第三章消毒滅菌與病原微生物實驗室生物安全

1、第第3章章消毒滅菌與病原微生物實驗室消毒滅菌與病原微生物實驗室生物安全生物安全消毒滅菌常用術(shù)語消毒滅菌常用術(shù)語消毒消毒(disinfection)：殺死物體上或環(huán)境中的病原微生物的方法。殺死物體上或環(huán)境中的病原微生物的方法。滅菌滅菌(sterilization)：殺滅物體上所有微生物的方法。殺滅物體上所有微生物的方法。 防腐防腐(antisepsis)：防止或抑制皮膚表面細菌生長繁殖的方法。防止或抑制皮膚表面細菌生長繁殖的方法。清潔清潔(cleaning)：是指通過除去塵埃和一切污穢以減少微生物數(shù)量的是指通過除去塵埃和一切污穢以減少微生物數(shù)量的過程。過程。 無菌無菌(asepsis)和和無菌操

2、作無菌操作：無菌是無菌是無無活菌的意思，多是滅菌的結(jié)果。活菌的意思，多是滅菌的結(jié)果。防止細菌進入人體或其它物品的操作技術(shù)，稱為無菌操作。防止細菌進入人體或其它物品的操作技術(shù)，稱為無菌操作。 第一節(jié)第一節(jié) 消毒滅菌的方法消毒滅菌的方法熱力滅菌法熱力滅菌法輻射殺菌法輻射殺菌法濾過除菌法濾過除菌法干燥與低溫抑菌法干燥與低溫抑菌法干熱滅菌法干熱滅菌法濕熱滅菌法濕熱滅菌法物理消毒滅菌法物理消毒滅菌法 化學消毒滅菌法化學消毒滅菌法 高效消毒劑高效消毒劑中效消毒劑中效消毒劑低效消毒劑低效消毒劑（一）熱力滅菌法（一）熱力滅菌法1. 干熱滅菌法干熱滅菌法2. 濕熱滅菌法濕熱滅菌法在同一溫度下，濕熱效力比干熱大。

3、在同一溫度下，濕熱效力比干熱大。 原因：（原因：（1）濕熱中細菌菌體蛋白較易凝固；）濕熱中細菌菌體蛋白較易凝固； （2）濕熱的穿透力比干熱大；）濕熱的穿透力比干熱大； （3）濕熱的蒸汽有潛熱存在。）濕熱的蒸汽有潛熱存在。 1. 干熱滅菌法干熱滅菌法 焚燒焚燒 燒灼燒灼 干烤干烤 (160 2h或或 171 1h或或121 16h) 紅外線紅外線干烤箱干烤箱燒灼滅菌法燒灼滅菌法2. 濕熱滅菌法濕熱滅菌法 煮沸法煮沸法 巴氏消毒法巴氏消毒法 (牛乳、酒類）牛乳、酒類） 低溫維持巴氏消毒法低溫維持巴氏消毒法 61.162.830min 高溫瞬時巴氏消毒法高溫瞬時巴氏消毒法 71.715s 超高溫巴氏

4、消毒法超高溫巴氏消毒法 13212s 流動蒸汽消毒法流動蒸汽消毒法 間歇蒸汽滅菌法間歇蒸汽滅菌法（反復(fù)多次流動蒸汽）（反復(fù)多次流動蒸汽） 100維持維持30min37溫箱過夜溫箱過夜100維持維持30min37溫箱過夜溫箱過夜 100維持維持30min 37溫箱過夜溫箱過夜100維持維持30min。 高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法 在在103.4kPa蒸氣壓下，溫度達到蒸氣壓下，溫度達到121.3，維持，維持1520min高壓蒸汽滅菌器高壓蒸汽滅菌器用于普通培養(yǎng)基、生理鹽水、耐熱藥品、手術(shù)敷料等。用于普通培養(yǎng)基、生理鹽水、耐熱藥品、手術(shù)敷料等。（二）輻射滅菌法（二）輻射滅菌法l非電離輻射非電離輻

5、射: 紫外線紫外線l電離輻射電離輻射: 、 、射線以及高能質(zhì)子、射線以及高能質(zhì)子、 中子等中子等l紫外線紫外線(ultraviolet ray, UV) 作用于作用于DNA，使相鄰的胸腺嘧啶共價結(jié)合形成二聚體，干，使相鄰的胸腺嘧啶共價結(jié)合形成二聚體，干擾擾DNA復(fù)制。復(fù)制。 空氣消毒、表面消毒?？諝庀尽⒈砻嫦?。UV的殺菌機制的殺菌機制l電離輻射電離輻射 射線射線:電離輻射強，穿透力差（電離輻射強，穿透力差（ 缺乏穿透力，不實用）缺乏穿透力，不實用） 射線射線:電離輻射強，穿透力強電離輻射強，穿透力強 射線射線:電離輻射弱，穿透力強電離輻射弱，穿透力強x射線：殺菌力不如紫外線，穿透力強射線：

6、殺菌力不如紫外線，穿透力強殺菌機制：射線使水電離為殺菌機制：射線使水電離為H+和和OH-，這，這些游離基是強烈的還原劑和氧些游離基是強烈的還原劑和氧化劑，可直接作用于細菌本身化劑，可直接作用于細菌本身 。用途：忌熱物品的滅菌消毒、食品保藏和育種等方面。用途：忌熱物品的滅菌消毒、食品保藏和育種等方面。l 微波微波(microwave)-熱效應(yīng)滅菌。熱效應(yīng)滅菌。（三）濾過除菌法（三）濾過除菌法 l濾菌器濾菌器(filter)-液體除菌液體除菌薄膜濾菌器薄膜濾菌器玻璃濾菌器玻璃濾菌器石棉濾菌器石棉濾菌器素陶瓷濾菌器素陶瓷濾菌器薄膜濾菌器薄膜濾菌器微孔濾膜上的細菌微孔濾膜上的細菌l生物潔凈技術(shù)生物潔凈

7、技術(shù)-空氣除菌空氣除菌 初級分子空氣過濾器初級分子空氣過濾器 塑料泡沫海綿塑料泡沫海綿 中級分子空氣過濾器中級分子空氣過濾器 無紡布無紡布 高級分子空氣過濾器高級分子空氣過濾器 超細玻璃濾紙超細玻璃濾紙層流室層流室無菌手術(shù)室無菌手術(shù)室（四）（四） 干燥與低溫抑菌法干燥與低溫抑菌法l 干燥：干燥：細菌在干燥的環(huán)境中失去大量水分，新陳代謝便會發(fā)生障細菌在干燥的環(huán)境中失去大量水分，新陳代謝便會發(fā)生障礙，甚至引起菌體蛋白質(zhì)變性和由于鹽類濃度的增高而逐漸導(dǎo)致死亡。礙，甚至引起菌體蛋白質(zhì)變性和由于鹽類濃度的增高而逐漸導(dǎo)致死亡。l 低溫：低溫：低溫下，細菌代謝活動降低到最低水平，生長繁殖停止，低溫下，細菌代

8、謝活動降低到最低水平，生長繁殖停止，但仍可長時間保持活力。但仍可長時間保持活力。 常用作保存細菌菌種，常用作保存細菌菌種，冷凍真空干燥法冷凍真空干燥法可避免解凍時對細菌的損可避免解凍時對細菌的損傷，是目前保存菌種的最好方法。傷，是目前保存菌種的最好方法。菌種保存管菌種保存管（五）化學（五）化學消毒滅菌法消毒滅菌法殺菌機制殺菌機制v 促進菌體蛋白質(zhì)變性或凝固。促進菌體蛋白質(zhì)變性或凝固。v 干擾細菌的酶系統(tǒng)和代謝。干擾細菌的酶系統(tǒng)和代謝。v 損傷細菌的細胞膜，使細胞膜通透性增加，胞外液內(nèi)滲，損傷細菌的細胞膜，使細胞膜通透性增加，胞外液內(nèi)滲，細菌裂解。細菌裂解。化學消毒劑的種類化學消毒劑的種類（一）

9、（一）高效消毒劑高效消毒劑 1.1.含氯消毒劑含氯消毒劑 （次氯酸鈉、漂白粉）（次氯酸鈉、漂白粉） 2.2.過氧化物消毒劑過氧化物消毒劑 （過氧化氫、過氧乙酸）（過氧化氫、過氧乙酸） 3.3.醛類消毒劑醛類消毒劑 （戊二醛、甲醛）（戊二醛、甲醛） 4.4.環(huán)氧乙烷環(huán)氧乙烷（二）（二）中效消毒劑中效消毒劑 1.1.含碘消毒劑含碘消毒劑 （碘酊、碘伏）（碘酊、碘伏） 2.2.醇類消毒劑醇類消毒劑 （乙醇、異丙醇）（乙醇、異丙醇）（三）（三）低效消毒劑低效消毒劑 1.1.季銨鹽類季銨鹽類消毒劑消毒劑 （苯扎溴銨）（苯扎溴銨） 2.2.氯已定氯已定 3.3.高錳酸鉀高錳酸鉀 第二節(jié)第二節(jié) 消毒滅菌的運

10、用消毒滅菌的運用 醫(yī)療器械物品的消毒滅菌醫(yī)療器械物品的消毒滅菌 室內(nèi)空氣消毒滅菌室內(nèi)空氣消毒滅菌 手和皮膚的消毒手和皮膚的消毒 黏膜的消毒黏膜的消毒 病人排泄物與分泌物的消毒滅菌病人排泄物與分泌物的消毒滅菌 病人污染物品的消毒病人污染物品的消毒 飲水的消毒飲水的消毒 環(huán)境的消毒環(huán)境的消毒 第三節(jié)第三節(jié) 影響消毒滅菌效果的因素影響消毒滅菌效果的因素| 微生物的種類微生物的種類 | 微生物的物理狀態(tài)微生物的物理狀態(tài) | 微生物的數(shù)量微生物的數(shù)量 | 消毒劑性質(zhì)、濃度與作用時間消毒劑性質(zhì)、濃度與作用時間 | 溫度溫度 | 酸堿度酸堿度 | 有機物有機物第四節(jié)第四節(jié) 病原微生物實驗室生物安全病原微生物

11、實驗室生物安全 生物安全（生物安全（biosafety）是生物技術(shù)安全（）是生物技術(shù)安全（safety of biotechnology）的簡稱。）的簡稱。 生物安全是指對由現(xiàn)代生物技術(shù)的開發(fā)和應(yīng)用可能產(chǎn)生生物安全是指對由現(xiàn)代生物技術(shù)的開發(fā)和應(yīng)用可能產(chǎn)生的負面影響所采取的有效預(yù)防和控制措施。目的是保護生物的負面影響所采取的有效預(yù)防和控制措施。目的是保護生物多樣性、生態(tài)環(huán)境和人體健康。多樣性、生態(tài)環(huán)境和人體健康。一、病原微生物的分類一、病原微生物的分類第一類第一類是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚是指能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅

12、的微生物。未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。第二類第二類是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在是指能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。 第三類第三類是指能夠引起人或動物疾病，但一般情況下對人、動物或環(huán)境不是指能夠引起人或動物疾病，但一般情況下對人、動物或環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并構(gòu)成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物。第四類第四類是指在通常情況下不會

13、引起人或動物疾病的微生物。如小鼠白血是指在通常情況下不會引起人或動物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。病病毒等。 第一類、第二類統(tǒng)稱為第一類、第二類統(tǒng)稱為高致病性病原微生物高致病性病原微生物。二、病原微生物實驗室的分級二、病原微生物實驗室的分級級別級別處理對象處理對象一級一級對人體、動植物或環(huán)境危害較低，不具有對健康成人、動植物對人體、動植物或環(huán)境危害較低，不具有對健康成人、動植物致病的致病因子致病的致病因子。二級二級對人體、動植物或環(huán)境具有中等危害或具有潛在危險的致病因?qū)θ梭w、動植物或環(huán)境具有中等危害或具有潛在危險的致病因子，對健康成人、動植物和環(huán)境不會造成嚴重危害，子，對健康成人、動植物和

14、環(huán)境不會造成嚴重危害，具具有有效有有效的預(yù)防和治療措施的預(yù)防和治療措施。三級三級對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性，主要通過氣溶膠使人對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性，主要通過氣溶膠使人類傳染上嚴重的甚至是致命的疾病，或?qū)又参锖铜h(huán)境具有高類傳染上嚴重的甚至是致命的疾病，或?qū)又参锖铜h(huán)境具有高度危害的致病因子。通常有預(yù)防治療措施度危害的致病因子。通常有預(yù)防治療措施。四級四級 對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性，通過氣溶膠途徑傳播對人體、動植物或環(huán)境具有高度危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明或未知的危險的致病因子。沒有預(yù)防治療措施或傳播途徑不明或未知的危險的致病因子。沒有預(yù)防治療措施。病原微生物實驗室生物安全的核心是病原微生物實驗室生物安全的核心是防擴散防擴