生物制藥十五章

1、會計學1生物制藥十五章生物制藥十五章17961796年，年，琴納琴納從患牛痘擠奶女工的痘皰中，分離皰漿，接種于從患牛痘擠奶女工的痘皰中，分離皰漿，接種于8 8歲男歲男孩的手臂上，獲得對天花免疫力。孩的手臂上，獲得對天花免疫力。類別類別死疫苗死疫苗活疫苗活疫苗制劑性狀制劑性狀殺死的殺死的病原微生物病原微生物弱毒或無毒弱毒或無毒的病原微生物的病原微生物接種量、次數接種量、次數量量大大、次數多（、次數多（2-32-3）量量小小、1 1次次保存、有效期保存、有效期易保存，較穩(wěn)定易保存，較穩(wěn)定不易保存，不易保存，4 4 數周數周失效失效免疫效果免疫效果較差、不持久較差、不持久較好，維持較好，維持1-51

2、-5年或更長年或更長安全性安全性會出現發(fā)熱、全身或局會出現發(fā)熱、全身或局部反應部反應有時會感染致病有時會感染致病兩種類型疫苗特征比較兩種類型疫苗特征比較1、基因工程基因工程疫苗疫苗 （gene engineered vaccine)p 利用利用DNA重組技術重組技術克隆并表達保護性抗原基因，用克隆并表達保護性抗原基因，用表達的抗原產物表達的抗原產物或或重組體本身重組體本身制成的疫苗。制成的疫苗。p包括包括 基因工程基因工程亞單位亞單位疫苗疫苗、 基因工程基因工程載體載體疫苗、疫苗、 核酸核酸疫苗、疫苗、 基因缺失基因缺失活疫苗活疫苗蛋白工程蛋白工程疫苗等。疫苗等。 Def:Def:基因工程表達

3、的基因工程表達的蛋白抗原蛋白抗原純化后制成的疫苗。純化后制成的疫苗。p 優(yōu)點：優(yōu)點：產量產量高高、純度、純度高高、安全性、安全性高高；用于用于病原體難培養(yǎng)病原體難培養(yǎng)或有潛在致癌性，或有免疫病理作用或有潛在致癌性，或有免疫病理作用的疫苗研究。的疫苗研究。p 缺點：缺點：與傳統亞單位疫苗相比，與傳統亞單位疫苗相比，免疫效果較差免疫效果較差。p 增強免疫原性增強免疫原性：篩選完整的顆粒性結構；加入有：篩選完整的顆粒性結構；加入有免疫佐劑免疫佐劑 基因工程基因工程亞單位亞單位疫苗疫苗 基因工程載體疫苗基因工程載體疫苗(gene engineering vector vaccine)(gene eng

4、ineering vector vaccine)p 利用微生物做載體，在利用微生物做載體，在微生物中表達微生物中表達保護性抗原基因保護性抗原基因，把，把微生物微生物制成疫苗。制成疫苗。優(yōu)點優(yōu)點：1 1、活疫苗活疫苗，抗原，抗原不需純化不需純化;2;2、不需多次免疫，載體本不需多次免疫，載體本身可發(fā)揮身可發(fā)揮免疫佐劑免疫佐劑效果。效果。缺點缺點：載體為：載體為特定的微生物特定的微生物載體，曾感染過載體，曾感染過腺病毒或者接種卡腺病毒或者接種卡介苗介苗的人，對載體微生物已具有免疫力，的人，對載體微生物已具有免疫力，再次再次接種后接種后不易不易繁殖繁殖，會影響，會影響免疫效果免疫效果。 核酸疫苗（核

5、酸疫苗（nucleic acid vaccinenucleic acid vaccine）：或稱或稱基因疫苗基因疫苗用用能夠表達抗原的基因能夠表達抗原的基因制成疫苗。制成疫苗。優(yōu)點優(yōu)點： 易于制備、便于保存、可易于制備、便于保存、可多次免疫多次免疫并且容易制成多聯并且容易制成多聯多價疫苗。多價疫苗。缺點缺點： 是否會是否會整合到染色體整合到染色體上引起癌變；上引起癌變； 能否引起免疫病理作用，如自身抗核酸抗體的產生，能否引起免疫病理作用，如自身抗核酸抗體的產生，免疫耐受等。免疫耐受等。 基因缺失活疫苗（基因缺失活疫苗（gene deleted live vaccinegene deleted

6、live vaccine）：去除與毒）：去除與毒力有關的基因獲得的力有關的基因獲得的缺失突變毒株缺失突變毒株制成的疫苗。（缺失制成的疫苗。（缺失毒素毒素A A單位單位的或的或其他毒力相關基因其他毒力相關基因的霍亂活菌苗已上市）的霍亂活菌苗已上市）優(yōu)點：優(yōu)點：突變性狀明確、穩(wěn)定；突變性狀明確、穩(wěn)定；不易返祖、毒力恢復；不易返祖、毒力恢復；是研究安全有效的是研究安全有效的新型疫苗新型疫苗的重要途徑。的重要途徑。 蛋白工程疫苗（蛋白工程疫苗（protein engineering vaccine protein engineering vaccine ）：）：p 抗原基因抗原基因加以改造加以改造，使

7、之發(fā)生，使之發(fā)生點突變點突變、缺失缺失、甚至進、甚至進行行不同基因或結構域不同基因或結構域的人工組合，達到增強其的人工組合，達到增強其免疫原免疫原性性，去除有害作用或副反應去除有害作用或副反應的一類疫苗的一類疫苗2 2、遺傳重組疫苗、遺傳重組疫苗 （genetic recombinant genetic recombinant vaccinevaccine）：用）：用遺傳重組方法遺傳重組方法獲得重組微生物制成獲得重組微生物制成的疫苗。的疫苗。3 3、合成肽疫苗、合成肽疫苗(Synthetic peptide vaccine)(Synthetic peptide vaccine)：用化學方法：用

8、化學方法合成能夠誘發(fā)機體產生免疫保護的合成能夠誘發(fā)機體產生免疫保護的多肽多肽制成的疫苗。制成的疫苗。優(yōu)點：優(yōu)點： 純度和安全性純度和安全性高高；副作用小副作用?。豢砷L期在常溫；可長期在常溫下保存；下保存；缺點：缺點： 抗原性抗原性單一單一；免疫原性；免疫原性弱弱。 合成肽抗原合成肽抗原聯合使用聯合使用提高免疫原性。提高免疫原性。4 4、抗獨特型抗體疫苗、抗獨特型抗體疫苗 （antiidiotype vaccineantiidiotype vaccine）：）：用與用與特定抗原的免疫原性相近的抗體特定抗原的免疫原性相近的抗體（ab2ab2）做抗原）做抗原制成的疫苗。制成的疫苗。目前此疫苗尚處于理

9、論性研究階段。目前此疫苗尚處于理論性研究階段。 一、滅活菌苗制造一、滅活菌苗制造二、二、活菌苗制造活菌苗制造三、疫苗的制造三、疫苗的制造滅活菌苗，種類、苗型甚多，但制造的基本程序差別不大。 一、滅活菌苗制造一、滅活菌苗制造基本流程菌液菌液佐劑佐劑+ +乳乳 化化分裝和保存分裝和保存原料配置滅活菌液滅活菌液滅活 滅活菌苗通常根據細菌的特性加入最有效細菌的特性加入最有效的滅活劑，采取最適當的滅活條件進行。表表 幾種滅活菌苗的滅活方法幾種滅活菌苗的滅活方法 一、滅活菌苗制造一、滅活菌苗制造蛋白質、肉浸液等原料蛋白質、肉浸液等原料培養(yǎng)基培養(yǎng)基病原菌分離病原菌分離菌菌 種種弱毒菌種弱毒菌種配置、滅菌鑒定

10、減毒檢驗配制滅菌檢驗配制滅菌原原 料料佐佐 劑劑死菌液死菌液配苗、乳化配苗、乳化滅活菌苗滅活菌苗培培 養(yǎng)養(yǎng)原液原液配配 苗苗活菌苗活菌苗保護劑保護劑菌菌 液液分裝、凍干分裝、凍干分分 裝裝殺菌原原 料料活化活化種子種子檢定檢定3、病毒疫苗制造、病毒疫苗制造1、病毒性禽胚培養(yǎng)疫苗制造2、 細胞培養(yǎng)制造疫苗細胞培養(yǎng)制造疫苗3、病毒性動物組織疫苗制造 細胞類型：細胞類型：原代細胞原代細胞和傳代細胞傳代細胞兩類根據根據病毒種類病毒種類、制備疫苗工藝制備疫苗工藝流程選擇不同的細胞流程選擇不同的細胞。（脊髓灰質炎活疫脊髓灰質炎活疫苗選擇苗選擇verovero細胞；狂犬病弱毒細胞疫苗采取細胞；狂犬病弱毒細胞

11、疫苗采取BHK21BHK21細胞增殖病毒等細胞增殖病毒等）。二、病毒性細胞培養(yǎng)疫苗制造二、病毒性細胞培養(yǎng)疫苗制造 病毒接種病毒接種培養(yǎng)有培養(yǎng)有同步與異步同步與異步。 同步同步：在細胞：在細胞分裝同時或不久分裝同時或不久接種毒種。接種毒種。異步：異步：在在細胞形成單層后細胞形成單層后接種毒種，接種毒種，如如乙型腦炎疫苗乙型腦炎疫苗，細胞形成單層后細胞形成單層后傾去培養(yǎng)液，按傾去培養(yǎng)液，按1%-1%-2%2%量接種量接種毒種，經吸附后毒種，經吸附后加入維持液繼續(xù)進行培養(yǎng)加入維持液繼續(xù)進行培養(yǎng)，待，待70%-85%70%-85%以上細胞病變以上細胞病變時收獲。時收獲。 收獲收獲收獲時間和方法收獲時間

12、和方法依疫苗性質而定依疫苗性質而定。 二、通過細胞培養(yǎng)制造疫苗二、通過細胞培養(yǎng)制造疫苗（五）配（五）配 苗苗 1 1滅活疫苗滅活疫苗 不同滅活劑對不同病毒滅活劑對不同病毒的作用也不同。向細胞毒液內按規(guī)定細胞毒液內按規(guī)定加入滅活劑加入滅活劑，在一定的溫度下作用一定的時間，有的滅活劑還需加入阻斷劑中止滅活阻斷劑中止滅活。滅活疫苗配置通常都需加入佐劑加入佐劑，充分混合、分裝，制成滅活疫苗。2 2凍干苗凍干苗 細胞毒液內按比例加入保護劑或穩(wěn)定劑保護劑或穩(wěn)定劑，充分混合、分裝，進行冷凍真空干燥制成凍于疫苗。 二、通過細胞培養(yǎng)制造疫苗二、通過細胞培養(yǎng)制造疫苗動物或胚胎動物或胚胎組組 織織毒毒 株株種種 毒

13、毒滅活滅活病毒病毒消消化化鑒定培育培養(yǎng)培養(yǎng)檢驗檢驗檢驗檢驗配制原原 料料佐佐 劑劑傳代傳代細胞細胞配配 苗苗（乳化、混勻）（乳化、混勻）死疫苗死疫苗原代原代懸液懸液生長細胞生長細胞配配 苗苗活疫苗活疫苗保護劑保護劑原原 苗苗凍干、分裝凍干、分裝分分 裝裝滅活滅活原原 料料原原 料料細胞培養(yǎng)液細胞培養(yǎng)液配制剪碎剪碎種種 子子鑒定擴增收獲收獲配制滅菌17961796年，年，琴納琴納從患牛痘擠奶女工的痘皰中，分離皰漿，接種于從患牛痘擠奶女工的痘皰中，分離皰漿，接種于8 8歲男歲男孩的手臂上，獲得對天花免疫力。孩的手臂上，獲得對天花免疫力。Def:Def:基因工程表達的基因工程表達的蛋白抗原蛋白抗原純化后制成的疫苗。純化后制成的疫苗。p 優(yōu)點：優(yōu)點：產量產量高高、純度、純度高高、安全性、安全性高高；用于用于病原體難培養(yǎng)病原體難培養(yǎng)或有潛在致癌性，或有免疫病理作用或有潛在致癌性，或有免疫病理作用的疫苗研究。的疫苗研究。p 缺點：缺點：與傳統亞單位疫苗相比，與傳統亞單位疫苗相比，免疫效果較差免疫效果較差。p 增強免疫原性增強免疫原性：篩選完整的顆粒性結構；加入有：篩選完整的顆粒性結構；加入有免疫佐劑免疫佐劑 基因工程基因工程亞單位亞單位疫苗疫苗 蛋白工程疫苗（蛋白工程疫苗（protein engineering vaccine