藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則

1、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則中國藥典2015年版藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證的目的是證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測要求。在建立藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，分析方法需經(jīng)驗(yàn)證；在藥品生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)，則質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法也需進(jìn)行驗(yàn)證。方法驗(yàn)證理由、過程和結(jié)果均應(yīng)記載在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)起草說明或修訂說明中。生物制品質(zhì)量控制中采用的方法包括理化分析方法和生物學(xué)測定方法其中理化分析方法的驗(yàn)證原則與化學(xué)藥品基本相同，所以可參照本指導(dǎo)原則進(jìn)行，但在進(jìn)行具體驗(yàn)證時(shí)還需要結(jié)合生物制品的特點(diǎn)考慮；相對于理化分析方法而言，生物學(xué)測定方法存在更多的影響因素，因此本指導(dǎo)原則不涉及生物學(xué)測定方法驗(yàn)證的內(nèi)容。

2、驗(yàn)證的分析項(xiàng)目有：鑒別試驗(yàn)、限量或定量檢查、原料藥或制劑中有效成分含量測定，以及制劑中其他成分（如防腐劑等，中藥中其他殘留物、添加劑等）的測定。藥品溶出度、釋放度等檢查中，其溶出量等的測定方法也應(yīng)進(jìn)行必要驗(yàn)證。驗(yàn)證指標(biāo)有：準(zhǔn)確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍和耐用性。在分析方法驗(yàn)證中，須采用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)。由于分析方法具有各自的特點(diǎn)，并隨分析對象而變化，因此需要視具體方法擬訂驗(yàn)證的指標(biāo)。表1中列出的分析項(xiàng)目和相應(yīng)的驗(yàn)證指標(biāo)可供參考。表1檢驗(yàn)項(xiàng)目和驗(yàn)GE指標(biāo)項(xiàng)目內(nèi)容鑒捌雜質(zhì)測定1含st測定及溶岀量測定校正國于限度十精密痰重規(guī)性一十+十中間精密度十

3、f專屬性+檢測限1比；11十線性十+丄十+十耐用性十 巳有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度 如一種方法不骸專屬，可用其他分析方法予以補(bǔ)充. 視具體情況予以驗(yàn)證.一、準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指采用該方法測定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度一般用回收率（）表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定。1. 化學(xué)藥含量測定方法的準(zhǔn)確度原料藥采用對照品進(jìn)行測定，或用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法測定的結(jié)果進(jìn)行比較。制劑可在處方量空白輔料中，加入已知量被測物對照品進(jìn)行測定。如不能得到制劑輔料的全部組分，可向待測制劑中加入已知量的被測物對照品進(jìn)行測定或用所建立方法的測定結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一種方法測定結(jié)果進(jìn)行比較。準(zhǔn)確度也

4、可由所測定的精密度、線性和專屬性推算出來。2. 化學(xué)藥雜質(zhì)定量測定的準(zhǔn)確度可向原料藥或制劑處方量空白輔料中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測定。如不能得到雜質(zhì)或降解產(chǎn)物對照品，可用所建立方法測定的結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較，如藥典標(biāo)準(zhǔn)方法或經(jīng)過驗(yàn)證的方法。在不能測得雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的校正因子或不能測得對主成分的相對校正因子的情況下，可用不加校正因子的主成分自身對照法計(jì)算雜質(zhì)含量。應(yīng)明確表明單個(gè)雜質(zhì)和雜質(zhì)總量相當(dāng)于主成分的重量比（%）或面積比（）。3中藥化學(xué)成分測定方法的準(zhǔn)確度可用對照品進(jìn)行加樣回收率測定即向已知被測成分含量的供試品中再精密加入一定量的被測成分對照品，依法測定。用實(shí)測值與供試品中含有量之差，除

5、以加入對照品量計(jì)算回收率，在加樣回收試驗(yàn)中須注意對照品的加入量與供試品中被測成分含有量之和必須在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍之內(nèi)；加入對照品的量要適當(dāng)，過小則引起較大的相對誤差，過大則干擾成分相對減少，真實(shí)性差。回收率%=（C-A）/BX100%式中A為供試品所含被測成分量；B為加入對照品量；C為實(shí)測值。4.校正因子的準(zhǔn)確度對色譜方法而言，絕對（或定量）校正因子是指單位面積的色譜峰代表的待測物質(zhì)的量。待測定物質(zhì)與所選定的參照物質(zhì)的絕對校正因子之比，即為相對校正因子。相對校正因子計(jì)算法常應(yīng)用于化學(xué)藥有關(guān)物質(zhì)的測定、中藥材及其復(fù)方制劑中多指標(biāo)成分的測定。校正因子的表示方法很多，本指導(dǎo)原則中的校正因子是指氣相色

6、譜法和高效液相色譜法中的相對重量校正因子。相對校正因子可采用替代物（對照品）和被替代物（待測物）標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率比值進(jìn)行比較獲得；采用紫外吸收檢測器時(shí)，可將替代物（對照品）和被替代物（待測物）在規(guī)定波長和溶劑條件下的吸收系數(shù)比值進(jìn)行比較，計(jì)算獲得。5.數(shù)據(jù)要求在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（相當(dāng)于100%濃度水平）的供試品，用至少測定6份樣品的結(jié)果進(jìn)行評價(jià)；或設(shè)計(jì)3種不同濃度，每種濃度分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測定，用9份樣品的測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。對于化學(xué)藥，一般中間濃度加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1：1左右，建議高、中、低濃度對照品加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.2:1，1:

7、1，0.8:1左右，應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率（），或測定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差或置信區(qū)間（置信度一般為95%）；對于中藥，一般中間濃度加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1:1左右，建議高、中、低濃度對照品加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.5：1,1:1，0.5:1左右，應(yīng)報(bào)告供試品取樣量、供試品中含有量、對照品加入量、測定結(jié)果和回收率（）計(jì)算值，以及回收率（）的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）或置信區(qū)間。對于校正因子，應(yīng)報(bào)告測定方法、測定結(jié)果和RSD%。樣品中待測定成分含量和回收率限度關(guān)系可參考表2。在基質(zhì)復(fù)雜、組分含量低于0.01%及多成分等分析中，回收率限度可適

8、當(dāng)放寬。衰2枠品申椿測定戰(zhàn)分含量和回收率PR度特測定成分含雄回收率隈度S100%9810?10%93102眈】050.%90-1080.01%(ppm)80-1157512010p.g/k£(ppb)北125二、精密度精密度系指在規(guī)定的條件下，同一份均勻供試品，經(jīng)多次取樣測定所得結(jié)果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測定所得結(jié)果的精密度稱為重復(fù)性；在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果之間的精密度，稱為中間精密度在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測定結(jié)果之間的精密度稱為重現(xiàn)性。含量測定和雜質(zhì)的定量測定應(yīng)考察方法的精密

9、度。1. 重復(fù)性在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一濃度（相當(dāng)于100%濃度水平）的供試品，用至少測定6份的結(jié)果進(jìn)行評價(jià)；或設(shè)計(jì)3種不同濃度，每種濃度分別制備3份供試品溶液進(jìn)行測定，用9份樣品的測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)。采用9份測定結(jié)果進(jìn)行評價(jià)時(shí)，對于化學(xué)藥，一般中間濃度加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1:1左右，建議高、中、低濃度對照品加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.2:1，1:1，0.8:1左右，對于中藥，一般中間濃度加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1：1左右，建議高、中、低濃度對照品加入量與所取供試品中待測定成分量之比控制在1.5:1，1:1，0.5:1左右。2中間精密度考察隨

10、機(jī)變動(dòng)因素如不同日期、不同分析人員、不同儀器對精密度的影響，應(yīng)設(shè)計(jì)方案進(jìn)行中間精密度試驗(yàn)。3. 重現(xiàn)性國家藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用的分析方法，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)，如通過不同實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)獲得重現(xiàn)性結(jié)果。協(xié)同檢驗(yàn)的目的、過程和重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說明中。應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)用樣品質(zhì)量的一致性及貯存運(yùn)輸中的環(huán)境對該一致性的影響，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果。數(shù)據(jù)要求均應(yīng)報(bào)告偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對標(biāo)準(zhǔn)偏差或置信區(qū)間。樣品中待測定成分含量和精密度可接受范圍參考表3。在基質(zhì)復(fù)雜、含量低于0.01%及多成分等分析中，精密度接受范圍可適當(dāng)放寬。*3樣品中特測定成分含和精密度可接亜范圍待測魁咸分含址重宣性（RSD%）重現(xiàn)性CRSD）1

11、EXJ騎1210%1.531%2斗50.01%4g(ppm)11ifie/g81610p.g/kg(ppb)15三、專屬性專屬性系指在其他成分（如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等）存在下，采用的分析方法能正確測定被測物的能力。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查和含量測定方法，均應(yīng)考察其專屬性。如方法專屬性不強(qiáng)，應(yīng)采用多種不同原理的方法予以補(bǔ)充。1. 鑒別反應(yīng)應(yīng)能區(qū)分可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物。不含被測成分的供試品，以及結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物，應(yīng)均呈陰性反應(yīng)。2. 含量測定和雜質(zhì)測定采用色譜法和其他分離方法，應(yīng)附代表性圖譜，以說明方法的專屬性，并應(yīng)標(biāo)明各成分在圖中的位置，色譜法中的分離度應(yīng)符合要求。在雜質(zhì)對照品

12、可獲得的情況下，對于含量測定，試樣中可加入雜質(zhì)或輔料，考察測定結(jié)果是否受干擾，并可與未加雜質(zhì)或輔料的試樣比較測定結(jié)果。對于雜質(zhì)檢查，也可向試樣中加入一定量的雜質(zhì)，考察各成分包括雜質(zhì)之間能否得到分離。在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可將含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣進(jìn)行測定，與另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證了的方法或藥典方法比較結(jié)果。也可用強(qiáng)光照射、高溫、高濕、酸（堿）水解或氧化等方法進(jìn)行加速破壞，以研究可能存在的降解產(chǎn)物和降解途徑對含量測定和雜質(zhì)測定的影響。含量測定方法應(yīng)比對兩種方法的結(jié)果，雜質(zhì)檢查應(yīng)比對檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)，必要時(shí)可采用光二極管陣列檢測和質(zhì)譜檢測，進(jìn)行峰純度檢查。四、檢測限檢測限系指試樣中被測物能被檢測

13、出的最低量。藥品的鑒別試驗(yàn)和雜質(zhì)檢查方法，均應(yīng)通過測試確定方法的檢測限。檢測限僅作為限度試驗(yàn)指標(biāo)和定性鑒別的依據(jù)，沒有定量意義。常用的方法如下。1. 直觀法用已知濃度的被測物，試驗(yàn)出能被可靠地檢測出的最低濃度或量。2. 信噪比法用于能顯示基線噪聲的分析方法即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，計(jì)算出能被可靠地檢測出的被測物質(zhì)最低濃度或量。一般以信噪比為3:1或2:1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定檢測限。3. 基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法按照LOQ=3.36/S公式計(jì)算。式中LOQ：檢測限；6：響應(yīng)值的偏差；S：標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。6可以通過下列方法測得：測定空白值的標(biāo)準(zhǔn)偏差

14、；標(biāo)準(zhǔn)曲線的剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差或截距的標(biāo)準(zhǔn)偏差來代替。數(shù)據(jù)要求上述計(jì)算方法獲得的檢測限數(shù)據(jù)須用含量相近的樣品進(jìn)行驗(yàn)證。應(yīng)附測定圖譜，說明試驗(yàn)過程和檢測限結(jié)果。五、定量限定量限系指試樣中被測物能被定量測定的最低量其測定結(jié)果應(yīng)符合準(zhǔn)確度和精密度要求。對微量或痕量藥物分析、定量測定藥物雜質(zhì)和降解產(chǎn)物時(shí)，應(yīng)確定方法的定量限。常用的方法如下。1. 直觀法用已知濃度的被測物，試驗(yàn)出能被可靠地定量測定的最低濃度或量。2. 信噪比法用于能顯示基線噪聲的分析方法即把已知低濃度試樣測出的信號與空白樣品測出的信號進(jìn)行比較，計(jì)算出能被可靠地定量的被測物質(zhì)的最低濃度或量。一般以信噪比為10:1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量

15、限。3. 基于響應(yīng)值標(biāo)準(zhǔn)偏差和標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率法按照LOQ=106/S公式計(jì)算。式中LOQ：定量限；6：響應(yīng)值的偏差；S：標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。6在可以通過下列方法測得：測定空白值的標(biāo)準(zhǔn)偏差；采用標(biāo)準(zhǔn)曲線的剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差或是截距的標(biāo)準(zhǔn)偏差來代替。r.r-t-a卜、數(shù)據(jù)要求上述計(jì)算方法獲得的定量限數(shù)據(jù)須用含量相近的樣品進(jìn)行驗(yàn)證。應(yīng)附測定圖譜，說明測試過程和定量限結(jié)果，包括準(zhǔn)確度和精密度驗(yàn)證數(shù)據(jù)。六、線性線性系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測定響應(yīng)值與試樣中被測物濃度呈比例關(guān)系的程度。應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關(guān)系?？捎猛粚φ掌焚A備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱取對照品，制備一系列對照品溶液的方法進(jìn)行測定，至少制備5份不同濃

16、度的對照品溶液。以測得的響應(yīng)信號對被測物的濃度作圖，觀察是否呈線性，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。必要時(shí)，響應(yīng)信號可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算。或者可采用描述濃度-響應(yīng)關(guān)系的非線性模型。數(shù)據(jù)要求：應(yīng)列出回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖（或其他數(shù)學(xué)模型）。七、范圍范圍系指分析方法能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性要求時(shí)的高低限濃度或量的區(qū)間。范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用及其線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果和要求確定。原料藥和制劑含量測定，范圍一般為測定濃度的80%120%；制劑含量均勻度檢查，范圍一般為測定濃度的70%130%，特殊劑型，如氣霧劑和噴霧劑，范圍可適當(dāng)放寬；溶出度或釋放度中的溶出量測定，范圍一般為限度的土30%，如規(guī)定了限度范圍，則應(yīng)為下限的-20%至上限的+20%；雜質(zhì)測定，范圍應(yīng)根據(jù)初步實(shí)際測定數(shù)據(jù)，擬訂為規(guī)定限度的土20%。如果含量測定與雜質(zhì)檢查同時(shí)進(jìn)行，用峰面積歸一化法進(jìn)行計(jì)算，則線性范圍應(yīng)為雜質(zhì)規(guī)定限度的-20%至含量限度（或上限）的+20%。在中藥分析中，范圍應(yīng)根據(jù)分析方法的具體應(yīng)用和線性、準(zhǔn)確度、精密度結(jié)果及要求確定。對于有毒的、具特殊功效或藥理作用的成分，其驗(yàn)證范圍應(yīng)大于被限定含量的區(qū)間。校正因子測定時(shí)，范圍一般應(yīng)根據(jù)其應(yīng)用對象的測定范圍確定。八、耐用性耐用性系指在測定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測定結(jié)果不受影響的承受程度，為所建立的方法用