第五章細(xì)胞融合與單克隆技術(shù)

1、第五章第五章 細(xì)胞融合與單克隆抗體細(xì)胞融合與單克隆抗體 細(xì)胞融合（細(xì)胞融合（cell fusion)，又稱體細(xì)胞雜交（somatic hybridiazation），是指兩個(gè)或更多個(gè)相同或不同細(xì)胞通過(guò)膜 融合形成單個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。一、細(xì)胞融合一、細(xì)胞融合（一一）、細(xì)胞融合的定義、細(xì)胞融合的定義 細(xì)胞融合實(shí)際上包含多個(gè)過(guò)程：首細(xì)胞融合實(shí)際上包含多個(gè)過(guò)程：首先是兩個(gè)親本細(xì)胞并列，以后膜組織局先是兩個(gè)親本細(xì)胞并列，以后膜組織局部破壞，最終形成包圍融合細(xì)胞的連續(xù)部破壞，最終形成包圍融合細(xì)胞的連續(xù)胞膜。融合細(xì)胞表現(xiàn)的特征性變化，有胞膜。融合細(xì)胞表現(xiàn)的特征性變化，有膜成分和胞質(zhì)成分的交流以及細(xì)胞內(nèi)電膜成分和

2、胞質(zhì)成分的交流以及細(xì)胞內(nèi)電導(dǎo)率的連續(xù)性。導(dǎo)率的連續(xù)性。細(xì)胞在融合過(guò)程中會(huì)發(fā)生下列細(xì)胞在融合過(guò)程中會(huì)發(fā)生下列主要變化主要變化： 呈致密狀態(tài)的體細(xì)胞在促融合劑的作用下，呈致密狀態(tài)的體細(xì)胞在促融合劑的作用下，細(xì)細(xì)胞膜胞膜的性質(zhì)發(fā)生變化；的性質(zhì)發(fā)生變化； 首先，出現(xiàn)細(xì)胞凝集現(xiàn)象；首先，出現(xiàn)細(xì)胞凝集現(xiàn)象；然后，部分凝集細(xì)胞之間的膜發(fā)生粘連；繼而，融然后，部分凝集細(xì)胞之間的膜發(fā)生粘連；繼而，融合形成多核細(xì)胞；合形成多核細(xì)胞； 在培養(yǎng)過(guò)程中多核細(xì)胞又進(jìn)行在培養(yǎng)過(guò)程中多核細(xì)胞又進(jìn)行核的融合核的融合而成為而成為單核的雜種細(xì)胞，而那些不能形成單核的融合細(xì)胞單核的雜種細(xì)胞，而那些不能形成單核的融合細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中逐

3、漸死亡。在培養(yǎng)過(guò)程中逐漸死亡。 由于體外培養(yǎng)的細(xì)胞很少會(huì)發(fā)生自發(fā)由于體外培養(yǎng)的細(xì)胞很少會(huì)發(fā)生自發(fā)融合（融合頻率大約在融合（融合頻率大約在10-410-6之間），之間），因此要采用生物、化學(xué)或物理的方法人為因此要采用生物、化學(xué)或物理的方法人為地促使細(xì)胞融合。地促使細(xì)胞融合。顯微鏡下細(xì)胞融合過(guò)程顯微鏡下細(xì)胞融合過(guò)程融合過(guò)程中兩個(gè)細(xì)胞膜從彼此接觸到破裂形成細(xì)胞橋的變化過(guò)程圖解融合過(guò)程中兩個(gè)細(xì)胞膜從彼此接觸到破裂形成細(xì)胞橋的變化過(guò)程圖解（二二）、細(xì)胞融合研究進(jìn)展、細(xì)胞融合研究進(jìn)展Muller于1838年觀察到脊椎動(dòng)的腫瘤細(xì)胞能在體內(nèi)自發(fā)地融合產(chǎn)生多核的腫瘤細(xì)胞多核的腫瘤細(xì)胞。Virchow于1858年

4、描述了正常組織、發(fā)炎組織以及腫瘤組織中的多核細(xì)胞現(xiàn)象多核細(xì)胞現(xiàn)象。Luginbuhl于1873年觀察到天花病人的血液中也有多核的血多核的血細(xì)胞細(xì)胞存在。Lange于1875年第一個(gè)觀察到脊椎動(dòng)物（蛙類）的血液細(xì)胞血液細(xì)胞發(fā)生融合的過(guò)程發(fā)生融合的過(guò)程。Cienkawski(1876)、Buck(1877)、Geddes(1880)在無(wú)脊椎動(dòng)中發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞合并現(xiàn)象細(xì)胞合并現(xiàn)象。1958年日本學(xué)者岡田（Okada）發(fā)現(xiàn)仙臺(tái)病毒具有觸發(fā)動(dòng)物仙臺(tái)病毒具有觸發(fā)動(dòng)物細(xì)胞融合的效應(yīng)細(xì)胞融合的效應(yīng)。1974年華裔加拿大學(xué)者高國(guó)楠?jiǎng)?chuàng)立了聚乙二醇（PEG）化學(xué)融合法。1975年Kohler和Milstein成功地融合

5、了小鼠B-淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞而產(chǎn)生能分泌預(yù)定單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞。20世紀(jì)80年代出現(xiàn)了電融合技術(shù)。幾種細(xì)胞融合成功的例子幾種細(xì)胞融合成功的例子植物融合細(xì)胞植物融合細(xì)胞成長(zhǎng)狀態(tài)對(duì)比成長(zhǎng)狀態(tài)對(duì)比:右瓶右瓶為地面融為地面融合的細(xì)胞合的細(xì)胞;左瓶左瓶中為太空中為太空微重力環(huán)境下微重力環(huán)境下融合的細(xì)胞融合的細(xì)胞 動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)使用的小白鼠動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)使用的小白鼠 （三三）、動(dòng)植物細(xì)胞的融合過(guò)程、動(dòng)植物細(xì)胞的融合過(guò)程（四）（四）、細(xì)胞融合的意義、細(xì)胞融合的意義u理論上說(shuō)任何細(xì)胞，都有可能通過(guò)體細(xì)胞雜交而成為新的生物資源新的生物資源。這 對(duì)于種質(zhì)資源的開(kāi)發(fā)和利用種質(zhì)資源的開(kāi)發(fā)和利用具有深遠(yuǎn)的意義

6、。u融合過(guò)程不存在雜交過(guò)程中的種性隔離機(jī)制的限制，為遠(yuǎn)緣物種遠(yuǎn)緣物種間 的遺傳物質(zhì)交換提供了有效途徑。u體細(xì)胞雜交產(chǎn)生的雜種細(xì)胞含有來(lái)自雙親的核外遺傳系統(tǒng)，在雜種的分 裂和增殖過(guò)程中雙親的線粒體DNA亦可發(fā)生重組，從而產(chǎn)生新 的核外遺傳系統(tǒng)核外遺傳系統(tǒng)。u淋巴細(xì)胞雜交瘤和單克隆抗體單克隆抗體的制備。二、二、單克隆抗體技術(shù)單克隆抗體技術(shù)主要組織相容性復(fù)合體（一一）、何謂單克隆抗體？、何謂單克隆抗體？ Ig 分子的基本結(jié)構(gòu)：由四肽鏈組成的，二條相同的分子量較小的輕鏈（L 鏈）+二條相同的分子量較大的重鏈（H 鏈）組成的。 L鏈與H鏈?zhǔn)怯啥蜴I連接形成一個(gè)四肽鏈分子，稱為Ig分子的單體的基本結(jié)構(gòu)?？?/p>

7、體的主要類型與結(jié)構(gòu)：抗體的主要類型與結(jié)構(gòu)：抗體由四條抗體由四條蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)長(zhǎng)短鏈所組成（兩長(zhǎng)兩短）長(zhǎng)短鏈所組成（兩長(zhǎng)兩短）抗體分子上有兩個(gè)抗體分子上有兩個(gè) 抗原結(jié)合區(qū)抗原結(jié)合區(qū) （二者相同）（二者相同）抗體與抗原結(jié)合是抗體與抗原結(jié)合是 專一性專一性 的（的（lock & key）是單一抗體分子，另有是單一抗體分子，另有 IgA（二元體）及（二元體）及IgM（五元體）（五元體） IgG由由4條多肽組成條多肽組成(兩條輕鏈和兩條重鍵兩條輕鏈和兩條重鍵) ，通過(guò)二硫鍵和非共價(jià)鍵相連，其分子結(jié)構(gòu)如通過(guò)二硫鍵和非共價(jià)鍵相連，其分子結(jié)構(gòu)如“Y”型。一端為抗原結(jié)合端型。一端為抗原結(jié)合端(氨基端氨基端

8、)可可變區(qū)變區(qū)(V區(qū)區(qū))，即氨基酸順序隨免疫的抗原不，即氨基酸順序隨免疫的抗原不同而異，有兩個(gè)相同的能與抗原結(jié)合的部位。同而異，有兩個(gè)相同的能與抗原結(jié)合的部位。另一端另一端(羧基端羧基端)氨基酸順序排列比較恒定氨基酸順序排列比較恒定恒定區(qū)恒定區(qū)(C區(qū)區(qū))，可與具有，可與具有Fc受體的細(xì)胞相受體的細(xì)胞相結(jié)合結(jié)合(如巨噬細(xì)胞、如巨噬細(xì)胞、K細(xì)胞、肥大細(xì)胞等細(xì)胞、肥大細(xì)胞等)，分別產(chǎn)生不同的效應(yīng)。分別產(chǎn)生不同的效應(yīng)。IgG抗體結(jié)構(gòu)模型抗體結(jié)構(gòu)模型（紅色部分為（紅色部分為CDR區(qū)域）區(qū)域）一個(gè)抗原分子上通常含有數(shù)個(gè)一個(gè)抗原分子上通常含有數(shù)個(gè)抗原決定簇抗原決定簇每個(gè)決定簇至少都可誘生出一種專一性抗體每個(gè)

9、決定簇至少都可誘生出一種專一性抗體蛋白質(zhì)性抗原決定簇含有六個(gè)以上氨基酸蛋白質(zhì)性抗原決定簇含有六個(gè)以上氨基酸抗原決定簇抗原決定簇抗原分子上可以誘導(dǎo)出抗體的部位或片段，稱之為抗原分子上可以誘導(dǎo)出抗體的部位或片段，稱之為 antigenic determinant)或或 (epitope)。存在于抗原分子中決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)，又稱表位（epitope）?？乖瓫Q定簇的大小相當(dāng)于相應(yīng)抗體的抗原結(jié)合部位，一般由58個(gè)氨基酸、單糖或核苷酸殘基組成。 抗體與抗原的特異性結(jié)合抗體與抗原的特異性結(jié)合 克隆定義克隆定義 只針對(duì)某一抗原決定只針對(duì)某一抗原決定簇簇的抗體分子稱為單的抗體分子稱為單克隆抗體?？寺?/p>

10、抗體。 由同一抗原誘導(dǎo)而產(chǎn)生的針對(duì)多個(gè)抗原決由同一抗原誘導(dǎo)而產(chǎn)生的針對(duì)多個(gè)抗原決定定簇簇的抗體稱為多克隆抗體。的抗體稱為多克隆抗體。 單克隆抗體技術(shù)的核心是用骨髓瘤細(xì)胞(myeloma cell)與經(jīng)特定抗源免疫刺激的B淋巴細(xì)胞(antigen stimulated B lymphoblast)融合得到雜交瘤細(xì)胞(hybridoma cell)，雜交瘤細(xì)胞既能象骨髓瘤細(xì)胞那樣在體外無(wú)限增殖，又具有B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力。因此，單克隆抗體技術(shù)又稱為雜交瘤技術(shù)雜交瘤技術(shù)(hybridoma technology ）。（二）（二）單克隆抗體技術(shù)的原單克隆抗體技術(shù)的原理理（二）（二）單克隆抗體

11、技術(shù)的原理單克隆抗體技術(shù)的原理Niels K. Jerne 尼爾斯杰尼 G. Kohler喬治JF科勒 C. Milstein塞薩米爾斯坦 1984年10月15日，三位免疫學(xué)家被授予1984年度的諾貝爾醫(yī)學(xué)與生理學(xué)獎(jiǎng)。杰尼是丹麥免疫學(xué)界偉大的理論家, 他提出了三大理論: 抗體形成的自然選擇學(xué)說(shuō)、 抗體多樣性的發(fā)生學(xué)說(shuō)、 免疫系統(tǒng)的網(wǎng)絡(luò)學(xué)說(shuō), 開(kāi)創(chuàng)了免疫學(xué)的新紀(jì)元, 為現(xiàn)代免疫學(xué)的建立奠定了基礎(chǔ), 杰尼也被譽(yù)為“現(xiàn)代免疫學(xué)之父”?？评帐堑聡?guó)免疫學(xué)家, 米爾斯坦是英國(guó)分子生物學(xué)家, 兩人的突出貢獻(xiàn)是用雜交瘤技術(shù)生成了單克隆抗體, 并闡明了單克隆抗體技術(shù)的原理。幾個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題幾個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題1.HAT選擇

12、原理選擇原理（酶缺陷型）（酶缺陷型） HAT系統(tǒng)為次黃嘌呤系統(tǒng)為次黃嘌呤(H)、氨基喋呤、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷和胸腺嘧啶核苷(T)的縮寫的縮寫。它是根據(jù)嘌。它是根據(jù)嘌呤和嘧啶生物合成途徑設(shè)計(jì)的分離雜種呤和嘧啶生物合成途徑設(shè)計(jì)的分離雜種細(xì)胞特殊的培養(yǎng)基。細(xì)胞特殊的培養(yǎng)基。 細(xì)胞內(nèi)核苷酸的生物合成有細(xì)胞內(nèi)核苷酸的生物合成有兩條途徑兩條途徑： 一條是一條是主要途徑主要途徑，該途徑中葉酸及其衍生物是必，該途徑中葉酸及其衍生物是必不可少的，氨基喋呤可抑制二氫葉酸還原酶活性，不可少的，氨基喋呤可抑制二氫葉酸還原酶活性，從而阻斷細(xì)胞中從而阻斷細(xì)胞中DNA的合成；的合成； 另外一條是另外一條是補(bǔ)救途徑

13、補(bǔ)救途徑，該途徑需要兩種酶參與。，該途徑需要兩種酶參與。一種是一種是HGPRT酶酶(次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶酶) ，另一種酶是，另一種酶是TK酶酶(胸腺嘧啶核苷激酶胸腺嘧啶核苷激酶) 。它。它們可以分別利用次黃嘌呤催化產(chǎn)生的肌苷酸及胸們可以分別利用次黃嘌呤催化產(chǎn)生的肌苷酸及胸腺嘧啶核苷催化產(chǎn)生的脫氧胸苷來(lái)合成腺嘧啶核苷催化產(chǎn)生的脫氧胸苷來(lái)合成DNA。 H、T為應(yīng)急途徑時(shí)提供外源核苷酸為應(yīng)急途徑時(shí)提供外源核苷酸“前體前體”。核酸合成的主要核酸合成的主要合成：合成：由核糖與磷酸合由核糖與磷酸合成成5-磷酸核糖磷酸核糖(R-5-P)，在磷酸核糖，在磷酸核糖焦磷酸酶的催化

14、焦磷酸酶的催化下，與下，與ATP發(fā)生發(fā)生作用生成作用生成1-焦磷酸焦磷酸-5-磷酸核糖磷酸核糖(PRPP)，以后，以后PRPP再經(jīng)過(guò)一系再經(jīng)過(guò)一系列反應(yīng)而生成次列反應(yīng)而生成次黃嘌呤核苷酸黃嘌呤核苷酸(IMP)。 在氨基喋呤存在時(shí)，阻斷在氨基喋呤存在時(shí)，阻斷了核苷酸的從頭合成了核苷酸的從頭合成IMP的的途徑，細(xì)胞只能通過(guò)途徑，細(xì)胞只能通過(guò)HGPRT使次黃嘌呤酸化形使次黃嘌呤酸化形成次黃苷酸，再依次轉(zhuǎn)化為成次黃苷酸，再依次轉(zhuǎn)化為AMP及及GMP，即通過(guò)，即通過(guò)“補(bǔ)救補(bǔ)救途徑途徑”依賴外源來(lái)合成核苷依賴外源來(lái)合成核苷酸。酸。 因此，一個(gè)因此，一個(gè)HGPRT或或TK的細(xì)胞株不可能在含的細(xì)胞株不可能在含

15、HAT的培養(yǎng)液中生長(zhǎng)。但這的培養(yǎng)液中生長(zhǎng)。但這樣的細(xì)胞與能提供樣的細(xì)胞與能提供HGPRT或或TK酶的細(xì)胞融合后，雜酶的細(xì)胞融合后，雜交細(xì)胞能在含交細(xì)胞能在含HAT培養(yǎng)液中培養(yǎng)液中存活下來(lái)。存活下來(lái)。 1.HAT選擇原理選擇原理 如果融合細(xì)胞的親本之一是一個(gè)能在體外如果融合細(xì)胞的親本之一是一個(gè)能在體外長(zhǎng)期生存的骨髓瘤細(xì)胞系，而另一個(gè)親本長(zhǎng)期生存的骨髓瘤細(xì)胞系，而另一個(gè)親本細(xì)胞是體外增殖能力有限的正常細(xì)胞。細(xì)胞是體外增殖能力有限的正常細(xì)胞。 如將長(zhǎng)期培養(yǎng)系突變?yōu)槿鐚㈤L(zhǎng)期培養(yǎng)系突變?yōu)镠GPRT或或TK酶缺酶缺陷型的細(xì)胞系，在和正常細(xì)胞融合后，未陷型的細(xì)胞系，在和正常細(xì)胞融合后，未經(jīng)融合或自身融合的經(jīng)

16、融合或自身融合的骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞在在HAT培培養(yǎng)液中死亡；未融合或自身融合的養(yǎng)液中死亡；未融合或自身融合的正常細(xì)正常細(xì)胞胞在體外生存能力有限最終也死亡。在體外生存能力有限最終也死亡。存活存活下來(lái)的只有融合細(xì)胞。下來(lái)的只有融合細(xì)胞。2.骨髓瘤細(xì)胞的選擇骨髓瘤細(xì)胞的選擇 每一個(gè)每一個(gè) B 細(xì)胞只分泌產(chǎn)生一種抗體，若能把此細(xì)胞只分泌產(chǎn)生一種抗體，若能把此B細(xì)胞由脾臟中挑出來(lái)，單獨(dú)培養(yǎng)成細(xì)胞株，則可細(xì)胞由脾臟中挑出來(lái)，單獨(dú)培養(yǎng)成細(xì)胞株，則可得單一種類的抗體，只會(huì)對(duì)一種抗原決定簇反應(yīng)，得單一種類的抗體，只會(huì)對(duì)一種抗原決定簇反應(yīng)，其專一性極高。其專一性極高。 大量培養(yǎng)此細(xì)胞株，即可有質(zhì)量一定、純度均大

17、量培養(yǎng)此細(xì)胞株，即可有質(zhì)量一定、純度均一的抗體，此即為一的抗體，此即為單克隆抗體單克隆抗體。 但但B細(xì)胞在體外增殖能力非常弱或不增殖，故細(xì)胞在體外增殖能力非常弱或不增殖，故無(wú)法獲得大量的單克隆抗體。無(wú)法獲得大量的單克隆抗體。 骨髓瘤細(xì)胞易在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)；利用細(xì)胞融合骨髓瘤細(xì)胞易在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)；利用細(xì)胞融合法將骨髓瘤細(xì)胞永久生長(zhǎng)的特性導(dǎo)入可生產(chǎn)有用法將骨髓瘤細(xì)胞永久生長(zhǎng)的特性導(dǎo)入可生產(chǎn)有用抗體的抗體的 B 細(xì)胞中，則得到可在培養(yǎng)基中永久生長(zhǎng)細(xì)胞中，則得到可在培養(yǎng)基中永久生長(zhǎng)的的 B 細(xì)胞株，此即雜交瘤細(xì)胞株。細(xì)胞株，此即雜交瘤細(xì)胞株。 得到的雜交瘤細(xì)胞既具有得到的雜交瘤細(xì)胞既具有B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特

18、異淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗體的能力，又具有腫瘤細(xì)胞在體外無(wú)限增殖性抗體的能力，又具有腫瘤細(xì)胞在體外無(wú)限增殖的特點(diǎn)，可不斷在細(xì)胞培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生單抗。的特點(diǎn)，可不斷在細(xì)胞培養(yǎng)上清液中產(chǎn)生單抗。次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤轉(zhuǎn)磷酸核糖激酶缺陷型（次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤轉(zhuǎn)磷酸核糖激酶缺陷型（HGPRT-）或）或者胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（者胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-）。）。癌細(xì)胞癌細(xì)胞可培養(yǎng)生長(zhǎng)可培養(yǎng)生長(zhǎng)漿細(xì)胞漿細(xì)胞單克隆抗體單克隆抗體可產(chǎn)生有用抗體的淋巴細(xì)胞若與癌細(xì)胞融可產(chǎn)生有用抗體的淋巴細(xì)胞若與癌細(xì)胞融合，則形成穩(wěn)定而可培養(yǎng)的細(xì)胞株。合，則形成穩(wěn)定而可培養(yǎng)的細(xì)胞株。細(xì)胞融合細(xì)胞融合融合瘤融合瘤兩組染色體混合在一起兩組染色

19、體混合在一起也可培養(yǎng)生長(zhǎng)也可培養(yǎng)生長(zhǎng)多用多用BALB/C 小鼠的骨髓瘤細(xì)胞。小鼠的骨髓瘤細(xì)胞。（三）（三）.細(xì)胞材料的準(zhǔn)備細(xì)胞材料的準(zhǔn)備（1）培養(yǎng)基：制備單抗的培養(yǎng)基常用DMEM（小鼠）和RPMI-1640（人）兩種；使用前添加胎牛血清或小牛血清、抗生素、谷氨酰胺等。（2）血清：胎牛血清（球蛋白少）；優(yōu)質(zhì)血清可支持接種量小于20個(gè)細(xì)胞/孔的細(xì)胞生長(zhǎng)。（3）抗生素：青鏈霉素+慶大霉素+卡拉霉素預(yù)防細(xì)菌污染；兩性霉素+制霉菌素預(yù)防霉菌污染；小鼠體內(nèi)接種清除支原體。（四）免疫動(dòng)物（四）免疫動(dòng)物 1.動(dòng)物選擇動(dòng)物選擇 目的目的：是希望是希望B細(xì)胞在抗原刺激下分化增殖，細(xì)胞在抗原刺激下分化增殖，使之有利

20、于融合成雜交瘤細(xì)胞，尤其是能分泌使之有利于融合成雜交瘤細(xì)胞，尤其是能分泌特異性抗體的雜交瘤融合細(xì)胞頻率增加。特異性抗體的雜交瘤融合細(xì)胞頻率增加。 動(dòng)物選擇應(yīng)與骨髓瘤細(xì)胞來(lái)源相同的同一品動(dòng)物選擇應(yīng)與骨髓瘤細(xì)胞來(lái)源相同的同一品系動(dòng)物，多為系動(dòng)物，多為BALB/c小鼠。小鼠。 2.抗原與載體抗原與載體 抗原可分為抗原可分為可溶性抗原可溶性抗原（蛋白質(zhì)、核酸、多糖、（蛋白質(zhì)、核酸、多糖、多肽等）和多肽等）和顆粒性抗原顆粒性抗原（細(xì)胞、病毒、細(xì)菌等）。（細(xì)胞、病毒、細(xì)菌等）。 一般顆粒性抗原都有較強(qiáng)的抗原性，免疫時(shí)可一般顆粒性抗原都有較強(qiáng)的抗原性，免疫時(shí)可不加佐劑；而可溶性抗原免疫時(shí)需加佐劑。不加佐劑；

21、而可溶性抗原免疫時(shí)需加佐劑。 初次免疫時(shí)一般用初次免疫時(shí)一般用完全弗氏完全弗氏佐劑佐劑將抗原制成乳將抗原制成乳劑劑，而以后加強(qiáng)免疫時(shí)一般用，而以后加強(qiáng)免疫時(shí)一般用不完全弗氏不完全弗氏佐劑佐劑制制成乳劑進(jìn)行免疫。成乳劑進(jìn)行免疫。 3.免疫途徑免疫途徑 不同抗原可經(jīng)不同途徑進(jìn)行免疫，不同抗原可經(jīng)不同途徑進(jìn)行免疫，主要有主要有腹腔注射、皮下淋巴樣器官注腹腔注射、皮下淋巴樣器官注射、靜脈注射、脾內(nèi)免疫射、靜脈注射、脾內(nèi)免疫等，最常用等，最常用的途徑是的途徑是腹腔注射腹腔注射。 a.腹腔注射腹腔注射：幾乎適合于所有抗原體，特別適合幾乎適合于所有抗原體，特別適合于顆粒性抗原，經(jīng)腹腔注射免疫時(shí)還可使用佐劑。

22、于顆粒性抗原，經(jīng)腹腔注射免疫時(shí)還可使用佐劑。 b.皮下淋巴樣器官注射皮下淋巴樣器官注射：多適用于可溶性抗原，多適用于可溶性抗原，多點(diǎn)注射有利于提高免疫效果。多點(diǎn)注射有利于提高免疫效果。 c.靜脈注射靜脈注射：不宜用于大顆粒性抗原，不宜作為不宜用于大顆粒性抗原，不宜作為初次免疫途徑，也不宜加入佐劑，以免引起血栓初次免疫途徑，也不宜加入佐劑，以免引起血栓或過(guò)敏反應(yīng)?；蜻^(guò)敏反應(yīng)。 d.脾內(nèi)免疫脾內(nèi)免疫：適于抗原量特別少的情況下使用，適于抗原量特別少的情況下使用，但脾內(nèi)免疫多不產(chǎn)生明顯的血清抗體，對(duì)免疫效但脾內(nèi)免疫多不產(chǎn)生明顯的血清抗體，對(duì)免疫效果的判斷有一定影響。果的判斷有一定影響。（五）親本細(xì)胞的

23、準(zhǔn)備（五）親本細(xì)胞的準(zhǔn)備 1. 脾細(xì)胞的分離脾細(xì)胞的分離: 一般動(dòng)物需經(jīng)多次加強(qiáng)免疫后才能獲得大量的一般動(dòng)物需經(jīng)多次加強(qiáng)免疫后才能獲得大量的分泌抗體的分泌抗體的B細(xì)胞。在末次免疫后細(xì)胞。在末次免疫后35天左右即天左右即可可取脾臟或淋巴結(jié)細(xì)胞分離淋巴細(xì)胞取脾臟或淋巴結(jié)細(xì)胞分離淋巴細(xì)胞(大多為大多為B細(xì)細(xì)胞胞)用于與骨髓癌細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合。用于與骨髓癌細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合。 分離脾細(xì)胞可用脾內(nèi)注射培養(yǎng)基輕輕擠壓使淋分離脾細(xì)胞可用脾內(nèi)注射培養(yǎng)基輕輕擠壓使淋巴細(xì)胞逸出的方法，也可用不銹鋼網(wǎng)擠壓法分離巴細(xì)胞逸出的方法，也可用不銹鋼網(wǎng)擠壓法分離淋巴細(xì)胞。淋巴細(xì)胞。 2.特異性抗原的富集特異性抗原的富集 分離的

24、脾細(xì)胞中含有對(duì)抗原具有特異性的分離的脾細(xì)胞中含有對(duì)抗原具有特異性的B細(xì)細(xì)胞比例相對(duì)較少，可以對(duì)抗原特異性的胞比例相對(duì)較少，可以對(duì)抗原特異性的B細(xì)胞進(jìn)細(xì)胞進(jìn)行行富集富集。 將抗原包被在培養(yǎng)板或其他基質(zhì)上，然后與將抗原包被在培養(yǎng)板或其他基質(zhì)上，然后與脾細(xì)胞結(jié)合，那些表面具有特異性抗體的脾細(xì)胞結(jié)合，那些表面具有特異性抗體的B細(xì)胞細(xì)胞與抗原結(jié)合使得與抗原結(jié)合使得B細(xì)胞黏附于培養(yǎng)板或基質(zhì)上，細(xì)胞黏附于培養(yǎng)板或基質(zhì)上，輕輕洗滌除去不黏附的細(xì)胞，留下的細(xì)胞為具輕輕洗滌除去不黏附的細(xì)胞，留下的細(xì)胞為具有特異性抗體的有特異性抗體的B細(xì)胞，用于細(xì)胞融合。細(xì)胞，用于細(xì)胞融合。 3. 骨髓癌細(xì)胞的準(zhǔn)備：骨髓癌細(xì)胞的準(zhǔn)

25、備： 融合親本的骨髓瘤細(xì)胞，最好是同種的骨髓融合親本的骨髓瘤細(xì)胞，最好是同種的骨髓瘤細(xì)胞或漿細(xì)胞瘤系。這些細(xì)胞具有發(fā)達(dá)的內(nèi)瘤細(xì)胞或漿細(xì)胞瘤系。這些細(xì)胞具有發(fā)達(dá)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，能產(chǎn)生大量所需抗體，但必須是不能產(chǎn)質(zhì)網(wǎng)，能產(chǎn)生大量所需抗體，但必須是不能產(chǎn)生自身基因編碼的抗體，否則雜交細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生生自身基因編碼的抗體，否則雜交細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生兩種以上的抗體，無(wú)法得到單克隆抗體。兩種以上的抗體，無(wú)法得到單克隆抗體。 瘤細(xì)胞系必須是對(duì)選擇劑敏感的，融合后可瘤細(xì)胞系必須是對(duì)選擇劑敏感的，融合后可以用藥物以用藥物(選擇劑選擇劑)把未融合的瘤細(xì)胞除去。常把未融合的瘤細(xì)胞除去。常用來(lái)自用來(lái)自BALB/c 小鼠的小鼠的653、S

26、p/20、NS-1等。等。4. 細(xì)胞融合：細(xì)胞融合： 一般用一般用PEG誘導(dǎo)誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞與骨髓淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞間進(jìn)行融合，操作在瘤細(xì)胞間進(jìn)行融合，操作在10 min 內(nèi)完成；內(nèi)完成；骨髓瘤細(xì)胞：脾細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞：脾細(xì)胞為12：10。 將將富集富集的的對(duì)抗原具有特異性的對(duì)抗原具有特異性的B細(xì)胞或?qū)⒖乖苯咏宦?lián)到骨髓瘤細(xì)細(xì)胞或?qū)⒖乖苯咏宦?lián)到骨髓瘤細(xì)胞表面，再與脾細(xì)胞共溫育，使具胞表面，再與脾細(xì)胞共溫育，使具有產(chǎn)生特異抗體的有產(chǎn)生特異抗體的B細(xì)胞與交聯(lián)抗細(xì)胞與交聯(lián)抗原的骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合，原的骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合，然后再進(jìn)行融合，提高融合的特異然后再進(jìn)行融合，提高融合的特異性。性

27、。 融合后的細(xì)胞以融合后的細(xì)胞以12 106個(gè)細(xì)胞個(gè)細(xì)胞/ml的濃度接種到的濃度接種到96或或24孔板中培養(yǎng)?？装逯信囵B(yǎng)。促細(xì)胞融合的方法有：促細(xì)胞融合的方法有： A.病毒融合劑誘發(fā)細(xì)胞融合病毒融合劑誘發(fā)細(xì)胞融合:其中仙臺(tái)病毒其中仙臺(tái)病毒(HVJ)是最早用于動(dòng)物是最早用于動(dòng)物細(xì)胞融合的融合劑。細(xì)胞融合的融合劑。 B.化學(xué)融合劑誘發(fā)細(xì)胞融合：化學(xué)融合劑誘發(fā)細(xì)胞融合：其中以聚乙二醇其中以聚乙二醇(PEG)最為常用。最為常用。 C.電融合法：電融合法： 利用直流電脈沖誘導(dǎo)細(xì)胞間融合。利用直流電脈沖誘導(dǎo)細(xì)胞間融合。A.病毒融合劑誘發(fā)細(xì)胞融合病毒融合劑誘發(fā)細(xì)胞融合 最早被采用的包括皰疹病毒、麻疹病毒和最

28、早被采用的包括皰疹病毒、麻疹病毒和致瘤病毒等致瘤病毒等有膜病毒有膜病毒，但使用最廣的是滅，但使用最廣的是滅活的活的仙臺(tái)病毒仙臺(tái)病毒； 病毒被膜含有膜蛋白，其表面有許多具病毒被膜含有膜蛋白，其表面有許多具神神經(jīng)氨酸酶和凝血活性經(jīng)氨酸酶和凝血活性的刺起，它們降解細(xì)的刺起，它們降解細(xì)胞膜上的糖蛋白，使細(xì)胞膜局部凝集在病胞膜上的糖蛋白，使細(xì)胞膜局部凝集在病毒周圍，在高毒周圍，在高pH和和Ca2+的條件下，膜上蛋的條件下，膜上蛋白質(zhì)分子的重新分布，使膜中脂類分子重白質(zhì)分子的重新分布，使膜中脂類分子重排，從而打開(kāi)質(zhì)膜，導(dǎo)致細(xì)胞融合。排，從而打開(kāi)質(zhì)膜，導(dǎo)致細(xì)胞融合。用滅活的病毒誘導(dǎo)的動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程示意圖用

29、滅活的病毒誘導(dǎo)的動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程示意圖 使用仙臺(tái)病毒融合懸浮細(xì)胞時(shí)，將兩種親使用仙臺(tái)病毒融合懸浮細(xì)胞時(shí)，將兩種親本細(xì)胞的懸液混合在一起離心，后將細(xì)胞沉本細(xì)胞的懸液混合在一起離心，后將細(xì)胞沉淀懸于滅活的仙臺(tái)病毒懸液中，使其進(jìn)行融淀懸于滅活的仙臺(tái)病毒懸液中，使其進(jìn)行融合，再洗去病毒，即可將融合的細(xì)胞加入選合，再洗去病毒，即可將融合的細(xì)胞加入選擇培養(yǎng)液進(jìn)行選擇培養(yǎng)；擇培養(yǎng)液進(jìn)行選擇培養(yǎng)； 融合貼壁細(xì)胞時(shí)，可將兩親本細(xì)胞混合培融合貼壁細(xì)胞時(shí)，可將兩親本細(xì)胞混合培養(yǎng)，然后將病毒直接加入到混合培養(yǎng)物中，養(yǎng)，然后將病毒直接加入到混合培養(yǎng)物中，培養(yǎng)一定時(shí)間后加選擇培養(yǎng)液進(jìn)行選擇；融培養(yǎng)一定時(shí)間后加選擇培養(yǎng)液進(jìn)

30、行選擇；融合效率比懸浮細(xì)胞高。合效率比懸浮細(xì)胞高。B. 化學(xué)融合劑誘發(fā)細(xì)胞融合化學(xué)融合劑誘發(fā)細(xì)胞融合 主要主要包括包括聚乙二醇聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇、聚甘油、聚乙烯醇、聚甘油、溶血卵磷脂、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰膽堿等，其溶血卵磷脂、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰膽堿等，其中以中以PEG最為常用。最為常用。 PEG比病毒更易制備和控制、活性穩(wěn)定、使用方比病毒更易制備和控制、活性穩(wěn)定、使用方便、而且促進(jìn)細(xì)胞融合的能力更強(qiáng)。便、而且促進(jìn)細(xì)胞融合的能力更強(qiáng)。 PEG(polyethylene glycol, PEG)是一種線形的多是一種線形的多聚化合物，有多種不同的分子量，常用于細(xì)胞融聚化合物，有多種不同的

31、分子量，常用于細(xì)胞融合的合的PEG分子量在分子量在10004000，濃度在，濃度在3050%間。間。PEG誘導(dǎo)細(xì)胞融合的誘導(dǎo)細(xì)胞融合的機(jī)理機(jī)理： 帶有大量負(fù)電荷的帶有大量負(fù)電荷的PEG與水之間的氫與水之間的氫鍵結(jié)合，使溶液中自由水消失，由于高度鍵結(jié)合，使溶液中自由水消失，由于高度脫水引起細(xì)胞凝集，形成大小程度不同的脫水引起細(xì)胞凝集，形成大小程度不同的凝集物。細(xì)胞發(fā)生皺縮并大大扭曲變形，凝集物。細(xì)胞發(fā)生皺縮并大大扭曲變形，鄰近細(xì)胞之間緊密接觸。鄰近細(xì)胞之間緊密接觸。 在相鄰細(xì)胞膜緊密接觸的部位，膜在相鄰細(xì)胞膜緊密接觸的部位，膜內(nèi)蛋白質(zhì)顆粒易位并凝聚。接著可能是內(nèi)蛋白質(zhì)顆粒易位并凝聚。接著可能是相

32、鄰的剝?nèi)サ鞍踪|(zhì)的細(xì)胞膜間的類脂質(zhì)相鄰的剝?nèi)サ鞍踪|(zhì)的細(xì)胞膜間的類脂質(zhì)與類脂質(zhì)反應(yīng)。與類脂質(zhì)反應(yīng)。 繼之，類脂質(zhì)分子的擾動(dòng)和重排導(dǎo)繼之，類脂質(zhì)分子的擾動(dòng)和重排導(dǎo)致接觸的細(xì)胞膜局部發(fā)生融合，形成很致接觸的細(xì)胞膜局部發(fā)生融合，形成很小的小的細(xì)胞質(zhì)橋細(xì)胞質(zhì)橋，之后細(xì)胞質(zhì)橋逐漸擴(kuò)大，之后細(xì)胞質(zhì)橋逐漸擴(kuò)大，兩個(gè)細(xì)胞最終融合。兩個(gè)細(xì)胞最終融合。聚乙二醇（聚乙二醇（PEG）法細(xì)胞融合過(guò)程）法細(xì)胞融合過(guò)程 使用使用PEG時(shí)，通常通過(guò)離心使細(xì)胞緊密接觸，時(shí)，通常通過(guò)離心使細(xì)胞緊密接觸，然后在細(xì)胞沉淀中加入一定濃度的然后在細(xì)胞沉淀中加入一定濃度的PEG，稍作用，稍作用一段時(shí)間后一段時(shí)間后(約約30秒秒)后立即加液稀釋

33、以及時(shí)終止后立即加液稀釋以及時(shí)終止其作用。其作用。 使用化學(xué)促融劑時(shí)，使用化學(xué)促融劑時(shí)，Ca2+是必需的是必需的。Ca2+的的作用機(jī)理，有的認(rèn)為是作用機(jī)理，有的認(rèn)為是Ca2+和和PO43-形成不溶于水形成不溶于水的配合物，成為細(xì)胞間的鈣橋，由此引起融合。的配合物，成為細(xì)胞間的鈣橋，由此引起融合。也有解釋為也有解釋為Ca2+結(jié)合到帶負(fù)電磷脂的電離基上，結(jié)合到帶負(fù)電磷脂的電離基上，使磷脂分子在膜上相互分離，由此引起融合。使磷脂分子在膜上相互分離，由此引起融合。PEG誘導(dǎo)雞紅細(xì)胞融合誘導(dǎo)雞紅細(xì)胞融合PEG法植物原生質(zhì)體的融合法植物原生質(zhì)體的融合圖圖1 煙草葉肉細(xì)胞和洋蔥根尖煙草葉肉細(xì)胞和洋蔥根尖細(xì)胞

34、原生質(zhì)體融合（細(xì)胞原生質(zhì)體融合（40） 圖圖2 煙草葉肉和洋蔥根尖細(xì)煙草葉肉和洋蔥根尖細(xì)胞原生質(zhì)體的異源融合胞原生質(zhì)體的異源融合 煙草煙草洋蔥洋蔥C. 電融合法電融合法 電處理融合法是電處理融合法是20世紀(jì)世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)年代發(fā)展起來(lái)的細(xì)胞融合技術(shù)，使融合率大為提高。的細(xì)胞融合技術(shù)，使融合率大為提高。 電融合的原理：電融合的原理： 當(dāng)細(xì)胞處于強(qiáng)電場(chǎng)脈沖時(shí)，電脈沖誘當(dāng)細(xì)胞處于強(qiáng)電場(chǎng)脈沖時(shí)，電脈沖誘發(fā)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)紊亂，膜上會(huì)短暫地形成微發(fā)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)紊亂，膜上會(huì)短暫地形成微膜孔，相鄰兩個(gè)細(xì)胞緊密排列部位的微孔膜孔，相鄰兩個(gè)細(xì)胞緊密排列部位的微孔就會(huì)有物質(zhì)交流，形成細(xì)胞膜橋和細(xì)胞質(zhì)就會(huì)有物質(zhì)交流，形

35、成細(xì)胞膜橋和細(xì)胞質(zhì)橋，進(jìn)而引起細(xì)胞融合產(chǎn)生雜交細(xì)胞。橋，進(jìn)而引起細(xì)胞融合產(chǎn)生雜交細(xì)胞。電融合誘導(dǎo)法原理示意圖電融合誘導(dǎo)法原理示意圖實(shí)際操作：實(shí)際操作： 先把待融合的細(xì)胞或原生質(zhì)體混合，取樣置于先把待融合的細(xì)胞或原生質(zhì)體混合，取樣置于100V/cm的高頻交流電場(chǎng)中，在非均勻交流電場(chǎng)中形成串的高頻交流電場(chǎng)中，在非均勻交流電場(chǎng)中形成串珠狀排列；珠狀排列； 完整煙草原生質(zhì)體完整煙草原生質(zhì)體 原生質(zhì)體成串原生質(zhì)體成串 再用再用15 KV/cm直流電脈沖，微直流電脈沖，微秒沖擊細(xì)胞或原生質(zhì)體的粘接點(diǎn)，細(xì)秒沖擊細(xì)胞或原生質(zhì)體的粘接點(diǎn)，細(xì)胞膜造成若干微孔，于是在膜之間形胞膜造成若干微孔，于是在膜之間形成通道，

36、使細(xì)胞質(zhì)得以交換；最后導(dǎo)成通道，使細(xì)胞質(zhì)得以交換；最后導(dǎo)致新的球狀細(xì)胞的形成。致新的球狀細(xì)胞的形成。電融合法原生質(zhì)體的融合結(jié)果電融合法原生質(zhì)體的融合結(jié)果細(xì)胞核移植中的細(xì)胞融合細(xì)胞核移植中的細(xì)胞融合融合中融合中融合后融合后融合前融合前電融合技術(shù)的擴(kuò)展：電融合技術(shù)的擴(kuò)展： 離心電融合：離心電融合：利用離心使相鄰細(xì)胞緊密接利用離心使相鄰細(xì)胞緊密接觸以提高融合率。觸以提高融合率。 特異性電融合：特異性電融合：利用生物素抗生物素利用生物素抗生物素抗原抗體橋聯(lián)，使帶有生物素標(biāo)記的骨抗原抗體橋聯(lián)，使帶有生物素標(biāo)記的骨髓瘤細(xì)胞與具有特異抗體的髓瘤細(xì)胞與具有特異抗體的B細(xì)胞間特異性細(xì)胞間特異性配對(duì)；或直接將抗原

37、標(biāo)記到骨髓瘤細(xì)胞表配對(duì)；或直接將抗原標(biāo)記到骨髓瘤細(xì)胞表面，利用抗原抗體特異性結(jié)合使兩種細(xì)胞面，利用抗原抗體特異性結(jié)合使兩種細(xì)胞特異性配對(duì)，然后用高壓電脈沖誘導(dǎo)細(xì)胞特異性配對(duì)，然后用高壓電脈沖誘導(dǎo)細(xì)胞融合。融合。 細(xì)胞化學(xué)聚集電融合：細(xì)胞化學(xué)聚集電融合：采用低濃度采用低濃度PEG、PHA或伴刀豆蛋白或伴刀豆蛋白A等使細(xì)胞聚集接觸，等使細(xì)胞聚集接觸，然后用電脈沖誘導(dǎo)細(xì)胞融合。然后用電脈沖誘導(dǎo)細(xì)胞融合。 磁電融合：磁電融合：利用磁場(chǎng)使已表面磁化的利用磁場(chǎng)使已表面磁化的細(xì)胞相互聚集接觸，然后在用電脈沖誘細(xì)胞相互聚集接觸，然后在用電脈沖誘導(dǎo)融合。導(dǎo)融合。電融合的優(yōu)點(diǎn)：電融合的優(yōu)點(diǎn)： 適應(yīng)的細(xì)胞類型廣；適

38、應(yīng)的細(xì)胞類型廣； 不需加外源因子，如不需加外源因子，如PEG等；等； 對(duì)細(xì)胞毒性相對(duì)低；對(duì)細(xì)胞毒性相對(duì)低； 融合率高，可達(dá)融合率高，可達(dá)50%80%； 可用于細(xì)胞數(shù)量很少的融合；可用于細(xì)胞數(shù)量很少的融合； 可定向誘導(dǎo)細(xì)胞融合可定向誘導(dǎo)細(xì)胞融合; 有利于融合細(xì)胞的挑選。有利于融合細(xì)胞的挑選。電融合的不利之處：電融合的不利之處： 融合儀價(jià)格昂貴；融合儀價(jià)格昂貴； 兩細(xì)胞大小差異較大時(shí)，電壓較難選擇；兩細(xì)胞大小差異較大時(shí)，電壓較難選擇； 融合膜成分不同時(shí)細(xì)胞較難融合融合膜成分不同時(shí)細(xì)胞較難融合5.融合細(xì)胞的篩選融合細(xì)胞的篩選與克隆與克隆 在細(xì)胞融合過(guò)程中，不僅兩類不同細(xì)胞間在細(xì)胞融合過(guò)程中，不僅兩類

39、不同細(xì)胞間發(fā)生融合，兩類親本細(xì)胞也能發(fā)生相互融合發(fā)生融合，兩類親本細(xì)胞也能發(fā)生相互融合現(xiàn)象。含兩個(gè)不同親本細(xì)胞核的細(xì)胞稱現(xiàn)象。含兩個(gè)不同親本細(xì)胞核的細(xì)胞稱異核異核體體 或或異核細(xì)胞異核細(xì)胞。由同一親本細(xì)胞融合形成。由同一親本細(xì)胞融合形成的細(xì)胞稱的細(xì)胞稱同核體同核體或或同核細(xì)胞同核細(xì)胞。 利用利用PEG和仙臺(tái)病毒進(jìn)行融合時(shí)，細(xì)胞融和仙臺(tái)病毒進(jìn)行融合時(shí)，細(xì)胞融合有一定的隨機(jī)性，除形成雜交細(xì)胞外還會(huì)合有一定的隨機(jī)性，除形成雜交細(xì)胞外還會(huì)出現(xiàn)各親本細(xì)胞自身融合，需對(duì)雜交細(xì)胞及出現(xiàn)各親本細(xì)胞自身融合，需對(duì)雜交細(xì)胞及時(shí)分離或篩選出來(lái)。時(shí)分離或篩選出來(lái)。 大部分多核細(xì)胞在一周內(nèi)死亡，只有少數(shù)大部分多核細(xì)胞在

40、一周內(nèi)死亡，只有少數(shù)異核細(xì)胞、尤其雙核異核細(xì)胞會(huì)存活。并異核細(xì)胞、尤其雙核異核細(xì)胞會(huì)存活。并通過(guò)有絲分裂使兩個(gè)不同親本細(xì)胞的染色通過(guò)有絲分裂使兩個(gè)不同親本細(xì)胞的染色體合并在一個(gè)細(xì)胞核中，形成雜交細(xì)胞。體合并在一個(gè)細(xì)胞核中，形成雜交細(xì)胞。 利用利用酶缺陷型、營(yíng)養(yǎng)缺陷型、溫度敏感性、酶缺陷型、營(yíng)養(yǎng)缺陷型、溫度敏感性、形態(tài)和行形態(tài)和行為等標(biāo)志，建立了多種選擇選擇為等標(biāo)志，建立了多種選擇選擇系統(tǒng)，最常用的是酶缺陷型系統(tǒng)，最常用的是酶缺陷型HAT選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)法。法。 A.初步篩選初步篩選： 融合后馬上以融合后馬上以 HAT 培養(yǎng)，能活培養(yǎng)，能活下來(lái)的大多為下來(lái)的大多為 B 細(xì)胞與細(xì)胞與 骨髓瘤細(xì)胞融

41、合形成的骨髓瘤細(xì)胞融合形成的雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞。 未融合的骨髓瘤及骨髓瘤細(xì)胞間相互融合的未融合的骨髓瘤及骨髓瘤細(xì)胞間相互融合的細(xì)胞在細(xì)胞在HAT中因中因DNA 合成抑制而死亡。合成抑制而死亡。 未融合的未融合的B細(xì)胞及細(xì)胞及B細(xì)胞相互融合的細(xì)胞在體細(xì)胞相互融合的細(xì)胞在體外培養(yǎng)因無(wú)法增殖會(huì)漸漸死去。外培養(yǎng)因無(wú)法增殖會(huì)漸漸死去。 核酸的正常代謝途徑若被氨基蝶呤核酸的正常代謝途徑若被氨基蝶呤(A)阻礙，可由補(bǔ)救途徑利用次黃嘌呤阻礙，可由補(bǔ)救途徑利用次黃嘌呤(H)通通過(guò)過(guò)次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶次黃嘌呤鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)催化產(chǎn)生肌苷酸催化產(chǎn)生肌苷酸(IMP)，并利用，并利用胸腺

42、嘧啶核苷胸腺嘧啶核苷(T)通過(guò)通過(guò)胸腺嘧啶核苷激酶胸腺嘧啶核苷激酶(TK)催化產(chǎn)生脫氧核苷酸來(lái)合成催化產(chǎn)生脫氧核苷酸來(lái)合成DNA。但骨髓瘤細(xì)胞缺乏但骨髓瘤細(xì)胞缺乏TK及及 HGPRT 兩種酶，兩種酶，因此在因此在A存在下無(wú)法生長(zhǎng)；正常細(xì)胞存在下無(wú)法生長(zhǎng)；正常細(xì)胞 (如如B細(xì)胞細(xì)胞) 則可經(jīng)由補(bǔ)救途徑繼續(xù)生長(zhǎng)。則可經(jīng)由補(bǔ)救途徑繼續(xù)生長(zhǎng)。 骨髓瘤細(xì)胞與正常的骨髓瘤細(xì)胞與正常的B細(xì)胞形成的細(xì)胞形成的雜交瘤，因正常細(xì)胞可以提供雜交瘤，因正常細(xì)胞可以提供TK及及HGPRT兩酶，故在兩酶，故在HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)基中可以正常生長(zhǎng)。可以正常生長(zhǎng)。 B.抗體專一性篩選抗體專一性篩選：并非所有：并非所有 B 細(xì)胞

43、都產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)所細(xì)胞都產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)所要的抗體，小鼠原先就存在許多要的抗體，小鼠原先就存在許多B 細(xì)胞株對(duì)抗一般疾細(xì)胞株對(duì)抗一般疾??；因此要對(duì)雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體專一性進(jìn)行篩選，?。灰虼艘獙?duì)雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體專一性進(jìn)行篩選，這也是單克隆抗體制備中最關(guān)鍵的步驟之一。這也是單克隆抗體制備中最關(guān)鍵的步驟之一。 用于篩選雜交瘤細(xì)胞的方法大致有用于篩選雜交瘤細(xì)胞的方法大致有第二抗體法第二抗體法、抗抗原結(jié)合法原結(jié)合法和和功能篩選法功能篩選法三類三類； 常用的方法是第二抗體法，包括固相放射免疫測(cè)定常用的方法是第二抗體法，包括固相放射免疫測(cè)定法法(RIA)、酶聯(lián)免疫法酶聯(lián)免疫法 (ELISA) 和熒光活化細(xì)胞分類和熒

44、光活化細(xì)胞分類器法器法(FACS)等，通過(guò)這些方法挑出產(chǎn)生專一性抗體的等，通過(guò)這些方法挑出產(chǎn)生專一性抗體的集落集落 。 C.細(xì)胞克隆化細(xì)胞克隆化：通過(guò)抗體專一性挑出來(lái)的：通過(guò)抗體專一性挑出來(lái)的細(xì)胞株，也許仍含有兩群以上的細(xì)胞細(xì)胞株，也許仍含有兩群以上的細(xì)胞 ，因此，因此要進(jìn)行單克隆化；要進(jìn)行單克隆化； 一般采用一般采用有限稀釋法有限稀釋法或或軟瓊脂法軟瓊脂法對(duì)雜交瘤對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞克隆化，獲得來(lái)自單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞克隆化，獲得來(lái)自單個(gè)細(xì)胞的克??；克隆； 并對(duì)單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)出的群落，再次以并對(duì)單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)出的群落，再次以 ELISA 篩選專一性抗體，獲得可產(chǎn)生特異性篩選專一性抗體，獲得可產(chǎn)

45、生特異性抗體的單克隆細(xì)胞株。抗體的單克隆細(xì)胞株。 得到穩(wěn)定的抗體后，通常要再以得到穩(wěn)定的抗體后，通常要再以ELISA方法檢定該抗體的亞型是屬于方法檢定該抗體的亞型是屬于IgG, IgM或或IgA等。免疫時(shí)間太短的，較可能取得等。免疫時(shí)間太短的，較可能取得IgM，但一般仍以，但一般仍以IgG較多。較多。6. 單克隆抗體的大量制備：?jiǎn)慰寺】贵w的大量制備： 單克隆抗體的大量制備可分為單克隆抗體的大量制備可分為體內(nèi)法體內(nèi)法和和體外法體外法。體內(nèi)法體內(nèi)法：可把篩選出來(lái)的雜交瘤細(xì)胞注入小鼠腹：可把篩選出來(lái)的雜交瘤細(xì)胞注入小鼠腹腔，誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生大量腹水，然后以針頭收集所腔，誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生大量腹水，然后以針頭收

46、集所產(chǎn)生的腹水，通常每次可取得產(chǎn)生的腹水，通常每次可取得35 mL左右；腹左右；腹水中的抗體濃度高，可達(dá)到水中的抗體濃度高，可達(dá)到125 g/mL 。其缺。其缺點(diǎn)是不適合大規(guī)模生產(chǎn)，腹水中有可能混有小鼠點(diǎn)是不適合大規(guī)模生產(chǎn)，腹水中有可能混有小鼠本身的抗體，給純化抗體帶來(lái)困難。本身的抗體，給純化抗體帶來(lái)困難。1) 體外法體外法：把融合細(xì)胞在大型培養(yǎng)瓶中用無(wú)血清培：把融合細(xì)胞在大型培養(yǎng)瓶中用無(wú)血清培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，收集培養(yǎng)液上清即得抗體。缺點(diǎn)養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，收集培養(yǎng)液上清即得抗體。缺點(diǎn)是抗體濃度低，僅為是抗體濃度低，僅為0.51 g mL。三三、人源性單克隆抗體、人源性單克隆抗體 和基因工程抗體和基因

47、工程抗體1. EB病毒轉(zhuǎn)化技術(shù)：病毒轉(zhuǎn)化技術(shù)： 利用類似于皰疹病毒的利用類似于皰疹病毒的EB病毒在體病毒在體外直接感染人外周血淋巴細(xì)胞（來(lái)源于淋外直接感染人外周血淋巴細(xì)胞（來(lái)源于淋巴結(jié)、扁桃體、臍帶血、外周血等），使巴結(jié)、扁桃體、臍帶血、外周血等），使之轉(zhuǎn)化獲得永生能力得到人之轉(zhuǎn)化獲得永生能力得到人B淋巴細(xì)胞系，淋巴細(xì)胞系，這些細(xì)胞可在體外分泌人抗體。這些細(xì)胞可在體外分泌人抗體。(一一) 、人源性單克隆抗體、人源性單克隆抗體 技術(shù)同鼠鼠雜交瘤，親本骨髓瘤細(xì)胞主要技術(shù)同鼠鼠雜交瘤，親本骨髓瘤細(xì)胞主要有來(lái)自小鼠的骨髓瘤有來(lái)自小鼠的骨髓瘤653、SP2/0、NS-1，來(lái)自，來(lái)自大鼠的骨髓瘤大鼠的骨髓

48、瘤Y3Ag1.2.3等；等； 親本親本B細(xì)胞來(lái)源于人外周血淋巴細(xì)胞、淋巴結(jié)細(xì)胞來(lái)源于人外周血淋巴細(xì)胞、淋巴結(jié)細(xì)胞、脾細(xì)胞。細(xì)胞、脾細(xì)胞。 但人鼠雜交瘤的單克隆抗體分泌性能不穩(wěn)但人鼠雜交瘤的單克隆抗體分泌性能不穩(wěn)定，多數(shù)情況下由于人染色體的丟失導(dǎo)致雜交定，多數(shù)情況下由于人染色體的丟失導(dǎo)致雜交瘤細(xì)胞失去分泌抗體的能力。瘤細(xì)胞失去分泌抗體的能力。 2. 人鼠雜交瘤單克隆抗體： 技術(shù)同鼠鼠雜交瘤，親本骨髓瘤細(xì)胞主要技術(shù)同鼠鼠雜交瘤，親本骨髓瘤細(xì)胞主要有來(lái)自小鼠的骨髓瘤有來(lái)自小鼠的骨髓瘤653、SP2/0、NS-1，來(lái)自，來(lái)自大鼠的骨髓瘤大鼠的骨髓瘤Y3Ag1.2.3等；等； 親本親本B細(xì)胞來(lái)源于人外周

49、血淋巴細(xì)胞、淋巴結(jié)細(xì)胞來(lái)源于人外周血淋巴細(xì)胞、淋巴結(jié)細(xì)胞、脾細(xì)胞。細(xì)胞、脾細(xì)胞。 但人鼠雜交瘤的單克隆抗體分泌性能不穩(wěn)但人鼠雜交瘤的單克隆抗體分泌性能不穩(wěn)定，多數(shù)情況下由于人染色體的丟失導(dǎo)致雜交定，多數(shù)情況下由于人染色體的丟失導(dǎo)致雜交瘤細(xì)胞失去分泌抗體的能力。瘤細(xì)胞失去分泌抗體的能力。3. 人人雜交瘤單克隆抗體：人人雜交瘤單克隆抗體： 人人雜交瘤操作步驟基本上與小鼠小鼠雜交瘤技人人雜交瘤操作步驟基本上與小鼠小鼠雜交瘤技術(shù)相同，使用人的骨髓瘤細(xì)胞與人的術(shù)相同，使用人的骨髓瘤細(xì)胞與人的B淋巴細(xì)胞融合；淋巴細(xì)胞融合； 但可供利用的人骨髓瘤細(xì)胞種類非常有限，人的骨髓但可供利用的人骨髓瘤細(xì)胞種類非常有限

50、，人的骨髓瘤細(xì)胞在融合率、非分泌型方面仍不及小鼠骨髓瘤細(xì)胞瘤細(xì)胞在融合率、非分泌型方面仍不及小鼠骨髓瘤細(xì)胞； 而且人不能像小鼠那樣進(jìn)行高度免疫，而且人不能像小鼠那樣進(jìn)行高度免疫，B淋巴細(xì)胞常淋巴細(xì)胞常限于取自外周血限于取自外周血(小鼠取自動(dòng)物脾臟小鼠取自動(dòng)物脾臟)，激活狀態(tài)不適合做，激活狀態(tài)不適合做融合；故人人雜交瘤細(xì)胞在融合、融合后的篩選以及融合；故人人雜交瘤細(xì)胞在融合、融合后的篩選以及融合細(xì)胞分泌抗體方面仍不理想。融合細(xì)胞分泌抗體方面仍不理想。4. 構(gòu)建轉(zhuǎn)構(gòu)建轉(zhuǎn)入入Ig基因組小鼠基因組小鼠 將改造過(guò)的人的抗體基因組導(dǎo)入小鼠胚胎，將改造過(guò)的人的抗體基因組導(dǎo)入小鼠胚胎，得到在免疫后能產(chǎn)生人抗體

51、的轉(zhuǎn)基因小鼠。改得到在免疫后能產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因小鼠。改造過(guò)的抗體除了構(gòu)成抗原識(shí)別與抗原結(jié)合部位造過(guò)的抗體除了構(gòu)成抗原識(shí)別與抗原結(jié)合部位的三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)的三個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)是鼠源的以外，其余是鼠源的以外，其余部分均是人源的。部分均是人源的。 用人用人Ig基因組取代小鼠基因組取代小鼠Ig基因組獲得轉(zhuǎn)基因基因組獲得轉(zhuǎn)基因小鼠，以后僅需免疫小鼠制作單克隆抗體，但小鼠，以后僅需免疫小鼠制作單克隆抗體，但獲得的是人抗體而非小鼠抗體。該技術(shù)難度較獲得的是人抗體而非小鼠抗體。該技術(shù)難度較大，但已有成功的報(bào)道。大，但已有成功的報(bào)道。5. 嚴(yán)重免疫缺陷小鼠制備人單克隆抗體：嚴(yán)重免疫缺陷小鼠制備人單克隆抗體

52、： SCID小鼠具有嚴(yán)重免疫缺陷，對(duì)外源組小鼠具有嚴(yán)重免疫缺陷，對(duì)外源組織無(wú)免疫排斥反應(yīng)，故這種小鼠可接受人體織無(wú)免疫排斥反應(yīng)，故這種小鼠可接受人體組織或器官移植，形成人鼠嵌合體小鼠。組織或器官移植，形成人鼠嵌合體小鼠。 將人免疫干細(xì)胞移植到將人免疫干細(xì)胞移植到SCID小鼠體內(nèi)，小鼠體內(nèi)，SCID小鼠獲得了人的免疫系統(tǒng)。小鼠獲得了人的免疫系統(tǒng)。 這種小鼠可用任何抗原免疫，從激活的這種小鼠可用任何抗原免疫，從激活的淋巴細(xì)胞中富集抗原特異性人源性淋巴細(xì)胞中富集抗原特異性人源性B淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞，進(jìn)一步進(jìn)行細(xì)胞融合或制備抗體庫(kù)。胞，進(jìn)一步進(jìn)行細(xì)胞融合或制備抗體庫(kù)。(二二)、基因工程抗體、基因工程抗體

53、基因工程抗體是利用基因工程基因工程抗體是利用基因工程的手段獲得人源性抗體，主要包括的手段獲得人源性抗體，主要包括以下幾個(gè)方面：以下幾個(gè)方面：人鼠嵌合抗體、人鼠嵌合抗體、改型抗體、抗體片段、噬菌體抗體改型抗體、抗體片段、噬菌體抗體文庫(kù)技術(shù)、表位印跡選擇技術(shù)等文庫(kù)技術(shù)、表位印跡選擇技術(shù)等。 抗體的重輕鏈構(gòu)成的可變區(qū)抗體的重輕鏈構(gòu)成的可變區(qū)(V區(qū)區(qū))與識(shí)別抗與識(shí)別抗原有關(guān)，具有特異性；而恒定區(qū)原有關(guān)，具有特異性；而恒定區(qū)(C區(qū)區(qū))與效應(yīng)功與效應(yīng)功能有關(guān)。能有關(guān)。 人鼠嵌合抗體就是通過(guò)人工改造使抗體的人鼠嵌合抗體就是通過(guò)人工改造使抗體的V區(qū)是鼠源的，而區(qū)是鼠源的，而C區(qū)是人源的。如此改造的嵌區(qū)是人源的

54、。如此改造的嵌合抗體保留了原來(lái)鼠源單克隆抗體的特異性和合抗體保留了原來(lái)鼠源單克隆抗體的特異性和親和力，人抗小鼠抗體反應(yīng)親和力，人抗小鼠抗體反應(yīng)(HAMA)也明顯減弱。也明顯減弱。 1. 人鼠嵌合抗體：人鼠嵌合抗體：人鼠嵌合抗體的制備人鼠嵌合抗體的制備 2. 改型抗體：改型抗體： 也稱也稱CDR移植移植。用鼠源的。用鼠源的CDR(可可變區(qū)中和抗原互補(bǔ)結(jié)合構(gòu)成抗原結(jié)合部變區(qū)中和抗原互補(bǔ)結(jié)合構(gòu)成抗原結(jié)合部位的部分）取代人抗體中相應(yīng)的位的部分）取代人抗體中相應(yīng)的CDR部部位，使得抗體中除構(gòu)成抗原結(jié)合部位的位，使得抗體中除構(gòu)成抗原結(jié)合部位的3個(gè)個(gè)CDR是鼠源以外，其余均為人源。是鼠源以外，其余均為人源。

55、這種抗體在人體內(nèi)免疫性大大降低。這種抗體在人體內(nèi)免疫性大大降低。改型抗體（改型抗體（CDR移植）移植） Fab抗體抗體：抗體抗體Y形的兩個(gè)臂稱為形的兩個(gè)臂稱為Fab，它由，它由可變區(qū)和小部分的恒定區(qū)組成，利用基因工可變區(qū)和小部分的恒定區(qū)組成，利用基因工程的方法構(gòu)建具有可變區(qū)和小部分恒定區(qū)的程的方法構(gòu)建具有可變區(qū)和小部分恒定區(qū)的Fab抗體，這樣的抗體仍具有特異結(jié)合抗原的抗體，這樣的抗體仍具有特異結(jié)合抗原的特性。特性。 單鏈抗體單鏈抗體(ScFv)：用短肽接頭用短肽接頭常用常用(Gly4Ser)3將重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)相連，使其分子將重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)相連，使其分子變小，更有利于穿透組織和清

56、除，而且易構(gòu)變小，更有利于穿透組織和清除，而且易構(gòu)建表達(dá)；但親和力會(huì)出現(xiàn)一定的下降。建表達(dá)；但親和力會(huì)出現(xiàn)一定的下降。4. 噬菌體抗體文庫(kù)技術(shù)噬菌體抗體文庫(kù)技術(shù) 體外建立一個(gè)相應(yīng)于體內(nèi)體外建立一個(gè)相應(yīng)于體內(nèi)B細(xì)胞庫(kù)的抗體庫(kù)，從中篩細(xì)胞庫(kù)的抗體庫(kù)，從中篩選所需要的抗體。利用選所需要的抗體。利用PCR擴(kuò)增重鏈和輕鏈的擴(kuò)增重鏈和輕鏈的cDNA，并插入到噬菌體外殼蛋白的編碼基因中，然后感染并插入到噬菌體外殼蛋白的編碼基因中，然后感染E. coli，使抗體基因的表達(dá)產(chǎn)物和外殼蛋白一起融合展示在使抗體基因的表達(dá)產(chǎn)物和外殼蛋白一起融合展示在噬菌體表面，成為噬菌體抗體。噬菌體表面，成為噬菌體抗體。 通過(guò)固相化

57、的抗原進(jìn)行篩選，不能結(jié)合抗原的噬菌體通過(guò)固相化的抗原進(jìn)行篩選，不能結(jié)合抗原的噬菌體被洗去，結(jié)合的噬菌體被洗脫下來(lái)再次感染細(xì)菌進(jìn)行擴(kuò)被洗去，結(jié)合的噬菌體被洗脫下來(lái)再次感染細(xì)菌進(jìn)行擴(kuò)增，多次吸附洗脫擴(kuò)增后可獲得所要的抗原特異性增，多次吸附洗脫擴(kuò)增后可獲得所要的抗原特異性的噬菌體抗體。這些抗體可以做到全部為人源的。的噬菌體抗體。這些抗體可以做到全部為人源的。5. 表位印模選擇技術(shù)：表位印模選擇技術(shù)： 用特定的已知抗原從抗體組合文庫(kù)中或噬菌體抗體文用特定的已知抗原從抗體組合文庫(kù)中或噬菌體抗體文庫(kù)中篩選所需抗體，通過(guò)抗體可變區(qū)與抗原結(jié)合及編碼輕、庫(kù)中篩選所需抗體，通過(guò)抗體可變區(qū)與抗原結(jié)合及編碼輕、重鏈可

58、變區(qū)鼠源性與人源性基因置換、匹配，從而獲得能重鏈可變區(qū)鼠源性與人源性基因置換、匹配，從而獲得能與抗原特異性反應(yīng)的人源性抗體與抗原特異性反應(yīng)的人源性抗體； 將篩選到的含人輕、重鏈基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到骨髓瘤將篩選到的含人輕、重鏈基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到骨髓瘤SP2/0細(xì)胞中，該細(xì)胞即可產(chǎn)生人單克隆抗體。細(xì)胞中，該細(xì)胞即可產(chǎn)生人單克隆抗體。四四、單克隆抗體的應(yīng)用、單克隆抗體的應(yīng)用 1. 理論研究：理論研究： 構(gòu)建構(gòu)建B淋巴細(xì)胞雜交瘤可用于分析淋巴細(xì)胞雜交瘤可用于分析B細(xì)胞的多樣細(xì)胞的多樣性及其產(chǎn)生機(jī)理，并能分析免疫應(yīng)答中抗體的性及其產(chǎn)生機(jī)理，并能分析免疫應(yīng)答中抗體的多樣性。多樣性。 利用單克隆抗體可利用單克隆抗

59、體可進(jìn)行表位分析進(jìn)行表位分析：利用單克?。豪脝慰寺】贵w的交叉反應(yīng)，能幫助找出大分子之間在重抗體的交叉反應(yīng)，能幫助找出大分子之間在重要結(jié)構(gòu)和生物學(xué)上的關(guān)系，因?yàn)閷?duì)一種單克隆要結(jié)構(gòu)和生物學(xué)上的關(guān)系，因?yàn)閷?duì)一種單克隆抗體起反應(yīng)的幾種大分子一定具有相同和相似抗體起反應(yīng)的幾種大分子一定具有相同和相似的抗原決定簇。的抗原決定簇。2. 診斷試劑中的應(yīng)用：診斷試劑中的應(yīng)用： 單克隆抗體現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于許多領(lǐng)域的診斷，特別單克隆抗體現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于許多領(lǐng)域的診斷，特別是在疾病診斷上廣泛應(yīng)用。如針對(duì)是在疾病診斷上廣泛應(yīng)用。如針對(duì)HIV、乙肝等疾病、乙肝等疾病的單克隆抗體，測(cè)定妊娠的的單克隆抗體，測(cè)定妊娠的hCG單克

60、隆抗體、測(cè)定排單克隆抗體、測(cè)定排卵的卵的LH單克隆抗體在市場(chǎng)上大量供應(yīng)。單克隆抗體在市場(chǎng)上大量供應(yīng)。 用針對(duì)腫瘤細(xì)胞表面特異抗原的單克隆抗體在幫助用針對(duì)腫瘤細(xì)胞表面特異抗原的單克隆抗體在幫助診斷癌癥，如用診斷癌癥，如用癌胚抗原癌胚抗原(CEA)的單克隆抗體在幫助的單克隆抗體在幫助診斷結(jié)腸癌和直腸癌，用前列腺診斷結(jié)腸癌和直腸癌，用前列腺酸性磷酸酶酸性磷酸酶的單克隆的單克隆抗體在幫助診斷前列腺癌等?？贵w在幫助診斷前列腺癌等。 用同位素標(biāo)記的單克隆抗體用于腫瘤顯像定位對(duì)診用同位素標(biāo)記的單克隆抗體用于腫瘤顯像定位對(duì)診斷腫瘤患者是否有轉(zhuǎn)移病灶具有重要意義。斷腫瘤患者是否有轉(zhuǎn)移病灶具有重要意義。3. 疾病治療上的