高溫菌的純種分離與鑒定

1、高溫菌的純種分離與鑒定匯報人:趙影匯報內(nèi)容 實驗內(nèi)容 實驗結果及分析實驗后期工作 實驗內(nèi)容篇 接著上次的實驗結果,老師給的樣品DSM88固體培養(yǎng)基，溫度70度，PH7.0培養(yǎng)長出了菌株 對菌株進行純種分離 :在培養(yǎng)出的菌株中挑選了10個單菌落從菌落特怔看為不同的菌種進行培養(yǎng),多次劃線,直到長出的菌為純種菌 對得到的10種菌進行斜面保藏及革蘭染色觀察它們的形態(tài)結構對部分菌進行了芽孢染色實驗結果篇 10種菌的菌落特征及形態(tài)結構(革蘭染色,單染色)2號菌革蘭染色圖片2號菌單染色圖片3號菌革蘭染色圖片3號菌單染色圖片4號菌革蘭染色圖片4號菌單染色圖片5號菌革蘭染色圖片5號菌單染色圖片6號菌革蘭染色圖片

2、6號菌單染色圖片7號菌革蘭染色圖片7號菌單染色圖片8號菌革蘭染色圖片8號菌單染色圖片9號菌革蘭染色圖片9號菌單染色圖片10號菌革蘭染色圖片10號菌單染色圖片實驗結果分析篇 對挑取的9種樣品進行多次重復劃線內(nèi)容2 菌種的分子鑒定 細菌 的DNA提?。?實驗原理：苯酚 氯仿提取DNA是利用酚是蛋白質的變性劑，反復抽提，使蛋白質變性。SPS將細胞膜裂解，在蛋白酶K，EDTA的存在下消化蛋白質或多肽或小肽分子，核蛋白變性降解，使DNA從核蛋白中游離出來，DNA溶于水，不溶于有機溶劑，蛋白質分子表面帶有親水基團，也容易進行水合作用，并在表面形成一層水化層，使蛋白質分子能順利進入到水溶液中形成穩(wěn)定的膠體溶

3、液，當有機溶液存在時，蛋白質的這種膠體穩(wěn)定遭到破壞，變性沉淀，離心后有機溶劑在試管底層（有機相），DNA存在于上層水相中，蛋白質則沉淀于兩項之間，酚-氯仿抽提的作用是除去未消化的蛋白質，氯仿的作用是有助于水相與有機相分離和除去DNA溶液中的酚。抽提后的溶液用2倍體積的無水乙醇在乙酸鈉存在下沉淀DNA?；厥誅NA用70%乙醇法洗去DNA沉淀中的鹽，真空干燥，用TE緩沖液溶解DNA備用。內(nèi)容2實驗步驟：1、挑米粒大小菌體+50微升溶菌酶+460微升1TE,放入37搖床2小時以上（注意搖菌時離心管要橫放）2、20SDS50微升+Pk5-10微升震蕩混勻，放入55烘箱3060min3、550微升苯酚：

4、氯仿：異戊醇（25:24:1）震蕩混勻，12000rPm離心10min，吸取上清（不吸到中間渣滓，反復抽提2次）4、上清液+2倍上清液體積無水乙醇+0.1倍體積的乙酸鈉，室溫放置10min以上；5、12000rPm離心10min，去上清，用70乙醇輕搖洗鹽12次，再次離心5min，棄乙醇6、3755干燥后（確保乙醇完全揮發(fā)干凈，防止影響PCR），加水保存?zhèn)溆?0mi 加熱使其溶解 定容TE配制方法：(用于懸浮和貯存DNA)配制100ml溶液各成分用量1ml 1mol/L Tris-HCL (pH7.4-8 , 25)200ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)水98.8mlTris-HCL緩沖液配制：將121g的Tris堿溶解于約0.9L水中，再根據(jù)所要求的pH（25下）加一定量的濃鹽酸，用水調至終體積1L濃鹽酸體積（ml） pH70ml 7.460ml 7.642ml 8.00.5mol/LEDTA配制：93.05gEDTA.Na2+10