15189實驗室認可程序之檢驗方法選擇和評審程序

1、檢驗方法選擇和評審程序1 目的規(guī)范檢驗方法的選擇和評審程序，采用權(quán)威或者已被同行公認的方法對實驗室使用的檢驗方法進行評價、確認、核實，并根據(jù)評審結(jié)果對檢驗方法不斷改進，保證所選用的檢驗方法和檢驗程序能滿足實驗室服務(wù)對象的需要，確認其符合相應(yīng)的用途。2 適用范圍實驗室使用的檢驗方法。3 職責(zé)3.1 技術(shù)負責(zé)人和各專業(yè)組組長共同負責(zé)檢驗方法評審和選擇。3.2 各專業(yè)組組長負責(zé)組織本組工作人員對所選方法的驗證確認。4 定義和術(shù)語4.1 標準檢測方法簡稱標準方法,是指衛(wèi)生標準、技術(shù)標準或檢測工作規(guī)范中明確規(guī)定必須采用的檢測方法，并具有檢測方法名稱和標準文號。4.2 非標準檢測方法指衛(wèi)生標準、技術(shù)標準和

2、檢測工作規(guī)范中未明確規(guī)定而可以由檢測機構(gòu)自行選擇的檢測方法。非標準方法可以是權(quán)威機構(gòu)發(fā)布的方法，或有關(guān)科技文獻、雜志、教科書上發(fā)表的方法。4.3 自編（建）方法實驗室根據(jù)工作需要自行設(shè)計開發(fā)的檢測方法。4.4 評價實驗室自行研究或開發(fā)了一個新的檢測系統(tǒng)或方法，或自行改變或組合檢測系統(tǒng)（如在“開放”儀器上或原檢測系統(tǒng)上，實驗室自行換用試劑和或校準品、任意修改操作程序等），為了使方法的檢驗結(jié)果符合臨床要求，必須對方法的不精密度、不準確度、病人結(jié)果線性范圍、分析靈敏度、分析特異性（干擾）、參考區(qū)間等6大基本性能逐一進行實驗評估，以實驗資料說明檢測系統(tǒng)的可靠性。4.5 確認通過提供客觀證據(jù)對特定的預(yù)期

3、用途或應(yīng)用要求已得到滿足的認定。4.6 核實實驗室準備采用的檢測系統(tǒng)，己被許多實驗室廣泛應(yīng)用，實驗室期望核實該系統(tǒng)能不能被認可，進行的評估為核實實驗。通過實驗至少應(yīng)說明檢測系統(tǒng)可以得到廠商報告一致的不精密度和不準確度，也能和檢測系統(tǒng)其他用戶的性能一致。4.7 檢出限：給定分析程序具有適當(dāng)?shù)拇_定檢出的分析物的最小濃度或量。4.8 分析靈敏度：為校準曲線的斜率及對于規(guī)定量的變化分析程序產(chǎn)生信號的變化。4.9功能靈敏度：以天間重復(fù)CV為20%時對應(yīng)檢測限樣品具有的平均濃度，確定為檢測系統(tǒng)或方法可定量報告分析物的最低濃度或其他量值的限值。4.10 分析干擾：廣義上是某一物質(zhì)對某分析物測量準確度的影響。

4、4.11 生物參考區(qū)間：參考值分布的95%中心區(qū)間。4.12 精密度：在規(guī)定條件下，獨立測試結(jié)果間的一致程度。4.13 批內(nèi)精密度：在重復(fù)性條件測得的精密度。4.14 批間精密度：在本標準中特指在同一實驗室，由同一（組）操作員在同一儀器上，使用同一方法和同種、同一批號試劑，在一段時間內(nèi)（一般為一個月或20個工作日）對同一測試樣品（常用質(zhì)控品）測量結(jié)果的精密度。4.15 正確度：由大量測試結(jié)果得到的平均數(shù)與接受參照值間的一致程度。5 檢測方法選擇工作程序5.1 檢測方法的選擇5.1.1 實驗室應(yīng)根據(jù)服務(wù)對象的需要以及檢驗科開展的業(yè)務(wù)情況，合理選擇使用檢測方法，并確保所使用的檢測方法能夠達到實驗室

5、質(zhì)量體系的要求。當(dāng)實驗室更改檢驗方法或服務(wù)對象對檢測方法有疑問時，實驗室應(yīng)通知服務(wù)對象并說明理由。5.1.2 為了確保檢測結(jié)果的準確性，實驗室應(yīng)優(yōu)先選擇標準檢測方法。若無標準檢測方法，實驗室應(yīng)首先使用在己出版的公認權(quán)威教科書中、經(jīng)同行評議的書刊或雜志中，或國際、國家或地區(qū)的法規(guī)中所明確的程序（方法）。如果應(yīng)用的是內(nèi)部的規(guī)程，則應(yīng)確認其符合相應(yīng)的用途并形成文件。5.1.3 實驗室所采用的檢測方法應(yīng)保持最新有效版本，并現(xiàn)行受控。對檢測方法性能進行驗證確認時，所有驗證試驗都必須在驗證項目室內(nèi)質(zhì)控在控的情況下進行。5.2 方法的證實確認實驗室采用非標準方法時，應(yīng)對所選用的方法采取以下措施之一或其組合進

6、行證實和確認：a）使用參考標準或標準物質(zhì)進行校準；b）與其它方法所得的結(jié)果進行比較；C）實驗室之間的比對；d）對影響結(jié)果的因素作系統(tǒng)評審；e）根據(jù)對方法的理論原理和實踐經(jīng)驗的科學(xué)理解，對所得結(jié)果不確定度進行的評定。5.3 精密度評估實驗操作要點和要求5.3.1批內(nèi)精密度是眾多種類精密度中最基本的一個，因為它是在最嚴格的相似條件下，所得到的最佳的精密度。當(dāng)比較不同實驗室工作的質(zhì)量時，批內(nèi)精密度是衡量實驗室質(zhì)量管理的一個量化數(shù)據(jù)，也是可比的指標之一；批間精密度特指在同一實驗室，由同一（組）操作者在同一儀器上，使用同一方法和同種、同一批號試劑，在一段時間內(nèi)（一般為一個月或20個工作日）對同一樣品（常

7、為質(zhì)控品）測量結(jié)果的精密度。這與實際室內(nèi)質(zhì)控工作條件相近似；在測量批內(nèi)和批間精密度時，實驗室往往是在本實驗室的最佳或最適條件下進行，以期獲得最理想的精密度。最適或最佳條件包括如下方面，但不只限于如下條件：a）操作者必須熟悉方法和/或儀器工作原理，了解并掌握儀器的操作步驟和各項注意事項。能在評估階段維持儀器的可靠和穩(wěn)定；b）操作者應(yīng)該熟悉和掌握方法的標準操作程序（StandardOperationProcedure,SOP）,能夠嚴格按照每一操作步驟進行操作，保證每一操作步驟維持在合理的變異范圍內(nèi)；c）管理人員應(yīng)確信操作者會正確地進行校準和掌握質(zhì)量控制的方法和規(guī)則，知道在什么情況屬于失控，所測數(shù)

8、據(jù)無效；d）對儀器進行一次全面維護，必要時更換新的零部件。系統(tǒng)地檢查儀器性能，確認達到要求；e）檢查方法和/或儀器近期的室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)評結(jié)果，確認達到要求；f）檢查該儀器近期的校準記錄，確認達到要求；g）實驗數(shù)據(jù)數(shù)目要合適，要足夠多；h）選用可靠的統(tǒng)計學(xué)方法分析數(shù)據(jù)，并得出合理的結(jié)論。5.3.2評估方案（一）5.3.2.1 每天作2個批次的測試，每批測試時，對同一樣品作雙份測量，共做20天。這樣評估結(jié)束時將共有40對，即80個測試結(jié)果。從40批次測量中雙份結(jié)果的差值求出批內(nèi)精密度。從所有80個數(shù)據(jù)計算出批間精密度。（注：也可以一日進行一個批次測量，一個批次中對同一樣品重復(fù)測量4次，共測20個

9、工作日，由80個數(shù)據(jù)求出批內(nèi)和批間精密度；如果取得穩(wěn)定樣品有困難，也可改為測5日，每日二個批次，每個批次測一個標本八次。仍有80個數(shù)據(jù)。從十個批次中每一樣品八次差異算出批內(nèi)精密度。從所有80個結(jié)果計算出批間精密度。）5.3.2.2在實施此項評估工作時，必須由同一個或一組操作者在同一臺儀器上進行，應(yīng)該使用相同的校準品、相同種類和批號的試劑。所用時間不得少于20個工作日，這樣所測到的精密度能更好地反映出在該臨床實驗室定量測量方法在一段時間內(nèi)的理想或最適的穩(wěn)定性。5.3.2.3評估試驗中，實驗用的樣品一定要穩(wěn)定；它的基本組成應(yīng)盡可能相似于實際檢測的病人標本，一般常采用臨床實驗室收集的穩(wěn)定和冷凍貯存的

10、血清（漿）庫;當(dāng)實驗室收集的樣品不穩(wěn)定或不易得到時，也可考慮使用穩(wěn)定的、以蛋白質(zhì)為基質(zhì)的商品，如廠家的校準品和質(zhì)控品。必須至少評估高低二個濃度的精密度，當(dāng)二個濃度的精密度有顯著差異時，建議增加為三個濃度。樣品中的分析物含量應(yīng)在該項目的醫(yī)學(xué)決定水平處，或者在有臨床意義的水平。如沒有醫(yī)學(xué)決定水平，可在參考區(qū)間上限左右選一個濃度。此外再根據(jù)檢驗項目的性質(zhì)在線性區(qū)間內(nèi)選擇一個值；如果對公司的檢測系統(tǒng)作實驗證實或核實，則選取的樣品分析物含量應(yīng)盡量與公司對檢測系統(tǒng)性能評估時采用的含量一致，便于比較；5.3.2.4在每一批次測量中，必須同時測量質(zhì)控品，以保證結(jié)果是可靠的，數(shù)據(jù)能夠采用。5.3.3評估方案實施

11、評估精密度的時間較長，應(yīng)在開始后3-5日，對所得實驗室的結(jié)果進行初步評估。如初歩所得精密度結(jié)果達到預(yù)期目的，則繼續(xù)完成剩余測試工作。但如果有些批次結(jié)果不理想，數(shù)值出現(xiàn)明顯差異，達不到預(yù)期目的，此3-5日的數(shù)據(jù)可除去不用。應(yīng)尋找產(chǎn)生差異的原因，并進行糾正，直到達到預(yù)期目的，再開始下一次的實驗。不僅要觀察最初3-5日的數(shù)據(jù)，以決定是否繼續(xù)評估實驗。在其后每隔3-5日，同樣應(yīng)該對這期間的數(shù)據(jù)進行整理和檢查，檢查質(zhì)控結(jié)果是否在在控范圍，評估實驗數(shù)據(jù)分散度是否太大或出現(xiàn)趨向性的變化。有必要時可以停止評估試驗，待解決問題后再重新開始。5.3.4數(shù)據(jù)的收集和計算5.3.4.1要收集到足夠有效數(shù)據(jù)（至少為80

12、個數(shù)據(jù)）。除補充由于質(zhì)控失控而增加的測試外，應(yīng)在進行數(shù)據(jù)分析前，檢查數(shù)據(jù)中有無由于偶然差錯引起的離群值（outlier）,可用下述剔除值的標準；從實施段已收集的40對均值的數(shù)據(jù)計算出總均值和標準差，出現(xiàn)下列任何一種情況都可認為是離群值：a）任何一對均值和總均值的差超過4倍標準差b）任何一對中二個結(jié)果的絕對差值超過4倍標準差c）離群值不用于精密度的計算。在剔除后應(yīng)再增加檢驗次數(shù)，以保證至少有40批次，80個數(shù)據(jù)進行計算。注：任何一次實驗的剔除值不能超過總測量數(shù)的2.5%。當(dāng)超過時，應(yīng)懷疑是否為方法不穩(wěn)定或操作者不熟悉所致。此時應(yīng)不用此次試驗數(shù)據(jù)，重新開始新的試驗。必須保留任何剔除值和室內(nèi)質(zhì)控失控

13、的記錄。5.3.4.2 根據(jù)以下統(tǒng)計學(xué)方法計算精密度：a）求出批內(nèi)精密度Sr使用下列公式S=送（xX）2/41r12式中I表示檢驗日數(shù)S（XX）2/（n1）b）求出批間精密度，公式為：療I°j式中n表示檢驗總數(shù)5.3.5 數(shù)據(jù)分析計算批內(nèi)和批間精密度，1/4生物學(xué)變異與分析質(zhì)量要求允許總誤差為批內(nèi)不精密度判斷限，1/3生物學(xué)變異與分析質(zhì)量要求允許總誤差為批間不精密度判斷限。小于或等于判斷限的，檢測系統(tǒng)的不精密度屬可接受；大于判斷限的，表示不精密度不符合要求。也可與廠家聲明的精密度性能指標進行比較，實驗所得精密度至少應(yīng)達到廠家的要求。5.3.6 評估方案（二）對檢測系統(tǒng)的精密度驗證，各

14、專業(yè)組可根據(jù)實際情況選擇以下簡化方案：5.3.6.1 批內(nèi)精密度評估：在最短時間（常是在同一測量批次內(nèi)）對同一樣品測量20次（血細胞分析儀檢測項目、尿干化學(xué)分析儀檢測項目等可測量10次即可），由此計算出批內(nèi)精密度，計算標準差、變異系數(shù)。5.3.6.2 批間精密度評估：利用20天的室內(nèi)質(zhì)控在控數(shù)據(jù)計算標準差、變異系數(shù)。5.3.6.3 其他要求同第一種評估方案5.3.7 如果在一個分析系統(tǒng)上可以做多個項目的檢測，千萬不可用一個項目組成的檢測系統(tǒng)來評價所有項目，必須對認可項目的所有檢測系統(tǒng)性能進行評價。5.4 正確度驗證實驗操作要點和要求實驗室準備用一個新的檢測系統(tǒng)或測定方法（或新的試劑盒、新儀器）

15、，在進行病人標本測定前，應(yīng)與原有的檢測系統(tǒng)或公認的參考方法一起檢測一批病人標本（一般至少30個以上的標本），從測定結(jié)果的差異了解新檢測系統(tǒng)或方法引入后的偏倚，如果偏倚在允許的誤差范圍內(nèi)，說明新檢測系統(tǒng)或方法替代原有檢測系統(tǒng)或方法不會對臨床引起明顯偏倚，目前較為常用的方法是通過比對試驗和衛(wèi)生部室間質(zhì)評、福建省室間質(zhì)評及南京軍區(qū)室間質(zhì)評活動對檢測系統(tǒng)的正確度進行驗證。如允許，正確度驗證的樣本數(shù)至少在30個以上，實驗操作要點和要求參照實驗室間及實驗室內(nèi)部比對程序。5.5 定量測定方法的線性評價實驗操作要點和要求5.5.1實驗操作要點與要求5.5.1.1進行線性評價實驗的樣品必須與真實標本盡可能相似，

16、也要與真實標本具有相同的基體狀態(tài)。5.5.1.2最好有5個或以上的系列濃度的實驗樣品，濃度范圍遍及整個預(yù)期線性范圍。最高濃度的標本應(yīng)達到線性范圍的上限。各實驗樣品內(nèi)分析物濃度呈等比例關(guān)系，不要呈倍比關(guān)系。5.5.1.3若能收到含低濃度分析物的病人樣品（如血清），將外觀澄清的混合樣品離心，一分為二。在一份混合樣品中加入高濃度分析物貯存液，加入體積不得超過混合樣品體積的1/10，但又可使樣品中分析物濃度達到高限，充分混勻后為高值（H）樣品。在另一份混合樣品中加入配制分析物貯存液的溶劑，加入量等于前一份樣品中加入的貯存液體積，充分混勻后為低值（L）樣品。將H和L樣品按：5L,4L+1H,3L+2H,

17、2L+3H,1L+4H,5H關(guān)系各自配制混合，形成系列評價樣品。5.5.1.4若收不到低值樣品，可收集高值樣品，用生理鹽水作系列不同程度稀釋，形成系列評價樣品。5.5.1.5一天內(nèi)做兩次實驗，第一次實驗由低到高重復(fù)測定1次，第二次實驗由高到低重復(fù)測定1次，即每個實驗樣品做2次重復(fù)測定。綜合所有結(jié)果作統(tǒng)計學(xué)處理。5.5.2判斷線性范圍的統(tǒng)計處理5.5.2.1檢測系統(tǒng)或測定方法經(jīng)校準后，對線性范圍實驗的低、高限值樣品做多次測定，以均值表示該兩個樣品測定結(jié)果。依照其它線性范圍實驗樣品配置稀釋關(guān)系，可以計算出各自實驗樣品內(nèi)含分析物的濃度，為這些樣品的預(yù)期值。將這些樣品再經(jīng)過檢測系統(tǒng)或測定方法檢測，得到

18、各檢測值。按試驗要求，每個樣品做2次重復(fù)測定，得到2個實測值，它們和預(yù)期值形成2對預(yù)期值、實測值。5.5.2.2在坐標紙上，以X表示各樣品的預(yù)期值，以Y表示各樣品的實測值，將所在試驗結(jié)果點在圖上。5.5.2.3 若所有試驗點在坐標紙上呈明顯的直線趨勢，用直線回歸對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，得到回歸方程Y=bX+a，若b在0.971.03范圍內(nèi)，a接近于0,則可直接判斷測定方法線性范圍在實驗已涉及濃度。5.5.2.4若b不在0.971.03范圍內(nèi)，a較大，試著舍去某組數(shù)據(jù)，另作回歸統(tǒng)計。若縮小分析范圍后，回歸式有明顯改善，b接近于1,a趨于0。此時，縮小的分析范圍是真實的線性范圍。5.6 定量檢測方法可報告

19、范圍評價試驗操作要點及要求5.6.1 在臨床檢測過程中，對于一些檢測項目在臨床樣本中基本上不會超出檢測系統(tǒng)線性范圍上限，無需稀釋后檢測，故可報告范圍直接引用線性范圍即可。5.6.2 在臨床檢測過程中，對于一些檢測項目在臨床中容易出現(xiàn)超出檢測系統(tǒng)線性范圍上限的樣本時，則需要對該檢測項目檢測有效稀釋度進行驗證，通常采用稀釋回收試驗，即取線性范圍內(nèi)的高值樣本，用生理鹽水進行1：2，1：5，1：10，1：20稀釋，每個樣本檢測兩次求均值，計算回收率，回收率在95%-105%區(qū)間內(nèi)的最大稀釋度即為該檢測項目的有效稀釋度。該項目可報告范圍=線性范圍X有效稀釋度。5.7 最低檢測限驗證實驗操作要點和要求最低

20、檢測限驗證一般用于低值具有重要臨床意義的檢測項目，實驗室可根據(jù)實際情況選擇性開展。其方法為：5.7.1 樣品采用檢測項目所要求的稀釋液、生理鹽水或蒸餾水為檢測標本。5.7.2 試劑和校準品要求在整個評估階段，盡可能使用相同條件，應(yīng)使用同一種類同一批號的試劑和校準物,如有可能,只進行一次校準。使用不同批號試劑和多次校準都會增加檢驗結(jié)果的變異程度5.7.3 質(zhì)量控制檢驗時應(yīng)同時至少測一個質(zhì)控品。當(dāng)質(zhì)控品結(jié)果超出規(guī)定的失控限，不論實驗結(jié)果是否滿意都應(yīng)棄去不用，重新進行試驗。要保存所有的質(zhì)控數(shù)據(jù)和失控處理記錄。5.7.4 評估方法5.7.4.1計算空白限(LoB)每個項目用空白液按常規(guī)步驟進行至少60

21、次檢測，將檢測值由小到大排列，第95百分位數(shù)的均數(shù)即LoB,LoB=Pct。B100-a5.7.4.2計算檢出限(LoD)收集濃度在14倍LoB范圍內(nèi)的標本6份，每份按一天兩次檢測五天，每個項目共測60次。計算6個濃度樣品的綜合標準差，SD2=(n1SD12+n2SD22+-+n6SD62)/(n1+n2+n3+n4+n5+n6),LoD=LoB+SD*C(C為標準正態(tài)分布第95百分位數(shù)值的校正因子，=1.645/(1-1/4f),其中f為綜合標準差的自由度，f=N-低濃度水平數(shù)=60-5),從而得出每個項目的檢出限。5.7.5 數(shù)據(jù)收集記錄全部試驗數(shù)據(jù)。5.8 生物參考區(qū)間評審檢驗科應(yīng)定期評

22、審實驗室檢測項目的生物參考區(qū)間，當(dāng)檢驗科用一個新的檢測系統(tǒng)或新的測定方法測定病人標本，如果檢驗科有理由可以相信某一特定參考區(qū)間對參考人群不再適用，則也需對生物參考區(qū)間進行評審。參考區(qū)間評價實驗操作要點和要求參照生物參考區(qū)間評審程序。6 檢驗方法評審程序6.1 評審頻次評審每年進行一次，如某檢測項目的檢測程序發(fā)生重大變化或出現(xiàn)重要情況，各專業(yè)實驗室負責(zé)人可隨時申請該檢測項目檢驗程序的評審。6.2 評審內(nèi)容6.2.1 上次檢驗程序評審的執(zhí)行情況；6.2.2 病人和臨床醫(yī)護部門對某檢測項目的意見或建議；6.2.3 與檢測項目有關(guān)的學(xué)術(shù)進展，是否有更好的替代實驗；6.2.4 檢測項目給病人、臨床醫(yī)護部門帶來的經(jīng)濟負擔(dān)，以及給科室?guī)淼慕?jīng)濟效益；6.2.5 檢測項目的應(yīng)用范圍是否合適，檢測項目是否出現(xiàn)新的局限性；6.2.6 檢驗申請單的書寫格式是否需要變動；6.2.7 檢測項目所需標本的采集方式及量是否合適；6.2.8 標本運送、保存、處理中存在的問題；6.2.9 檢測項目所需設(shè)備和試劑是否合適，是否需要變更；6.2.10 設(shè)備與試劑的校準情況，檢測結(jié)果的溯源情況；6.2.11 檢測項目的室間質(zhì)量評價和室內(nèi)質(zhì)量控制情