第十四章 超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗(yàn)

1、超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗(yàn)超敏反應(yīng)性疾病的免疫學(xué)檢驗(yàn)張思英張思英 病原學(xué)教研室病原學(xué)教研室 超敏反應(yīng)：超敏反應(yīng)：已經(jīng)致敏的機(jī)體再次接受相同已經(jīng)致敏的機(jī)體再次接受相同抗原刺激后，所引起的以生理功能紊亂或組織抗原刺激后，所引起的以生理功能紊亂或組織損傷為主的異常的適應(yīng)性免疫應(yīng)答。損傷為主的異常的適應(yīng)性免疫應(yīng)答。第一節(jié)第一節(jié) 激發(fā)試驗(yàn)激發(fā)試驗(yàn)激發(fā)試驗(yàn)（激發(fā)試驗(yàn)（provocation testprovocation test） 是模擬自是模擬自然發(fā)病條件，用少量超敏原引起一次較輕的超敏然發(fā)病條件，用少量超敏原引起一次較輕的超敏反應(yīng)發(fā)作，達(dá)到確定超敏原的一種體內(nèi)試驗(yàn)。反應(yīng)發(fā)作，達(dá)到確定超敏原的一種體內(nèi)

2、試驗(yàn)。l 非特異性激發(fā)：非特異性激發(fā)：是用組胺等刺激物做霧化吸入，是用組胺等刺激物做霧化吸入， 以觀察患者對(duì)以觀察患者對(duì)型超敏反應(yīng)的敏感性，進(jìn)而分型超敏反應(yīng)的敏感性，進(jìn)而分 析病因或判定療效。析病因或判定療效。l 特異性激發(fā)：特異性激發(fā)：是用抗原如塵螨等做試驗(yàn)，對(duì)明確是用抗原如塵螨等做試驗(yàn)，對(duì)明確 超敏原有一定價(jià)值。超敏原有一定價(jià)值。 用于用于型和型和型型超敏反應(yīng)性疾病的檢查。超敏反應(yīng)性疾病的檢查。收集原料收集原料 粉碎、勻漿粉碎、勻漿 脫脂、提取脫脂、提取 過(guò)濾、分離過(guò)濾、分離 鑒定鑒定 分裝、保存分裝、保存清毒試驗(yàn)部位清毒試驗(yàn)部位抗原的制備皮試皮試前臂曲側(cè)、上臂、背部前臂曲側(cè)、上臂、背部禁

3、忌：禁忌：皮膚患濕疹、感染、皮炎或外傷皮膚患濕疹、感染、皮炎或外傷正在或近日服用免疫抑制劑或抗組胺藥物正在或近日服用免疫抑制劑或抗組胺藥物皮膚試驗(yàn)的類(lèi)型與方法皮膚試驗(yàn)的類(lèi)型與方法o 皮內(nèi)試驗(yàn)（皮內(nèi)試驗(yàn)（intracutaneous test）；）；o 挑刺試驗(yàn)（挑刺試驗(yàn)（pricktest） 主要用于主要用于型型超敏反應(yīng)超敏反應(yīng)o 斑貼試驗(yàn)（斑貼試驗(yàn)（patchtest） 主要是檢測(cè)主要是檢測(cè)型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng)0.010.03ml/針相同超敏原相同超敏原不同稀釋度不同稀釋度速發(fā)型速發(fā)型151530min30min內(nèi)觀察內(nèi)觀察遲發(fā)型遲發(fā)型 484872h72h內(nèi)觀察內(nèi)觀察4mm/4mm/針針?lè)?/p>

4、法方法結(jié)果結(jié)果一、皮膚試驗(yàn)一、皮膚試驗(yàn)-皮內(nèi)試驗(yàn)皮內(nèi)試驗(yàn)l 比皮內(nèi)試驗(yàn)敏感性稍低，但假陽(yáng)性較少；比皮內(nèi)試驗(yàn)敏感性稍低，但假陽(yáng)性較少；l 皮試液濃度要比皮內(nèi)試驗(yàn)高皮試液濃度要比皮內(nèi)試驗(yàn)高1010100100倍。倍。將試驗(yàn)抗原與對(duì)照液分別將試驗(yàn)抗原與對(duì)照液分別滴于試驗(yàn)部位的皮膚上滴于試驗(yàn)部位的皮膚上用針尖透過(guò)液滴輕挑一下用針尖透過(guò)液滴輕挑一下以刺破皮膚而不出血為度以刺破皮膚而不出血為度1min1min后拭（吸）去試驗(yàn)抗原液后拭（吸）去試驗(yàn)抗原液一、皮膚試驗(yàn)一、皮膚試驗(yàn)-點(diǎn)刺試驗(yàn)點(diǎn)刺試驗(yàn)皮內(nèi)試驗(yàn)較點(diǎn)刺試驗(yàn)有更好的敏感性皮內(nèi)試驗(yàn)較點(diǎn)刺試驗(yàn)有更好的敏感性l第一次讀：第一次讀：4848小時(shí)打開(kāi)斑試器小時(shí)打

5、開(kāi)斑試器, ,間隔間隔30min30min待斑試器待斑試器 壓痕消失后判定結(jié)果。壓痕消失后判定結(jié)果。l第二次讀：第第二次讀：第3 3天或第天或第4 4天。天。l如懷疑光過(guò)敏，在斑貼試驗(yàn)的基礎(chǔ)上給予紫外線照如懷疑光過(guò)敏，在斑貼試驗(yàn)的基礎(chǔ)上給予紫外線照 射，操作過(guò)程相似。射，操作過(guò)程相似。 一、皮膚試驗(yàn)一、皮膚試驗(yàn)-斑貼試驗(yàn)斑貼試驗(yàn)假陰性出現(xiàn)的常見(jiàn)原因： 皮試液的濃度過(guò)低或失效； 老年患者或過(guò)敏性休克或哮喘大發(fā)作之后； 皮試前用過(guò)抗組胺藥或免疫抑制劑； 操作不當(dāng)將皮試液注入皮下或注入量過(guò)少等。結(jié)果分析及注意事項(xiàng)結(jié)果分析及注意事項(xiàng) 結(jié)果分析及注意事項(xiàng)結(jié)果分析及注意事項(xiàng) 假陽(yáng)性出現(xiàn)的常見(jiàn)原因： 皮試液

6、含有非特異性刺激物； 患者患有皮膚劃痕征； 操作手法較重； 注入量較大或濃度過(guò)高； 注入少量空氣等。l詢問(wèn)病史陽(yáng)性對(duì)照l(shuí)必備搶救藥品和設(shè)施如何避免假性結(jié)果的出現(xiàn)：如何避免假性結(jié)果的出現(xiàn)：適應(yīng)證陰性對(duì)照皮試液濃度皮膚試驗(yàn)的應(yīng)用皮膚試驗(yàn)的應(yīng)用l預(yù)防藥物或疫苗等過(guò)敏 l防治型超敏反應(yīng)性疾病l結(jié)核菌素試驗(yàn)l評(píng)估機(jī)體細(xì)胞免疫功能 l預(yù)防皮膚接觸過(guò)敏 結(jié)核菌素試驗(yàn) 是用結(jié)核菌素進(jìn)行皮膚試驗(yàn)，通過(guò)觀察局部是否出現(xiàn)遲發(fā)型超敏反應(yīng)，判斷機(jī)體有無(wú)結(jié)核分枝桿菌感染和對(duì)該菌的免疫力。l陽(yáng)性：機(jī)體已感染過(guò)結(jié)核桿菌或BCG接種成功；l強(qiáng)陽(yáng)性：可能有活動(dòng)性結(jié)核?。籰陰性：機(jī)體未感染過(guò)結(jié)核分枝桿菌， 但應(yīng)考慮： 感染初期；

7、老年人； 重度結(jié)核病患者，機(jī)體處于免疫反應(yīng)低下?tīng)顟B(tài)； 患有其他疾病。 結(jié)核菌素試驗(yàn) 手捏式霧化器二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)（bronchial provocative test,BPTbronchial provocative test,BPT）霧化抗原顆粒5微米測(cè)定肺功能指標(biāo)：用力肺活量(FVC)1秒用力呼氣容積(FEV1)最大呼氣流速(PEF)比氣道傳導(dǎo)率(sGaw)射流霧化器二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)（bronchial provocative test,BPTbronchial provocative test,BPT）測(cè)基礎(chǔ)肺功能測(cè)基礎(chǔ)肺功能 激發(fā)物稀釋液：激發(fā)物

8、稀釋液：低濃度低濃度/ /小劑量小劑量雙倍濃度雙倍濃度/ /劑量遞增劑量遞增陽(yáng)性伴明顯氣促、喘息陽(yáng)性伴明顯氣促、喘息口吸入口吸入1 11 1分半鐘分半鐘測(cè)定肺功能測(cè)定肺功能陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)/ /明顯不適明顯不適/ /臨床癥狀臨床癥狀直至直至激發(fā)物達(dá)到最高濃度激發(fā)物達(dá)到最高濃度陰性反應(yīng)陰性反應(yīng)支氣管支氣管舒張劑舒張劑吸入吸入二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)（bronchial provocative test,BPTbronchial provocative test,BPT）支氣管反應(yīng)有三種類(lèi)型：速發(fā)、遲發(fā)和雙重反應(yīng)。支氣管反應(yīng)有三種類(lèi)型：速發(fā)、遲發(fā)和雙重反應(yīng)。每次觀察不能小于每次觀察不能

9、小于2424小時(shí)。小時(shí)。lFEV1FEV1：重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定；重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定；lPEFPEF：峰流速儀價(jià)格低廉、方便、不受場(chǎng)地限制，峰流速儀價(jià)格低廉、方便、不受場(chǎng)地限制， 與與FEV1FEV1有較好的相關(guān)性，適合流行病學(xué)調(diào)查；有較好的相關(guān)性，適合流行病學(xué)調(diào)查；lsGawsGaw：敏感性好，但重復(fù)性稍差。敏感性好，但重復(fù)性稍差。測(cè)定指標(biāo)測(cè)定指標(biāo)二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)（bronchial provocative test,BPTbronchial provocative test,BPT）結(jié)果判斷：結(jié)果判斷： 變應(yīng)原的確定常以定性試驗(yàn)判斷結(jié)果。變應(yīng)原的確定常以定性試驗(yàn)判斷結(jié)果。

10、 陽(yáng)性：陽(yáng)性：氣道反應(yīng)性增高氣道反應(yīng)性增高 FEV1FEV1、PEFPEF較基礎(chǔ)下降較基礎(chǔ)下降2020或或sGawsGaw下降下降35%35%， 有時(shí)伴有明顯自覺(jué)癥狀或肺部聞及哮鳴音。有時(shí)伴有明顯自覺(jué)癥狀或肺部聞及哮鳴音。定性判斷定性判斷二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)（bronchial provocative test,BPTbronchial provocative test,BPT）結(jié)果判斷：結(jié)果判斷： 陰性：陰性：氣道反應(yīng)性正常氣道反應(yīng)性正常 FEV1FEV1、PEFPEF或或sGawsGaw上述標(biāo)準(zhǔn)，正常值為陰性。上述標(biāo)準(zhǔn)，正常值為陰性。 無(wú)論激發(fā)試驗(yàn)陽(yáng)性或陰性，均應(yīng)排除氣道反

11、應(yīng)性的影響因素。無(wú)論激發(fā)試驗(yàn)陽(yáng)性或陰性，均應(yīng)排除氣道反應(yīng)性的影響因素。可疑者，間隔可疑者，間隔2 23 3周后復(fù)檢或周后復(fù)檢或2 2個(gè)月后再測(cè)。個(gè)月后再測(cè)。 l受試者在心肺功能不全、高血壓、甲亢、妊娠、嚴(yán)重咽喉炎、受試者在心肺功能不全、高血壓、甲亢、妊娠、嚴(yán)重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情況下一般不適宜作激發(fā)試驗(yàn)；呼吸道感染或肺炎等情況下一般不適宜作激發(fā)試驗(yàn)；l有過(guò)敏性休克，嚴(yán)重的血管性水腫及嚴(yán)重的喉頭水腫病史者；有過(guò)敏性休克，嚴(yán)重的血管性水腫及嚴(yán)重的喉頭水腫病史者；l一周之內(nèi)預(yù)防接種、職業(yè)性過(guò)敏因素的接觸等。一周之內(nèi)預(yù)防接種、職業(yè)性過(guò)敏因素的接觸等。禁忌證禁忌證二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)二、支氣管激發(fā)

12、試驗(yàn)（bronchial provocative test,BPTbronchial provocative test,BPT）注意事項(xiàng)及禁忌癥：注意事項(xiàng)及禁忌癥：受試者在檢查前：受試者在檢查前：4848小時(shí)：停小時(shí)：停！抗組胺藥、色甘酸鈉及皮質(zhì)激素類(lèi)藥抗組胺藥、色甘酸鈉及皮質(zhì)激素類(lèi)藥; ;1212小時(shí)：停小時(shí)：停！支氣管擴(kuò)張劑支氣管擴(kuò)張劑; ;1515分鐘：實(shí)驗(yàn)室休息分鐘：實(shí)驗(yàn)室休息, ,病史、體檢排除病史、體檢排除BPTBPT的禁忌證。的禁忌證。注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)（bronchial provocative test,BPTbronchial provoc

13、ative test,BPT）注意事項(xiàng)及禁忌癥：注意事項(xiàng)及禁忌癥：有一定的危險(xiǎn)性，但較皮膚試驗(yàn)的特異性高有一定的危險(xiǎn)性，但較皮膚試驗(yàn)的特異性高與受試者的病史、癥狀和體征相關(guān)性較強(qiáng)與受試者的病史、癥狀和體征相關(guān)性較強(qiáng)確定支氣管哮喘的過(guò)敏原，尤其皮試結(jié)果不肯定時(shí)確定支氣管哮喘的過(guò)敏原，尤其皮試結(jié)果不肯定時(shí)排除皮試時(shí)的假陽(yáng)性反應(yīng)和假陰性反應(yīng)排除皮試時(shí)的假陽(yáng)性反應(yīng)和假陰性反應(yīng)檢測(cè)新制劑的抗原性、平喘藥療效及觀察脫敏效果檢測(cè)新制劑的抗原性、平喘藥療效及觀察脫敏效果缺點(diǎn)是每次僅能用一種抗原，要專門(mén)設(shè)備和技術(shù)，缺點(diǎn)是每次僅能用一種抗原，要專門(mén)設(shè)備和技術(shù)，并需對(duì)病人進(jìn)行訓(xùn)練并與之配合并需對(duì)病人進(jìn)行訓(xùn)練并與之配

14、合二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)二、支氣管激發(fā)試驗(yàn)（bronchial provocative test,BPTbronchial provocative test,BPT）應(yīng)用與評(píng)價(jià)：應(yīng)用與評(píng)價(jià)：觀察癥狀觀察癥狀癥狀好轉(zhuǎn)癥狀好轉(zhuǎn)或減輕或減輕導(dǎo)致導(dǎo)致基礎(chǔ)基礎(chǔ)飲食飲食吃可疑的吃可疑的過(guò)敏食物過(guò)敏食物癥狀癥狀加重加重1 1周后周后疑似疑似過(guò)敏原，重復(fù)過(guò)敏原，重復(fù)3 3次次確定確定某食物為過(guò)敏原某食物為過(guò)敏原癥狀未減輕癥狀未減輕1 1周后周后排除排除 食物所致過(guò)敏食物所致過(guò)敏三、食物激發(fā)試驗(yàn)三、食物激發(fā)試驗(yàn)口腔激發(fā)試驗(yàn)口腔激發(fā)試驗(yàn)將超敏原直接與口腔黏膜接觸，當(dāng)口腔將超敏原直接與口腔黏膜接觸，當(dāng)口腔黏膜出現(xiàn)腫脹和

15、充血時(shí)，可判斷為陽(yáng)性黏膜出現(xiàn)腫脹和充血時(shí)，可判斷為陽(yáng)性反應(yīng)。反應(yīng)。 結(jié)膜激發(fā)試驗(yàn)結(jié)膜激發(fā)試驗(yàn)將超敏原滴于一眼，陽(yáng)性反應(yīng)為結(jié)膜充將超敏原滴于一眼，陽(yáng)性反應(yīng)為結(jié)膜充血、水腫、分泌增加、搔癢，甚至眼瞼血、水腫、分泌增加、搔癢，甚至眼瞼紅腫。注意假陽(yáng)性對(duì)結(jié)果的干擾。紅腫。注意假陽(yáng)性對(duì)結(jié)果的干擾。鼻黏膜激發(fā)試驗(yàn)鼻黏膜激發(fā)試驗(yàn)將抗原吸入將抗原吸入/ /滴入受試者鼻腔，出現(xiàn)鼻滴入受試者鼻腔，出現(xiàn)鼻黏膜水腫、蒼白、鼻癢、流涕、噴嚏為黏膜水腫、蒼白、鼻癢、流涕、噴嚏為陽(yáng)性。陽(yáng)性。 四、其他方法四、其他方法結(jié)果判定及分析結(jié)果判定及分析 o 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 抗原刺激后2030min內(nèi)觀察結(jié)果。 陽(yáng)性反應(yīng)：陽(yáng)性

16、反應(yīng)： 點(diǎn)刺試驗(yàn)以紅暈為主 皮內(nèi)試驗(yàn)以風(fēng)團(tuán)為主表24-2 速發(fā)型皮膚試驗(yàn)的結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 反應(yīng)程度 皮內(nèi)試驗(yàn) 挑刺試驗(yàn) 無(wú)反應(yīng)或小于對(duì)照 無(wú)反應(yīng)或小于對(duì)照 風(fēng)團(tuán)35min，紅暈20mm 紅暈對(duì)照，20nm 風(fēng)團(tuán)69mm，伴紅暈 紅暈20mm，無(wú)風(fēng)團(tuán) 風(fēng)團(tuán)1015mm，伴紅暈 紅暈伴有風(fēng)團(tuán) 風(fēng)團(tuán)15mm，紅暈伴偽足 紅暈伴偽足和風(fēng)團(tuán) 結(jié)果判定及分析結(jié)果判定及分析o 型超敏反應(yīng)型超敏反應(yīng) 接觸抗原后4872h內(nèi)觀察結(jié)果。 陽(yáng)性反應(yīng)：陽(yáng)性反應(yīng)： 皮內(nèi)試驗(yàn)以紅腫和硬結(jié)為主 斑貼試驗(yàn)以紅腫和水皰為主 假性結(jié)果假性結(jié)果 o 假陰性假陰性 ：試驗(yàn)抗原濃度過(guò)低或因各種原因失效；正服用免疫抑制劑或抗組胺藥物；操作

17、誤差 ；皮試季節(jié)選擇不當(dāng) 。o 假陽(yáng)性假陽(yáng)性 ：試驗(yàn)抗原不純，引起交叉反應(yīng)；試驗(yàn)溶液配制不當(dāng)，產(chǎn)生非特異性刺激；皮膚反應(yīng)性過(guò)強(qiáng)；操作不當(dāng)。 第二節(jié)第二節(jié) IgE的檢測(cè)的檢測(cè)一、血清總一、血清總IgEIgE的檢測(cè)的檢測(cè) ELISA雙抗體夾心法：操作簡(jiǎn)便，敏感性很高，是測(cè)定血清IgE最常用的方法。 CLIA：敏感度更高，特異性高，定量。 臨床意義臨床意義：正常人群血清：正常人群血清IgEIgE水平受地域環(huán)境、種水平受地域環(huán)境、種 族、遺傳、年齡、性別、寄生蟲(chóng)感染、測(cè)定法及取族、遺傳、年齡、性別、寄生蟲(chóng)感染、測(cè)定法及取 樣等影響，結(jié)果有一定差異。樣等影響，結(jié)果有一定差異。 參考值參考值0.10.10

18、.9mg/L0.9mg/L某些過(guò)敏體質(zhì)者高于正常某些過(guò)敏體質(zhì)者高于正常100010001000010000倍倍 血清血清IgEIgE高高特應(yīng)癥、支氣管肺曲菌病、特應(yīng)癥、支氣管肺曲菌病、藥物性間質(zhì)性肺炎、麻風(fēng)、藥物性間質(zhì)性肺炎、麻風(fēng)、寄生蟲(chóng)病及寄生蟲(chóng)病及IgEIgE型骨髓瘤等型骨髓瘤等一、血清總一、血清總IgEIgE的檢測(cè)的檢測(cè)o 總總IgE：正常成人血清含量為正常成人血清含量為 2020200IU/ml200IU/ml 嬰兒血中嬰兒血中IgEIgE含量極低；含量極低； 寄生蟲(chóng)感染時(shí)可顯著增高。寄生蟲(chóng)感染時(shí)可顯著增高。o sIgE:o ECP(嗜酸性細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白）：嗜酸性細(xì)胞陽(yáng)離子蛋白）：o

19、放射免疫吸附劑試驗(yàn) （radioimmunosorbenttest，IRST）o 酶聯(lián)免疫測(cè)定法(ELISA) o 化學(xué)發(fā)光o 固相熒光免疫分析一、血清總一、血清總IgEIgE的檢測(cè)的檢測(cè)臨床意義 ：1、正常人群IgE水平受環(huán)境、種族、遺傳、年齡、檢測(cè)方法及取樣標(biāo)準(zhǔn)等因素的影響2、IgE升高相關(guān)的常見(jiàn)疾病有：過(guò)敏性哮喘、季節(jié)性過(guò)敏性鼻炎、特應(yīng)性皮炎、藥物性間質(zhì)性肺炎、支氣管肺曲菌病、麻風(fēng)、類(lèi)天皰瘡及某些寄生蟲(chóng)感染等。 一、血清總一、血清總IgEIgE的檢測(cè)的檢測(cè) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）：常用間接法。 免疫印跡技術(shù)（IBT）：操作簡(jiǎn)單，能一次性測(cè)定多種變應(yīng)原的特異性IgE，故臨床已普遍采

20、用IBT法。二、特異性二、特異性IgEIgE的檢測(cè)的檢測(cè)（+ +）E EE EE EE EE EE E洗滌洗滌洗滌洗滌洗滌洗滌結(jié)果結(jié)果ELISAELISA間接法檢測(cè)特異性間接法檢測(cè)特異性IgEIgE特異性變應(yīng)原加入待檢血清特異性變應(yīng)原加入待檢血清+- 轉(zhuǎn)印至轉(zhuǎn)印至NC膜膜NC膜膜多種特異性變應(yīng)原+ + +- - - +分離特異性變應(yīng)原條帶待檢血清待檢血清特異性特異性IgE抗抗-IgEHRP底物底物特異性抗原特異性抗原條帶顯色條帶顯色NC膜膜變應(yīng)原變應(yīng)原特異性特異性IgE抗抗-IgEHRPIBT檢測(cè)特異性IgEo 目前公認(rèn)的檢測(cè)I型超敏反應(yīng)方法之一；o 具有特異性強(qiáng)、敏感性高；o 影響因素少、對(duì)

21、患者絕對(duì)安全等優(yōu)點(diǎn)；o 過(guò)敏性哮喘診斷；o 尋找變應(yīng)原。 o 缺點(diǎn)：費(fèi)用昂貴、花費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)、不同試劑盒的參比血清不同不易相互比較。 二、特異性二、特異性IgEIgE的檢測(cè)的檢測(cè)第三節(jié)第三節(jié) 免疫復(fù)合物免疫復(fù)合物檢測(cè)檢測(cè)o 抗原特異性循環(huán)免疫復(fù)合物抗原特異性循環(huán)免疫復(fù)合物 利用免疫復(fù)合物中抗原特異性來(lái)測(cè)利用免疫復(fù)合物中抗原特異性來(lái)測(cè)ICIC。 優(yōu)點(diǎn)：特異性高；優(yōu)點(diǎn)：特異性高； 缺點(diǎn)：需制備專一的針對(duì)抗原的抗體，只能檢缺點(diǎn)：需制備專一的針對(duì)抗原的抗體，只能檢測(cè)特定的一種測(cè)特定的一種ICIC，不常用。（免疫復(fù)合物中的抗，不常用。（免疫復(fù)合物中的抗原性質(zhì)不太清楚或非常復(fù)雜）原性質(zhì)不太清楚或非常復(fù)雜）抗原

22、非特異性免疫復(fù)合物檢測(cè)抗原非特異性免疫復(fù)合物檢測(cè) o 不考慮免疫復(fù)合物中抗原的性質(zhì)，只檢測(cè)免疫復(fù)合物的總量。 o 根據(jù)檢測(cè)原理不同，檢測(cè)技術(shù)分為根據(jù)檢測(cè)原理不同，檢測(cè)技術(shù)分為： 1.1.物理法物理法PEGPEG法法2.2.補(bǔ)體法補(bǔ)體法C1qC1q結(jié)合試驗(yàn)結(jié)合試驗(yàn)3.3.抗球蛋白法抗球蛋白法mRFmRF固相抑制試驗(yàn)固相抑制試驗(yàn)4.4.細(xì)胞法細(xì)胞法 RajiRaji細(xì)胞試驗(yàn)細(xì)胞試驗(yàn)CIC：分子量600kDa以上，沉降系數(shù)19S；熱聚合人IgG(heat agglutination human IgG, HAHG)：作為參考標(biāo)準(zhǔn)品，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行CIC定量或測(cè)定A值代表CIC相當(dāng)于HAHG的含量。

23、一、抗原非特異性一、抗原非特異性CICCIC檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)一、抗原非特異性一、抗原非特異性CICCIC檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)CIC的檢測(cè)方法：按抗體分子在結(jié)合抗原后發(fā)生的物理學(xué)和生物學(xué)特性的改變而設(shè)計(jì)。 PEG比濁法; ELISA法; 細(xì)胞法Raji細(xì)胞法; 抗球蛋白技術(shù)mRF凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)。一、抗原非特異性一、抗原非特異性CICCIC檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)PEG比濁法：1.基本原理 聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）為不帶電荷、直鏈大分子結(jié)構(gòu)的多糖，有強(qiáng)脫水作用，利用2%4%濃度的PEG可選擇性沉淀大分子CIC。2.技術(shù)要點(diǎn) 生物化學(xué)檢驗(yàn)。 3.注意事項(xiàng)： 2%PEG沉淀大分子C

24、IC； 4%PEG沉淀較小分子CIC； 超過(guò)5%PEG選擇性沉淀CIC的特性消失； 溫度影響極大，需進(jìn)行溫差校正； 低密度脂蛋白使?jié)岫仍黾?，空腹采血?高球蛋白血癥和標(biāo)本反復(fù)凍融濁度增加。一、抗原非特異性一、抗原非特異性CICCIC檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)PEG比濁法：一、抗原非特異性一、抗原非特異性CICCIC檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)ELISA法：1.基本原理 ELISA法測(cè)定的CIC，是能夠結(jié)合C1q的 IgG類(lèi)抗體與其特異性抗原形成的CIC。2.技術(shù)要點(diǎn) 將聚苯乙烯包被上C1q，加入受檢血清， CIC中IgG的Fc段與C1q結(jié)合，再加抗人IgGHRP， 形成C1q-CIC-抗人IgGHRP復(fù)合物，加底物

25、顯色。一、抗原非特異性一、抗原非特異性CICCIC檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù) 靈敏度高于PEG比濁法，檢測(cè)到0.1mg/L，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)； C1q制品不易精制, 純品不穩(wěn)定，只能檢出與補(bǔ)體結(jié)合的CIC。ELISA法：一、抗原非特異性一、抗原非特異性CICCIC檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)細(xì)胞法-Raji細(xì)胞法：1.基本原理 Raji細(xì)胞是從Burkitt淋巴瘤分離建株似B細(xì)胞系，在體外繁殖傳代，細(xì)胞表面有高密度的C1q、C3b、C3d等補(bǔ)體受體，而且不易脫落。 2.技術(shù)要點(diǎn) 將一定量待檢血清、HAHG和Raji細(xì)胞混合，使補(bǔ)體、CIC或HAHG與Raji細(xì)胞形成復(fù)合物，加入抗人IgGFIC，形成Raji細(xì)胞補(bǔ)體C

26、IC(或 HAHG)抗人IgG FIC復(fù)合物，檢測(cè)熒光強(qiáng)度。一、抗原非特異性一、抗原非特異性CICCIC檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)細(xì)胞法-Raji細(xì)胞法： 3.影響因素 培養(yǎng)條件能改變Raji細(xì)胞其表面受體的數(shù)量及親和性，影響檢測(cè)敏感性; 待檢血清中如有抗淋巴細(xì)胞的抗體，能和Raji細(xì)胞反應(yīng); SLE血清中的抗DNA也能和Raji細(xì)胞反應(yīng)，使測(cè)定結(jié)果偏高。 一、抗原非特異性一、抗原非特異性CICCIC檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)細(xì)胞法-Raji細(xì)胞法： 4.方法評(píng)價(jià) 敏感性高(6mg/L HAHG)，實(shí)用性強(qiáng)； 缺點(diǎn)需培養(yǎng)Raji細(xì)胞和同位素標(biāo)記抗人IgG，操作繁瑣; Raii細(xì)胞培養(yǎng)較困難，不易長(zhǎng)期穩(wěn)定保持其特性

27、，培養(yǎng)條件受限。一、抗原非特異性一、抗原非特異性CICCIC檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)細(xì)胞法-Raji細(xì)胞法：1.方法評(píng)價(jià)IgG或IgM類(lèi)自身抗體與IC中IgG的Fc段結(jié)合而不與游離IgG結(jié)合的特性，mRF與CIC親和力較強(qiáng)。一、抗原非特異性一、抗原非特異性CICCIC檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)抗球蛋白技術(shù)-mRF凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)：1.方法評(píng)價(jià)IgG或IgM類(lèi)自身抗體與IC中IgG的Fc段結(jié)合而不與游離IgG結(jié)合的特性，mRF與CIC親和力較強(qiáng)。一、抗原非特異性一、抗原非特異性CICCIC檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)抗球蛋白技術(shù)-mRF凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)：2.技術(shù)要點(diǎn)將mRF和待檢血清中的CIC在瓊脂凝膠中擴(kuò)散，mRFCIC結(jié)合形成沉

28、淀現(xiàn)象，進(jìn)行CIC定性或定量。一、抗原非特異性一、抗原非特異性CICCIC檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)抗球蛋白技術(shù)-mRF凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)：3.方法評(píng)價(jià)敏感度較低100mg/L（HAHG），mRF來(lái)源受限，操作費(fèi)時(shí)，難于常規(guī)應(yīng)用。一、抗原非特異性一、抗原非特異性CICCIC檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)抗球蛋白技術(shù)-mRF凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)：自身免疫性疾病病程中連續(xù)動(dòng)態(tài)觀察或輔助診斷：試驗(yàn)方法本身不完善；IC形成的復(fù)雜性，如在生理狀態(tài)下IC是由各種抗原 與相應(yīng)抗體所構(gòu)成的，維持動(dòng)態(tài)平衡。在病理狀態(tài) 下往往是單一種類(lèi)IC增高，而此種單一成分增高發(fā) 展到足以影響IC總體水平情況下，才能被試驗(yàn)檢出。二、二、CICCIC檢測(cè)方法評(píng)價(jià)及應(yīng)

29、用檢測(cè)方法評(píng)價(jià)及應(yīng)用檢測(cè)方法評(píng)價(jià)：腎臟疾?。杭毙阅I小球腎炎、移植腎、IgA腎??；消化系統(tǒng)疾病：慢活肝炎、原發(fā)性膽淤性肝硬化；皮膚?。菏n麻疹、天皰瘡、皮疹性皮炎；型超敏反應(yīng)性疾?。篠LE、RA、硬皮癥、自身 免疫性溶血性貧血等。此外，CIC的檢測(cè)對(duì)于腫瘤、肝癌、白血病、霍奇金病、神經(jīng)肌肉萎縮性側(cè)索硬化癥等疾病的診斷。二、二、CICCIC檢測(cè)方法評(píng)價(jià)及應(yīng)用檢測(cè)方法評(píng)價(jià)及應(yīng)用臨床應(yīng)用： 固定或沉積于病變局部組織中的IC測(cè)定常用免免疫組化技術(shù)疫組化技術(shù)，如熒光免疫組化技術(shù)檢測(cè)到組織標(biāo)本有Ig和補(bǔ)體。受累組織的成分、構(gòu)型和特定的部位可為疾病的嚴(yán)重程度和預(yù)后提供依據(jù)。三、沉積于組織中三、沉積于組織中IC IC 的測(cè)定的測(cè)定第四節(jié)第四節(jié) 抗球蛋白試驗(yàn)（抗球蛋白試驗(yàn)（Coombs試驗(yàn)）試驗(yàn)）類(lèi)型類(lèi)型l不完全抗體：抗體分子較短小，只能與顆?？乖环较嘟Y(jié)合，不出現(xiàn)可見(jiàn)的凝集現(xiàn)象，但能封閉抗原決定簇，使其不能再與完全抗體結(jié)合。l抗人球蛋白試驗(yàn)（antiglobulin test, AGT）：將人球蛋