整理2006年生物化學(xué)

1、精品文檔2006年生物化學(xué)1.舉5例說(shuō)明綠色熒光蛋白在生物化學(xué)研究中的應(yīng)用1活細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)與蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的光學(xué)成像與可視化（基于GFP的熒光共振能量轉(zhuǎn)移，信號(hào)傳導(dǎo)過程）2小動(dòng)物體內(nèi)惡性腫瘤生長(zhǎng)過程及藥物作用效果的實(shí)時(shí)光學(xué)成像檢查，（熒光探針，找出與已知蛋白的配體分子及藥物。3制備融合抗體，具有免疫原性和發(fā)射熒光兩種特性。4構(gòu)建分子感受器的有力工具，這種GFP感受器能被用來(lái)檢測(cè)多種分子5研究活體細(xì)胞的蛋白變他過程，細(xì)胞器動(dòng)力學(xué)和內(nèi)膜運(yùn)輸（動(dòng)態(tài)跟蹤，微管的變化，定位在細(xì)胞器）6.GFP基因在生物防治中的應(yīng)用，評(píng)價(jià)殺蟲劑的毒力。7GFP的示蹤特性，研究腫瘤細(xì)胞內(nèi)某些基因異常表達(dá)與腫瘤細(xì)胞

2、浸潤(rùn)的關(guān)系，即可揭示腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)的某些機(jī)制。8 .在微生物學(xué)中的應(yīng)用（與宿主的相互作用，生物膜。基因表達(dá)，生物降解，定位等）9 .請(qǐng)說(shuō)明真核生物中逆轉(zhuǎn)座子的結(jié)構(gòu)特征和生物學(xué)意義通過DNA轉(zhuǎn)錄為RNA后，再經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄稱為cDNA并插入到基因組的新位點(diǎn)上的移動(dòng)因子。10 某一蛋白樣品在SDS-PAGE上經(jīng)靠馬斯亮藍(lán)染色呈現(xiàn)單一的條帶。是否可以認(rèn)為此蛋白樣品只包含一種蛋白？如何進(jìn)一步鑒定這個(gè)蛋白的純度不能認(rèn)為是單一蛋白，SDS-PAGE上僅僅代表的是分子大小一直的條帶，可以進(jìn)行雙向電泳（two-dimensionalelectrophoresis）。它是等電聚焦電邇和SDS-PAGE的組合，蛋白質(zhì)粗制

3、品的獲得選用適當(dāng)?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|(zhì)與其它雜蛋白分離開來(lái)。比較方便的有效方法是根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異進(jìn)行的分離。常用的有下列幾種方法：等電點(diǎn)沉淀法，鹽析法，有機(jī)溶劑沉淀法，樣品的進(jìn)一步分離純化用等電點(diǎn)沉淀法、鹽析法所得到的蛋白質(zhì)一般含有其他蛋白質(zhì)雜質(zhì)，須進(jìn)一步分離提純才能得到有一定純度的樣品。常用的純化方法有：凝膠過濾層析、離子交換纖維素層析、親和層析等等。有時(shí)還需要這幾種方法聯(lián)合使用才能得到較高純度的蛋白質(zhì)樣品。11 簡(jiǎn)述免疫共沉淀的原理及應(yīng)用精品文檔精品文檔定義：用抗體將相應(yīng)特定分子沉淀的同時(shí)，與該分子特異性結(jié)合的其他分子也會(huì)被帶著一起沉淀出來(lái)的技術(shù)。這種技術(shù)常用于驗(yàn)證蛋白質(zhì)之間相互特異性

4、結(jié)合。原理：當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí)，完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)一蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái)。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來(lái)。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合；也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。應(yīng)用：1.信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法2.腫瘤異質(zhì)性（腫瘤細(xì)胞在生長(zhǎng)過程中，經(jīng)過許多代分裂繁殖產(chǎn)生的子細(xì)胞，呈現(xiàn)不同的基因改變或其他大分子的改變）的蛋白質(zhì)分子機(jī)制5 .轉(zhuǎn)基因食品漸漸地被擺上餐桌，請(qǐng)根據(jù)你的生化知識(shí)談一談你對(duì)轉(zhuǎn)基因食品安全性的認(rèn)識(shí)實(shí)質(zhì)等同原則。6 .請(qǐng)?jiān)敿?xì)說(shuō)明真核生物基因表達(dá)在不同水平

5、上的調(diào)節(jié)機(jī)制7 .中國(guó)科學(xué)家2005年在生命科學(xué)研究領(lǐng)域獲得了大豐收，在CELL、Science、Nature上發(fā)表了多篇原創(chuàng)性文章。請(qǐng)說(shuō)出其中兩篇的主要內(nèi)容和主要作者或主要作者單位。精品文檔精品文檔2007年生物化學(xué)一、名詞解釋1. AlternativeSplicing2. Nonsensemediateddecay3. RNAediting4. mircoRNA5. smallinterferingRNA(siRNA)二、簡(jiǎn)述真核生物中分泌型蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)途徑級(jí)主要的生理功能三、請(qǐng)說(shuō)明真核生物中轉(zhuǎn)座子的兩大類型、各自的轉(zhuǎn)座方式及生物學(xué)意義轉(zhuǎn)座元件是基因組中可移動(dòng)的DNA分子，分為反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子

6、和DNA轉(zhuǎn)座子兩類，Dna轉(zhuǎn)座子是一段能直接在基因組上移動(dòng)的DNA序列，它的轉(zhuǎn)座利用切除/修復(fù)機(jī)制，不會(huì)引起宿主基因組的增大。反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子不同于dna轉(zhuǎn)座子，是以DNA-RNA-DNA的途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)座，在整合酶的作用下新生成的DNA狀態(tài)的反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子整合到宿主基因組中.這樣，反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子在宿主基因組中的拷貝數(shù)得到不斷積累，從而使基因組增大.根據(jù)是否具有編碼反轉(zhuǎn)錄酶的能力，反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子又分為長(zhǎng)末端重復(fù)序列(LTR)反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子和非LTR反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子兩個(gè)亞類，而DNA轉(zhuǎn)座子分為自主元件、非自主元件和微型反向重復(fù)轉(zhuǎn)座元件(MITE)三種類型，都具有兩個(gè)末端反向重復(fù)序列。精品文檔精品文檔生物學(xué)意義：目

7、前轉(zhuǎn)座子元件是植物分子生物學(xué)操作和植物基因工程中分離克隆基因和研究基因功能最有力的工具之一，其中的一大類一反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子具有分布廣、異源轉(zhuǎn)座高和受組織培養(yǎng)誘導(dǎo)激活等優(yōu)勢(shì)，因此它的發(fā)現(xiàn)和利用又為轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽的應(yīng)用提供了更廣闊的前景。(不了解基因產(chǎn)物的生化性質(zhì)和表達(dá)模式的情況下，分離克隆植物基因，即轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽(transposontagging),此外通過對(duì)現(xiàn)有轉(zhuǎn)座元件的改造以及轉(zhuǎn)座元件作為載體改造的工具，也將大大加速植物基因和功能序列的分離與研究，如利用轉(zhuǎn)座子元件構(gòu)建啟動(dòng)子捕捉載體，效率比T-DNA標(biāo)簽高四、簡(jiǎn)述免疫共沉淀及酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)的原理及個(gè)自己的優(yōu)缺點(diǎn)免疫共沉淀優(yōu)點(diǎn)(1)相互作用的蛋白質(zhì)都是

8、經(jīng)翻譯后修飾的，處于天然狀態(tài)；(2)蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的，可以避免人為的影響;(3)可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復(fù)合物。免疫共沉淀缺點(diǎn)(1)可能檢測(cè)不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)一蛋白質(zhì)相互作用；(2)兩種蛋白質(zhì)的結(jié)合可能不是直接結(jié)合，而可能有第三者在中間起橋梁作用；(3)必須在實(shí)驗(yàn)前預(yù)測(cè)目的蛋白是什么，以選擇最后檢測(cè)的抗體，所以，若預(yù)測(cè)不正確，實(shí)驗(yàn)就得不到結(jié)果，方法本身具有冒險(xiǎn)性。酵母雙雜優(yōu)點(diǎn)：作用信號(hào)是在融合基因表達(dá)后，在細(xì)胞內(nèi)重建轉(zhuǎn)錄因子的作用而給出的，省去了純化蛋白質(zhì)的繁瑣步驟。檢測(cè)在活細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，可以在一定程度上代表細(xì)胞內(nèi)的真實(shí)情況。檢測(cè)的結(jié)果可以是基因表達(dá)產(chǎn)物的積累

9、效應(yīng)，因而可檢測(cè)存在于蛋白質(zhì)之間的微弱的或暫時(shí)的相互作用。酵母雙雜交系統(tǒng)可采用不同組織、器官、細(xì)胞類型和分化時(shí)期材料構(gòu)建cDNA文庫(kù)，能分析細(xì)胞漿、細(xì)胞核及膜結(jié)合蛋白等多種不同亞細(xì)胞部位及功能的蛋白。酵母缺點(diǎn)：。雙雜交系統(tǒng)分析蛋白間的相互作用定位于細(xì)胞核內(nèi)，而許多蛋白間的相互作用依賴于翻譯后加工如糖基化、二硫鍵形成等，這些反應(yīng)在核內(nèi)無(wú)法進(jìn)行。另外有些蛋白的正確折疊和功能有賴于其他非酵母蛋白的輔助，這限制了精品文檔精品文檔某些細(xì)胞外蛋白和細(xì)胞膜受體蛋白等的研究。酵母雙雜交系統(tǒng)的一個(gè)重要的問題是“假陽(yáng)性。由于某些蛋白本身具有激活轉(zhuǎn)錄功能或在酵母中表達(dá)時(shí)發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活作用，使DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域雜交蛋白在

10、無(wú)特異激活結(jié)構(gòu)域的情況下可激活轉(zhuǎn)錄。另外某些蛋白表面含有對(duì)多種蛋白質(zhì)的低親和力區(qū)域，能與其他蛋白形成穩(wěn)定的復(fù)合物，從而引起報(bào)告基因的表達(dá)，產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。五、用大腸桿菌表達(dá)帶有GST標(biāo)簽的X蛋白，通過免疫家兔獲得針對(duì)該融合蛋白的多克隆抗體血清，請(qǐng)你設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)純化X蛋白特異性抗體（與GST無(wú)免疫交叉反映）過去有用鹽析法純化的，有用辛酸-硫酸鏤沉淀的方式純化的，也有用冷酒精沉淀的方式純化的，也有后來(lái)的離子交換層析，抗原親和層析得到的抗體效率高、產(chǎn)量高、產(chǎn)品純、操作簡(jiǎn)單。步驟如下：1、介質(zhì)的制備2、抗原與填料的連接（X蛋白+gstBEADS）3、連接效果的評(píng)估4、多余位點(diǎn)的封閉5、抗血清與beads的

11、結(jié)合6、非特異性結(jié)合的抗體的洗滌純度鑒定：SDS-PAGE六、你的課題設(shè)計(jì)到研究某個(gè)蛋白的生物學(xué)功能，在你開始具體試驗(yàn)之前，利用網(wǎng)絡(luò)資源，你需要獲得該蛋白的哪些相關(guān)信息？通過這些信息，可預(yù)測(cè)該蛋白的結(jié)構(gòu)與功能。蛋白質(zhì)的氨基酸序列、結(jié)構(gòu)、和其他蛋白的同源序列和同源區(qū)域、表達(dá)情況DNA序列數(shù)據(jù)庫(kù)有GenBank（美國(guó)），1 .蛋白功能預(yù)測(cè)：根據(jù)序列預(yù)測(cè)功能，序列相似性，保守域，和亞結(jié)構(gòu)，blastp序列特征：疏水性-跨膜螺旋，前導(dǎo)序列2 .結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)：二級(jí)結(jié)構(gòu)：PHD程序精品文檔精品文檔三級(jí)結(jié)果：蛋白質(zhì)自動(dòng)建模服務(wù)器，用于同源性建模,2008年生物化學(xué)一、名詞解釋表觀遺傳學(xué)：是研究基因的核甘酸序列不

12、發(fā)生改變的情況下，基因表達(dá)了可遺傳的變化的一門遺傳學(xué)分支學(xué)科。表觀遺傳學(xué)涉及到DNA甲基化、組蛋白修飾、染色體重塑和非編碼RNA調(diào)控等內(nèi)容，表觀遺傳的現(xiàn)象很多，已知的有DNA甲基化(DNAmethylation),基因組印記(genomicimpriting),母體效應(yīng)(maternaleffects),基因沉默(genesilencing),核仁顯性，休眠轉(zhuǎn)座子激活和RNA845(RNAediting)等。組蛋白密碼組蛋白密碼信息存在于轉(zhuǎn)錄后組蛋白修飾等過程中。組蛋白氨基末端的多樣化修飾擴(kuò)充了遺傳密碼的信息庫(kù)。組蛋白密碼可被一系列特定的蛋白質(zhì)所識(shí)別，將其翻譯成一種特定的染色質(zhì)狀態(tài)以實(shí)現(xiàn)對(duì)特定

13、基因的調(diào)節(jié)1. chromatinremodelingdna復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、修復(fù)、重組引起耗能的在染色質(zhì)水平發(fā)生位置和結(jié)構(gòu)的變化染色質(zhì)重塑屬于表觀遺傳學(xué)的范疇.細(xì)胞分化中的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)，細(xì)胞有絲分裂中的染色質(zhì)結(jié)構(gòu)DNA復(fù)制程序性與染色質(zhì)結(jié)構(gòu)關(guān)系DNA甲基化、miRNA/siRNA引起的染色質(zhì)重塑精品文檔精品文檔主要參與基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控.并與細(xì)胞凋亡、DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞增殖分化、維持基因組穩(wěn)定性等方面相關(guān).調(diào)控染色質(zhì)重塑的途徑或者機(jī)制主要有組蛋白修飾、組蛋白突變體的替代。ATP酶依賴的染色質(zhì)重塑復(fù)合體、DNA甲基化、非編碼RNA調(diào)控等.2. glyconeogenesis由簡(jiǎn)單的非糖前體（乳酸、甘油、

14、生糖氨基酸等）轉(zhuǎn)變?yōu)樘牵ㄆ咸烟腔蛱窃┑倪^程。3. affinitychromatography利用共價(jià)連接有特異配體的層析介質(zhì)，分離蛋白質(zhì)混合物中能特異結(jié)合配體的目的蛋白質(zhì)或其他分子的層析技術(shù)如酶與底物的識(shí)別結(jié)合、受體與配體的識(shí)別結(jié)合、抗體與抗原的識(shí)別結(jié)合，這種結(jié)合既是特異的，又是可逆的，改變條件可以使這種結(jié)合解除。4. ortholog直系同源不同物種中由同一個(gè)祖先基因特化而來(lái)的對(duì)應(yīng)基因具有相近甚至相同的功能，由相似的途徑調(diào)控，在不同的物種中扮演相似甚至相同的角色，因此在基因組序列的注釋中，是最可靠的選擇.orthologs的生物信息預(yù)測(cè)方法主要有兩類：系統(tǒng)發(fā)生方法和序列比對(duì)方法.5. r

15、etrotransposon通過rna中間物進(jìn)行轉(zhuǎn)座的可移動(dòng)基因元件。6. competitiveinhibition一種最常見的酶活性的抑制作用，抑制劑與底物競(jìng)爭(zhēng)，從而阻止底物與酶的結(jié)合。其動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)是：酶促反應(yīng)的表觀米氏常數(shù)增大、最大速度不變?？梢酝ㄟ^增加底物濃度來(lái)解除這種抑制。7. 非競(jìng)爭(zhēng)性抑制：抑制劑與酶分子在底物結(jié)合位點(diǎn)以外的部位結(jié)合，不影響酶與底物的結(jié)合。因此，只影響酶催化反應(yīng)的最大反應(yīng)速度（變小），不影響米氏常數(shù)8. 反競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑：對(duì)酶活性的一種抑制作用，由于所加入的抑制劑能與酶底物復(fù)合物結(jié)合，而不與游離酶結(jié)合，所以其特征是最大反應(yīng)速度比未加抑制劑時(shí)反應(yīng)的最大速度低二、請(qǐng)列出6

16、中常見的非編碼RNA的名稱，簡(jiǎn)述其功能三、簡(jiǎn)述蛋白質(zhì)免疫共沉淀和染色質(zhì)免疫共沉淀的實(shí)驗(yàn)原理，比較他們?cè)诰W(wǎng)絡(luò)調(diào)控研究中的應(yīng)用染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（chromatinimmunoprecipitationassay,CHIP）是目前唯研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法。它的基本原理是在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白精品文檔精品文檔質(zhì)-DNA復(fù)合物，并將其隨機(jī)切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段，通過對(duì)目的片斷的純化與檢測(cè)，從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。（CHIP與基因芯片相結(jié)合建立的CHIP-on-chip方法已廣泛用于特定反式因子

17、靶基因的高通量篩選；CHIP與體內(nèi)足跡法相結(jié)合，用于尋找反式因子的體內(nèi)結(jié)合位點(diǎn)；RNA-CHIP用于研究RNA在基因表達(dá)調(diào)控中的作用。由此可見，隨著CHIP的進(jìn)一步完善，它必將會(huì)在基因表達(dá)調(diào)控研究中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。）四、舉5例說(shuō)明綠色熒光蛋白在生物化學(xué)研究中的應(yīng)用五、請(qǐng)纖細(xì)說(shuō)明真核生物基因表達(dá)從轉(zhuǎn)錄起始到翻譯后水平上的調(diào)節(jié)戒指六、分別以核蛋白、線粒體蛋白、膜蛋白和分泌蛋白為例，說(shuō)明蛋白質(zhì)合成后，如何被運(yùn)到靶細(xì)胞器執(zhí)行其功能。核蛋白：帶有和定位信號(hào)的蛋白與核輸入受體結(jié)合并?？谠诤丝淄ǖ溃丝讖?fù)合體。線粒體蛋白：翻譯后運(yùn)輸，多肽鏈結(jié)合蛋白去折疊，ATP,質(zhì)子梯度幫助去折疊和跨膜。線粒體定向肽

18、，與膜識(shí)別。膜蛋白：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上合成后，SRP,SRP受體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)子協(xié)同運(yùn)輸，有一個(gè)起始、終止穿膜信號(hào)，都是輸水氨基酸殘基分泌蛋白：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上合成后，修飾，形成被膜包裹的小泡，經(jīng)高爾基體運(yùn)至細(xì)胞膜，經(jīng)過胞吐作用釋放到膜外。1%的重組率為一個(gè)遺傳距離單位精品文檔精品文檔2006年遺傳學(xué)1 .染色體與連鎖群之間的關(guān)系。對(duì)于某物種來(lái)講，為什么在遺傳研究的早期，連鎖群的數(shù)目少于或多余該物種染色體的數(shù)目2 .基因不連鎖，其實(shí)在一條染色體上，多于。因?yàn)楫?dāng)可標(biāo)記的基因較少時(shí)，其連鎖群可能比染色體數(shù)目多。隨著可標(biāo)記基因數(shù)目的增加，一些可標(biāo)記基因會(huì)與幾個(gè)群上的標(biāo)記連鎖，而把它們連成一群。例如A基因與B基因連

19、鎖，B基因與C基因連鎖，那么A基因與C基因連鎖，AB、C基因就應(yīng)合并為一個(gè)連鎖群。當(dāng)可標(biāo)記基因足夠多時(shí)，標(biāo)記連鎖群的數(shù)目與染色體數(shù)目日趨接近，直至相等。不是單倍體，少于染色體數(shù)目。積累的資料不多。發(fā)掘出的基因認(rèn)識(shí)少，還不足以把全部連鎖群繪制出來(lái)3 .什么是復(fù)等位基因？請(qǐng)舉一實(shí)例加以說(shuō)明同源染色體的某個(gè)相同座位上的等位基因超過2個(gè)以上時(shí)，就稱作復(fù)等位基因。人類ABO血型基因座位是在9號(hào)染色體長(zhǎng)臂的末端，在這個(gè)座位上的等位基因，就人類來(lái)說(shuō)，有A、B、O三個(gè)基因，因此人類的ABO血型是由3個(gè)復(fù)等位基因決定的。但就一個(gè)具體人類來(lái)說(shuō)，決定ABO血型的一對(duì)等位基因，是A、B、O三個(gè)基因中的兩個(gè)，即AA、B

20、B、OO、AO、BO、AB。4 .試述同源染色體練會(huì)的遺傳學(xué)意義。如果同源染色體聯(lián)會(huì)出現(xiàn)異常，會(huì)產(chǎn)生怎么樣的遺傳學(xué)效應(yīng)同源聯(lián)會(huì)是為了進(jìn)行減數(shù)分裂，在四分體時(shí)期有可能會(huì)發(fā)生同源染色體上的非姐妹染色單體交叉互換，因此發(fā)生了基因重組，為生物提供了更多種類的基因型；同源染色體能均等的分離到兩個(gè)子細(xì)胞中，為的是保證在次級(jí)性母細(xì)胞沒有同源的出現(xiàn)，保證了每個(gè)配子都是單倍體，為精卵結(jié)合后得到二倍體或多倍體做了保障聯(lián)會(huì)異?？赡軙?huì)發(fā)生染色體數(shù)目變異，導(dǎo)致得到異常的配子，因此在受精后會(huì)得到多倍體，無(wú)籽西瓜。精品文檔精品文檔在遺傳學(xué)歷史上，確認(rèn)DNA為遺傳物質(zhì)的主要實(shí)驗(yàn)證據(jù)來(lái)源于FredGriffith(1928),

21、OswaldAvery(1944)以及AlfredHershey和MarthaChase(1952)等人的研究。請(qǐng)分別簡(jiǎn)述三項(xiàng)研究的主要內(nèi)容和結(jié)論肺炎球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)S致死菌+R菌同時(shí)注射小鼠體內(nèi)，感染致死。發(fā)現(xiàn)了遺傳轉(zhuǎn)化現(xiàn)象。OswaldAveryS細(xì)胞內(nèi)部物質(zhì)分別、不是蛋白、多糖、脂肪。核糖核酸酶轉(zhuǎn)化活力消失，促使肺炎球菌轉(zhuǎn)化因子是DNA。噬菌體侵染實(shí)驗(yàn)：35S和32P分別標(biāo)記蛋白質(zhì)和DNA。細(xì)胞內(nèi)部放射性的DNA、，噬菌體殘余物還在含有放射性的蛋白質(zhì)：證明了遺傳物質(zhì)的化學(xué)本質(zhì)就是DNA5 .激素X發(fā)現(xiàn)與80年錢，但對(duì)其信號(hào)轉(zhuǎn)到了解甚少。最近的研究表明一個(gè)質(zhì)膜定位的蛋白XR1可能是激素X的受體

22、，其中最關(guān)鍵的證據(jù)是XR1蛋白在體外形成二聚體后可能結(jié)合激素X,且其結(jié)合常熟接近激素X在體內(nèi)的生理濃度。但是，遺傳學(xué)研究的結(jié)果卻不能支持生物化學(xué)研究結(jié)果。第一，在已分離鑒定的與激素X相關(guān)的近200個(gè)不同突變體中，至今沒有發(fā)現(xiàn)XR1基因攜帶任何突變(即所有這些突變體重，XR1基因均為正常)；第二，通過基因敲除技術(shù)完全確實(shí)XR1基因功能后，激素X的信號(hào)轉(zhuǎn)到完全正常。今年初發(fā)表的一項(xiàng)研究似乎為解決這個(gè)難題帶來(lái)一線希望：如果過表達(dá)XR1基因，則細(xì)胞/有機(jī)體表現(xiàn)出對(duì)激素X超敏感。止匕外，如果過表達(dá)一個(gè)點(diǎn)突變的XR1基因(該點(diǎn)突變是將一個(gè)高度保守的絲氨酸變成丙氨酸)則導(dǎo)致細(xì)胞/有機(jī)體對(duì)激素X不敏感。請(qǐng)解釋

23、上述結(jié)果，你相信XR1蛋白是激素X的受體嗎？為什么？6 .舉例簡(jiǎn)述RNA編輯的主要凡是及生物學(xué)意義。錐蟲線粒體中，gRNA指導(dǎo)下的U的插入與刪除：位點(diǎn)特異性脫氨作用：1 .載脂蛋白BC-U,精品文檔精品文檔2 .A-I,腦谷氨酸受體亞基mRNA,生物學(xué)意義：1.消除移碼突變等基因突變?cè)斐傻奈：?.基因產(chǎn)物多樣性3.生物發(fā)育和進(jìn)化，基因調(diào)控的方式4.與學(xué)習(xí)和記憶有關(guān)2007年遺傳學(xué)1、 一個(gè)學(xué)生用轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究一個(gè)基因的功能。該學(xué)生共得到30個(gè)獨(dú)立的轉(zhuǎn)基因主席，其中29個(gè)主席的表型與預(yù)測(cè)的功能基本吻合。但其中一個(gè)主席的情況很特殊，在連續(xù)三代自交后代中無(wú)法獲得任何純合的轉(zhuǎn)基因主席。此外，轉(zhuǎn)基因雜合

24、體（其基因型已準(zhǔn)確的確認(rèn)）的自交后代中，僅出現(xiàn)雜合體和野生型（即不含有轉(zhuǎn)基因的個(gè)體）兩個(gè)群體，比例大致為2:1,但沒有純合體后代。請(qǐng)解釋該株系表型的遺傳學(xué)基礎(chǔ)，并通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證你的解釋。純合致死；插入到了管家基因處，使得該處基因無(wú)法正確表達(dá)，嚴(yán)重影響了細(xì)胞的正常生理過程和代謝。若是雜合體，另一條染色體還會(huì)表達(dá)。2、 一個(gè)學(xué)生用某一材料的基因組DNA為模板，通過PCR擴(kuò)增克隆了一個(gè)基因。DNA測(cè)序分析后發(fā)現(xiàn)其中一個(gè)堿基與數(shù)據(jù)庫(kù)中公布的基因組序列不復(fù)合。1 .解釋這種差異的可能原因：PCR過程中，酶的高保真效果低，導(dǎo)致錯(cuò)配。2 .發(fā)現(xiàn)的堿基差異一定會(huì)造成蛋白序列改變嗎？若有，是哪幾種？不一定。若有，

25、錯(cuò)義突變。3 .為減少克隆過程中認(rèn)為造成的突變，PCR擴(kuò)增應(yīng)該注意什么？3、 RNA干澀是一種快速、有效的研究基因功能的方法，但缺點(diǎn)是有時(shí)會(huì)導(dǎo)致非特意效應(yīng)，即影響了其他基因的功能，因而產(chǎn)生非特意性的表型。若過表達(dá)基因A序列片段構(gòu)建的RNAi導(dǎo)致了一定的表型，如何證明所觀察到的表型是由于此RNAi特異性地影響了其靶基因的表達(dá)所引起？舉出至少兩種實(shí)驗(yàn)方案，驗(yàn)證你的解釋。抗性篩選PCR檢測(cè)引物課設(shè)計(jì)在載體上的序列半定量PCR檢測(cè)目的基因表達(dá)產(chǎn)物是不是比野生型明顯降低，且轉(zhuǎn)基因株系中有差異。Northernblot如果轉(zhuǎn)化成功了，那么目的基因mRNA被降低至RNAblot檢測(cè)不到的水平4、 一種人類遺

26、傳病，在家族中每代都有人患病，且男女無(wú)差別。1 .請(qǐng)解釋其遺傳方式：常染色體上的顯性遺傳，基因座基因突變精品文檔精品文檔2 .請(qǐng)推測(cè)其可能的分子機(jī)制：由等位基因突變，合成與另一等位基因功能拮抗的酶，這一酶沒有活性，代謝異常。3 .導(dǎo)致這種疾病的突變?yōu)槭裁茨茉谌巳褐斜Ａ粝聛?lái)：基因突變是可遺傳的，且是非致死突變5、 有兩個(gè)膜蛋白A和B,其下游的一個(gè)靶基因是To當(dāng)配體L存在時(shí)，T能激活表達(dá)。如果敲出A（即功能缺失性突變a）,T表現(xiàn)為組成性表達(dá)（即沒有L存在時(shí)T也可被激活）：如果敲除B或者同事敲出A和B,無(wú)論L是否存在，T均不能被激活。1 .根據(jù)上述結(jié)果，推測(cè)A和B之間的關(guān)系，以及L和A、B之間的關(guān)系

27、。2 .設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)證明你的推測(cè)/模型A抑制B的活性A抑制T,是一種負(fù)調(diào)控因子B激活T蛋白AB是異源二聚體，感受信號(hào)配體L,A、B胞內(nèi)區(qū)的磷酸化，激活T1 .首先研究蛋白體外的互作情況2 .研究體外磷酸化水平實(shí)驗(yàn)：BRI1能否可以點(diǎn)突變2008年遺傳學(xué)填空題DNA正義編碼鏈CCTA反義模板鏈GGATGAmRNACCAAtRNAGGUUGCA有一種熒光物質(zhì)可以標(biāo)記丫染色體，在丫配子細(xì)胞中只顯示一個(gè)兩點(diǎn)。請(qǐng)回答:1 .正常XY個(gè)體產(chǎn)生的胚子中，有一個(gè)熒光亮點(diǎn)的配子所占比例是多少：1/22 .如果在某些一場(chǎng)情況下，有配子被染出2個(gè)兩點(diǎn)，從減數(shù)分裂考慮，是如何造成的？在哪個(gè)步驟可以發(fā)生？減數(shù)第二次分裂后期

28、，姊妹染色單體沒有分開，而是分配到一個(gè)細(xì)胞內(nèi)。精品文檔精品文檔3 .如果XY個(gè)體吃藥物D后，配子被染出2個(gè)兩點(diǎn)的比例大大增加，你如何解釋藥物D在簡(jiǎn)述分裂中的作用抑制紡錘絲的形成或牽引、4 .減數(shù)分裂的哪一步對(duì)遺傳多樣性貢獻(xiàn)最大，為什么？這種現(xiàn)象在丫染色體發(fā)生嗎？為什么？減數(shù)分裂前體，同源染色體聯(lián)會(huì)，配對(duì)。會(huì)，XY也屬于同源染色體，配對(duì)，發(fā)生重組3、 突變X是1個(gè)40Kb的缺失，純合突變導(dǎo)致表型A1 .如果40kb的確實(shí)包干多少個(gè)基因，如何見鑒定A表型是有哪個(gè)基因缺失引起的？舉出3種方法。過表達(dá)某個(gè)基因，就表型來(lái)看，是否產(chǎn)生恢復(fù)表現(xiàn)型；southernblot；westernblot；PCR2

29、.如果突變破壞的基因不能編碼蛋白，那會(huì)是編碼什么？并說(shuō)明這種基因的作用方式。RNA,調(diào)控基因表達(dá)，可能編碼啟動(dòng)子序列4、 植物激素甲能誘導(dǎo)基因T的表達(dá)，T被認(rèn)為是甲信號(hào)途徑的標(biāo)記基因。激素甲最重要的生理功能是抑制植物主根的身長(zhǎng)，據(jù)此生理效應(yīng)，某研究生篩選獲得了一組對(duì)激素甲不敏感的突變體ml,m2和m3.其中ml是通過化學(xué)誘變劑誘變獲得的，而m2和m3是通過T-DNA插入獲得的。該研究生首先證明ml和m2實(shí)際代表甲信號(hào)途徑的同一個(gè)位點(diǎn)，而m3代表甲信號(hào)途徑的另外一個(gè)位點(diǎn)。該研究生接下來(lái)成功克隆了ml和m2所代表的基因命名為A以及m3所代表的基因命名為Bo根據(jù)生物信息學(xué)，A編碼一個(gè)F-box蛋白，

30、而B可能編碼某類著名的轉(zhuǎn)錄因子家族的一個(gè)成員。回答以下問題：1 .怎么樣證明ml和m2代表同一個(gè)位點(diǎn)而m3代表另一個(gè)位點(diǎn)互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，向MI導(dǎo)入過表達(dá)m2,對(duì)激素敏感，向M2導(dǎo)入過表達(dá)ml對(duì)激素敏感；導(dǎo)入1或2都不能使3.或者M(jìn)1M3雜交再自交，不是3:1則不一位點(diǎn)的突變。2 .該研究生可能怎樣克隆A基因和B基因？怎樣證明他克隆到的基因是正確的？圖位克隆?；虺聊d體構(gòu)建傳野生型3 .請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)闡明A和B在甲信號(hào)途徑中的上下游關(guān)系。使T失活，看AB是否各自的表達(dá)量下降，雜交得雙突變體4 .假如存在這樣一種，t#況，在突變體m1中A基因的表達(dá)水平雖然下降，但其序列在DNA序列水平上并沒有發(fā)生變化

31、，你如何解釋？調(diào)控序列變化5 .作為轉(zhuǎn)錄因子應(yīng)該具備哪些條件？請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)證明B作為轉(zhuǎn)錄因子直接調(diào)控T的表達(dá)。DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域、調(diào)控結(jié)構(gòu)域。足跡法6 .你認(rèn)為B基因的表達(dá)可能存在那些水平的調(diào)控？請(qǐng)分別簡(jiǎn)述其機(jī)制7 .請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)對(duì)A基因(蛋白)的功能進(jìn)行系統(tǒng)研究。網(wǎng)上預(yù)測(cè)，是否是激酶，如果是，磷酸化形式。過表達(dá)沉默突變體構(gòu)建轉(zhuǎn)入擬南芥啟動(dòng)子功能分析8 .為了更深入的認(rèn)識(shí)激素甲作用的分子機(jī)理，導(dǎo)師希望鑒定與A相關(guān)的，在甲信號(hào)途徑中起重要作用的新原件，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)兩套技術(shù)路線開展研究。酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)，篩選可能存在的互作元件。基因芯片技術(shù)有條件的話可以建立RNAi庫(kù)。mRNA差異顯示技術(shù)(mRNAdiffer

32、etialdisplay)是一種快速有效的克隆差異性表達(dá)基因的方法。差異顯示獲得的只是某個(gè)基因的片段，而不是直接獲得全長(zhǎng)cDNA克隆精品文檔精品文檔傳統(tǒng)mRNA差異顯示技術(shù)(DDRT-PCR)是根據(jù)絕大多數(shù)真核細(xì)胞mRNA3端具有的多聚腺甘酸尾(polyA)結(jié)構(gòu)，因此可用含oligo(dT)的寡聚核甘酸為引物將不同的mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。該方法的創(chuàng)始人LiangP和PardeeA根據(jù)PolyA序列起點(diǎn)前2個(gè)堿基除AA外只有12種可能性的特征，設(shè)計(jì)合成了12種下游引物，稱3-錨定引物，具通式為5-T11MN;同時(shí)為擴(kuò)增出polyA上游500bp以內(nèi)所有可能性的mRNA序列，在5端又設(shè)計(jì)了20

33、種10bp長(zhǎng)的隨機(jī)引物。這樣構(gòu)成的引物對(duì)進(jìn)行PCR擴(kuò)增能產(chǎn)生出20000條左右的DNA條帶，其中每一條都代表一種特定mRNA種，這一數(shù)字大體涵蓋了在一定發(fā)育階段某種細(xì)胞類型中所表達(dá)的全部mRNA。將差別表達(dá)條帶中的DNA回收，擴(kuò)增至所需含量，進(jìn)行Southernblot或Northernblot或直接測(cè)序，從而對(duì)差異條帶鑒定分析，以便最終獲得差異表達(dá)的目的基因。2010年生物化學(xué)一名詞解釋1 .端粒2 .選擇性拼接3 .糖異生二簡(jiǎn)答：1.蛋白質(zhì)一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)、四級(jí)結(jié)構(gòu)，及他們之間的相互關(guān)系2 .RNAi的原理及作用機(jī)制3 .什么是聚合酶鏈?zhǔn)椒从?、原理及?yīng)用三、某學(xué)生得到一個(gè)基因，推測(cè)為轉(zhuǎn)錄因

34、子，請(qǐng)舉出三種方法證明其是否為轉(zhuǎn)錄因子。凝膠阻滯，足跡法，亞細(xì)胞熒光定位，在核內(nèi)表達(dá)。四、某學(xué)生得到AB兩個(gè)基因，設(shè)計(jì)三個(gè)實(shí)驗(yàn)證明其是否相互作用五、經(jīng)UV照射的兩份CELL培養(yǎng)，一份置于光下，一份避光繼續(xù)培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)黑暗條件培養(yǎng)的CELL死亡率更高，解釋原因光修復(fù)DNA損傷修復(fù)的一種方式，由DNA光裂合酶(photolyase)催化。該酶需要光(400700nm)才能激活，它能切除喀咤二聚體之間的連鍵(C-C鍵)，六、cell色素C氧化酶是呼吸鏈的一個(gè)復(fù)合物，當(dāng)其發(fā)生突變時(shí)，使酶活性降低，一種遺傳病，也會(huì)引起精品文檔精品文檔2010年遺傳學(xué)一、名詞解釋、移碼突變、生物膜、端粒和端粒酶、散在序

35、列、遺傳平衡、非編碼RNA、轉(zhuǎn)錄因子、無(wú)義突變、DNA轉(zhuǎn)座子和逆車t座子、RNA前體、染色體和染色質(zhì)假連鎖現(xiàn)象：pseudolinkage:由于相互易位雜合子總是以相鄰分離方式產(chǎn)生可育配子造成非同源染色體上的基因間的自由組合受到嚴(yán)重抑制的現(xiàn)象。移碼突變?cè)诨蚓幋a區(qū)，核甘酸插入或缺失導(dǎo)致三聯(lián)體密碼子閱讀方式的改變，從而使該基因的相應(yīng)編碼序列發(fā)生改變。生物膜圍繞細(xì)胞或細(xì)胞器的脂雙層膜，由磷脂雙層結(jié)合有蛋白質(zhì)和膽固醇、糖脂構(gòu)成，起滲透屏障、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用。精品文檔精品文檔端粒和端粒酶真核細(xì)胞內(nèi)線性染色體末端的一種特殊結(jié)構(gòu)，由DNA簡(jiǎn)單重復(fù)序列以及同這些序列專一性結(jié)合的蛋白質(zhì)構(gòu)成。一種反轉(zhuǎn)錄酶，由蛋白質(zhì)和RNA兩部分組成核糖蛋白復(fù)合體，其中RNA是一段模板序列，指導(dǎo)合成端粒DNA的重復(fù)序列片段。散在序列真核細(xì)胞基因組內(nèi)以分散形式存在于染色體中的重復(fù)序列遺傳平衡在大的隨機(jī)交配群體中，沒有突變、選擇和遷移的條件下，基因頻率和基因型頻率從一代到另一代保持不變的現(xiàn)象，該情況在