第一章植物細胞培養(yǎng)(2)

1、第二節(jié)第二節(jié) 植物細胞培養(yǎng)的方法植物細胞培養(yǎng)的方法植物細胞的培養(yǎng)方法：植物細胞的培養(yǎng)方法：根據(jù)培養(yǎng)基的類型分為根據(jù)培養(yǎng)基的類型分為: : 1 1、固體培養(yǎng)固體培養(yǎng): : 瓊脂、卡拉膠等固化。瓊脂、卡拉膠等固化。 2 2、半液半固體培養(yǎng)：固液雙層。、半液半固體培養(yǎng)：固液雙層。 3 3、液體培養(yǎng)：震蕩、旋轉(zhuǎn)或靜置培養(yǎng)。、液體培養(yǎng)：震蕩、旋轉(zhuǎn)或靜置培養(yǎng)。 固體培養(yǎng)固體培養(yǎng)液體培養(yǎng)液體培養(yǎng)：體胚液體培養(yǎng)體胚液體培養(yǎng)根據(jù)培養(yǎng)材料分為：根據(jù)培養(yǎng)材料分為： 單細胞培養(yǎng)、單細胞培養(yǎng)、 原生質(zhì)體培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)、 固定化細胞培養(yǎng)、固定化細胞培養(yǎng)、 小細胞團培養(yǎng)等。小細胞團培養(yǎng)等。一一 單細胞培養(yǎng)單細胞培養(yǎng)單細

2、胞培養(yǎng)單細胞培養(yǎng)是從外植體、愈傷組織、是從外植體、愈傷組織、細胞團中分離得到單細胞，然后在細胞團中分離得到單細胞，然后在一定條件下進行培養(yǎng)的過程。一定條件下進行培養(yǎng)的過程。通過單細胞培養(yǎng)可以觀察細胞個體的分通過單細胞培養(yǎng)可以觀察細胞個體的分裂、生長和繁殖情況，可以獲得細胞團，裂、生長和繁殖情況，可以獲得細胞團，進而得到從單細胞形成的細胞系。進而得到從單細胞形成的細胞系。從單細胞分裂、繁殖得到的細胞團和細胞從單細胞分裂、繁殖得到的細胞團和細胞系，可以認為具有相同的基因和特性。系，可以認為具有相同的基因和特性。用這種細胞系迸行大規(guī)模細胞培養(yǎng)，得到用這種細胞系迸行大規(guī)模細胞培養(yǎng)，得到較為均一的細胞及

3、其代謝產(chǎn)物。較為均一的細胞及其代謝產(chǎn)物。（一）植物單細胞的獲得（一）植物單細胞的獲得1 1、從外植體直接分離單細胞、從外植體直接分離單細胞外植體經(jīng)過切割、搗碎或酶解，然后經(jīng)過外植體經(jīng)過切割、搗碎或酶解，然后經(jīng)過一定孔徑的不銹鋼篩網(wǎng)過濾，得到細胞懸一定孔徑的不銹鋼篩網(wǎng)過濾，得到細胞懸浮液。浮液。懸浮液中所含的完整細胞數(shù)量很少，懸浮液中所含的完整細胞數(shù)量很少，分散性較好，可以看作是游離的單細胞懸分散性較好，可以看作是游離的單細胞懸浮液。浮液。2 2、從愈傷組織分離單細胞、從愈傷組織分離單細胞1 1）經(jīng)過愈傷組織誘導獲得脫分化愈傷組織）經(jīng)過愈傷組織誘導獲得脫分化愈傷組織的薄壁細胞團。的薄壁細胞團。2

4、 2）將細胞團轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中，進行振）將細胞團轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中，進行振蕩培養(yǎng)，使細胞團分散成為單細胞，然后用蕩培養(yǎng)，使細胞團分散成為單細胞，然后用適當孔徑的不銹鋼篩網(wǎng)過濾，除去細胞團和適當孔徑的不銹鋼篩網(wǎng)過濾，除去細胞團和殘渣，得到單細胞懸浮液。殘渣，得到單細胞懸浮液。3 3通過原生質(zhì)體再生法獲取單細胞通過原生質(zhì)體再生法獲取單細胞1 1）外植體、愈傷組織或細胞團經(jīng)過纖維素）外植體、愈傷組織或細胞團經(jīng)過纖維素酶和果膠酶等的作用，除去細胞壁而獲得酶和果膠酶等的作用，除去細胞壁而獲得原生質(zhì)體。原生質(zhì)體。2 2）原生質(zhì)體分離后，在一定條件下進行原生）原生質(zhì)體分離后，在一定條件下進行原生質(zhì)體培養(yǎng)，

5、使細胞壁再生，而獲得單細胞懸質(zhì)體培養(yǎng)，使細胞壁再生，而獲得單細胞懸浮液。浮液。（二）植物單細胞培養(yǎng)的方法（二）植物單細胞培養(yǎng)的方法由于植物細胞具有群體生長特性，由于植物細胞具有群體生長特性，單細胞往往難以生長、繁殖。單細胞往往難以生長、繁殖。為此，需要采用一些特殊技術為此，需要采用一些特殊技術1. 1. 平板培養(yǎng)法平板培養(yǎng)法概念：將制備好的單細胞懸浮液，按照一定概念：將制備好的單細胞懸浮液，按照一定的細胞密度，接種在的細胞密度，接種在1 1mmmm的薄層固體培養(yǎng)基的薄層固體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，稱之為平板培養(yǎng)。上進行培養(yǎng)，稱之為平板培養(yǎng)。由由Bergman1960Bergman1960年首創(chuàng)的，其

6、目的是年首創(chuàng)的，其目的是為了獲得單細胞系為了獲得單細胞系 ，并研究其生理，并研究其生理生化和遺傳上的規(guī)律。生化和遺傳上的規(guī)律。特特 點點： -平板培養(yǎng)是選擇優(yōu)良單細胞株常用的方平板培養(yǎng)是選擇優(yōu)良單細胞株常用的方法。因為由平板培養(yǎng)所增殖的細胞團大多來法。因為由平板培養(yǎng)所增殖的細胞團大多來自一個單細胞。自一個單細胞。 -平板培養(yǎng)用的是平板培養(yǎng)用的是1 mm厚的薄層固體培養(yǎng)厚的薄層固體培養(yǎng)基，在顯微鏡下可對細胞的分裂和細胞團的基，在顯微鏡下可對細胞的分裂和細胞團的增殖進行追蹤觀察增殖進行追蹤觀察 單細胞培養(yǎng)過程單細胞培養(yǎng)過程單細胞懸浮液的密度：一般為單細胞懸浮液的密度：一般為10103 3個個mLm

7、L接種單細胞接種單細胞 將調(diào)整好細胞密度的單細胞懸將調(diào)整好細胞密度的單細胞懸浮液與浮液與5050左右的固體培養(yǎng)基混合均勻，分左右的固體培養(yǎng)基混合均勻，分裝于無菌的培養(yǎng)皿中，水平放置，冷卻，即裝于無菌的培養(yǎng)皿中，水平放置，冷卻，即為單細胞培養(yǎng)平板為單細胞培養(yǎng)平板。培養(yǎng)培養(yǎng) ：將上述單細胞培養(yǎng)平板置于培養(yǎng)箱：將上述單細胞培養(yǎng)平板置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。中培養(yǎng)。 繼代培養(yǎng)：繼代培養(yǎng)： 選取生長良好的由單細胞形成選取生長良好的由單細胞形成的細胞團，接種于新鮮的固體培養(yǎng)基上進的細胞團，接種于新鮮的固體培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，獲得由單細胞形成的細胞系。行繼代培養(yǎng)，獲得由單細胞形成的細胞系。單細胞平板培養(yǎng)效率的檢測

8、單細胞平板培養(yǎng)效率的檢測所謂植板率即在平板上形成細胞團的百分所謂植板率即在平板上形成細胞團的百分率率2 2 看護培養(yǎng)看護培養(yǎng)概念：概念：有些植物細胞，一旦單離出來，有些植物細胞，一旦單離出來，不僅不能分裂、增殖，還可能死亡。不僅不能分裂、增殖，還可能死亡。如果用一塊愈傷組織（生長旺盛）來哺如果用一塊愈傷組織（生長旺盛）來哺育單細胞，從而使其正常分裂、增殖的育單細胞，從而使其正常分裂、增殖的方法，稱方法，稱“看護培養(yǎng)看護培養(yǎng)” 特點特點：方法簡便，但不能在顯微鏡：方法簡便，但不能在顯微鏡下追蹤細胞的分裂和細胞團的形成。下追蹤細胞的分裂和細胞團的形成。 濾紙濾紙起滲透擴散養(yǎng)分作用；起滲透擴散養(yǎng)分作

9、用；愈傷組織塊可以促進單細胞的生長繁殖愈傷組織塊可以促進單細胞的生長繁殖愈傷組織給單細胞傳遞了某些生物信息，愈傷組織給單細胞傳遞了某些生物信息，或為單細胞的生長繁殖提供了某些物質(zhì)條件或為單細胞的生長繁殖提供了某些物質(zhì)條件例如植物激素等內(nèi)源化合物。例如植物激素等內(nèi)源化合物。將生長活躍的愈傷組織塊植人固體培養(yǎng)將生長活躍的愈傷組織塊植人固體培養(yǎng)基的中間部位；基的中間部位；愈傷組織愈傷組織接種幾天后，接種幾天后，在愈傷組織塊的上在愈傷組織塊的上方放置方放置1片面積為片面積為1 cm2左右的無菌濾紙，左右的無菌濾紙，取一小滴經(jīng)過稀釋的單細胞懸浮液接種取一小滴經(jīng)過稀釋的單細胞懸浮液接種于濾紙上方；于濾紙上

10、方；單細胞培養(yǎng)過程單細胞培養(yǎng)過程置于培養(yǎng)箱中，在一定的溫度和光照條件置于培養(yǎng)箱中，在一定的溫度和光照條件下培養(yǎng)若干天，單細胞在濾紙上進行持續(xù)的下培養(yǎng)若干天，單細胞在濾紙上進行持續(xù)的分裂和增殖，形成細胞團；分裂和增殖，形成細胞團；將在濾紙上由單細胞形成的細胞團轉(zhuǎn)移將在濾紙上由單細胞形成的細胞團轉(zhuǎn)移到新鮮的固體培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)，獲到新鮮的固體培養(yǎng)基中進行繼代培養(yǎng)，獲得由單細胞形成的細胞系得由單細胞形成的細胞系3 3 微室培養(yǎng)微室培養(yǎng)1）概念：概念： 將接種有單細胞的少量培養(yǎng)基，將接種有單細胞的少量培養(yǎng)基，置于微室中培養(yǎng)，使單細胞生長繁殖的置于微室中培養(yǎng)，使單細胞生長繁殖的培養(yǎng)方法。培養(yǎng)方法。

11、1955年，德若普（年，德若普（De Ropp）首次將接首次將接種有單細胞的一小滴液體培養(yǎng)基，在微種有單細胞的一小滴液體培養(yǎng)基，在微室中進行單細胞懸浮培養(yǎng)室中進行單細胞懸浮培養(yǎng)。單細胞單細胞微室培養(yǎng)微室培養(yǎng)2）接種的細胞必須達到臨界細胞密度以上。）接種的細胞必須達到臨界細胞密度以上。10103 3個個mLmL; ;密度過低，單細胞無法進行生長繁殖；密度過低，單細胞無法進行生長繁殖；密度過高，則形成的細胞團混雜在一起，密度過高，則形成的細胞團混雜在一起，難于獲得單細胞形成的細胞系。難于獲得單細胞形成的細胞系。3 3）培養(yǎng)基少，營養(yǎng)和水分難以保持，）培養(yǎng)基少，營養(yǎng)和水分難以保持，pHpH值值變動輻

12、度大，培養(yǎng)細胞僅能短期分裂，因變動輻度大，培養(yǎng)細胞僅能短期分裂，因此，當細胞團長到一定大小，將其轉(zhuǎn)移到此，當細胞團長到一定大小，將其轉(zhuǎn)移到另外培養(yǎng)基上。另外培養(yǎng)基上。 De Ropp1955年首先進行微室培養(yǎng)研究，年首先進行微室培養(yǎng)研究，進行單細胞活體連續(xù)觀察。進行單細胞活體連續(xù)觀察。Jones1960年首先觀察到煙草細胞分裂年首先觀察到煙草細胞分裂.4 4） 特點：特點：微室培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基用量少，可以通過微室培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基用量少，可以通過顯微鏡觀察單個細胞的生長、分裂、分化、顯微鏡觀察單個細胞的生長、分裂、分化、發(fā)育情況。發(fā)育情況。有利于對細胞特性和單個細胞生長發(fā)育的全有利于對細胞特

13、性和單個細胞生長發(fā)育的全過程進行跟蹤研究。過程進行跟蹤研究。三、單細胞培養(yǎng)的技術關鍵三、單細胞培養(yǎng)的技術關鍵1.細胞的起始密度細胞的起始密度 -細胞密度：系指單位體積內(nèi)的細胞數(shù)細胞密度：系指單位體積內(nèi)的細胞數(shù)目，單位：目，單位：103個個mL -起始細胞密度起始細胞密度：系指開始培養(yǎng)時，單：系指開始培養(yǎng)時，單位體積內(nèi)的細胞數(shù)目。位體積內(nèi)的細胞數(shù)目。起始密度也就是起始密度也就是最低有效密度。最低有效密度。2.植物生長激素植物生長激素 生長素和分裂素是植物細胞培養(yǎng)中主要的生長素和分裂素是植物細胞培養(yǎng)中主要的 生長激素。生長激素。 3溫度溫度:一般控制在一般控制在25左右。左右。4. pH: 一般控

14、制在一般控制在5.26.0的范圍的范圍二二 小細胞團培養(yǎng)小細胞團培養(yǎng) 小細胞團小細胞團是指由是指由28個植物細胞聚合在一個植物細胞聚合在一起而形成的細胞團塊。起而形成的細胞團塊。小細胞團培養(yǎng)是將小團塊接種于培養(yǎng)基中，小細胞團培養(yǎng)是將小團塊接種于培養(yǎng)基中，在一定條件下進行培養(yǎng)的過程。在一定條件下進行培養(yǎng)的過程。 （）植物小細胞團的形成）植物小細胞團的形成1愈傷組織分割法愈傷組織分割法 愈傷組織分割法是在無菌條件下用鑷子愈傷組織分割法是在無菌條件下用鑷子或者小刀將愈傷組織塊分割成為小細胞或者小刀將愈傷組織塊分割成為小細胞團的過程。團的過程。 2 2單細胞增殖法單細胞增殖法1)植物細胞具有群體生長特

15、性，植物細胞具有群體生長特性，2)細胞外圍有一層果膠等膠體物質(zhì)，容易將細細胞外圍有一層果膠等膠體物質(zhì)，容易將細胞粘在一起而形成細胞團。胞粘在一起而形成細胞團。3) 單細胞培養(yǎng)過程中，單細胞經(jīng)過分裂繁殖單細胞培養(yǎng)過程中，單細胞經(jīng)過分裂繁殖也形成細胞團。也形成細胞團。3 3 細胞團分散法細胞團分散法 細胞團分散法是通過機械攪拌或者通人無細胞團分散法是通過機械攪拌或者通人無菌空氣等，在剪切力的作用下，使大細胞菌空氣等，在剪切力的作用下，使大細胞團分散成為小細胞團的過程團分散成為小細胞團的過程。（二）植物小細胞團的同步化方法（二）植物小細胞團的同步化方法細胞團大小不一樣，所處的生長期有所不同，細胞團大

16、小不一樣，所處的生長期有所不同，生長繁殖的能力和新陳代謝的水平也就有很生長繁殖的能力和新陳代謝的水平也就有很大差別。大差別。為了使小細胞團在懸浮培養(yǎng)時處于比較均一為了使小細胞團在懸浮培養(yǎng)時處于比較均一的狀態(tài)，需要進行同步化處理的狀態(tài)，需要進行同步化處理。 1 1體積選擇法體積選擇法體積選擇法是根據(jù)細胞團的體積大小進行選擇體積選擇法是根據(jù)細胞團的體積大小進行選擇.將培養(yǎng)一段時間的細胞懸浮液，在無菌條件下，將培養(yǎng)一段時間的細胞懸浮液，在無菌條件下，用一定孔徑的不銹鋼篩網(wǎng)過濾，除去大細胞團，用一定孔徑的不銹鋼篩網(wǎng)過濾，除去大細胞團，再用較小孔徑的篩網(wǎng)過濾，獲得顆粒大小較均勻再用較小孔徑的篩網(wǎng)過濾，獲

17、得顆粒大小較均勻的小細胞團，再懸浮于新鮮的液體培養(yǎng)基中進行培的小細胞團，再懸浮于新鮮的液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。養(yǎng)。2低溫處理法1) 將收集得到的細胞或小細胞團，在將收集得到的細胞或小細胞團，在4左右左右的低溫條件下處理的低溫條件下處理13d，植物細胞在低溫植物細胞在低溫下全部停止生長繁殖，下全部停止生長繁殖，2)然后再懸浮于新鮮的液體培養(yǎng)基中，在然后再懸浮于新鮮的液體培養(yǎng)基中，在25培養(yǎng)，于是細胞幾乎同時開始生長繁殖，處培養(yǎng)，于是細胞幾乎同時開始生長繁殖，處于同步狀態(tài)。于同步狀態(tài)。3 3限制營養(yǎng)處理法限制營養(yǎng)處理法1)將細胞或小細胞團懸浮在營養(yǎng)物質(zhì)受到限將細胞或小細胞團懸浮在營養(yǎng)物質(zhì)受到限制的培

18、養(yǎng)液中培養(yǎng)幾天，由于營養(yǎng)缺乏，制的培養(yǎng)液中培養(yǎng)幾天，由于營養(yǎng)缺乏，細胞的生長繁殖受到限制，幾乎所有的細細胞的生長繁殖受到限制，幾乎所有的細胞都停止生長；胞都停止生長；2)然后再將細胞轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)液中，進然后再將細胞轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)液中，進行懸浮培養(yǎng)，則細胞幾乎同步地開始生長繁行懸浮培養(yǎng)，則細胞幾乎同步地開始生長繁殖。殖。 4細胞分裂抑制法1)在細胞或小細胞團培養(yǎng)過程中，通過向在細胞或小細胞團培養(yǎng)過程中，通過向培養(yǎng)液中添加某種細胞分裂抑制劑處理一培養(yǎng)液中添加某種細胞分裂抑制劑處理一段時間，所有的細胞都停止分裂；段時間，所有的細胞都停止分裂；2)然后將細胞轉(zhuǎn)移到新鮮的液體培養(yǎng)基中，然后將細胞轉(zhuǎn)

19、移到新鮮的液體培養(yǎng)基中，在一定的條件下進行懸浮培養(yǎng)，則所有的細在一定的條件下進行懸浮培養(yǎng)，則所有的細胞幾乎同步地開始分裂。胞幾乎同步地開始分裂。（三）植物小細胞團培養(yǎng)的方法（三）植物小細胞團培養(yǎng)的方法植物細胞懸浮培養(yǎng)植物細胞懸浮培養(yǎng):植物細胞懸浮培養(yǎng)植物細胞懸浮培養(yǎng)懸浮細胞培養(yǎng)是指將組織培養(yǎng)物分離懸浮細胞培養(yǎng)是指將組織培養(yǎng)物分離成單細胞或小細胞團，懸浮在液體培成單細胞或小細胞團，懸浮在液體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)的方法。養(yǎng)基上進行培養(yǎng)的方法。 1 1、細胞懸浮培養(yǎng)的要求、細胞懸浮培養(yǎng)的要求（1 1）細胞懸浮培養(yǎng)的材料要求為保持良）細胞懸浮培養(yǎng)的材料要求為保持良好分散狀態(tài)的單個細胞或小細胞聚集體。好分散

20、狀態(tài)的單個細胞或小細胞聚集體。細胞懸浮培養(yǎng)的材料一般通過愈傷組織細胞懸浮培養(yǎng)的材料一般通過愈傷組織反復繼代培養(yǎng)獲得反復繼代培養(yǎng)獲得. .選擇疏松易碎的，外觀新鮮濕潤的愈傷組織選擇疏松易碎的，外觀新鮮濕潤的愈傷組織繼代培養(yǎng)，在培養(yǎng)的過程中繼代培養(yǎng)，在培養(yǎng)的過程中不斷進行攪拌和不斷進行攪拌和振蕩振蕩, ,使愈傷組織上的細胞被剝落到培養(yǎng)液中，使愈傷組織上的細胞被剝落到培養(yǎng)液中，得到分散程度高的游離細胞懸浮物得到分散程度高的游離細胞懸浮物. .（2 2）細胞接種）細胞接種：細胞：細胞合適的接種率為合適的接種率為1 1:10(:10(細胞細胞: :占培養(yǎng)基占培養(yǎng)基)。( (3)3)細胞懸浮培養(yǎng)條件細胞懸

21、浮培養(yǎng)條件: :懸浮培養(yǎng)通常采用水平振蕩，速率為懸浮培養(yǎng)通常采用水平振蕩，速率為30-30-150150r/minr/min，或者通入氣體攪拌?；蛘咄ㄈ霘怏w攪拌。溫度溫度24-3024-30為宜。為宜。 pHpH值為值為5-75-7。(4)(4)植物細胞都是植物細胞都是好氧性好氧性的，因此需要連續(xù)不斷地的，因此需要連續(xù)不斷地供氧供氧。但是。但是需氧量較低，最大氧攝入速率需氧量較低，最大氧攝入速率1-3.5 1-3.5 mmol/hmmol/h，而微生物細而微生物細 胞是胞是5-90 5-90 mmol/hmmol/h. .2 2、懸浮細胞的生長與增殖、懸浮細胞的生長與增殖懸浮細胞擴增生長曲線為

22、懸浮細胞擴增生長曲線為S S型，型，經(jīng)歷經(jīng)歷延遲期，生長期和直線生長期，減延遲期，生長期和直線生長期，減慢期和靜止期。慢期和靜止期。圖圖5-6懸浮培養(yǎng)細胞生長曲線懸浮培養(yǎng)細胞生長曲線 懸浮培養(yǎng)細胞起始密度一般應在懸浮培養(yǎng)細胞起始密度一般應在0 05-2.5 5-2.5 10105 5cellscellsmLmL，在培養(yǎng)過程中增加到在培養(yǎng)過程中增加到1-4 1-4 10106 6mLmL，每個細每個細胞平均分裂胞平均分裂4-64-6次，歷經(jīng)次，歷經(jīng)18-2518-25d d。 3 3、細胞懸浮培養(yǎng)細胞懸浮培養(yǎng)注意問題注意問題（1）防止細胞凝聚成塊）防止細胞凝聚成塊 植物細胞具有植物細胞具有聚聚集

23、集在一起的特性，它們?nèi)菀拙奂杉毎麍F在一起的特性，它們?nèi)菀拙奂杉毎麍F（2-200個細胞，直徑個細胞，直徑2mm），），或者細胞或者細胞分裂后沒有分離或分泌的粘多糖和蛋白質(zhì)分裂后沒有分離或分泌的粘多糖和蛋白質(zhì)-細胞密度過大或粘性高引起混合和循細胞密度過大或粘性高引起混合和循環(huán)的不良。細胞增殖速度變慢，影響產(chǎn)物環(huán)的不良。細胞增殖速度變慢，影響產(chǎn)物的質(zhì)量和產(chǎn)量。的質(zhì)量和產(chǎn)量。( (2 2) )剪切力的影響剪切力的影響 植物細胞壁脆，植物細胞壁脆，對剪切力敏感。對剪切力敏感。剪切力積極影響表現(xiàn)為增加通氣剪切力積極影響表現(xiàn)為增加通氣, ,保持良好的混合狀態(tài)和細胞分散保持良好的混合狀態(tài)和細胞分散性性,

24、, 對細胞生長繁殖有利，提高對細胞生長繁殖有利，提高細胞產(chǎn)率和次生代謝產(chǎn)物產(chǎn)量細胞產(chǎn)率和次生代謝產(chǎn)物產(chǎn)量 多數(shù)情況下則呈現(xiàn)副作用多數(shù)情況下則呈現(xiàn)副作用, ,較高的較高的攪拌速度會造成細胞損傷攪拌速度會造成細胞損傷, ,引起胞引起胞內(nèi)化合物的釋放，影響細胞形態(tài)、內(nèi)化合物的釋放，影響細胞形態(tài)、代謝和產(chǎn)率及聚集狀態(tài)等。代謝和產(chǎn)率及聚集狀態(tài)等。 因此要選擇合適的攪拌方式因此要選擇合適的攪拌方式. .（3）保持細胞培養(yǎng)無菌 植物細胞培養(yǎng)成分復雜而豐富，適合真菌生長，植物細胞培養(yǎng)成分復雜而豐富，適合真菌生長， 植物細胞生長速度慢，生長周期長，植物細胞生長速度慢，生長周期長， 要要2-32-3周或者周或者2-32-3個月個月 極易造成污染。極易造成污染。 所以在植物細胞培