動物細胞工程的應(yīng)用

1、動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)動物細胞融合動物細胞融合單克隆抗體技術(shù)單克隆抗體技術(shù)核移植核移植動物動物細胞細胞工程工程常用常用技術(shù)技術(shù) 皮膚燒傷，如果創(chuàng)面很小（不大于硬幣）只要保持清潔，甚至深度燒傷，也可能自愈。如果下層真皮受損面積較大，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自燒傷病人自身未燒傷的部位（自體植皮），也可取自其他活人或尸體（異體植皮）等。自體植皮是永久性的，取自其他人或動物的植皮是暫時性的，是在創(chuàng)面愈合過程中為保護創(chuàng)面而采取的措施，1014天后就要被身體排斥。 如果一個大面積燒傷的病人來說，自體皮膚有限，其他渠道的皮膚來源不足。如何才能獲得大量的自體健康皮膚？人耳

2、鼠“人耳鼠”再出風(fēng)頭 2001年，一只特別的活老鼠在北京引起轟動這是有著一對紅眼睛的、尾巴長長的、渾身沒毛的小白鼠。值得一提的是，這只小白鼠的背上，竟長著一只幾乎與身子一般大小的“人耳”。這只老鼠背上的“人耳”是由上海市第九人民醫(yī)院副院長、整復(fù)外科主任曹誼林教授利用組織工程技術(shù)復(fù)制出來的。 在京展出的數(shù)天，盡管門票高達20元，但還是有將近20萬人，心甘情愿地掏錢一睹“人耳鼠”的風(fēng)采。 人耳鼠的出現(xiàn)，透露了怎樣的信息？一、動物細胞培養(yǎng)一、動物細胞培養(yǎng) 1. 1.發(fā)展歷史發(fā)展歷史: : 20 20世紀(jì)初，人們不知道神經(jīng)纖維是由神經(jīng)細胞的細世紀(jì)初，人們不知道神經(jīng)纖維是由神經(jīng)細胞的細胞質(zhì)向外突出形成的

3、，還是由神經(jīng)細胞周圍的其他細胞質(zhì)向外突出形成的，還是由神經(jīng)細胞周圍的其他細胞融合而成的。生物學(xué)家們就這個問題展開了激烈的胞融合而成的。生物學(xué)家們就這個問題展開了激烈的爭論。爭論。19071907年，美國生物學(xué)家哈里森年，美國生物學(xué)家哈里森(Harrison)(Harrison)從蝌從蝌蚪的脊索中分離出神經(jīng)組織，把它放在青蛙的凝固的蚪的脊索中分離出神經(jīng)組織，把它放在青蛙的凝固的淋巴液中培養(yǎng)。蝌蚪的神經(jīng)組織存活了好幾周，并且淋巴液中培養(yǎng)。蝌蚪的神經(jīng)組織存活了好幾周，并且從神經(jīng)細胞中長出了神經(jīng)纖維。哈里森的實驗不僅解從神經(jīng)細胞中長出了神經(jīng)纖維。哈里森的實驗不僅解決了神經(jīng)纖維的起源問題，而且開創(chuàng)了動物

4、組織培養(yǎng)決了神經(jīng)纖維的起源問題，而且開創(chuàng)了動物組織培養(yǎng)的先河。此后，在許多科學(xué)家的不懈努力下，動物組的先河。此后，在許多科學(xué)家的不懈努力下，動物組織培養(yǎng)不斷改進并逐漸發(fā)展成為動物細胞培養(yǎng)。織培養(yǎng)不斷改進并逐漸發(fā)展成為動物細胞培養(yǎng)。2、動物細胞培養(yǎng)的應(yīng)用和概念：、動物細胞培養(yǎng)的應(yīng)用和概念： 動物細胞培動物細胞培養(yǎng)就是從動物有養(yǎng)就是從動物有機體中取出相關(guān)機體中取出相關(guān)的組織的組織,將它分散將它分散成單個細胞成單個細胞,然后然后,放在適宜的培養(yǎng)放在適宜的培養(yǎng)基中基中,讓這些細胞讓這些細胞生長和增殖生長和增殖. 幼齡動物取動物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理細胞培養(yǎng)養(yǎng)單個細胞剪碎組織剪碎組織的目的？的目

5、的？胰蛋白酶處胰蛋白酶處理的目的？理的目的？3、動物細胞培養(yǎng)過程：、動物細胞培養(yǎng)過程：動物胚胎或幼齡動動物胚胎或幼齡動物的組織、器官物的組織、器官細胞懸浮液細胞懸浮液胰蛋白酶胰蛋白酶10代細胞代細胞原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)50代細胞代細胞傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞株細胞株無限傳代無限傳代細胞系細胞系單個細胞單個細胞加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)未改變未改變遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)已改變已改變動物組織細胞間隙中動物組織細胞間隙中含有一定量的彈性纖含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細胞維等蛋白質(zhì)，將細胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織定彈性和韌性的組織和器官。和器官。（分解彈性纖維）（分解彈性纖維

6、） 原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞：從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為原代細胞。（分裝前的細胞培養(yǎng)）為原代細胞。（分裝前的細胞培養(yǎng)） 傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)：將原代細胞從培養(yǎng)瓶中取出，將原代細胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。細胞株：細胞株：傳代培養(yǎng)的細胞一般傳至傳代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左代左右細胞生長停滯，大部分細胞衰老死亡，少數(shù)右細胞生長停滯，大部分細胞衰老死亡，少數(shù)細胞存活到細胞存活到4050代，這種傳代細胞為細胞株。代，這種傳代細胞為細胞株。 細胞系：細胞

7、系：細胞株傳代至細胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細胞代后又出現(xiàn)細胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細胞由于遺傳物質(zhì)的生長停滯狀態(tài)，只有部分細胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。種傳代細胞為細胞系。 細胞株和細胞系的區(qū)別細胞株和細胞系的區(qū)別： 細胞系的遺傳細胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，物質(zhì)改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。容易傳代培養(yǎng)。一一 體外培養(yǎng)特點體外培養(yǎng)特點: 大多數(shù)動物細胞要附在物體上表面生長，大多數(shù)動物細胞要附在物體上表面生長，動物細胞培養(yǎng)對營養(yǎng)要求更嚴(yán)格，除氨基動物細胞培養(yǎng)對營

8、養(yǎng)要求更嚴(yán)格，除氨基酸、維生素、鹽類、葡萄糖外，還需要血酸、維生素、鹽類、葡萄糖外，還需要血清。對環(huán)境適應(yīng)性差，對環(huán)境敏感，包括：清。對環(huán)境適應(yīng)性差，對環(huán)境敏感，包括：PH、溶解氧、溫度、剪切力等比微生物要、溶解氧、溫度、剪切力等比微生物要求更高。求更高。 培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、培培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)管、養(yǎng)管、多孔培養(yǎng)板多孔培養(yǎng)板等。等。細胞培養(yǎng)以玻璃器皿為主。細胞培養(yǎng)以玻璃器皿為主。器皿應(yīng)選擇透明度好、無毒、器皿應(yīng)選擇透明度好、無毒、中性硬度玻璃制品。中性硬度玻璃制品。 根據(jù)培養(yǎng)細胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異，用于細胞傳代培養(yǎng)的細胞要求瓶壁厚簿均勻，便于細胞貼壁生長和觀察，瓶口要大小一致，口徑一

9、般不小于1cm，允許吸管伸入瓶內(nèi)任何部位。 【討論【討論】多細胞動物和人體的細胞都生活在內(nèi)環(huán)境中，討論以下問題：1.體外培養(yǎng)細胞時需要提供哪些物質(zhì)？體外培養(yǎng)細胞時需要提供哪些物質(zhì)？ 提示：充足的營養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的提示：充足的營養(yǎng)供給、適宜的溫度、適宜的pH和氣體環(huán)境。和氣體環(huán)境。2.體外培養(yǎng)的細胞需要什么樣的環(huán)境條件？體外培養(yǎng)的細胞需要什么樣的環(huán)境條件？ 提示：無菌、無毒的環(huán)境。提示：無菌、無毒的環(huán)境。維持培養(yǎng)細胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人維持培養(yǎng)細胞旺盛生長，必須有恒定適宜的溫度。人體細胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為體細胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.536.50.50.5，偏離這一溫度，偏離

10、這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養(yǎng)細胞范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過3939時，細時，細胞代謝與溫度成正比；胞代謝與溫度成正比； 人體細胞在人體細胞在39-40139-401小時，即能受到一定損傷，但仍有可小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)；能恢復(fù)； 在在40-41140-411小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù)；恢復(fù)； 41-42141-421小時，細胞受到嚴(yán)重損傷，大部分細胞死亡，個小時，細胞受到嚴(yán)重損傷，大部分細胞死

11、亡，個別細胞仍有恢復(fù)可能；別細胞仍有恢復(fù)可能； 當(dāng)溫度在當(dāng)溫度在4343以上以上1 1小時，細胞全部死亡。低溫下會使細小時，細胞全部死亡。低溫下會使細胞代謝速率降低胞代謝速率降低 當(dāng)當(dāng)PHPH低于低于6 6或高于或高于7.67.6時的生長會受到影響，時的生長會受到影響，甚至死亡。甚至死亡。 用來檢測PH的變化：紅色-pH7.4， 橙色-pH7.0，黃色-pH6.5，藍紅色-pH7.6，紫色-pH7.8。 有調(diào)節(jié)有調(diào)節(jié)PH的作用。的作用。 氣體是人體細胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時一般

12、把細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。 在保證細胞滲透壓的情況下，培養(yǎng)在保證細胞滲透壓的情況下，培養(yǎng)液里的成分要滿足細胞進行代謝所需要液里的成分要滿足細胞進行代謝所需要的各種營養(yǎng)，如包括十幾種必需氨基酸的各種營養(yǎng)，如包括十幾種必需氨基酸及其他多種非必需氨基酸、維生素、碳及其他多種非必需氨基酸、維生素、碳水化合物及無機鹽類等。只有滿足了這水化合物及無機鹽類等。只有滿足了這些基本條件，細胞才能在體外正常存活、些基本條件，細胞才能在體外正常存活、生長。生長。 動物細胞的培養(yǎng)基一般分為天然、合動物細胞的培養(yǎng)基一般分為天然、合成、無血清培養(yǎng)基幾種，此外細胞培養(yǎng)成、無血清培養(yǎng)基幾種，此外細胞培

13、養(yǎng)還需要一些常用的溶液。還需要一些常用的溶液。 1951年厄爾開發(fā)了供動物細胞體外生年厄爾開發(fā)了供動物細胞體外生長的人工合成培養(yǎng)基長的人工合成培養(yǎng)基(MEM)。合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的種類相當(dāng)多。合成培養(yǎng)基成分已知，便的種類相當(dāng)多。合成培養(yǎng)基成分已知，便于對實驗條件的控制。但與天然培養(yǎng)基相于對實驗條件的控制。但與天然培養(yǎng)基相比，有些天然的未知成分尚無法用已知的比，有些天然的未知成分尚無法用已知的化學(xué)成分所替代，因此，細胞培養(yǎng)中使用化學(xué)成分所替代，因此，細胞培養(yǎng)中使用的基礎(chǔ)合成培養(yǎng)基還必須加入一定量的天的基礎(chǔ)合成培養(yǎng)基還必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分，以克服合成培養(yǎng)基的不足。然培養(yǎng)基成分，以克服

14、合成培養(yǎng)基的不足。最普遍的作法是加入小牛血清。最普遍的作法是加入小牛血清。 人工合成培養(yǎng)基，如人工合成培養(yǎng)基，如109培養(yǎng)液、培養(yǎng)液、DMEM、199、 RPMI-1640，IMEM，MEM培養(yǎng)液等。培養(yǎng)液等。 直接采用取自動物體液或從組織中提取的成直接采用取自動物體液或從組織中提取的成分作培養(yǎng)液，主要有血清、組織提取液、雞胚分作培養(yǎng)液，主要有血清、組織提取液、雞胚汁等。汁等。 血清是天然培養(yǎng)基中最有效和最常用的培養(yǎng)血清是天然培養(yǎng)基中最有效和最常用的培養(yǎng)成分。它含有許多維持細胞生長繁殖和保持細成分。它含有許多維持細胞生長繁殖和保持細胞生物學(xué)性狀不可缺少的未知成分。胞生物學(xué)性狀不可缺少的未知成分

15、。 使用最普遍的天然培養(yǎng)基是血清，基本以使用最普遍的天然培養(yǎng)基是血清，基本以小牛血清最普遍。血清由于含有多種細胞生長小牛血清最普遍。血清由于含有多種細胞生長因子、促貼附因子及其多活性物質(zhì)。與合成培因子、促貼附因子及其多活性物質(zhì)。與合成培養(yǎng)基合用，能使細胞碩利增殖生長。養(yǎng)基合用，能使細胞碩利增殖生長。 常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為牛血清分為胎牛血清和犢牛血清胎牛血清和犢牛血清，前者來，前者來源少，價格高；后者要求剛產(chǎn)下尚未哺乳源少，價格高；后者要求剛產(chǎn)下尚未哺乳的小牛，因為哺乳后的小牛血清中可能含的小牛，因為哺乳后的小牛血清中可能含有更復(fù)雜的

16、成分。血清中已知的成分主要有更復(fù)雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等。蛋有蛋白質(zhì)、氨基酸、葡萄糖、激素等。蛋白質(zhì)主要是白蛋白和球蛋白。白質(zhì)主要是白蛋白和球蛋白。 氨基酸是細胞合成蛋白質(zhì)的基本成分，氨基酸是細胞合成蛋白質(zhì)的基本成分，氨基酸中有氨基酸中有1212種是細胞本身不合成的，種是細胞本身不合成的，必須由培養(yǎng)液提供。激素有胰島素、生必須由培養(yǎng)液提供。激素有胰島素、生長激素和多種生長因子如表皮生長因子、長激素和多種生長因子如表皮生長因子、成纖維細胞生長因子、增殖刺激因子成纖維細胞生長因子、增殖刺激因子(MSA)(MSA)、類胰島素生長因子、類胰島素生長因子(IGFl(

17、IGFl、IGF2)IGF2)等。等。 水解乳蛋白、膠原水解乳蛋白、膠原是另外兩種較好的天然培養(yǎng)是另外兩種較好的天然培養(yǎng)基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解產(chǎn)物，呈蛋黃基成分。水解乳蛋白是乳白蛋白的水解產(chǎn)物，呈蛋黃色粉末狀，富含氨基酸。一般配制成色粉末狀，富含氨基酸。一般配制成0 05 5溶液，微溶液，微酸性。膠原是從動物真皮中提取的，具改善細胞表面酸性。膠原是從動物真皮中提取的，具改善細胞表面特性促使其附著生長的作用。特性促使其附著生長的作用。 動物血清成分復(fù)雜，各種生物大小分子混動物血清成分復(fù)雜，各種生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血合在一起，有些成分至今尚未搞清楚。血清對細

18、胞生長很有效，但后期對培養(yǎng)產(chǎn)物清對細胞生長很有效，但后期對培養(yǎng)產(chǎn)物的分離、提純以及檢測造會成一定困難。的分離、提純以及檢測造會成一定困難。另外高質(zhì)量的動物血清來源有限，成本高，另外高質(zhì)量的動物血清來源有限，成本高，限制了它的大量使用。限制了它的大量使用。 無血清培養(yǎng)基不加動物血清，在基礎(chǔ)培無血清培養(yǎng)基不加動物血清，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入細胞生長有效因子，激素等。養(yǎng)基中加入細胞生長有效因子，激素等。 平衡鹽水（平衡鹽水（BSSBSS）：）： Hanks Hanks 液和液和EarleEarle液是常用的液是常用的BSSBSS基礎(chǔ)溶液。基礎(chǔ)溶液。 PH調(diào)整液：調(diào)整液： NaHCO3溶液、溶液、HEPE

19、S溶液溶液（二羥乙基哌二羥乙基哌嗪乙烷磺酸嗪乙烷磺酸） 細胞消化液細胞消化液: : 胰蛋白酶溶液胰蛋白酶溶液EDTAEDTA溶液膠原酶溶液溶液膠原酶溶液 抗生素溶液：抗生素溶液：1)1)青、鏈霉素青、鏈霉素: :每毫升培養(yǎng)液含每毫升培養(yǎng)液含100U100U青霉素和青霉素和100ug100ug鏈霉素鏈霉素. .2)2)卡那霉素：終濃度為卡那霉素：終濃度為50ug/ml50ug/ml培養(yǎng)液。培養(yǎng)液。3 3）制霉菌素：濃度制霉菌素：濃度25U/ml25U/ml，小瓶分裝，每瓶，小瓶分裝，每瓶一次用完。一次用完。培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細胞生存培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細胞生存的首要條件。當(dāng)細胞放置于體

20、外培養(yǎng)時，的首要條件。當(dāng)細胞放置于體外培養(yǎng)時，與體內(nèi)相比細胞丟失了對微生物和有毒物與體內(nèi)相比細胞丟失了對微生物和有毒物的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質(zhì)的防御能力，一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等，可導(dǎo)致細胞死亡。因此在進行培積累等，可導(dǎo)致細胞死亡。因此在進行培養(yǎng)中，保持細胞生存環(huán)境無污染、代謝物養(yǎng)中，保持細胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時清除等，是維持細胞生存的基本條件。及時清除等，是維持細胞生存的基本條件。 1、實驗室設(shè)計細胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養(yǎng)室和設(shè)計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清

21、潔、空氣清新，干燥和無煙塵。 細胞培養(yǎng)室的設(shè)計實施原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。1.準(zhǔn)備室準(zhǔn)備室2.緩沖室緩沖室 準(zhǔn)備室風(fēng)淋3.培養(yǎng)室培養(yǎng)室 專用于組織細胞培養(yǎng)的空間，應(yīng)包括更衣專用于組織細胞培養(yǎng)的空間，應(yīng)包括更衣間、緩沖間、操作間。間、緩沖間、操作間。 內(nèi)設(shè)超凈工作臺、培養(yǎng)箱等細胞培養(yǎng)的必內(nèi)設(shè)超凈工作臺、培養(yǎng)箱等細胞培養(yǎng)的必要設(shè)備，應(yīng)具備紫外消毒、通風(fēng)及溫控設(shè)要設(shè)備，應(yīng)具備紫外消毒、通風(fēng)及溫控設(shè)施。施。 操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱、操作間放置凈化工作臺及二氧化碳培養(yǎng)箱、離心機及倒置顯微鏡等。離心機及倒置顯微鏡等。 緩沖間可

22、放置電冰箱、冷藏器及毒好的無緩沖間可放置電冰箱、冷藏器及毒好的無菌物品等菌物品等風(fēng)淋室風(fēng)淋室： 風(fēng)淋室是生物潔凈室的理想配套設(shè)備，它不僅可以清除人體和物品表面附著的塵埃，減少帶入潔凈室的灰塵量，而且兼有氣閘室的功能，可防止非潔凈空氣的侵入。風(fēng)淋室的板壁采用輕質(zhì)隔熱夾芯鋼板，吹淋板采用進口不銹鋼制作，吹淋口方向可調(diào)，風(fēng)淋時間可在30-99秒間的調(diào)整。風(fēng)淋室可以配合加熱器，冬天可以加熱，溫度可調(diào)，一般控制溫度在30-35較為適宜。 n也稱凈化工作臺，分也稱凈化工作臺，分為側(cè)流式、直流式和為側(cè)流式、直流式和外流式三大類。外流式三大類。 哺乳動物離體細胞培養(yǎng)和體內(nèi)細胞一樣哺乳動物離體細胞培養(yǎng)和體內(nèi)細胞

23、一樣,需要在恒足溫度下才能生存需要在恒足溫度下才能生存,溫差變化一般溫差變化一般不應(yīng)超過不應(yīng)超過0.5度，因此培養(yǎng)箱對溫度應(yīng)具有度，因此培養(yǎng)箱對溫度應(yīng)具有較高靈敏度。較高靈敏度。 CO2培養(yǎng)箱的優(yōu)點在于能恒定地供應(yīng)一培養(yǎng)箱的優(yōu)點在于能恒定地供應(yīng)一定量定量的的CO2,一般一般5%即可即可維持培養(yǎng)液維持培養(yǎng)液PH值值穩(wěn)定穩(wěn)定。 細胞培養(yǎng)的冰箱應(yīng)特別注意清潔，細胞培養(yǎng)的冰箱應(yīng)特別注意清潔，防止污染。防止污染。 水純化裝置水純化裝置細胞培養(yǎng)對水的質(zhì)量要求較高。一般需要使用重蒸或三蒸水配置各種培養(yǎng)用液。 各種培養(yǎng)用液只能用過濾的方法進行除菌消毒處理。微化濾膜濾器是目前應(yīng)用最廣泛的過濾裝置。 細胞冷凍貯存

24、細胞冷凍貯存器器 細胞冷凍貯存具有經(jīng)濟、省力和較好保持細胞生物學(xué)特性的優(yōu)點，目前各實驗室主要使用液氮容器貯存細胞。 培養(yǎng)器皿培養(yǎng)器皿 培養(yǎng)器皿包括各種規(guī)格的玻璃、塑料培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)皿，吸管，離心管等。 洗刷消毒間：洗刷消毒間： 烤箱、消毒鍋、蒸烤箱、消毒鍋、蒸餾水處理器及酸缸餾水處理器及酸缸等。等。 分析間：分析間： 顯微鏡、計算機及顯微鏡、計算機及打印機等。打印機等。 由于體外培養(yǎng)的細胞缺乏機體抗感染功能，所以在一由于體外培養(yǎng)的細胞缺乏機體抗感染功能，所以在一切操作中要努力作到最大限度的無菌，防止污染。切操作中要努力作到最大限度的無菌，防止污染。 超凈工作臺消毒超凈工作臺消毒打開紫外線殺菌燈照

25、射消毒打開紫外線殺菌燈照射消毒2030分鐘，然后關(guān)閉分鐘，然后關(guān)閉紫外燈，打開風(fēng)機，流入的空氣是經(jīng)過除菌板過濾的空氣，紫外燈，打開風(fēng)機，流入的空氣是經(jīng)過除菌板過濾的空氣，工作臺可保持無菌環(huán)境。工作臺可保持無菌環(huán)境。 洗手洗手 操作時因整個前臂伸入工作臺內(nèi)，所以洗手一定要刷操作時因整個前臂伸入工作臺內(nèi)，所以洗手一定要刷洗到肘部，然后用洗到肘部，然后用0.2%新潔爾滅或新潔爾滅或75%的酒精棉球擦拭。的酒精棉球擦拭。 所使用物品均應(yīng)經(jīng)過燒灼，所用瓶口等開所使用物品均應(yīng)經(jīng)過燒灼，所用瓶口等開啟或封蓋時均需迅速旋轉(zhuǎn)過火焰進行消毒。啟或封蓋時均需迅速旋轉(zhuǎn)過火焰進行消毒。注意金屬器械不能在火焰上燒灼時間過

26、長。注意金屬器械不能在火焰上燒灼時間過長。 燒過的用具均要待冷卻后再接觸組織細胞。燒過的用具均要待冷卻后再接觸組織細胞。 吸取營養(yǎng)液后的吸管不能再經(jīng)火焰燒灼吸取營養(yǎng)液后的吸管不能再經(jīng)火焰燒灼,否否則會燒焦形成炭膜則會燒焦形成炭膜,再用時會將有害物質(zhì)帶入再用時會將有害物質(zhì)帶入培養(yǎng)液。培養(yǎng)液。 合理布局合理布局 右手使用方便的用品放右側(cè)，左手使用右手使用方便的用品放右側(cè)，左手使用方便的用品放左側(cè)。方便的用品放左側(cè)。 酒精燈置于中央，打開的培養(yǎng)液、培酒精燈置于中央，打開的培養(yǎng)液、培養(yǎng)瓶等應(yīng)保持斜立或平放（瓶口長時間開養(yǎng)瓶等應(yīng)保持斜立或平放（瓶口長時間開口直立口直立,易增加落菌機會）。易增加落菌機會）

27、。 吸取各種用液應(yīng)分別使用吸管，不能混用。吸取各種用液應(yīng)分別使用吸管，不能混用。 3.動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) 的條件的條件1.無菌無毒的環(huán)境無菌無毒的環(huán)境2.營養(yǎng)營養(yǎng)3.溫度和溫度和pH4.氣體環(huán)境氣體環(huán)境 應(yīng)該加入哪些物質(zhì)？這應(yīng)該加入哪些物質(zhì)？這些物質(zhì)如何調(diào)配？些物質(zhì)如何調(diào)配？在使用合成培養(yǎng)基時通常在使用合成培養(yǎng)基時通常需加入血清、血漿等天然需加入血清、血漿等天然成分，目的是什么？成分，目的是什么？4.動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用 蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品的生產(chǎn) 如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體 健康細胞培養(yǎng)健康細胞培養(yǎng) 培養(yǎng)健康細胞用

28、于燒傷病人皮膚移植培養(yǎng)健康細胞用于燒傷病人皮膚移植 細胞的生理、藥理、病理研究細胞的生理、藥理、病理研究 用于篩選抗癌藥物用于篩選抗癌藥物 比較項目比較項目植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)原理原理培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的細胞的全能性細胞的全能性細胞增殖細胞增殖固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基蔗糖蔗糖 植物激素植物激素 葡萄糖葡萄糖 動物血清動物血清植物體植物體細胞株、細胞系細胞株、細胞系快速繁殖、培育無快速繁殖、培育無病毒植株病毒植株獲得細胞或細胞分獲得細胞或細胞分泌蛋白泌蛋白思考：思考：2、為什么選用動物胚胎或幼

29、齡個體的器官或組織做動物細胞、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料？培養(yǎng)材料？1、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨特之處？有何獨特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞？4、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？體？主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。獨特之處有：獨特之處有：1、液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基 2、成

30、分中有動物血清等、成分中有動物血清等因為這些組織或器官上的細胞生命力旺盛，分裂能力強因為這些組織或器官上的細胞生命力旺盛，分裂能力強成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細胞懸浮液利于培養(yǎng)成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細胞懸浮液利于培養(yǎng)不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的不能，動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體動物個體一、動物細胞融合一、動物細胞融合 細胞融合是正常的生命活動兩個細胞正在融合兩個細胞正在融合 受精作用受精作用細胞細胞A細胞細胞B雜種細胞雜種細胞滅活的病毒滅活的病毒物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法仙臺病毒仙臺病毒皰疹病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒新城雞瘟病毒用滅活的病毒

31、誘導(dǎo)動物細胞融合過程用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細胞融合過程細胞核細胞核病毒顆粒病毒顆粒細胞核細胞核什么是抗體？什么是抗體？ 抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。免疫功能的球蛋白。B淋巴細胞產(chǎn)生抗體。淋巴細胞產(chǎn)生抗體。B淋巴細胞受抗原刺激后，可以淋巴細胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。產(chǎn)生抗體。動物體內(nèi)的動物體內(nèi)的B淋巴細胞可以產(chǎn)生淋巴細胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。原具有特異性免疫作用。每一個淋巴細胞只能產(chǎn)生一種抗每一個淋巴細

32、胞只能產(chǎn)生一種抗體。體。 由單個由單個B淋巴細胞經(jīng)過無性繁殖淋巴細胞經(jīng)過無性繁殖（克隆），形成基因型相同的細胞群，（克?。?，形成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特這一細胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為異性強的抗體稱為單克隆抗體。單克隆抗體。 特點：特點：特異性強、靈敏度高特異性強、靈敏度高 利用淋巴細胞產(chǎn)生抗體的功能利用淋巴細胞產(chǎn)生抗體的功能 利用腫瘤細胞無限增殖的特性利用腫瘤細胞無限增殖的特性 利用細胞融合的技術(shù)將兩種細胞融利用細胞融合的技術(shù)將兩種細胞融合獲得具有淋巴細胞和腫瘤細胞特合獲得具有淋巴細胞和腫瘤細胞特性的雜交瘤細胞性的雜交瘤細胞 利用動物細胞培養(yǎng)技

33、術(shù)大量培養(yǎng)雜利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細胞交瘤細胞 單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程 注射抗原注射抗原B淋巴細胞淋巴細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞細胞融合、篩選細胞融合、篩選雜交瘤細胞雜交瘤細胞細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細胞群特定抗體的細胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體思考：思考：1、本過程利用了哪些原理？、本過程利用了哪些原理？免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理免疫原理，細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B細胞融合？細胞融合？這

34、樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳這樣融合成的雜交瘤細胞，繼承了雙親細胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有物質(zhì)，不僅具有B細胞分泌抗體的能力，而且還有細胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強，與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。應(yīng)用主要有：應(yīng)用主要有：1、臨床診斷、臨床診斷2、作為載體，運載抗癌藥物，形成、作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”治療腫治療腫瘤瘤資料資料：目前世界各國已經(jīng)研制

35、出數(shù)以百計的單克隆抗目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)位體內(nèi)“病灶病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。蹤及心肌梗塞的診斷。比較項目比較項目植物體細胞雜交植物體細胞雜交動物細胞融合動物細胞融合細胞融合原理細胞

36、融合原理細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞融合的方法細胞融合的方法 去除細胞壁后誘導(dǎo)去除細胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合使細胞分散后誘使細胞分散后誘導(dǎo)細胞融合導(dǎo)細胞融合誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法物理（離心、振蕩、物理（離心、振蕩、電刺激）電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒用途用途獲得雜種植株獲得雜種植株制備單克隆抗體制備單克隆抗體動物的胚胎移植動物的胚胎移植 解決某些妊解決某些妊娠時間長、每胎娠時間長、每胎產(chǎn)子數(shù)量少的優(yōu)產(chǎn)子數(shù)量少的優(yōu)良種畜的繁殖速良種畜的繁殖速度問題。度問題。胚胎移植技術(shù)胚胎移植技術(shù)試管

37、動物（嬰兒）培養(yǎng)過程試管動物（嬰兒）培養(yǎng)過程卵細胞卵細胞精子精子體外受精體外受精受精卵受精卵胚胎胚胎新個體新個體母體子宮內(nèi)母體子宮內(nèi)孕育、產(chǎn)出孕育、產(chǎn)出一、動物體細胞核移植技術(shù)和克隆動物一、動物體細胞核移植技術(shù)和克隆動物1、動物細胞全能性的表現(xiàn)程度不同、動物細胞全能性的表現(xiàn)程度不同受精卵受精卵 胚胎干細胞胚胎干細胞 多能干細胞多能干細胞 單能干細胞單能干細胞 體細胞體細胞核移植核移植胚胎細胞核移植胚胎細胞核移植體細胞核移植體細胞核移植（難度高）（難度高） 2、動物體細胞核移植動物體細胞核移植是將動物的一個細胞的是將動物的一個細胞的細胞核細胞核,移如入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞移如入一個已經(jīng)去

38、掉細胞核的卵母細胞中中.使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎,這個新的胚這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。胎最終發(fā)育為動物個體。3.培育過程培育過程去核卵細胞去核卵細胞體細胞核體細胞核細胞核移植細胞核移植重組細胞重組細胞電脈沖刺激電脈沖刺激早期胚胎早期胚胎(或重組胚胎）或重組胚胎）胚胎移植胚胎移植母體子宮母體子宮妊娠、出生妊娠、出生 個體個體4、原理、原理動物體細胞核具有全能性動物體細胞核具有全能性卵細胞卵細胞母綿羊母綿羊母綿羊母綿羊乳腺細胞乳腺細胞細胞質(zhì)細胞質(zhì)細胞核細胞核細胞核移植細胞核移植早期胚胎早期胚胎卵裂卵裂C母綿羊子宮母綿羊子宮胚胎移植胚胎移植多莉羊多莉羊分娩分娩妊

39、娠妊娠多莉羊的培育過程多莉羊的培育過程融合后的卵細胞融合后的卵細胞克隆羊的成功證明了什么？克隆羊的成功證明了什么？1、動物體細胞核具有全能性；、動物體細胞核具有全能性；2、細胞質(zhì)具有調(diào)控細胞核發(fā)育的作用。、細胞質(zhì)具有調(diào)控細胞核發(fā)育的作用。動物體細胞核移植是一種無性繁殖技術(shù)，動物體細胞核移植是一種無性繁殖技術(shù)，用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物。其意義：其意義：1、有利于遺傳疾病的治療，優(yōu)良品種的培育、有利于遺傳疾病的治療，優(yōu)良品種的培育2、對物種的優(yōu)化、瀕危動物的保護和轉(zhuǎn)基因動物的擴、對物種的優(yōu)化、瀕危動物的保護和轉(zhuǎn)基因動物的擴群有重要意義群有重要意義3

40、、降低畜牧業(yè)的成本，縮短育種年限，提高生產(chǎn)效率、降低畜牧業(yè)的成本，縮短育種年限，提高生產(chǎn)效率體細胞核移植技術(shù)存在的問題：體細胞核移植技術(shù)存在的問題：許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調(diào)等。器缺陷，免疫失調(diào)等。 動物細胞特點？動物細胞特點？v分化潛能變窄分化潛能變窄：隨著細胞分化程度的提高而逐漸受到限制，分化潛能變窄，這是指整體細胞而言。v細胞核仍具有全能性細胞核仍具有全能性：細胞核，它含有保持物種遺傳性所需的全套基因，而且并沒有因細胞分化而丟失基因，因此高度分化細胞的細胞核仍具有

41、全能性 根據(jù)動物細胞核仍具有全能性根據(jù)動物細胞核仍具有全能性的特點的特點,怎樣將動物細胞的全能性表怎樣將動物細胞的全能性表達達? 利用動物體細胞核移植技術(shù)利用動物體細胞核移植技術(shù) 動物核移植： 將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經(jīng)去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育為動物個體。動物個體。 用核移植的方法得到的動物。用核移植的方法得到的動物?？寺游铮郝鸭毎鸭毎鸆母綿羊子宮母綿羊子宮母綿羊母綿羊母綿羊母綿羊乳腺細胞乳腺細胞細胞質(zhì)細胞質(zhì)細胞核細

42、胞核細胞核移植細胞核移植胚胎移植胚胎移植早期胚胎早期胚胎多莉羊多莉羊分娩分娩卵裂卵裂融合后的卵細胞融合后的卵細胞細胞拆合技術(shù)細胞拆合技術(shù)妊娠妊娠多莉羊的培育過程多莉羊的培育過程2.體細胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景體細胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景克隆動物的研究意義克隆動物的研究意義1.克隆動物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白克隆動物作為生物反應(yīng)器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白2.改良動物品種改良動物品種 3.治療人類疾病，作為供體治療人類疾病，作為供體4.保護瀕危動物保護瀕危動物體細胞核移植技術(shù)存在的問題體細胞核移植技術(shù)存在的問題1.許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過許多克隆動物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥

43、胖，發(fā)育困難，免疫失調(diào)等。大，異常肥胖，發(fā)育困難，免疫失調(diào)等。2.成功率非常低及克隆動物食品的安全性問題。成功率非常低及克隆動物食品的安全性問題。小結(jié)小結(jié)兩個過程兩個過程動物細胞培養(yǎng)過程動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個三個“一一”一個誘導(dǎo)細胞融合的新方法一個誘導(dǎo)細胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個新細胞雜交瘤細胞一個新細胞雜交瘤細胞一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性 強、靈敏度高的優(yōu)勢強、靈敏度高的優(yōu)勢植物細胞工程的理論基礎(chǔ)是：植物細胞工程的理論基礎(chǔ)是： 植物細胞的全能性植物細胞的全能性植物細胞工程常用的技術(shù)是植物細胞工程常用的技術(shù)是 植物組織培養(yǎng)植物組

44、織培養(yǎng)植物體細胞雜交植物體細胞雜交概念：概念：細胞的全能性是指生物體的細胞具有細胞的全能性是指生物體的細胞具有使后代細胞形成完整個體的潛能。使后代細胞形成完整個體的潛能。原因：原因：是生物體的每一個細胞都含有該物種是生物體的每一個細胞都含有該物種所特有的全套遺傳物質(zhì)及發(fā)育為完整所特有的全套遺傳物質(zhì)及發(fā)育為完整個體所必需的全部基因。個體所必需的全部基因。 當(dāng)植物細胞脫離了原來所在植物體的器官或組織而處當(dāng)植物細胞脫離了原來所在植物體的器官或組織而處于離體狀態(tài)時，在一定的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件于離體狀態(tài)時，在一定的營養(yǎng)物質(zhì)、激素和其他外界條件的作用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株。的作

45、用下，就可能表現(xiàn)出全能性，發(fā)育成完整的植株。 在生物的個體發(fā)育中，由于基因在特定時間和空間在生物的個體發(fā)育中，由于基因在特定時間和空間下選擇性地表達而形成不同器官，因此，要實現(xiàn)細胞的下選擇性地表達而形成不同器官，因此，要實現(xiàn)細胞的全能性，首先必須使生物體的細胞處于離體狀態(tài)。全能性，首先必須使生物體的細胞處于離體狀態(tài)。 受精卵的全能性最高；受精卵的全能性最高；其次是生殖細胞（尤其是卵細胞）；其次是生殖細胞（尤其是卵細胞）；體細胞的全能性比生殖細胞低得多。體細胞的全能性比生殖細胞低得多。 植物組織培養(yǎng)就是在無菌和人工控制條件下，植物組織培養(yǎng)就是在無菌和人工控制條件下，將離體的植物器官、組織、細胞，

46、培養(yǎng)在人工配將離體的植物器官、組織、細胞，培養(yǎng)在人工配制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)制的培養(yǎng)基上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。離體的植物器官、組織或細胞離體的植物器官、組織或細胞脫分化（又叫去分化）脫分化（又叫去分化）愈傷組織愈傷組織（排列疏松而無規(guī)則，高度液泡（排列疏松而無規(guī)則，高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞）化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞）再分化再分化根或芽等器官根或芽等器官植物體植物體植物組織培養(yǎng)的條件：植物組織培養(yǎng)的條件： 適宜的養(yǎng)料和激素，適宜的適宜的養(yǎng)料和激素，適宜的溫度和無菌條件溫度和無菌條件

47、離體的植物離體的植物器官、組織器官、組織或細胞或細胞愈愈傷傷組組織織根根芽芽植植物物體體脫分化脫分化再分化再分化由高度分化的植物器官、組織或細胞產(chǎn)生愈由高度分化的植物器官、組織或細胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細胞的脫分化。傷組織的過程，稱為植物細胞的脫分化。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng)又可以重脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng)又可以重新分化成根或芽等器官，這一過程稱為植物細新分化成根或芽等器官，這一過程稱為植物細胞的再分化。胞的再分化。2. 植物組織培養(yǎng)過程1 1、在植物組培過程中，為、在植物組培過程中，為什么要進行一系列的消什么要進行一系列的消毒，滅菌，并且要求無毒，滅菌，并且要求無菌操

48、作？菌操作？2 2、為什么切取胡蘿卜根的、為什么切取胡蘿卜根的形成層，其他部分也能形成層，其他部分也能培養(yǎng)成小植株嗎？培養(yǎng)成小植株嗎？ 將不同種植物的體細胞，在一將不同種植物的體細胞，在一定條件下融合成雜種細胞，并把雜定條件下融合成雜種細胞，并把雜種細胞培育成新的植物體的技術(shù)。種細胞培育成新的植物體的技術(shù)。 （不同種生物之間存在著生殖隔離，（不同種生物之間存在著生殖隔離，所以用傳統(tǒng)的有性雜交方法是不可所以用傳統(tǒng)的有性雜交方法是不可能做到這一點的）能做到這一點的）（1）要想讓兩個來自不同植物的體細胞融合）要想讓兩個來自不同植物的體細胞融合在一起，遇到的第一個障礙是什么？在一起，遇到的第一個障礙是

49、什么？（2）有沒有一種溫和的去細胞壁的方法？）有沒有一種溫和的去細胞壁的方法？（3）為什么兩個原生質(zhì)體能發(fā)生融合，這與）為什么兩個原生質(zhì)體能發(fā)生融合，這與細胞膜的什么特性有關(guān)？細胞膜的什么特性有關(guān)？（4）如果兩個來源不同的原生質(zhì)體發(fā)生融合）如果兩個來源不同的原生質(zhì)體發(fā)生融合形成了雜種細胞，下一步該對此細胞做形成了雜種細胞，下一步該對此細胞做何種處理？何種處理？（5）如何將雜種細胞培育成雜種植株？）如何將雜種細胞培育成雜種植株？植物細胞植物細胞A植物細胞植物細胞B去掉細胞壁去掉細胞壁去掉細胞壁去掉細胞壁原生質(zhì)體原生質(zhì)體A原生質(zhì)體原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合雜合的原生質(zhì)體雜合的原生質(zhì)體再生出細胞壁再生出細胞壁雜種細胞雜種細胞細胞分裂細胞