第六章芳香酸及其酯類藥物的分析

1、第六章 芳酸及其酯類藥物的分析 一、掌握本類藥物的鑒別反應(yīng)。一、掌握本類藥物的鑒別反應(yīng)。 掌握本類藥物特殊雜質(zhì)檢查方法。掌握本類藥物特殊雜質(zhì)檢查方法。 掌握本類藥物含量測定方法。掌握本類藥物含量測定方法。二、了解本類藥物的結(jié)構(gòu)特征和理化性質(zhì)。二、了解本類藥物的結(jié)構(gòu)特征和理化性質(zhì)。 了解本類藥物體內(nèi)分析方法。了解本類藥物體內(nèi)分析方法。包括：芳酸、芳酸酯、芳酸鹽 共同點：苯環(huán)、羧基共同點：苯環(huán)、羧基 不同點：不同的取代基（如酚羥基、不同點：不同的取代基（如酚羥基、芳伯氨基等）芳伯氨基等） 性質(zhì) （一）物理性質(zhì) （1）固體 具有一定的熔點 （2）溶解性 游離芳酸類藥物幾乎不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑；芳

2、酸堿金屬鹽及其它鹽易溶于水，難溶于有機(jī)溶劑。 （二）化學(xué)性質(zhì) 1. 芳酸具游離羧基，呈酸性，其pKa在36之間，屬中等強度的酸或弱酸； X、NO2、OH等吸電子取代基存在使酸性增強 CH3、NH2等斥電子取代基存在使酸性減弱 鄰位取代間位、對位取代，尤其是鄰位取代了酚羥基，由于形成分子內(nèi)氫健，酸性大為增強 2. 芳酸堿金屬鹽易溶于水，水解，溶液呈堿性，但堿性太弱，所以其含量測定方法為雙相滴定法或非水堿量法。 3. 芳酸酯可水解，利用其水解得到酸和醇的性質(zhì)可進(jìn)行鑒別；利用芳酸酯水解定量消耗氫氧化鈉的性質(zhì)，芳酸酯類藥物可用水解后剩余滴定法測定含量；芳酸酯類藥物還應(yīng)檢查因水解而引入的特殊雜質(zhì)。 4.

3、 UV 5. IR 6. 取代芳酸類藥物可利用其取代基的性質(zhì)進(jìn)行鑒別和含量測定。如具有酚羥基的藥物可用FeCl3反應(yīng)鑒別；具芳伯氨基的藥物可用重氮化偶合反應(yīng)鑒別、亞硝酸鈉滴定法測定含量。 7. 色譜法制劑分析 常見的芳酸及其酯類藥物水楊酸類 COOHOH水楊酸 （pKa2.98）COOOH水楊酸二乙胺(C2H5)2NH2+COOHOCOCH3阿司匹林（pKa3.49）COONaOHNH2對氨基水楊酸鈉?雙水楊酯COOHOOOH貝諾酯貝諾酯OCOCH3COONHCOCH3 1.1.酸性酸性 SA(PKa2.95)SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.49)ASA(PKa3.49)、雙水楊酯均

4、有酸性。、雙水楊酯均有酸性。 2. 溶解性溶解性: 均為固體，有一定溶點。除鈉鹽溶于水，其余不溶。均為固體，有一定溶點。除鈉鹽溶于水，其余不溶。 3. UV和和IR光譜特性：光譜特性：分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán)分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán),有有UV和和IR特征吸收。特征吸收。 4. 芳伯氨基和酚羥基特性：芳伯氨基和酚羥基特性： 5. 水解特性：水解特性：ASA、雙水楊酯及其制劑應(yīng)檢查水楊酸、雙水楊酯及其制劑應(yīng)檢查水楊酸,對氨基水對氨基水 楊酸鈉和貝諾酯檢查間氨基酚和對氨基酚。楊酸鈉和貝諾酯檢查間氨基酚和對氨基酚。主要理化性質(zhì)主要理化性質(zhì)苯甲酸類 苯甲酸（pKa4.20）COOH苯甲酸鈉COONaCH2H2NCO

5、OH氨甲苯酸氨甲苯酸HOCOOC2H5羥苯乙酯羥苯乙酯COOHSO2(CH3CH2CH2)2N丙磺舒（丙磺舒（pKa3.4）NH(CH2)3CH3H2NO2SCOOHO布美他尼布美他尼其他芳酸類藥物 ClO CCH3CH3COOC2H5氯貝丁酯SO3HOHHOHNC2H5C2H5酚磺乙胺酚磺乙胺 1.1.溶解性：溶解性：水中不溶，有機(jī)溶劑溶解，氯貝丁酯為液水中不溶，有機(jī)溶劑溶解，氯貝丁酯為液 體；布洛芬為固體，有一定熔點。體；布洛芬為固體，有一定熔點。 2.UV2.UV和和IRIR特征吸收光譜：特征吸收光譜：基于基于分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán)和分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán)和 特征基團(tuán)。特征基團(tuán)。 具酚羥基或水解

6、后能產(chǎn)生酚羥基的藥物 紫堇色鐵配位化合物6pH43 FeClOHArOHR 直接：水楊酸、對氨基水楊酸鈉、水楊酸、對氨基水楊酸鈉、雙水楊酯、水楊酸二乙胺、酚磺乙胺、雙水楊酯、水楊酸二乙胺、酚磺乙胺、對乙酰氨基酚對乙酰氨基酚 水楊酸水楊酸 ChP（2005）鑒別鑒別 （1）取本品的水溶液，加三取本品的水溶液，加三氯化鐵試液氯化鐵試液1 1滴，即顯紫堇色。滴，即顯紫堇色。 間接：阿司匹林、貝諾酯阿司匹林、貝諾酯 水楊酸阿司匹林 阿司匹林阿司匹林 ChP（2005）鑒別鑒別 （1）取本品約取本品約0.1g，加水，加水10ml，煮沸，放冷，加三氯化鐵試液，煮沸，放冷，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫堇色。滴

7、，即顯紫堇色。赭色苯甲酸（鈉）堿性或中性3FeCl 米黃色鈉鹽丙磺舒3 0 . 60 . 5FeClpHNaOH二、重氮化偶合反應(yīng) 芳香第一胺類鑒別反應(yīng)具芳伯氨基或潛在芳伯氨基具芳伯氨基或潛在芳伯氨基的藥物的藥物 ArNH2HClNaNO2重氮鹽橙黃猩紅色萘酚OH-NH2R 直接：對氨基水楊酸鈉、鹽酸普對氨基水楊酸鈉、鹽酸普魯卡因、苯佐卡因、鹽酸普魯卡因胺魯卡因、苯佐卡因、鹽酸普魯卡因胺 間接：對乙酰氨基酚（撲熱息對乙酰氨基酚（撲熱息痛）、醋氨苯砜、貝諾酯痛）、醋氨苯砜、貝諾酯 三、水解反應(yīng) 醋酸臭氣）水楊酸（白色醋酸鈉水楊酸鈉阿司匹林硫酸 CONa32+OH可溶于醋酸銨（測定熔點），水楊酸白

8、色雙水楊酯稀鹽酸NaOH試紙變蘭色且可使?jié)駶櫟募t色石蕊二乙胺臭氣，酚磺乙胺NaOH 1. 分解產(chǎn)物的反應(yīng) 苯甲酸鹽 苯甲酸苯甲酸鈉42SOH四、特殊反應(yīng)四、特殊反應(yīng)2. 與汞離子及茚三酮反應(yīng)與汞離子及茚三酮反應(yīng) 白色）（氨甲苯酸弱堿性2AcHg藍(lán)紫色茚三酮氨甲苯酸243SOHNO酚磺乙胺 24HNO32SOSONaNaOH3丙磺舒3. 氧化反應(yīng)氧化反應(yīng) 含硫的藥物含硫的藥物4. 異羥肟酸鐵反應(yīng) 紫色異羥肟酸鐵異羥肟酸鹽氯貝丁酯弱酸性鹽酸羥胺 3NaOHFeCl 六、IR 五、UV （1）雜質(zhì)來源 原料殘存（生產(chǎn)過程中乙酰化不完全）、水解產(chǎn)生（貯存過程中水解產(chǎn)生） （2）檢查方法 對照法 反應(yīng)原

9、理 三氯化鐵反應(yīng) 限量 原料：0.1%； 阿司匹林片：0.3%； 阿司匹林腸溶片：1.5%； 阿司匹林栓：1.0%（HPLC法） 其他雜質(zhì)：其他雜質(zhì)：乙酰水楊酸酐（乙酰水楊酸酐（ASAN）、）、乙酰水楊酰水楊酸（乙酰水楊酰水楊酸（ASSA）、水楊）、水楊酰水楊酸（酰水楊酸（SSA） 二、對氨基水楊酸鈉中間氨基酚的檢查 1. 雜質(zhì)來源 原料殘存、脫羧產(chǎn)生原料殘存、脫羧產(chǎn)生 2. 檢查方法 ChP（2005） 含量測定法（雙相滴定法）。含量測定法（雙相滴定法）。 利用對氨基水楊酸鈉不溶于乙醚，利用對氨基水楊酸鈉不溶于乙醚，間氨基酚溶于乙醚的性質(zhì)，使二者分間氨基酚溶于乙醚的性質(zhì)，使二者分離后，在乙醚

10、中加水適量，用鹽酸滴離后，在乙醚中加水適量，用鹽酸滴定，控制鹽酸滴定液體積以控制間氨定，控制鹽酸滴定液體積以控制間氨基酚限量?；酉蘖?。USP（24） 離子對離子對HPLC法（內(nèi)標(biāo)法法（內(nèi)標(biāo)法） 三、雙水楊酯中有關(guān)物質(zhì)的檢查三、雙水楊酯中有關(guān)物質(zhì)的檢查 BP（1998）TLC 水楊酸：雜質(zhì)對照品法水楊酸：雜質(zhì)對照品法有關(guān)物質(zhì)：高低濃度對比法有關(guān)物質(zhì)：高低濃度對比法COONa+HClCOOH+NaCl水乙醚 1. 雜質(zhì)對照品法 方法： 供試品供試品溶液 雜質(zhì)對照品對照品溶液 供試品對照品 判斷：供試品中所含雜質(zhì)斑點大小及顏色不得超過相應(yīng)的雜質(zhì)對照斑點 優(yōu)點：同一物質(zhì)，同一Rf值比較，準(zhǔn)確度高、直

11、觀性強； 缺點：需要雜質(zhì)對照品。 2. 高低濃度對比法 方法： 對照溶液一定量供試品溶液供試品溶液稀釋溶劑溶解S供試品對照品 判斷： 供試品溶液所顯雜質(zhì)斑點不得深于對照溶液的主斑點（或熒光強度） 控制雜質(zhì)斑點個數(shù)，控制雜質(zhì)種類 缺點：不同物質(zhì)，不同Rf值比較，準(zhǔn)確度差、直觀性差。 優(yōu)點：以供試品的稀溶液作為對照液，不需要雜質(zhì)對照品，簡單、價廉，還可配成幾種限量的對照溶液； 四、羥苯乙酯中有關(guān)物質(zhì)的檢查四、羥苯乙酯中有關(guān)物質(zhì)的檢查BP（1998）反相）反相TLC 高低濃度對比高低濃度對比法法五、酚磺乙胺中氫醌的檢查五、酚磺乙胺中氫醌的檢查 ChP（2000）HPLC法法六、六、 氯貝丁酯中對氯酚

12、及揮發(fā)性雜質(zhì)氯貝丁酯中對氯酚及揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查的檢查 GC 1. 直接滴定法 pKa36終點滴定酚酞中性乙醇 NaOH solS阿司匹林阿司匹林 ChP（2005） 取本品約取本品約0.4g，精密稱定，加中性乙，精密稱定，加中性乙醇（對酚酞指示液顯中性）醇（對酚酞指示液顯中性）20ml，溶解后，溶解后，加酚酞指示液加酚酞指示液3滴，用氫氧化鈉滴定液滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1mo1/L）滴定。每）滴定。每lml的氫氧化鈉滴的氫氧化鈉滴定液（定液（0.1mo1/L）相當(dāng)于）相當(dāng)于18.02mg的的C9H8O4。COOHOCOCH3+NaOHCOONaOCOCH3+H2O（1）測定方法及計算 Ka

13、=3.2710-4 反應(yīng)摩爾比為1 1 （2）討論 中性乙醇 溶解阿司匹林且防止酯鍵水解?！爸行浴笔菍χ泻头ㄋ玫闹甘緞┒?優(yōu)點：簡便、快速 缺點：酯鍵水解干擾（不斷攪拌、快速滴定） 酸性雜質(zhì)干擾（如水楊酸） 適用范圍：不能用于含水楊酸過高或制劑分析，只能用于合格原料藥的含量測定2. 水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法 酯的一般含量測定方法阿司匹林阿司匹林USP（24）方法：取本品約）方法：取本品約1.5g，精密，精密稱定稱定,加入氫氧化鈉滴定液（加入氫氧化鈉滴定液（0.5mo1/L）50.0m1，混合，緩緩煮沸，混合，緩緩煮沸10min，放冷，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液加酚酞指示液，用

14、硫酸滴定液（0.25mo1/L）滴定剩余的氫氧化鈉，）滴定剩余的氫氧化鈉，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。每并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。每1ml的氫氧化鈉滴定液（的氫氧化鈉滴定液（0.5mol/l）相當(dāng)于）相當(dāng)于45.04mg的的C9H8O4。 COOHOCOCH3+ 2NaOHCOONaOH+CH3COONa2NaOH（過量）H2SO4 Na2SO42H2O剩余滴定：水解： 反應(yīng)摩爾比為反應(yīng)摩爾比為1 1 優(yōu)點：消除了酯鍵水解的干擾優(yōu)點：消除了酯鍵水解的干擾 缺點：酸性雜質(zhì)干擾缺點：酸性雜質(zhì)干擾 羥苯乙酯含量測定亦可用此法羥苯乙酯含量測定亦可用此法 3. 兩步滴定法 阿司匹林片、阿司匹林腸溶片

15、氯貝丁酯 如阿司匹林片的測定： 取本品取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于阿司匹林（約相當(dāng)于阿司匹林0.3g），置錐形瓶中，加），置錐形瓶中，加中性乙醇（對酚酞指示液顯中性）溶解后，振中性乙醇（對酚酞指示液顯中性）溶解后，振搖使阿司匹林溶解，加酚酞指示液搖使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加滴，滴加氫氧化鈉滴定液（氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）至溶液顯粉紅色，）至溶液顯粉紅色，再精密加氫氧化鈉滴定液（再精密加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）40m1，置水浴上加熱置水浴上加熱15分鐘并時時振搖，迅速放冷至分鐘并時時振搖，迅速放冷至室溫，用硫

16、酸滴定液（室溫，用硫酸滴定液（0.05mol/L）滴定，并將）滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每滴定的結(jié)果用空白試驗校正。每lml的氫氧化鈉的氫氧化鈉滴定液（滴定液（0.1mo1/L）相當(dāng)于）相當(dāng)于18.02mg的的C9H8O4。 COOHOCOCH3+NaOHCOONaOCOCH3+H2O第一步 中和酒石酸枸櫞酸水楊酸醋酸+NaOH鈉鹽+H2O第二步 水解后剩余滴定 水解： COONaOCOCH3+NaOHCOONaOH+CH3COONa(定量過量）?2NaOH（過量）H2SO4 Na2SO42H2O 反應(yīng)摩爾比為2 1 本法消除了酸性雜質(zhì)的干擾，降低了酯鍵水解的干擾 剩余滴定： 氯貝丁

17、酯：消除供試品中共存的酸性雜質(zhì) 片劑含量測定結(jié)果的計算片劑含量測定結(jié)果的計算 %100/%100%片）標(biāo)示量（）平均片重（）供試品重（）測得量（標(biāo)示量每片含量標(biāo)示量gggg剩余滴定法 %100%0標(biāo)示量平均片重）（標(biāo)示量sWFVVT含量計算含量計算ASA的的標(biāo)示量百分含量標(biāo)示量百分含量=(V0 - V) * C實際實際 * 18.02 * 10-30.05 Ws*W標(biāo)示量標(biāo)示量*100%? 3. 雙相滴定法 （芳酸堿金屬鹽） 如苯甲酸鈉 ChP(2005)COONa+HClCOOH+NaCl水乙醚溶劑：水乙醚 取本品取本品1.5g，精密稱定，置分液漏斗中，精密稱定，置分液漏斗中，加水加水25m

18、1、乙醚、乙醚50ml及甲基指示液及甲基指示液2滴，用鹽滴，用鹽酸滴定液（酸滴定液（0.5mo1/L）滴定，隨滴隨振搖，至）滴定，隨滴隨振搖，至水層顯橙紅色，分取水層，置具塞錐形瓶中，水層顯橙紅色，分取水層，置具塞錐形瓶中，乙醚層用水乙醚層用水5ml洗滌，洗液并入錐形瓶中洗滌，洗液并入錐形瓶中,加乙加乙醚醚20m1，繼續(xù)用鹽酸滴定液，繼續(xù)用鹽酸滴定液0.5mo1/L)滴定，滴定，隨滴定隨振搖，至水層顯持續(xù)的橙紅色。每隨滴定隨振搖，至水層顯持續(xù)的橙紅色。每1ml的鹽酸滴定液（的鹽酸滴定液（0.5mol/L）相當(dāng)于）相當(dāng)于72.06mg的的C7H5NaO2。 乙醚的作用是：萃取反應(yīng)生成的苯甲酸，使

19、水相中的中和反應(yīng)進(jìn)行到底滴定中要強力振搖。隨著滴定不斷進(jìn)行，苯甲酸不斷被萃取入有機(jī)溶劑層，使滴定反應(yīng)完全，終點清晰。優(yōu)點：消除了反應(yīng)產(chǎn)物的干擾5. 非水堿量法非水堿量法 芳酸堿金屬鹽芳酸堿金屬鹽 冰醋酸作溶劑冰醋酸作溶劑 高氯酸的冰醋酸溶液作滴定劑高氯酸的冰醋酸溶液作滴定劑 結(jié)晶紫作指示劑指示終點結(jié)晶紫作指示劑指示終點 或電位法指示終點或電位法指示終點 6. 縮合后酸堿滴定法縮合后酸堿滴定法 氨甲苯酸氨甲苯酸 加入甲醛使與氨甲苯酸作用，生成加入甲醛使與氨甲苯酸作用，生成Schiff堿后，用堿液滴定堿后，用堿液滴定 H2O+CH2NH2CCOOHHCHO+H3NCH2COO-氨甲苯酸氨甲苯酸 取

20、本品約取本品約0.3g，精密稱定，加水，精密稱定，加水30ml，加熱使溶解，放冷，加甲醛與甲酚紅指示加熱使溶解，放冷，加甲醛與甲酚紅指示液，用氫氧化鈉滴定液（液，用氫氧化鈉滴定液（0.1mo1/L）滴定）滴定至溶液顯淡紫色，并將滴定結(jié)果用空白試至溶液顯淡紫色，并將滴定結(jié)果用空白試液 校 正 。 每液 校 正 。 每 l m l 的 氫 氧 化 鈉 滴 定 液的 氫 氧 化 鈉 滴 定 液（0.1mo1/L）相當(dāng)于）相當(dāng)于15.12mg的的C8H9NO2。二、亞硝酸鈉滴定法二、亞硝酸鈉滴定法 具芳伯氨基或潛在芳伯氨基（芳具芳伯氨基或潛在芳伯氨基（芳酰氨基水解或硝基還原）的藥物酰氨基水解或硝基還原

21、）的藥物Cl-+22+2+ArNH2 NaNO2 HCl ArNN NaCl H2O三、紫外分光光度法三、紫外分光光度法1. 直接紫外分光光度法直接紫外分光光度法酚磺乙胺注射液酚磺乙胺注射液 ChP（2005） 精密量取本品適量（約相當(dāng)于酚精密量取本品適量（約相當(dāng)于酚磺乙胺磺乙胺0.25g），置），置200ml量瓶中，用量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取乙醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取2m1，置，置100ml量瓶中，用乙醇稀釋量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。在至刻度，搖勻。在1cm吸收池中，以吸收池中，以溶劑為空白，于溶劑為空白，于305nm的波長處測定的波長處測定吸收度，按吸收度，按C1

22、0H17NO5S的吸收系數(shù)的吸收系數(shù)（ ）為）為159計算含量。計算含量。 %11cmE注射液含量測定結(jié)果的計算注射液含量測定結(jié)果的計算%100%標(biāo)示實測標(biāo)示量cc紫外分光光度法 吸收系數(shù)法 %100100%11標(biāo)示標(biāo)示量cnlEAcm2. 過濾后的紫外分光光度法過濾后的紫外分光光度法 丙磺舒片丙磺舒片 取本品取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于丙磺舒適量（約相當(dāng)于丙磺舒60mg），置），置200m1量量瓶中，加乙醇瓶中，加乙醇150ml與鹽酸溶液（與鹽酸溶液（9100）4m1，置，置70水浴上加熱水浴上加熱30min，放冷，用乙，放冷，用乙醇稀釋至

23、刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液密量取續(xù)濾液5ml，置，置100ml量瓶中，加鹽酸量瓶中，加鹽酸溶液（溶液（9100）2m1，用乙醇稀釋至刻度，搖，用乙醇稀釋至刻度，搖勻。于勻。于1cm吸收池中，以溶劑為空白，在吸收池中，以溶劑為空白，在249nm的波長處測定吸收度，按的波長處測定吸收度，按C13H19NO4S的的吸收系數(shù)（吸收系數(shù)（ ）為）為338計算。計算。%11cmE紫外分光光度法 吸收系數(shù)法 %100100%11標(biāo)示量平均片重標(biāo)示量scmmVnlEA3. 柱分配色譜柱分配色譜紫外分光光度法紫外分光光度法USP（24）阿司匹林膠囊）阿司

24、匹林膠囊 可同時定量可同時定量測定阿司匹林和水楊酸測定阿司匹林和水楊酸（1）水楊酸的限量測定）水楊酸的限量測定固定相：固定相：FeCl3 SA保留，冰醋酸洗脫，保留，冰醋酸洗脫，306nm測水楊酸的量測水楊酸的量（2）含量測定）含量測定固定相：固定相：NaHCO3 AAS、SA保留保留冰醋酸洗脫，冰醋酸洗脫，280nm測總量測總量4. 離子交換后紫外分光光度法離子交換后紫外分光光度法 氯貝丁酯氯貝丁酯 強堿性陰離子交換樹脂吸附酸性雜強堿性陰離子交換樹脂吸附酸性雜質(zhì)后，對照法定量測定氯貝丁酯含量質(zhì)后，對照法定量測定氯貝丁酯含量原料藥 對照法 %100smVnAAc對供對百分含量四、四、HPLC 1. 阿司匹林栓劑阿司匹林栓劑 ChP（2000） 離子抑制色譜法離子抑制色譜法 內(nèi)標(biāo)法定量內(nèi)標(biāo)法定量 2. 對氨基水楊酸鈉對氨基水楊酸鈉 USP（24） 離子對反相離子對反相HPLC 內(nèi)標(biāo)法定量內(nèi)標(biāo)法定量 3. 丙磺舒丙磺舒 USP（24） 離子抑制色譜法離子抑制色譜法 外標(biāo)法定量外標(biāo)法定量 4. 酚磺乙胺酚磺乙胺 ChP（2000） 正相正相HPLC 內(nèi)標(biāo)法定量內(nèi)標(biāo)法定量練 習(xí) 題1.兩步滴定法測定阿司匹林片是因為：A.片劑中有其他