有酶膜、醇臂、酵纖維、散震、顆粒狀等。33用分批測(cè)定法測(cè)固定化酶活力時(shí)，影響測(cè)量結(jié)果的因素有攪拌速度、撮藹建度、反應(yīng)器形狀、反應(yīng)液數(shù)量等。34測(cè)定固定化酶活力l-f注明反應(yīng)溫度

48、、固定化酶的干燥條件、用于固定化的原始酶比活等。35用共價(jià)結(jié)合法固定酶時(shí)，常用載體有纖維素、淀粉、尼龍等。36用載體結(jié)合法固定酶的特點(diǎn)是撮作筒單，不影響醇活性輝。37利用酶分子上的氨基、羧基、酚基、咪唑基基團(tuán)可以進(jìn)行共價(jià)結(jié)合。38交聯(lián)法制備固定化酶包括交聯(lián)酶法、酶與輔助蛋白交聯(lián)法、吸附交聯(lián)法及載體交聯(lián)法。39固定化細(xì)胞的特點(diǎn)有：(1)無(wú)需進(jìn)行酶的分離純化；(2)固定化過(guò)程醇回收率高；(3)細(xì)胞內(nèi)輔因子可以自生、再生；(4)可催化一系列反應(yīng)；(5)抗污染能力強(qiáng)。40過(guò)氧化氫酶可以來(lái)源于細(xì)菌、霉菌、紅血球等。41酶催化反應(yīng)的特點(diǎn)是：專一性強(qiáng)、催化效率高、反應(yīng)條件溫和、酶括性的調(diào)控機(jī)制復(fù)雜等。42從

49、動(dòng)物體及微生物發(fā)酵物中提8的酶稱為第一代酶。43固定化酶稱為第二代酶。44固定化生長(zhǎng)態(tài)細(xì)胞、多酶體系及固定化輔酶稱為第三代酶。45酶作為一種催化劑，只能改變化學(xué)反應(yīng)速度而不能改變化學(xué)平衡。46吸附法制備固定酶時(shí)，酶與載體間結(jié)合力不強(qiáng)，酶易于脫落。47天然酶使用后通常不回收，不能連續(xù)使用。48共價(jià)結(jié)合法制備固定化酶的缺點(diǎn)是操作復(fù)雜。49包埋的固定化酶只適用于小分子底物及小分子產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化反應(yīng)，不適用于催化大分子底物或產(chǎn)物的反應(yīng)。50固定化酶相對(duì)恬力與單位載體上偶聯(lián)酶量有關(guān)，偶聯(lián)量少，相對(duì)活力高。51在酶活力測(cè)定過(guò)程中，為確?？杀刃?，必須控制反應(yīng)條件的一致性。52天然酶經(jīng)固定化后即成固定化酶，其催化

50、體系由均相反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)榉蔷喾磻?yīng)。53大多數(shù)天然酶經(jīng)固定化后對(duì)蛋白酶的耐受力增高。54多孔玻璃珠共價(jià)結(jié)合的葡萄糖異構(gòu)酶最適溫度與游離酶樣。55細(xì)胞固定化后其最適溫度通常與游離細(xì)胞相同。56大多數(shù)天然酶固定化后其Y，與天然酶相同或接近。57天然酶固定化后其乙值均發(fā)生變化，有的變化很小，有的增加很多，但均不會(huì)變小。58固定化的PH酶活性曲線與游離酶相比，或保持相同的鐘罩形，或變得更陡，或變得更平坦。59固定化酶半衰期達(dá)到一個(gè)月以上時(shí)，即具有工業(yè)應(yīng)用價(jià)值。60固定化酶的底物專一性有所改變。61界面聚合法包埋酶屬化學(xué)制備法，而界面沉降法則屬于簡(jiǎn)單的物理方法。62固定化生長(zhǎng)態(tài)細(xì)胞通常用包埋法。63迄今從生

51、物界發(fā)現(xiàn)的酶的種類(lèi)有3，000多種。64細(xì)胞的固定化方法有吸附法，包埋法，交聯(lián)法及共價(jià)結(jié)合法。65用吸附法制備固定化酶時(shí)，每克無(wú)機(jī)載體吸附的蛋白質(zhì)量為大于1mg。第六章 細(xì)胞因子1細(xì)胞因子的有效濃度常10-1010-14mol/L之間。2細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的中心成份是IL-1。3細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵成份是IL-6。4IL-1的生物學(xué)活性表現(xiàn)于激活T或B淋巴細(xì)胞。5IL-3由激活的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。6淋巴細(xì)胞生成素I是指IL-7。7細(xì)胞因子合成抑制因子是指IL-10。8IL-12是由B淋巴細(xì)胞分沁的。9TNF是指腫瘤壞死因子。10TNF抗腫瘤的重要機(jī)理之一是直接的細(xì)胞毒作用。11IFN是指干擾素。12EP

52、O的主要代謝器官是肝臟。13能誘導(dǎo)有關(guān)生物細(xì)胞產(chǎn)生IFN的一類(lèi)物持統(tǒng)稱干擾素誘生劑。14干擾素效價(jià)的國(guó)際單位數(shù)與蛋白含量的毫克數(shù)之比即活性。15低濃度的干擾素基本沒(méi)療效的原因是IFN不易進(jìn)入組織間液。16干擾素的受體主要存在于細(xì)胞膜。17把干擾素直接導(dǎo)入“靶灶”內(nèi)即所謂的聚射。18粒細(xì)胞集落刺激因子是一種糖蛋白。19CSF中唯一一種沒(méi)有種間特異性的是巨噬細(xì)胞集落刺激因子。20EPO為穩(wěn)定的耐熱蛋白，800C不變性。21rhEPO用于治療CRF期間最常見(jiàn)的副作用是患者的血壓升高。22LT即淋巴細(xì)胞毒素。23TNFR是指腫瘤壞死因子受體。24細(xì)胞因子所構(gòu)成的網(wǎng)絡(luò)的中心成份是IL-1。25根據(jù)等電點(diǎn)

53、的不同將IL-1分為、型。26聯(lián)合化化療中，TNF與IFN-可發(fā)揮顯著協(xié)同作用。27IFNa主要在外周血單核細(xì)胞中誘生。28IFNa可抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，能常使細(xì)胞停止于細(xì)胞周期中的GI期。29集落刺激因子的縮寫(xiě)是CSF。30紅細(xì)胞生成素來(lái)源于腎臟。31血氧含量低，心肌功能不全，溶血性貧血等原因均能導(dǎo)致紅細(xì)胞生成素的分泌量增加：而垂體功能低下本身并不能導(dǎo)致紅細(xì)胞生成素的分泌增加。32刺激紅細(xì)胞生成純潔生長(zhǎng)的關(guān)鍵因素是機(jī)體的缺氧。33目前檢測(cè)白介素最敏感的方法是聚合酶鏈?zhǔn)?4干擾素屬于蛋白類(lèi)。352-5A合成酶、蛋白酶磷酸二脂酶等均屬于干擾素誘生的抗病毒蛋白，而糖基化酶則與干擾素?zé)o關(guān)。36干擾素中，純

54、化后最穩(wěn)定的是IFNa。37干擾素的受體主要存在于細(xì)胞膜中。38白介素-2的生物學(xué)作用主要是刺激細(xì)胞增生。39酵母屬于真核生物，大腸肝菌，放線菌及蘭細(xì)菌等屬于原核生物，但它們均為單細(xì)胞生物。40NK細(xì)胞對(duì)射線照射最為敏感。41CTL細(xì)胞對(duì)射線照射最為敏感。42B細(xì)胞具有表面球蛋白，而T細(xì)胞、NK細(xì)胞，K細(xì)胞的表面則不具有表面球蛋白。44TNF對(duì)蛋白酶最為敏感。45具有生物活性的腫瘤壞死因子為三聚體構(gòu)型。46細(xì)胞因子使用的最終效應(yīng)部位在細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)。47細(xì)胞因子多為單鏈分子，其基因多由多個(gè)外顯子和內(nèi)含子組成，但其基因均為單拷貝。48IL-5對(duì)細(xì)胞的作用包括增強(qiáng)B細(xì)胞的功能，促進(jìn)活性B細(xì)胞分泌，并可誘導(dǎo)B細(xì)胞表達(dá)IL-2受體。49IL-8可來(lái)源于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、肺泡巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、T細(xì)胞等。50IFN的蛋的產(chǎn)物包括IFN-，IFN-及IFN-y。51IFN-在成纖維細(xì)胞中誘生。52IFN也可誘生IFN。53TNF也可誘生IFN。54IFN可抑制病素的生活周期的許多階段，包括病毒的吸附和脫殼