免疫細(xì)胞的分離及其表面標(biāo)志檢測技術(shù)

1、關(guān)于免疫細(xì)胞的分離及其表面標(biāo)志檢測技術(shù)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一頁，共40頁第一節(jié) 免疫細(xì)胞的分離 一、 外周血單個(gè)核細(xì)胞分離 二、 淋巴細(xì)胞的分離 三、 T細(xì)胞和B細(xì)胞的分離 四、 T細(xì)胞亞群的分離現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二頁，共40頁第二節(jié)第二節(jié) 淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類 一、一、 細(xì)胞表面標(biāo)志及亞群細(xì)胞表面標(biāo)志及亞群 二、二、 B B細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞表面標(biāo)志 三、三、 NKNK細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞表面標(biāo)志第三節(jié)第三節(jié) 其他的免疫細(xì)胞其他的免疫細(xì)胞第四節(jié)第四節(jié) 免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測及應(yīng)用免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測及應(yīng)用 一、一、免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測方法免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測方法 二、二、 淋巴

2、細(xì)胞表面標(biāo)志檢測的臨床意義淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測的臨床意義思考題小結(jié) 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三頁，共40頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四頁，共40頁第一節(jié)第一節(jié) 免疫細(xì)胞的分離免疫細(xì)胞的分離 外周血單個(gè)核細(xì)胞分離外周血單個(gè)核細(xì)胞分離 淋巴細(xì)胞的分離淋巴細(xì)胞的分離 T T細(xì)胞和細(xì)胞和B B細(xì)胞的分離細(xì)胞的分離 T T細(xì)胞亞群的分離細(xì)胞亞群的分離現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五頁，共40頁一、外周血單個(gè)核細(xì)胞分離一、外周血單個(gè)核細(xì)胞分離 外周血單個(gè)核細(xì)胞外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheralmononuclearcells,PMNC）包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞（monocyte）。）。 Ficoll分離液法主要用于分離

3、外周血中的單個(gè)核細(xì)胞，分離液法主要用于分離外周血中的單個(gè)核細(xì)胞，是一種單次差速密度梯度離心的分離法。是一種單次差速密度梯度離心的分離法。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六頁，共40頁細(xì)胞分離基本原理細(xì)胞分離基本原理不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞表面生物學(xué)特性不同不同細(xì)胞表面生物學(xué)特性不同不同細(xì)胞表面分化抗原不同不同細(xì)胞表面分化抗原不同現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七頁，共40頁不同細(xì)胞密度不同不同細(xì)胞密度不同人的紅細(xì)胞密度為1.093 粒細(xì)胞密度為1.092 單個(gè)核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞）的密度為1.075-1.090 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八頁，共40頁不同細(xì)胞密度不同現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九頁，共40頁用1.0770.001

4、的分層液可將細(xì)胞分離 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十頁，共40頁密度梯度離心(Ficoll)離心現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十一頁，共40頁二二、淋巴細(xì)胞分離、淋巴細(xì)胞分離貼壁粘附法貼壁粘附法 吸附柱過濾法吸附柱過濾法 磁鐵吸引法磁鐵吸引法 Percoll Percoll 分離液法分離液法 （連續(xù)密度梯度離心）（連續(xù)密度梯度離心）（去單核細(xì)胞）現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十二頁，共40頁E E花環(huán)沉降法花環(huán)沉降法 尼龍毛柱分離法尼龍毛柱分離法 三、三、T T細(xì)胞和細(xì)胞和B B細(xì)胞的分離細(xì)胞的分離現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十三頁，共40頁四、四、T T細(xì)胞亞群的分離細(xì)胞亞群的分離 親和板結(jié)合分離法親和板結(jié)合分離法 磁性微球分離法磁性微球分離法 熒光

5、激活細(xì)胞分離儀分離法熒光激活細(xì)胞分離儀分離法 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十四頁，共40頁熒光激活細(xì)胞分離儀分離法 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十五頁，共40頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十六頁，共40頁磁珠大小可以選擇現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十七頁，共40頁大小免疫磁珠分離細(xì)胞的特點(diǎn)比較 比較項(xiàng)目大磁珠小磁珠對(duì)細(xì)胞的影響對(duì)細(xì)胞造成機(jī)械壓力，影響其生物學(xué)活性，不利于分離后培養(yǎng)。對(duì)細(xì)胞溫和，不影響分離細(xì)胞的后續(xù)培養(yǎng)。對(duì)流式細(xì)胞儀的影響阻塞流式細(xì)胞儀的噴嘴，影響散射光?？芍苯由狭魇郊?xì)胞儀檢測，不影響散射光。分離條件要求技術(shù)簡單，分離可在試管中完成。需要很強(qiáng)的磁場來分離細(xì)胞。 收率得率高。得率不高。純度純度低。純度高。分離時(shí)間分離速度快。分離速度慢。

6、分離成本成本低。需要很強(qiáng)的磁場來分離細(xì)胞，需要一次性的分離柱，不能在普通試管進(jìn)行?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十八頁，共40頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十九頁，共40頁現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十頁，共40頁免疫磁珠法細(xì)胞分選過程現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十一頁，共40頁免疫磁珠細(xì)胞分選裝置現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十二頁，共40頁全自動(dòng)細(xì)胞分選系統(tǒng)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十三頁，共40頁流式細(xì)胞分析儀現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十四頁，共40頁第二節(jié)第二節(jié) 淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類淋巴細(xì)胞標(biāo)志及亞群分類 常用于鑒定和檢測淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志是常用于鑒定和檢測淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志是簇分化抗原（簇分化抗原（Cluster of Cluster of differentiation

7、differentiation，CDCD）。）。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十五頁，共40頁細(xì)胞表面分化抗原（細(xì)胞表面分化抗原（CDCD抗原抗原）適用于T、B細(xì)胞的分離已知CD抗原細(xì)胞亞群的分離未知CD抗原細(xì)胞亞群的分離（陰性分選）現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十六頁，共40頁一、一、T T細(xì)胞表面標(biāo)志及其亞群細(xì)胞表面標(biāo)志及其亞群 CD3+CD4+CD8-輔助性輔助性T細(xì)胞細(xì)胞（helpTcell,Th） CD3+CD4-CD8+細(xì)胞毒性細(xì)胞毒性T細(xì)胞細(xì)胞（cytotoxicTcell,TcorCTL） CD4+CD25+調(diào)節(jié)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞細(xì)胞（regulatoryTcell,TrorTreg）現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十七頁

8、，共40頁二、二、B B細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞表面標(biāo)志 SmIgSmIg、FcFc受體、補(bǔ)體受體、受體、補(bǔ)體受體、EBEB病毒受體，部分病毒受體，部分CDCD分子是分子是B B細(xì)胞的重要表面標(biāo)志，其中以細(xì)胞的重要表面標(biāo)志，其中以SmIgSmIg為為B B細(xì)胞細(xì)胞所特有，是鑒定所特有，是鑒定B B細(xì)胞可靠的指標(biāo)。細(xì)胞可靠的指標(biāo)。 CD19/CD5CD19/CD5分子：可將分子：可將B B細(xì)胞區(qū)分為細(xì)胞區(qū)分為B1B1細(xì)胞和細(xì)胞和B2B2細(xì)胞，細(xì)胞，B1B1細(xì)胞為細(xì)胞為CD19CD19和和CD5CD5雙陽性，而雙陽性，而B2B2細(xì)胞僅為細(xì)胞僅為CD19CD19陽性，陽性，B2B2細(xì)胞為通常所指的細(xì)胞為通常

9、所指的B B細(xì)胞細(xì)胞。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十八頁，共40頁三、三、NKNK細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞表面標(biāo)志 人類人類NK細(xì)胞表面標(biāo)志主要以細(xì)胞表面標(biāo)志主要以CD16、CD56來認(rèn)定，臨床上將來認(rèn)定，臨床上將CD3-CD56+CD16+淋巴細(xì)胞認(rèn)定為淋巴細(xì)胞認(rèn)定為NK細(xì)胞。細(xì)胞。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十九頁，共40頁T細(xì)胞及NK細(xì)胞現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十頁，共40頁第三節(jié)第三節(jié) 其他的免疫細(xì)胞其他的免疫細(xì)胞抗原提呈類細(xì)胞表面標(biāo)志抗原提呈類細(xì)胞表面標(biāo)志現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十一頁，共40頁第四節(jié)第四節(jié) 免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測及應(yīng)用免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測及應(yīng)用 免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測方法免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測方法淋巴細(xì)胞表面

10、標(biāo)志檢測的臨床意義淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測的臨床意義現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十二頁，共40頁一、免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測一、免疫細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測抗體致敏細(xì)胞花環(huán)法抗體致敏細(xì)胞花環(huán)法 免疫細(xì)胞化學(xué)法免疫細(xì)胞化學(xué)法 免疫熒光法免疫熒光法 流式細(xì)胞分析法流式細(xì)胞分析法 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十三頁，共40頁二、淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測的臨床意義二、淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測的臨床意義 淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測是評(píng)價(jià)免疫功能的淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測是評(píng)價(jià)免疫功能的重要指標(biāo)。重要指標(biāo)。 對(duì)對(duì)CD4+CD4+和和CD8+TCD8+T細(xì)胞的測定，有助于免疫缺細(xì)胞的測定，有助于免疫缺陷疾病、自身免疫性疾病和移植排斥反應(yīng)陷疾病、自身免疫性疾病和

11、移植排斥反應(yīng)的監(jiān)測。的監(jiān)測。 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十四頁，共40頁臨床常見疾病中的T 淋巴細(xì)胞的變化 現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十五頁，共40頁思考題思考題1.1.免疫細(xì)胞都包括哪些細(xì)胞？為什么要將其分離純化？免疫細(xì)胞都包括哪些細(xì)胞？為什么要將其分離純化？2.2.淋巴細(xì)胞有哪幾類細(xì)胞？能用形態(tài)學(xué)的方法加以區(qū)淋巴細(xì)胞有哪幾類細(xì)胞？能用形態(tài)學(xué)的方法加以區(qū)別嗎？別嗎？3.3.將細(xì)胞分離的原理有哪些？各有什么特點(diǎn)？將細(xì)胞分離的原理有哪些？各有什么特點(diǎn)？4.4.形態(tài)學(xué)相同的一類細(xì)胞為什么還要分亞群？形態(tài)學(xué)相同的一類細(xì)胞為什么還要分亞群？5.T5.T細(xì)胞和細(xì)胞和B B細(xì)胞進(jìn)一步區(qū)分亞群的依據(jù)是什么？細(xì)胞進(jìn)一步區(qū)分亞群的

12、依據(jù)是什么？現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十六頁，共40頁6.6.什么是細(xì)胞表面標(biāo)志？其作用是什么？什么是細(xì)胞表面標(biāo)志？其作用是什么？7.7.細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測方法有哪些？細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測方法有哪些？8.8.利用細(xì)胞表面標(biāo)志（利用細(xì)胞表面標(biāo)志（CDCD抗原）分離細(xì)胞的方法有哪幾抗原）分離細(xì)胞的方法有哪幾種？種？9.T9.T細(xì)胞、細(xì)胞、B B細(xì)胞、細(xì)胞、NKNK細(xì)胞、單核細(xì)胞的主要生物標(biāo)細(xì)胞、單核細(xì)胞的主要生物標(biāo)志是什么？志是什么？10.10.淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測的臨床意義是什么？淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志檢測的臨床意義是什么？現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十七頁，共40頁小小 結(jié)結(jié)淋巴細(xì)胞并不是功能單一的群體，但其在淋巴細(xì)胞并不是功能單一的群體，但其在光學(xué)顯微鏡下的形態(tài)基本是一樣的，因此光學(xué)顯微鏡下的形態(tài)基本是一樣的，因此要對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的分類和觀察就不能采要對(duì)其進(jìn)行進(jìn)一步的分類和觀察就不能采用形態(tài)學(xué)的方法，而要依靠對(duì)其表面標(biāo)志用形態(tài)學(xué)的方法，而要依靠對(duì)其表面標(biāo)志的檢測。常用于鑒定和檢測計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞的檢測。常用于鑒定和檢測計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞的表面標(biāo)志是的表面標(biāo)志是CDCD抗原。抗原?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十八頁，共40頁進(jìn)一步區(qū)分淋巴細(xì)胞亞群可使某一類淋巴進(jìn)一步區(qū)分淋巴細(xì)胞亞群可使某一類淋巴細(xì)胞的功能趨向