申文娟生藥1121五項目五ppt課件

1、項目五項目五 酶促轉化產物酶促轉化產物L-L-絲氨酸的分析鑒定絲氨酸的分析鑒定任務任務1 1 酶促轉化產物酶促轉化產物L-L-絲氨酸的分析鑒定絲氨酸的分析鑒定 方案的制定方案的制定 任務任務2 2 紙層析法分析鑒定紙層析法分析鑒定L-L-絲氨酸絲氨酸班級：生藥班級：生藥11211121姓名：申文娟姓名：申文娟學號：學號：20194232152019423215組別：第五組組別：第五組組員：申文娟組員：申文娟 俞靖俞靖 貢靜貢靜 顧海彬顧海彬 楊恪鑒楊恪鑒一、簡介一、簡介蛋白質的組成單位蛋白質的組成單位- -氨基酸氨基酸氨基酸結構通式氨基酸結構通式 氨基酸氨基酸Amino acidAmino a

2、cid賦予蛋白質特定的分子賦予蛋白質特定的分子結構結構 形狀，使他的分子具有生化形狀，使他的分子具有生化活性。蛋白質是生物體內重要的活性分子，活性。蛋白質是生物體內重要的活性分子，包括催化新陳代謝的酵素和酶。包括催化新陳代謝的酵素和酶。 按按R R基的極性不同來分類基的極性不同來分類中文名稱：中文名稱： 絲氨酸絲氨酸 英文名稱：英文名稱： serine;Ser serine;Ser 定義：學名：定義：學名：2-2-氨基氨基-3-3羥基丙酸。一種脂肪羥基丙酸。一種脂肪族極性族極性氨基酸。氨基酸。L-L-絲氨酸是組成蛋白質的絲氨酸是組成蛋白質的常見常見2020種氨基酸中的一種，是哺乳動物的非種氨基

3、酸中的一種，是哺乳動物的非必需氨基酸，也是生酮氨基酸。在自然界中必需氨基酸，也是生酮氨基酸。在自然界中也有也有D-D-絲氨酸，如絲原蛋白中。在一些抗生絲氨酸，如絲原蛋白中。在一些抗生素中也有素中也有D-D-絲氨酸。符號：絲氨酸。符號：S S。絲氨酸是一種非必需氨基酸，它在脂肪和脂絲氨酸是一種非必需氨基酸，它在脂肪和脂肪酸的新陳代謝及肌肉的生長中發(fā)揮著作用肪酸的新陳代謝及肌肉的生長中發(fā)揮著作用，因為它有助于免疫血球素和抗體的產生，因為它有助于免疫血球素和抗體的產生，維持健康的免疫系統(tǒng)也需要絲氨酸。絲氨酸維持健康的免疫系統(tǒng)也需要絲氨酸。絲氨酸在細胞膜的制造加工、肌肉組織和包圍神經在細胞膜的制造加工

4、、肌肉組織和包圍神經細胞的鞘的合成中都發(fā)揮著作用。細胞的鞘的合成中都發(fā)揮著作用。氨基酸、多肽與蛋白質氨基酸、多肽與蛋白質一、目的：一、目的： 學習并掌握紙層析法分離鑒定氨基學習并掌握紙層析法分離鑒定氨基酸的原理和方法。酸的原理和方法。二、原理二、原理 紙層析法是用濾紙作為惰性支持物紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法，其中濾紙纖維上吸附的的分配層析法，其中濾紙纖維上吸附的水是固定相，展層用的有機溶劑是流動水是固定相，展層用的有機溶劑是流動相。在層析時，相。在層析時，將樣品點在距濾紙一端約將樣品點在距濾紙一端約2 23cm3cm的某一處，的某一處，該點稱為原點；然后在密閉容器中層析溶劑該點

5、稱為原點；然后在密閉容器中層析溶劑沿濾紙的一個方向進行展層，這樣混合氨基沿濾紙的一個方向進行展層，這樣混合氨基酸在兩相中不斷分配。由于分配系數(shù)酸在兩相中不斷分配。由于分配系數(shù)KdKd不同，結果它們分布在濾紙的不同位置上。不同，結果它們分布在濾紙的不同位置上。物質被分離后在紙層析圖譜上的位置，可用物質被分離后在紙層析圖譜上的位置，可用比移值比移值RfRf來表示。來表示。所謂所謂RfRf，是指在紙層析中，從原點至氨基酸，是指在紙層析中，從原點至氨基酸停留點又稱為層析點中心的距離停留點又稱為層析點中心的距離X X與與原點至溶劑前沿的距離原點至溶劑前沿的距離Y Y的比值。如圖的比值。如圖Rf 原點到溶

6、劑前沿的距離離距的心中點析層到點原 在一定條件下如溫度、展層劑的組成、在一定條件下如溫度、展層劑的組成、層析紙質量等不變），某種物質的層析紙質量等不變），某種物質的Rf 值是常值是常數(shù)，因此可作為定性依據。數(shù)，因此可作為定性依據。 由于氨基酸無色，可利用茚三酮反應使由于氨基酸無色，可利用茚三酮反應使氨基酸層析斑點顯色，從而作定性分析。本氨基酸層析斑點顯色，從而作定性分析。本實驗利用紙層析法分離氨基酸。實驗利用紙層析法分離氨基酸。 三、試劑和器材：三、試劑和器材：1. 1. 試劑：試劑：1. 1. 展層劑和平衡液展層劑和平衡液 正丁醇正丁醇: :冰醋酸冰醋酸: :水水=4:1:5=4:1:5，充

7、分搖勻，用分，充分搖勻，用分液漏斗取上層液作展層劑；下層液作平衡液液漏斗取上層液作展層劑；下層液作平衡液( (棄棄去去) )。2. 2. 樣品液樣品液 用水配成每用水配成每mlml含有絲氨酸、亮氨酸、脯氨酸含有絲氨酸、亮氨酸、脯氨酸各各4mg/ml4mg/ml的氨基酸溶液，以及上述四種氨基酸的的氨基酸溶液，以及上述四種氨基酸的混合液混合液( (各各4mg/ml)4mg/ml)。3. 3. 茚三酮茚三酮 按展層劑按展層劑0.25%0.25%的比例將茚三酮加入展層劑的比例將茚三酮加入展層劑中，使其溶解。中，使其溶解。 實驗器材 1. 1.層析缸層析缸 2. 2. 點樣毛細管點樣毛細管 3. 3.

8、小燒杯小燒杯 4. 4. 培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿 5. 5. 量筒量筒 6. 6. 噴霧器噴霧器 7. 7. 吹風機或烘箱）吹風機或烘箱） 8. 8. 層析濾紙層析濾紙 9. 9. 直尺及鉛筆直尺及鉛筆四、實驗步驟四、實驗步驟1.1.準備濾紙：取寬約準備濾紙：取寬約16cm16cm、高約、高約16cm16cm的層析的層析濾紙一張。在紙的下端距邊緣濾紙一張。在紙的下端距邊緣2cm2cm處用鉛筆劃處用鉛筆劃一直線一直線A A，在直線上做，在直線上做5 5個記號，記號之間間個記號，記號之間間隔隔2cm2cm，標出，標出5 5個點，這就是原點的位置。另個點，這就是原點的位置。另在距左邊緣在距左邊緣1cm1cm處

9、畫一條平行于左邊緣的直線處畫一條平行于左邊緣的直線B B，在，在B B線上以線上以A A、B B兩線的交點為原點標明刻兩線的交點為原點標明刻度以厘米為單位）。度以厘米為單位）。2.2.點樣：用毛細管將各氨基酸樣品點在點樣：用毛細管將各氨基酸樣品點在5 5個原點個原點上，用量上，用量101020l20l，每點在紙上擴散的直徑，每點在紙上擴散的直徑，最大不超過，最大不超過3 mm3 mm，邊點樣邊用電吹風吹干，邊點樣邊用電吹風吹干，越小越好。干后再點一次。，越小越好。干后再點一次。3.3.層析：將平衡好的濾紙，放入層析缸底部接層析：將平衡好的濾紙，放入層析缸底部接觸展層劑液面，展層劑不可浸沒樣點，

10、展層觸展層劑液面，展層劑不可浸沒樣點，展層劑到達濾紙頂部邊緣約劑到達濾紙頂部邊緣約0.5cm0.5cm處停止層析層處停止層析層析時間析時間2h2h左右）。然后取出層析濾紙，標好左右）。然后取出層析濾紙，標好前沿，放入烘箱中前沿，放入烘箱中4545烘干。烘干。4 4顯色顯色 用噴霧器均勻噴上用噴霧器均勻噴上0 0。1 1茚三酮正丁茚三酮正丁醇溶液，然后置烘箱中烘烤醇溶液，然后置烘箱中烘烤5 5分鐘分鐘(100)(100)或或用熱風吹干即可，濾紙上即顯出紫紅色或黃用熱風吹干即可，濾紙上即顯出紫紅色或黃色的氨基酸斑點。色的氨基酸斑點。5 5計算各種氨基酸的計算各種氨基酸的RfRf值。值。五、本卷須知

11、五、本卷須知u在操作過程中，手不要摸濾紙。在操作過程中，手不要摸濾紙。u點樣直徑不超過點樣直徑不超過3mm 3mm 。u點樣的一端朝下點樣的一端朝下, , 擴展劑的液面需低于點擴展劑的液面需低于點樣線樣線1cm1cm。u即時取出濾紙即時取出濾紙, , 以免出現(xiàn)氨基酸層析跑到以免出現(xiàn)氨基酸層析跑到濾紙的外面不能檢測。濾紙的外面不能檢測。吸樣后的毛細管要垂直落在層析紙點樣處，樣點大小要基本一致；樣點不要浸在展開劑中；噴顯色劑時，使層析紙濕潤即可，切勿流淌，并迅速吹干；在層析紙制作、點樣、顯色、吹干及 值測定等操作過程中，手只能拿在最上端，以防被手沾污。六、思考題六、思考題層析紙上的樣品斑點浸在展開劑中是否層析紙上的樣品斑點浸在展開劑中是否可以