發(fā)酵工藝試驗(yàn)要點(diǎn)

1、實(shí)驗(yàn)一菌種的傳代培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? .掌握菌種傳代培養(yǎng)的原理2 .掌握菌種傳代培養(yǎng)的操作過(guò)程二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞在培養(yǎng)器中長(zhǎng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng)并且活化細(xì)胞的代謝性能，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）?；罨蟮木N經(jīng)過(guò)擴(kuò)大培養(yǎng)就會(huì)大量繁殖，把菌種通過(guò)逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)，使其大量繁殖并保留生長(zhǎng)更加良好的菌種。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法，同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過(guò)程。三、實(shí)驗(yàn)器材1 .菌種：金色鏈霉菌2 .培養(yǎng)基（秋皮培養(yǎng)基）：秋皮36.0克；磷酸氫二胺3.0克；磷酸氫二鉀0.2克；硫酸鎂0.1克；瓊脂15.0克；蒸儲(chǔ)水1.0升；ph7.03

2、 .其它：電子天平；250ml三角瓶；電爐；滅菌鍋；培養(yǎng)皿（5個(gè)）；試管；無(wú)菌操作臺(tái)；酒精燈；接種環(huán)；涂布棒；報(bào)紙；細(xì)繩；棉塞；牛皮紙；玻璃棒。四、實(shí)驗(yàn)步驟使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)菌種1 .按上述培養(yǎng)基配方配制250毫升培養(yǎng)基，裝入一只三角瓶中，加熱使藥品溶解，用棉塞塞住瓶口，并用牛皮紙?jiān)o，以備滅菌。2 .把培養(yǎng)皿用報(bào)紙包好，細(xì)繩系牢，以備滅菌。3 .把物品放入滅菌鍋中在121c下滅菌1520分鐘，滅菌后放入已殺菌的無(wú)菌操作臺(tái)中。4 .在無(wú)菌條件下，在每只培養(yǎng)皿中分別倒入培養(yǎng)基20ml左右，放平，冷卻后備用。5 .待培養(yǎng)基冷卻凝固后，在無(wú)菌條件下，選擇一個(gè)生長(zhǎng)良好的菌種，用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基上接種，并

3、用涂布棒將菌種均勻涂遍整個(gè)培養(yǎng)皿。6 .將接種好的平板做好標(biāo)號(hào)后，將其放入29c的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，倒置培養(yǎng)。使用試管培養(yǎng)菌種1 .按上述培養(yǎng)基配方配制250毫升培養(yǎng)基，裝入一只三角瓶中，加熱使藥品溶解，然后將其倒入試管用棉塞塞住瓶口，并用牛皮紙?jiān)o，以備滅菌。2 .把物品放入滅菌鍋中在121c下滅菌1520分鐘，滅菌后放入已殺菌的無(wú)菌操作臺(tái)中。3 .將滅了菌的試管取出并斜放（保證足夠的斜平面），待其冷卻凝固。接下來(lái)的步驟同培養(yǎng)皿的培養(yǎng)方法。注意事項(xiàng)：1 .4和5步均為無(wú)菌實(shí)驗(yàn)。2 .傳代培養(yǎng)周期為45天。實(shí)驗(yàn)二發(fā)酯種子培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆瞻l(fā)酵種子培養(yǎng)的原理和方法。二、實(shí)驗(yàn)原理種子擴(kuò)大培養(yǎng)簡(jiǎn)稱(chēng)種子

4、擴(kuò)培是發(fā)酵工程的一個(gè)組成部分，其實(shí)指將保存在砂土管、冷凍干燥管中處休眠狀態(tài)的生產(chǎn)菌種接入試管斜面活化后，再經(jīng)過(guò)扁瓶或搖瓶及種子罐逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)，最終獲得一定數(shù)量和質(zhì)量的純種過(guò)程。其目的首先是出于接種量的需要與菌種的馴化，同時(shí)對(duì)于縮短發(fā)酵時(shí)間、保證生產(chǎn)水平也有幫助。所以種子擴(kuò)大培養(yǎng)的任務(wù)是為了得到純而壯的培養(yǎng)物，即獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物。對(duì)于不同產(chǎn)品的發(fā)酵過(guò)程來(lái)說(shuō)，必須根據(jù)菌種生長(zhǎng)繁殖速度快慢決定種子擴(kuò)大培養(yǎng)的級(jí)數(shù)?？股厣a(chǎn)中，放線菌的細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖較慢，常采用二級(jí)或三級(jí)種子擴(kuò)大培養(yǎng)；一般50t發(fā)酵罐多采用二級(jí)或三級(jí)發(fā)酵，有的也采用四級(jí)發(fā)酵如鏈霉素生產(chǎn)。種子擴(kuò)培所得的純種培養(yǎng)物稱(chēng)為種

5、子。對(duì)于種子而言，應(yīng)當(dāng)具備以下要求：總量及濃度能滿(mǎn)足要求；生理狀況穩(wěn)定，個(gè)體與群體區(qū)隔明顯；活力強(qiáng)，移種發(fā)酵后，能夠迅速生長(zhǎng)；無(wú)雜菌污染。種齡是指種子罐中培養(yǎng)的菌體開(kāi)始移入下一級(jí)種子罐或發(fā)酵罐時(shí)的培養(yǎng)時(shí)間。種齡的確定受到諸多因素的影響，如果種齡過(guò)短則菌體太少，如果種齡過(guò)長(zhǎng)，則菌體易老化。種子擴(kuò)培的一般過(guò)程是：斜面菌種-一級(jí)種子培養(yǎng)（搖瓶）-二級(jí)種子培養(yǎng)（種子罐）-發(fā)酵對(duì)于種子制備過(guò)程，其大致可區(qū)分為實(shí)驗(yàn)室階段和生產(chǎn)車(chē)間階段，前期不用種子罐，所用的設(shè)備為培養(yǎng)箱、搖床等實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)設(shè)備，在工廠這些培養(yǎng)過(guò)程一般都在菌種室完成，因此將這一培養(yǎng)過(guò)程稱(chēng)為實(shí)驗(yàn)室階段的種子培養(yǎng)。而后期種子培養(yǎng)在種子罐里面進(jìn)行，

6、一般在工程上歸為發(fā)酵車(chē)間管理，因此形象地稱(chēng)這些培養(yǎng)過(guò)程為生產(chǎn)車(chē)間階段。并非所有的種子擴(kuò)大培養(yǎng)都采用從搖瓶到種子罐的二級(jí)發(fā)酵模式，其實(shí)際發(fā)酵級(jí)數(shù)受到發(fā)酵規(guī)模、菌體生長(zhǎng)特性、接種量的影響。種子培養(yǎng)基與發(fā)酵培養(yǎng)基的區(qū)別：1種子培養(yǎng)基一般是基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含有微生物生長(zhǎng)繁殖需要的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，微生物生長(zhǎng)過(guò)程中不需在添加營(yíng)養(yǎng)素、改變PH值的外界條件；2發(fā)酵培養(yǎng)基多為營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，添加特殊營(yíng)養(yǎng)成分，且發(fā)酵過(guò)程中要調(diào)PH值，溫度等外界條件。三、實(shí)驗(yàn)器材1 .菌種：金色鏈霉菌2 .培養(yǎng)基（）:葡萄糖4.2;氯化鈉0.2;硫酸胺0.3;碳酸鈣0.4;硫酸鎂0.025;磷酸二氫鉀0.025;ph6.0。3 .試劑：蒸儲(chǔ)

7、水4 .其它：電子天平；三角瓶（250ml、100ml）;電爐；棉塞；牛皮紙；細(xì)繩；滅菌鍋；無(wú)菌操作臺(tái)；酒精燈；無(wú)菌吸管；搖床。四、實(shí)驗(yàn)步驟1 .按上述培養(yǎng)基配方配制50毫升培養(yǎng)基，裝入一只250毫升三角瓶中，加熱使藥品溶解后（保持低溫加熱），用棉塞塞住瓶口，并用牛皮紙?jiān)o，以備滅菌。2 .用一個(gè)100毫升的三角瓶裝入蒸儲(chǔ)水，用棉塞塞住瓶口，并用牛皮紙?jiān)o，以備滅菌。3 .把物品放入滅菌鍋中在115C時(shí)滅菌1520分鐘，滅菌后放入已殺菌的無(wú)菌操作臺(tái)中。4 .待培養(yǎng)基和無(wú)菌水冷卻至適宜溫度時(shí)，在無(wú)菌條件下，將兩支斜面的抱子用無(wú)菌水制成懸浮液，用無(wú)菌吸管吸1ml接入搖瓶的培養(yǎng)基中。5 .將搖瓶放置

8、在29C、160r/min的搖床上培養(yǎng)2224小時(shí)。注意事項(xiàng)：1.接種必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行。2葡萄糖在超過(guò)115C的時(shí)候就會(huì)發(fā)生變性，滅菌時(shí)必須特別注意，要有人看護(hù)。實(shí)驗(yàn)三金霉素的發(fā)酪一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? .掌握搖瓶發(fā)酵的原理2 .掌握搖瓶發(fā)酵的操作過(guò)程二、實(shí)驗(yàn)原理1、發(fā)酵來(lái)源發(fā)酵現(xiàn)象早巳被人們所認(rèn)識(shí)，但了解它的本質(zhì)卻是近200年來(lái)的事。英語(yǔ)中發(fā)酵一詞fermentation是從拉丁語(yǔ)fervere派生而來(lái)的，原意為翻騰”，它描述酵母作用于果汁或麥芽浸出液時(shí)的現(xiàn)象。沸騰現(xiàn)象是由浸出液中的糖在缺氧條件下降解而產(chǎn)生的二氧化碳所引起的。在生物化學(xué)中把酵母的無(wú)氧呼吸過(guò)程稱(chēng)作發(fā)酵。我們現(xiàn)在所指的發(fā)酵早已賦予了

9、不同的含義。發(fā)酵是生命體所進(jìn)行的化學(xué)反應(yīng)和生理變化，是多種多樣的生物化學(xué)反應(yīng)根據(jù)生命體本身所具有的遺傳信息去不斷分解合成，以取得能量來(lái)維持生命活動(dòng)的過(guò)程。發(fā)酵產(chǎn)物是指在反應(yīng)過(guò)程當(dāng)中或反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)時(shí)所產(chǎn)生的能夠調(diào)節(jié)代謝使之達(dá)到平衡的物質(zhì)。實(shí)際上，發(fā)酵也是呼吸作用的一種，只不過(guò)呼吸作用最終生成CO2和水，而發(fā)酵最終是獲得各種不同的代謝產(chǎn)物。因而，現(xiàn)代對(duì)發(fā)酵的定義應(yīng)該是：通過(guò)微生物（或動(dòng)植物細(xì)胞）的生長(zhǎng)培養(yǎng)和化學(xué)變化，大量產(chǎn)生和積累專(zhuān)門(mén)的代謝產(chǎn)物的反應(yīng)過(guò)程。2、發(fā)酵的定義（1）微生物生理學(xué)嚴(yán)格定義的發(fā)酵”：有機(jī)物被生物體氧化降解成氧化產(chǎn)物并釋放能量的過(guò)程統(tǒng)稱(chēng)為生物氧化。微生物生理學(xué)把生物氧化區(qū)分為呼

10、吸和發(fā)酵，呼吸又可進(jìn)一步區(qū)分為有氧呼吸和無(wú)氧呼吸。因此，發(fā)酵是生物氧化的一種方式。發(fā)酵是這樣一種生物氧化方式：在沒(méi)有外源最終電子受體的條件下，化能異養(yǎng)型微生物細(xì)胞對(duì)能源有機(jī)化合物的氧化與內(nèi)源的（已經(jīng)經(jīng)過(guò)該細(xì)胞代謝的）有機(jī)化合物的還原相耦合，一般并不發(fā)生經(jīng)包含細(xì)胞色素等的電子傳遞鏈上的電子傳遞和電子傳遞磷酸化，而是通過(guò)底物（激酶的底物）水平磷酸化來(lái)獲得代謝能ATP;能源有機(jī)化合物釋放的電子的一級(jí)電子載體NAD,以NADH的形式直接將電子交給內(nèi)源的有機(jī)電子受體而再生成NAD,同時(shí)將后者還原成發(fā)酵產(chǎn)物（不完全氧化的產(chǎn)物）。細(xì)胞中的NAD是有限的，如果作為一級(jí)電子載體的輔酶NAD不能得到再生，就不能被

11、回用，有效的電子載體就會(huì)愈來(lái)愈少，脫氫反應(yīng)就不能持續(xù)進(jìn)行下去了。因此輔酶NAD的再生是生物氧化（包括發(fā)酵）繼續(xù)進(jìn)行下去的必要條件。（2）專(zhuān)業(yè)詞匯發(fā)酵（fermentation）”發(fā)酵”這個(gè)詞匯在生活中往往是人聯(lián)想到發(fā)面制作大餅、油條、饅頭、包子，或者聯(lián)想到食品酸敗物品霉?fàn)€。發(fā)酵”作為專(zhuān)業(yè)詞匯其含義不但覆蓋發(fā)面制作大餅、油條、饅頭、包子，更重要的是指用發(fā)酵的手段工業(yè)化生產(chǎn)酒及酒精飲料、食品及食品添加劑、飼料及飼料添加劑、藥品、化工材料等等。（3）工業(yè)生產(chǎn)上定義的發(fā)酵一一工業(yè)發(fā)酵”工業(yè)生產(chǎn)上籠統(tǒng)地把一切依靠微生物的生命活動(dòng)而實(shí)現(xiàn)的工業(yè)生產(chǎn)均稱(chēng)為發(fā)酵”。這樣定義的發(fā)酵就是工業(yè)發(fā)酵工業(yè)發(fā)酵要依靠微生物

12、的生命活動(dòng)，生命活動(dòng)依靠生物氧化提供的代謝能來(lái)支撐，因此工業(yè)發(fā)酵應(yīng)該覆蓋微生物生理學(xué)中生物氧化的所有方式：有氧呼吸、無(wú)氧呼吸和發(fā)酵。近百年來(lái)，隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，發(fā)酵技術(shù)發(fā)生了劃時(shí)代的變革，已經(jīng)從利用自然界中原有的微生物進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的階段進(jìn)入到，按照人的意愿改造成具有特殊性能的微生物以生產(chǎn)人類(lèi)所需要的發(fā)酵產(chǎn)品的新階段。3、發(fā)酵的特點(diǎn)發(fā)酵和其他化學(xué)工業(yè)的最大區(qū)別在于它是生物體所進(jìn)行的化學(xué)反應(yīng)。其主要特點(diǎn)如下：1）發(fā)酵過(guò)程一般來(lái)說(shuō)都是在常溫常壓下進(jìn)行的生物化學(xué)反應(yīng)，反應(yīng)安全，要求條件也比較簡(jiǎn)單。2）發(fā)酵所用的原料通常以淀粉、糖蜜或其他農(nóng)副產(chǎn)品為主，只要加入少量的有機(jī)和無(wú)機(jī)氮源就可進(jìn)行反應(yīng)。微生物因

13、不同的類(lèi)別可以有選擇地去利用它所需要的營(yíng)養(yǎng)?；谶@一特性，可以利用廢水和廢物等作為發(fā)酵的原料進(jìn)行生物資源的改造和更新。3）發(fā)酵過(guò)程是通過(guò)生物體的自動(dòng)調(diào)節(jié)方式來(lái)完成的，反應(yīng)的專(zhuān)一性強(qiáng)，因而可以得到較為單一的代謝產(chǎn)物。4）由于生物體本身所具有的反應(yīng)機(jī)制，能夠?qū)Ｒ恍缘睾透叨冗x擇性地對(duì)某些較為復(fù)雜的化合物進(jìn)行特定部位地氧化、還原等化學(xué)轉(zhuǎn)化反應(yīng)，也可以產(chǎn)生比較復(fù)雜的高分子化合物。5）發(fā)酵過(guò)程中對(duì)雜菌污染的防治至關(guān)重要。除了必須對(duì)設(shè)備進(jìn)行嚴(yán)格消毒處理和空氣過(guò)濾外，反應(yīng)必須在無(wú)菌條件下進(jìn)行。如果污染了雜菌，生產(chǎn)上就要遭到巨大的經(jīng)濟(jì)損失，要是感染了噬菌體，對(duì)發(fā)酵就會(huì)造成更大的危害。因而維持無(wú)菌條件是發(fā)酵成敗的

14、關(guān)鍵。6）微生物菌種是進(jìn)行發(fā)酵的根本因素，通過(guò)變異和菌種篩選，可以獲得高產(chǎn)的優(yōu)良菌株并使生產(chǎn)設(shè)備得到充分利用，也可以因此獲得按常規(guī)方法難以生產(chǎn)的產(chǎn)品。7）工業(yè)發(fā)酵與其他工業(yè)相比，投資少，見(jiàn)效快，開(kāi)可以取得顯著的經(jīng)濟(jì)效益?；谝陨咸攸c(diǎn)，工業(yè)發(fā)酵日益引起人們重視。和傳統(tǒng)的發(fā)酵工藝相比，現(xiàn)代發(fā)酵工程除了上述的發(fā)酵特征之外更有其優(yōu)越性。除了使用微生物外，還可以用動(dòng)植物細(xì)胞和酶，也可以用人工構(gòu)建的工程菌來(lái)進(jìn)行反應(yīng)；反應(yīng)設(shè)備也不只是常規(guī)的發(fā)酵罐，而是以各種各樣的生物反應(yīng)器而代之，自動(dòng)化連續(xù)化程度高，使發(fā)酵水平在原有基礎(chǔ)上有所提高和和創(chuàng)新。4、發(fā)酵的類(lèi)型根據(jù)發(fā)酵的特點(diǎn)和微生物對(duì)氧的不同需要，可以將發(fā)酵分成若

15、干類(lèi)型：1）按發(fā)酵原料來(lái)區(qū)分：糖類(lèi)物質(zhì)發(fā)酵、石油發(fā)酵及廢水發(fā)酵等類(lèi)型。2）按發(fā)酵產(chǎn)物來(lái)區(qū)分：如氨基酸發(fā)酵、有機(jī)酸發(fā)酵、抗生素發(fā)酵、酒精發(fā)酵、維生素發(fā)酵等。3）按發(fā)酵形式來(lái)區(qū)分，則有：固態(tài)發(fā)酵和深層液體發(fā)酵。4）按發(fā)酵工藝流程區(qū)分則有：分批發(fā)酵、連續(xù)發(fā)酵和流加發(fā)酵。5）按發(fā)酵過(guò)程中對(duì)氧的不同需求來(lái)分，一般可分為：厭氧發(fā)酵和通風(fēng)發(fā)酵兩大類(lèi)型。三、實(shí)驗(yàn)器材1 .菌種：金色鏈霉菌2 .培養(yǎng)基（）:葡萄糖4.2;氯化鈉0.2;硫酸胺0.3;碳酸鈣0.4;硫酸鎂0.025;磷酸二氫鉀0.025;pH6.0。3 .試劑：蒸儲(chǔ)水4 .其它：電子天平；三角瓶（500ml）;紗布；牛皮紙；細(xì)繩；滅菌鍋；無(wú)菌操作臺(tái)

16、；酒精燈；無(wú)菌吸管；搖床。四、實(shí)驗(yàn)步驟1 .按上述培養(yǎng)基配方配制50毫升培養(yǎng)基，裝入一只三角瓶中，加熱使藥品溶解，用紗布塞住瓶口，并用牛皮紙?jiān)o，以備滅菌。2 .把物品放入滅菌鍋中在121c下滅菌1520分鐘，滅菌后放入已殺菌的無(wú)菌操作臺(tái)中。3 .用吸管從種子培養(yǎng)基將菌液接入滅菌后的培養(yǎng)基中，接種量為2%4 .將搖瓶放置在29C、160r/min的搖床上培養(yǎng)。5 .定時(shí)取樣，以備后續(xù)測(cè)定。實(shí)驗(yàn)四發(fā)酯液中殘?zhí)橇康姆治鲆?、?shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆瞻l(fā)酵液中的殘?zhí)橇繙y(cè)定的原理和方法二、實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)葡萄糖含量的測(cè)定用DNS法。糖的測(cè)定方法有物理的和化學(xué)的兩類(lèi)。由于化學(xué)方法比較準(zhǔn)確，常常使用。還原糖的測(cè)定是糖測(cè)定

17、的基本方法。還原糖是指含有自由醛基和酮基的糖類(lèi)。單糖都是還原糖，利用單糖、雙糖和多糖的溶解度的不同可把它們分開(kāi)。用酸水解法使沒(méi)有還原性的雙糖，徹底水解成具有還原性的單糖，再進(jìn)行測(cè)定，就可以求出樣品中的還原糖的含量。有幾種方法可用于測(cè)定還原糖。在堿性溶液中，還原糖變?yōu)橄┒迹?,2-烯二醇）。烯二醇易被各種氧化劑如鐵氧化物，3,5-二硝基水楊酸和Cu+氧化為糖酸。鐵氧化物和二硝基水楊酸鹽的還原作用是還原糖定量測(cè)定的基礎(chǔ)。還原糖和堿性二硝基水楊酸試劑一起共熱，產(chǎn)生一種棕紅色的氨基化合物，在一定的濃度范圍內(nèi)，棕紅色物質(zhì)顏色的深淺程度與還原糖的量成正比。因此，我們可以測(cè)定樣品中還原糖的量。三、實(shí)驗(yàn)器材

18、1 .待測(cè)溶液：發(fā)酵液。2 .試劑：1）3,5一二硝基水楊酸（DNS）把6.3克3,5一二硝基水楊酸溶于262毫升2N的氫氧化鈉中，將此溶液與500毫升含有182克酒石酸鉀鈉的熱水混合，向該溶液中加入5克重蒸酚和5克亞硫酸鈉，充分?jǐn)嚢柚寥芙猓芤豪鋮s后，用水稀釋到100毫升，存儲(chǔ)于棕色瓶中。3.其它：pH試紙；容量并1（100ml）;玻璃漏斗；吸量管（0.1ml,1ml,0.5ml,5ml,10ml）;試管；恒溫水?。环兴″仭Ｋ?、實(shí)驗(yàn)步驟1.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制備1）按下表制備九個(gè)管；2）向九只試管中分別加入DNS試劑，充分混合；3）將九只試管放入沸水浴中加熱煮沸5分鐘；4）將試管放入盛有冷水

19、的燒杯中冷卻；5）向試管中分別加入4毫升蒸儲(chǔ)水，充分混合；6）以空白試管做對(duì)照，于540毫微米波長(zhǎng)下，分別測(cè)定各管的OD值；7）畫(huà)每管在540毫微米波長(zhǎng)下的吸收值（作為縱坐標(biāo)），對(duì)每管所含的葡萄糖微克數(shù)（作為橫坐標(biāo)）的圖，得到一條通過(guò)零點(diǎn)的直線。2口呂可葡萄糖存儲(chǔ)液（1mg/ml)(ml)水(ml)最終濃度（Wg/ml）100.5020.050.4510030.10.420040.150.3530050.20.340060.250.2550070.30.260080.350.1570090.40.18008）還原糖的測(cè)定（1）根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，將樣品稀釋N倍，使稀釋液中的葡萄糖含量在0.11mg/ml

20、的范圍之內(nèi)；10(2) 取蒸儲(chǔ)水1ml,稀釋液1ml,DNS1.5ml力口入試管中；(3) 在沸水浴中煮沸5分鐘；(4) 在冰水浴中迅速冷卻；(5) 用比色管定容到5ml;(6) 以參比做比較，在分光光度計(jì)上540nm測(cè)定去其OD值。參比的操作為(2)步中將稀釋液用蒸儲(chǔ)水代替。3.根據(jù)還原糖的OD值，使用葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，計(jì)算殘?zhí)橇俊?1實(shí)驗(yàn)五金霉素含量的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆战鹈顾睾康臏y(cè)定原理和操作過(guò)程二、實(shí)驗(yàn)原理金霉素在440nm下具有吸光度，通過(guò)測(cè)定發(fā)酵液中金霉素吸光度的變化，比較金霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以計(jì)算出發(fā)酵液中金霉素的含量。三、實(shí)驗(yàn)器材1 .不同時(shí)間的金霉素發(fā)酵液2 .試劑：蒸儲(chǔ)

21、水；固體草酸；2mol/LHCl。3 .其它：電子天平；三角瓶（100ml）;燒杯（50ml）;恒溫水浴鍋；容量瓶（50ml）;分光光度計(jì)；pH試紙；吸管。四、實(shí)驗(yàn)步驟金霉素含量的測(cè)定1 .取發(fā)酵液50ml左右。2 .加入固體草酸，調(diào)節(jié)發(fā)酵液pH在1.21.4之間，過(guò)濾。3,取適量濾液，稀釋100倍。4 .取1ml稀釋液加入5ml2mol/L的HCl。5 .100C水浴5min,定容到50ml;對(duì)照樣品不加熱。6 .440nm測(cè)定吸光度。7 .對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算金霉素含量。金霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線12實(shí)驗(yàn)六發(fā)酪罐的熟悉及滅菌操作（一）發(fā)酵罐的熟悉一、裝置介紹1 .簡(jiǎn)介本次試驗(yàn)所用FUS-15L生物反應(yīng)器是

22、一個(gè)精心設(shè)計(jì)、精密加工裝配而成的生物反應(yīng)系統(tǒng)，總?cè)莘e15L,工作容積10.5升，能精確的測(cè)量溫度、攪拌轉(zhuǎn)速、PH值和溶解氧濃度，并能精確的控制溫度、攪拌轉(zhuǎn)速和PH值。配備有自動(dòng)消泡裝置及輸送料液的蠕動(dòng)泵系統(tǒng)。機(jī)械攪拌裝置位于罐蓋上部，采用機(jī)械密封結(jié)構(gòu)，具有可靠的抗污染密封性能。氣體過(guò)濾器，具有過(guò)濾效率高、流量大、阻力小、能耐重復(fù)蒸氣消毒（耐蒸氣消毒溫度W140C）,能有效而可靠地慮出空氣中雜菌，而且體積小，安裝更換方便等優(yōu)點(diǎn)；主要管路均采用“O”型密封圈結(jié)構(gòu)的連接方式，可有效地防止因泄漏而導(dǎo)致發(fā)生污染。該裝置由罐體、管路系統(tǒng)、自動(dòng)控制系統(tǒng)三大部分組成，安裝、拆卸、清潔方便，容易維修保養(yǎng)。2 .

23、反應(yīng)器特性2. 1概述反應(yīng)器采用不銹鋼材制成，經(jīng)機(jī)械加工、精細(xì)拋光后，內(nèi)、外壁表面粗糙度不大于0.8um。設(shè)計(jì)壓力為0.2Mpa。反應(yīng)器工作溫度w125C,反應(yīng)器攪拌功率為185W,轉(zhuǎn)速為1501000rpm,攪拌器型式為兩檔六平葉拆卸式渦輪漿。加熱器加熱功率為750KW。3. 2罐體（1） 罐體的總?cè)莘e15L,工作容積體10.5升。（2） 罐高（H）為445mm,罐徑（D）為200mm,高徑比H:D為2:2.1。（3）罐體夾套裝有進(jìn)出水口各一個(gè)，用于培養(yǎng)過(guò)程中恒溫水、冷卻水的循環(huán)或進(jìn)、處，以13及高溫滅菌時(shí)蒸汽加熱、保溫的進(jìn)、出。(4)罐體夾套右側(cè)上方裝有壓力表，便于觀察蒸汽滅菌及補(bǔ)充冷水時(shí)

24、夾套內(nèi)的壓力變化。(5) 罐體的下部右側(cè)有兩個(gè)直徑25mm的標(biāo)準(zhǔn)電極插孔，用于安裝進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)的PH及DO電極。(6) 罐體正面裝有矩形視鏡，背面配有圓形燈鏡和專(zhuān)用照明燈具，以便于觀察罐內(nèi)培養(yǎng)液的情況與葉面上部的其它空間。(7) 取樣放料閥位于罐體下部，與蒸汽管道連接，可反復(fù)消毒滅菌。開(kāi)啟和關(guān)閉采用手動(dòng)順時(shí)針和逆時(shí)針的旋轉(zhuǎn)方式。該閥門(mén)可以在培養(yǎng)過(guò)程中作為取樣閥又可以在放料過(guò)程中作為放料閥。(8) 攪拌器為兩檔六平葉拆卸式渦輪漿。(9) 反應(yīng)器內(nèi)壁裝有可拆卸的4塊擋板，以增強(qiáng)培養(yǎng)過(guò)程中的混合效果。(10) 罐體下部裝有單管氣體分布器，消毒滅菌時(shí)可以通入蒸汽。培養(yǎng)過(guò)程可通入無(wú)菌空氣。(11) 罐體背

25、面上部裝有排氣管道并與冷凝器連接，用于培養(yǎng)過(guò)程中的排氣冷凝。2.3罐蓋罐蓋用不銹鋼材料制成，有“O”型密封圈與罐體法蘭密封。罐蓋的兩側(cè)裝有可拆卸的手柄。在罐蓋中心裝有攪拌器動(dòng)力輸出的“軸系總成”四周分布有9個(gè)開(kāi)孔(見(jiàn)圖1),該9個(gè)孔的用途分別為：其中通用接口b有6個(gè)，均為插針式接口，可用于補(bǔ)料、換液和酸、堿、消泡劑的加入及備用，并以硅橡膠墊圈與注射式密封針頭及壓帽互相銜接。連接硅橡膠管的注射式密封針頭和壓帽可分別單獨(dú)滅菌。之后，在火焰保護(hù)下插入即可。這里值得注意的是：在接種的時(shí)候打開(kāi)接種口a進(jìn)行接種操作時(shí)，由于開(kāi)孔口徑較大易于排氣，致使罐內(nèi)壓力跌零。此時(shí)應(yīng)加大通氣量，使罐內(nèi)始終保持正壓狀態(tài)，同

26、時(shí)，須使接種口處于火焰保護(hù)狀態(tài)。操作時(shí)動(dòng)作要快，14b也可以作為壓差式接種的接種口，接種完時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，避免因操作因素造成污染。接口畢應(yīng)用消毒酒精棉封住接種口，并旋上螺口蓋帽0符號(hào)；公稱(chēng)尺寸名禰或用途一aI26，接種口b6通用接口c-7消泡電極接口d6溫度電極接口圖1,罐蓋開(kāi)孔示意圖、反應(yīng)器管路系統(tǒng)1.管路系統(tǒng)流程示意圖15蒸汽空氣空氣過(guò)謔器,gcimsa-j皿流置計(jì)G-02Doj-.水圖2I5L發(fā)酵罐管路系統(tǒng)示意圖2.管路系統(tǒng)閥門(mén)標(biāo)記一覽表廳P代號(hào)名稱(chēng)1G-01氣體調(diào)節(jié)閥2G-02濾器進(jìn)氣閥3G-03無(wú)菌空氣閥4S-01濾器消毒閥165S-02夾套蒸汽閥6S-03底閥消毒閥7S-04濾器排氣

27、閥8S-05蒸汽濾氣排水閥9W-01水泵進(jìn)口閥10W-02冷水旁路閥11W-03水泵出口閥12W-04沖洗閥13W-05夾套回流閥14W-06冷凝水閥15M-01排料取樣閥3.閥門(mén)功能簡(jiǎn)介(1)氣體調(diào)節(jié)閥該閥為裝于流量計(jì)上的針型閥，用于培養(yǎng)過(guò)程中開(kāi)啟、關(guān)閉空氣及調(diào)節(jié)空氣的流量。球浮子的中部最大處是為空氣流量讀數(shù)。(2)濾器進(jìn)氣閥消毒霉菌是關(guān)閉此閥以防止蒸汽通入空氣流量計(jì)；消毒結(jié)束或進(jìn)入培養(yǎng)階段時(shí)，關(guān)閉S-01閥,開(kāi)啟此閥，使空氣經(jīng)過(guò)過(guò)濾器通入罐內(nèi)。(3)無(wú)菌空氣閥此閥用于將過(guò)濾后的無(wú)菌空氣經(jīng)氣體分布器通入罐內(nèi)。培養(yǎng)過(guò)程中，若遇到臨時(shí)停電、停氣等故障時(shí)，先關(guān)閉此閥，既可保證罐內(nèi)正壓有能防止罐壓急

28、劇下降造成培養(yǎng)液倒流現(xiàn)象。(4)尾氣排氣閥消毒時(shí)調(diào)節(jié)排氣量以控制罐內(nèi)溫度和壓力。培養(yǎng)過(guò)程中調(diào)節(jié)尾氣流量以維持罐壓(保持進(jìn)氣和排氣的平衡)。17(5)濾器消毒閥消毒時(shí)關(guān)閉G-02閥，開(kāi)啟此閥，蒸汽通入過(guò)濾器進(jìn)行消毒，同時(shí)將蒸汽經(jīng)過(guò)過(guò)濾器通入罐內(nèi)。(6)夾套蒸汽閥消毒時(shí)開(kāi)啟此閥和W-11閥，關(guān)閉W-02,W-03和W-05閥，蒸汽通過(guò)夾套，對(duì)罐內(nèi)培養(yǎng)基進(jìn)行預(yù)熱，防止在蒸汽直接通入罐內(nèi)培養(yǎng)基中時(shí)由于產(chǎn)生過(guò)多的冷凝水而造成培養(yǎng)基體積增加。(7)底閥消毒閥消毒時(shí)，開(kāi)啟此閥和M-01,對(duì)取樣、放樣閥(底閥)及取樣管道進(jìn)行滅菌。(8)濾氣排氣閥消毒時(shí)排去過(guò)濾器中的冷凝水，又可在培養(yǎng)過(guò)程中防止可能出現(xiàn)的回流管

29、道的倒流現(xiàn)象出現(xiàn)(9)蒸汽過(guò)濾器排水閥使用前開(kāi)啟此閥，排去冷凝水。(10)水泵進(jìn)口閥發(fā)酵過(guò)程中用于循環(huán)泵往夾套通入循環(huán)水的閥門(mén)，消毒時(shí)關(guān)閉此閥以防止蒸汽進(jìn)入泵內(nèi)。(11)冷水旁路閥當(dāng)水泵出現(xiàn)故障時(shí)，開(kāi)啟此閥，保證管路系統(tǒng)充滿(mǎn)水。(12)水泵出水閥消毒時(shí)，關(guān)閉此閥，防止蒸汽進(jìn)入水泵；快速冷卻或培養(yǎng)過(guò)程中，開(kāi)啟此閥，冷凝水由水泵進(jìn)入夾套，進(jìn)行溫度控制。發(fā)酵過(guò)程中用于循環(huán)泵往夾套通入循環(huán)水的閥門(mén)，消毒時(shí)關(guān)閉此閥以防止蒸汽進(jìn)入泵內(nèi)。18(13)沖洗閥培養(yǎng)過(guò)程結(jié)束后，用皮管連接此閥，可對(duì)反應(yīng)器內(nèi)、外及環(huán)境進(jìn)行沖洗。(14)夾套回流閥消毒時(shí)，關(guān)閉此閥，防止蒸汽經(jīng)加熱器進(jìn)入水泵；快速冷卻或培養(yǎng)過(guò)程中，開(kāi)啟此

30、閥，冷卻水或恒溫水經(jīng)加熱器排入下水道或通入水泵進(jìn)行循環(huán)以控制溫度。(15)冷凝水閥消毒或培養(yǎng)過(guò)程中，為減少培養(yǎng)液的損失，可開(kāi)啟此閥對(duì)排氣進(jìn)行冷卻，使冷凝液返回罐內(nèi)。(16)加熱器底閥快速冷卻或排污時(shí)，將加熱器內(nèi)的水排入下水道。(17)溫控切換閥在培養(yǎng)過(guò)程中，開(kāi)啟此閥。而一旦溫控電磁閥W-09失靈時(shí)，可關(guān)閉此閥，打開(kāi)或關(guān)閉W-10,即可維持手動(dòng)冷卻控溫，又可對(duì)W-09進(jìn)行維修或更換。(18)溫控電磁閥培養(yǎng)過(guò)程中，當(dāng)罐內(nèi)溫度高于設(shè)定值時(shí)，自控系統(tǒng)開(kāi)啟此閥，冷卻水加入夾套并流經(jīng)此閥，使溫度恒溫。(19)溫控旁路閥培養(yǎng)過(guò)程中，關(guān)閉此閥。而一旦溫控電磁閥W-09出現(xiàn)故障時(shí)，關(guān)閉W-08,開(kāi)啟此閥，可代替

31、W-09閥，進(jìn)行手動(dòng)冷卻控溫。(20)夾套排污閥用于排放夾套內(nèi)的水進(jìn)入下水道。亦可在S-05閥下面的疏水器出現(xiàn)故障時(shí)，排放夾套內(nèi)的冷19（21）排料排氣閥消毒時(shí)，開(kāi)啟此閥，蒸汽形成回路，對(duì)取樣放料閥（底閥）及取樣管路進(jìn)行消毒，罐內(nèi)液體由此口排放。（22）底閥對(duì)取樣放料閥（底閥）和取樣管路消毒結(jié)束后，關(guān)閉此閥，防止由于冷卻時(shí)，取樣管路內(nèi)壓力劇降，出現(xiàn)倒吸（抽真空）現(xiàn)象而產(chǎn)生污染。（二）發(fā)酵罐的滅菌操作簡(jiǎn)介：反應(yīng)器的消毒滅菌在微生物發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中非常重要，前期污染的主要原因就是消毒不徹底，為確保培養(yǎng)過(guò)程在無(wú)污染的情況下進(jìn)行，必須嚴(yán)格按實(shí)罐消毒滅菌程序進(jìn)行操作。反應(yīng)器的消毒滅菌分為實(shí)消和冷卻兩步進(jìn)行

32、。（一）實(shí)消步驟1、 關(guān)閉所有閥門(mén)。2、 向罐內(nèi)注入待消毒的料液至一定體積（消后體積控制在10L）3、 打開(kāi)電源總開(kāi)關(guān)，及“攪拌”開(kāi)關(guān)，并設(shè)置一定的攪拌速度（宜在200rpm左右）。4、 將控制機(jī)箱面板上的“手動(dòng)/自動(dòng)”開(kāi)關(guān)處于關(guān)閉狀態(tài)（即控制器處于檢測(cè)狀態(tài)）。5、 開(kāi)啟尾氣排氣閥G-04和冷凝水閥W-06o6、 開(kāi)啟夾套蒸汽閥S-02、蒸汽慮氣排水閥S-05,將蒸汽（約0.3-0.4Mpa）通入夾套，預(yù)熱罐內(nèi)液體。7、 當(dāng)罐內(nèi)溫度達(dá)到8595c左右時(shí)，開(kāi)啟濾器消毒閥S-01、濾氣排氣閥S-04,關(guān)閉冷凝水閥W-06,使蒸汽通入過(guò)濾器，并經(jīng)由濾器排氣閥S-04和疏水器排放過(guò)濾器中的冷凝水。8、

33、 待過(guò)濾器中的冷凝水排盡后，（觸摸濾器排氣閥S04下端的管子燙手即可），關(guān)閉濾器排氣閥S-04,然后開(kāi)啟無(wú)菌空氣閥G-03,使蒸汽通入罐內(nèi)。9、 當(dāng)溫度高于100c時(shí)，罐內(nèi)產(chǎn)生鼓泡翻騰，此時(shí)應(yīng)關(guān)閉“攪拌”開(kāi)關(guān)停止攪拌。蒸汽經(jīng)排氣冷凝器通過(guò)尾氣排放閥G-04向外排放。此時(shí)應(yīng)調(diào)節(jié)尾氣排氣閥G-04到至略有20少量蒸汽排出即可。10、當(dāng)罐內(nèi)溫度上升至121c(0.11Mpa),適當(dāng)開(kāi)啟底閥消毒閥S-03、排料取樣閥M-01,使少量蒸汽經(jīng)過(guò)排料取樣閥M-01排出，由“活”蒸汽對(duì)取樣放料管路進(jìn)行消毒滅菌。待排放適當(dāng)時(shí)間后(約20分鐘)，先關(guān)閉排料取樣閥M-01和底閥消毒閥M-03o11、通過(guò)調(diào)節(jié)夾套蒸汽

34、閥G-04、尾氣排放閥S-02或蒸汽進(jìn)量，使反應(yīng)器保溫、保壓(121C,0.11Mpa)30分鐘，實(shí)消工作即告完成。注意：在消毒滅菌過(guò)程中切記：(1)相關(guān)管道或區(qū)域均應(yīng)有蒸汽的進(jìn)和出，使蒸汽形成活路，不能留有死角。(2)經(jīng)常開(kāi)啟濾器排氣閥S-04,排放過(guò)濾器中的冷凝水，隨后即關(guān)閉此閥。(3)當(dāng)罐內(nèi)溫度超過(guò)121c時(shí)，應(yīng)盡量減少蒸汽進(jìn)量，關(guān)閉或關(guān)小夾套蒸汽閥S-02,而不應(yīng)加大排氣，以免液體攜帶而導(dǎo)致液體體積減少。(4)液體體積在實(shí)消結(jié)束后，會(huì)出現(xiàn)增加或減少現(xiàn)象，這是在消毒過(guò)程中由于蒸汽的冷凝或攜帶造成的。(5)在消毒滅菌過(guò)程中應(yīng)盡量避免蒸汽壓力劇跌，一旦蒸汽壓力低于罐內(nèi)壓力，罐內(nèi)液體會(huì)倒壓進(jìn)入

35、管道和過(guò)濾器內(nèi)。當(dāng)這種情況出現(xiàn)時(shí)，應(yīng)盡快關(guān)閉底閥消毒閥S-03,防止料液倒壓入過(guò)濾器內(nèi)。(二)冷卻步驟當(dāng)實(shí)消滅菌結(jié)束后，應(yīng)關(guān)閉底閥消毒閥S-03、切斷蒸汽源，開(kāi)啟“攪拌”開(kāi)關(guān)，待壓力降至0.8Mpa左右時(shí)充入氣體方可冷卻，否則易造成罐內(nèi)壓力劇降，出現(xiàn)罐壓跌零甚至倒吸現(xiàn)象，由此而帶來(lái)污染。具體步驟如下：1、 檢查空氣源并將進(jìn)入裝置白空氣壓力調(diào)節(jié)至0.120.14Mpa,開(kāi)啟“攪拌”開(kāi)關(guān)(200rpm左右)。2、 開(kāi)啟冷凝水閥W-06.3、 按下列順序關(guān)閉各閥門(mén)：21(1)無(wú)菌空氣閥G-03;(2)排料取樣閥M-01;(3)底閥消毒閥S-03;(4)濾器消毒閥S-01;(5)夾套蒸汽閥S-02。4

36、、 按下列順序開(kāi)啟各閥門(mén)，將無(wú)菌空氣通入罐內(nèi)：1) 氣體調(diào)節(jié)閥G-01;2) 濾器進(jìn)氣閥G-02;3) 無(wú)菌空氣閥G-03。注意：待罐內(nèi)壓力降至0.08Mpa左右時(shí)，方可開(kāi)啟無(wú)菌空氣閥G-03,避免罐壓高于空氣壓力造成倒壓。5、 調(diào)節(jié)空氣調(diào)節(jié)閥G-01和尾氣排放閥G-04,保持一定的罐壓。(0.05Mpa)6、 罐內(nèi)通入無(wú)菌空氣后關(guān)閉夾套排水閥S05,開(kāi)啟下列各閥，和機(jī)箱面板上的分路控制開(kāi)關(guān)，即可進(jìn)行快速冷卻：(1)水泵出口閥W-03;(2)夾套回流閥W-05;(3)溫控切換閥W-08;(4) “冷卻”開(kāi)關(guān)；(5) “水泵”開(kāi)關(guān)。注意：在冷卻過(guò)程中罐壓的波動(dòng)比較大，須密切注意觀察，切不可使罐壓

37、跌零。1、 當(dāng)罐溫降至接近培養(yǎng)工藝所需的設(shè)定溫度(相差約34C)時(shí)，將溫度手動(dòng)控制22切換成自動(dòng)控制，具體步驟為:2、 （1）關(guān)閉機(jī)箱面板上的“冷卻”開(kāi)關(guān)；3、 （2）將機(jī)箱面板上的“手動(dòng)/自動(dòng)”開(kāi)關(guān)處于開(kāi)啟狀態(tài)，此時(shí)，控制器處于自動(dòng)控制狀態(tài)；溫度達(dá)到培養(yǎng)工藝所需的設(shè)定值時(shí)，消毒滅菌全過(guò)程完畢；4、 （3）按工藝要求，設(shè)置工藝所需各個(gè)參數(shù)，待接種。注意：冷卻過(guò)程中空氣流量不要過(guò)大，攪拌速度可適當(dāng)降低，并嚴(yán)格控制罐壓，以防泡沫攜帶量過(guò)多。23實(shí)驗(yàn)七木聚糖的發(fā)酯生產(chǎn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? .了解木聚糖酶；2.熟悉影響真菌產(chǎn)木聚糖酶的發(fā)酪條件；3.掌握發(fā)酪實(shí)驗(yàn)的基本操作。二、實(shí)驗(yàn)原理木聚糖酶，英文名稱(chēng)xyl

38、anase,半纖維素酶系中最主要的組成部分。是一類(lèi)組成比較復(fù)雜的的酶，是一種多聚五碳糖，并和纖維素分子存在著氫鍵連接和物理混合。狹義上的木聚糖酶指的是內(nèi)切-B-1,4-木聚糖酶，廣義上木聚糖酶的主要功能是降解木聚糖分子，主要包括內(nèi)切-B-1,4-木聚糖酶(endo-B-1,4-D-xylanase,EC3.2.1.8)a-D-葡萄糖醛酸甘酶(a-D-glucuronidases,EC3.2.239)B-D-木糖甘酶(伊xylanxylohydrolase,EC3.2.1.37)a-L-味喃型阿拉伯糖甘酶(a-L-arabinofuranosidases酚酸酯酶。其中主要降解木聚糖分子的是內(nèi)切-

39、B-1,4-木聚糖酶，此酶主要是通過(guò)內(nèi)切木聚糖主鏈的B-1,4-木糖甘鍵，降解木聚糖主鏈骨架27,使木聚糖分子降解成低木聚糖分子，并生成少量的木糖。低木聚糖分子則在B-D-木糖甘酶的催化下，末端釋放出木糖殘基。木聚糖酶的來(lái)源廣泛，而且由于其組成不同，結(jié)構(gòu)也很復(fù)雜。根據(jù)組成木聚糖酶的分子量不同，可以將木聚糖酶劃分為高分子量木聚糖酶和低分子量木聚糖酶。高分子量木聚糖酶一般含有269809個(gè)氨基酸殘基，而低分子量木聚糖酶氨基酸氨基大約在182234個(gè)。也可將木聚糖酶按照是否具有底物特異性將其分為特異性木聚糖酶和非特異性木聚糖酶。三、實(shí)驗(yàn)器材1 .菌種：純綠青霉2 .基礎(chǔ)產(chǎn)酶培養(yǎng)基：麥萩3g,酵母粉0

40、.2g,硫酸鎂0.01g,氯化鈉0.05g,磷酸二氫鉀0.05g,定容到1000ml。121c滅菌30min。3 .其它：電子天平；250ml三角瓶；電爐；滅菌鍋；培養(yǎng)皿(5個(gè))；試管；24無(wú)菌操作臺(tái)；酒精燈；接種環(huán)；涂布棒；報(bào)紙；細(xì)純；棉塞；牛皮紙；玻璃棒。四、實(shí)驗(yàn)步驟1、按上述培養(yǎng)基配方配制100毫升培養(yǎng)基，裝入一只250毫升三角瓶中，加熱使藥品溶解后（保持低溫加熱），用棉塞塞住瓶口，并用牛皮紙?jiān)o，以備滅菌。2、用一個(gè)100毫升的三角瓶裝入蒸儲(chǔ)水，用棉塞塞住瓶口，并用牛皮紙?jiān)o，以備滅菌。3、把物品放入滅菌鍋中在121c時(shí)滅菌20分鐘，滅菌后放入已殺菌的無(wú)菌操作臺(tái)中。4、待培養(yǎng)基和無(wú)菌水冷卻至適宜溫度時(shí)，在無(wú)菌條件下，將兩支斜面的抱子用無(wú)菌水制成懸浮液，用無(wú)菌吸管吸1ml接入搖瓶的培養(yǎng)基中。5、將搖瓶放置在29C、160r/min的搖床上培養(yǎng)2224小時(shí)。在無(wú)菌條件下，菌株接種到基礎(chǔ)產(chǎn)酶培養(yǎng)基的三角瓶中，放置28C,轉(zhuǎn)速160r/min恒溫培養(yǎng)搖床上振蕩培養(yǎng)5do25實(shí)驗(yàn)八木聚糖酶活力測(cè)定方法木聚糖酶能夠?qū)⒛揪厶撬獬赡咎堑倪€原糖類(lèi)，這些還原糖能夠與DNS試劑發(fā)生顯色反應(yīng)，根據(jù)這個(gè)原理可用來(lái)測(cè)定木聚糖酶的活性。本實(shí)驗(yàn)利用木聚糖（生化試劑）為底物，加入一定量的粗酶液反應(yīng)一段時(shí)間后加入DNS,沸水浴5min鐘后，利用721可見(jiàn)光分光光度計(jì)測(cè)反應(yīng)后的O