cellsearch循環(huán)腫瘤細(xì)胞CTC試劑盒說明書自譯中文版

1、790000116人份試劑盒 Cell Search循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測試劑盒（上皮細(xì)胞）IVD使用須知本試劑盒僅用于體外診斷CellSearch循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測試劑盒用于外周血中循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）的計(jì)數(shù)，這些細(xì)胞來源于上皮細(xì)胞，即表現(xiàn)為CD45陰性（CD45-），EpCAM陽性（EpCAM+），細(xì)胞角蛋白8,18陽性（CK8,18+）和（或者）CK19陽性(CK19+)的細(xì)胞。用CellSearch循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測試劑盒檢測的CTC，存在于外周血中，這類細(xì)胞與乳腺癌、結(jié)直腸癌和前列腺癌*轉(zhuǎn)移患者的無進(jìn)展生存期和總生存期相關(guān)。因此，CTC可以用來監(jiān)控乳腺癌、結(jié)直腸癌和前列腺癌患者的腫瘤細(xì)胞是否

2、發(fā)生轉(zhuǎn)移。CTC應(yīng)該進(jìn)行持續(xù)檢測，并與其他臨床診斷方式聯(lián)合起來監(jiān)控上述腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。在腫瘤發(fā)生過程中的任何時間段，對CTC數(shù)量進(jìn)行評估，可以預(yù)估腫瘤患者治療后的無進(jìn)展生存期和總生存期。*在該研究中，轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者定義為血清標(biāo)志物PSA在標(biāo)準(zhǔn)激素基準(zhǔn)上，高于參考水平具有兩次連續(xù)增加。這些患者通常描述為具有非雄激素依賴性，激素抗性，或去勢抗性的前列腺癌。摘要說明腫瘤轉(zhuǎn)移是指當(dāng)腫瘤細(xì)胞從原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶剝落后，這些腫瘤細(xì)胞進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)并在機(jī)體的遠(yuǎn)端定植生長的情況。血液循環(huán)中的腫瘤細(xì)胞源自于上皮細(xì)胞，而這類細(xì)胞在血液循環(huán)系統(tǒng)中是極罕見的?；诖?，本公司推出的細(xì)胞自動化捕獲儀(CELLTRACKS

3、AUTOPREP System)通過預(yù)設(shè)程序并配合使用CellSearch循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測試劑盒(CELLSEARCH Kit)可以對樣本進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化和自動化檢測。用CELLTRACKS II分析儀或者CellSpotter分析儀，一種半自動熒光顯微鏡，可以對腫瘤細(xì)胞進(jìn)行分析和計(jì)數(shù)。這種方法只計(jì)具有上皮細(xì)胞特性（EpCAM+, CK8,18+，和/或者CK19+）的細(xì)胞數(shù)量。檢測原理CellSearch循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測試劑盒包括磁流體捕獲試劑和熒光免疫試劑。磁流體試劑是一種具有磁芯的顆粒。其表面包被識別EpCAM抗原的抗體，EpCAM是CTC特異性抗原。因此，該磁微?？梢圆东@CTC。經(jīng)過免疫捕獲

4、和富集后，熒光試劑用來鑒定CTC和CTC計(jì)數(shù)。熒光試劑包括以下組成：抗CK-藻紅蛋白（PE）的特異于細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的細(xì)胞角蛋白抗體（上皮細(xì)胞特性）；DAPI，用于細(xì)胞核染色；和抗CD45-別藻藍(lán)蛋白（APC）白細(xì)胞特異性抗體。試劑/樣品混合物被CELLTRACKS AUTOPREP系統(tǒng)分配到一個插入在MAGNEST®細(xì)胞呈現(xiàn)裝置的暗盒中。所述MAGNEST®裝置具有強(qiáng)磁場，能吸引磁微粒標(biāo)記的上皮細(xì)胞在暗盒的表面上。CELLTRACKS ANALYZERII®分析儀，或者CellSpotter®分析儀自動掃描暗盒的整個表面，獲取圖像并向用戶顯示所有事件，其中

5、CK-PE和DAPI熒光染料進(jìn)行共定位。圖像進(jìn)行最終分類，并以畫廊格式呈現(xiàn)給用戶。所檢測分析的事件當(dāng)其形態(tài)學(xué)特征與腫瘤細(xì)胞一致并表現(xiàn)出EpCAM+，CK+，DAPI+和CD45-表型時，才被分類為腫瘤細(xì)胞。試劑盒提供的材料試劑說明1. 3ml 包被抗EpCAM抗體的磁流體：含有濃度為0.022%的磁微粒，這些磁微粒表面偶聯(lián)有抗表皮細(xì)胞表面標(biāo)志物EpCAM的鼠源單克隆抗體。緩沖溶液中含有0.03%的BSA和0.05% ProClin 300作為保護(hù)劑。（棕色瓶蓋）2. 3ml染色試劑：包含細(xì)胞角蛋白特異性鼠源單克隆抗體，該偶聯(lián)藻紅蛋白（PE），濃度為0.0006%和濃度為0.0012%的鼠源抗C

6、D45分子的單克隆抗體，該抗體偶聯(lián)別藻藍(lán)蛋白（APC），保存在含有0.5BSA和0.1疊氮化鈉的緩沖溶液中。（白色瓶蓋）3. 3ml核酸染料：濃度為0.005%的4'，6-二脒基-2-苯基二鹽酸鹽（DAPI）保存在0.05%的Proclin300緩沖溶液中。（藍(lán)色瓶蓋）4. 3ml捕獲增強(qiáng)試劑：包含濃度為0.02的專有試劑用于限制鐵磁流體聚團(tuán)，保存在0.5BSA和 0.1疊氮化鈉緩沖溶液中。（透明瓶蓋）5. 3ml通透試劑：含有0.011的專有通透劑，保存在0.1疊氮化鈉緩沖液中。（綠色瓶蓋）6. 3ml細(xì)胞固定液：包含25的專有固定液成分，保存在0.1BSA和0.1疊氮化鈉緩沖溶液中

7、。（紅色瓶蓋）7. 2 x 110ml/瓶稀釋液：含有0.1疊氮化鈉的緩沖溶液。8. 16支Cellsearch®圓錐形管（15ml圓錐形離心管）和管帽。9. 16個暗盒和暗盒塞子。未提供的必需材料1. CellSave血液保護(hù)管（貨號#7900005）2. CELLTRACKS AUTOPREP系統(tǒng) (Catalog #9541)3. CELLTRACKS ANALYZER II® 分析儀(Catalog #9555)，或者CellSpotter®分析儀(Catalog #9525)4. CELLSEARCH®循環(huán)腫瘤細(xì)胞質(zhì)控試劑盒(Catalog #

8、7900003)5. CELLTRACKS® AUTOPREP® 儀器緩沖液 (Catalog #7901003)6. 能提供離心力為800 X g水平離心機(jī)。7. 試管架8. 微量移液器和槍頭9. 旋渦混合器警告和注意事項(xiàng)1. 本產(chǎn)品僅用于體外診斷。2. 在使用本產(chǎn)品檢測樣本之前請仔細(xì)閱讀說明書。3. 注意：只能用 CellSave保護(hù)管收集血液。CTC非常脆弱，需要特別保護(hù)才能進(jìn)行正確分析。4. 注意：從業(yè)人員必須遵循全面防護(hù)措施，使用實(shí)驗(yàn)室的安全設(shè)備（例如，護(hù)目鏡、安全服、安全手套等）。5. 注意：微生物污染會造成獲得結(jié)果的不正確性，實(shí)驗(yàn)中應(yīng)避免生物污染。6. 警告：

9、所有的生物樣本，包括暗盒和其他與生物樣本接觸的材料，應(yīng)該認(rèn)為具有生物危害。樣本如果具有傳播感染的能力，必須進(jìn)行及時處理。同時，廢棄物應(yīng)根據(jù)當(dāng)?shù)睾蛧业囊?guī)定進(jìn)行正確處理。禁止用嘴吸液。7. 警告：一些含有疊氮化鈉作為防腐劑的試劑。如果食入，請立即就醫(yī)。應(yīng)放在小孩拿不到的地方。遠(yuǎn)離食品和飲料。使用時，佩戴合適的防護(hù)服。與酸接觸會釋放劇毒氣體。在處理過程中，疊氮化合物應(yīng)用大量的水沖洗，并避免放置在鉛或銅的容器中，其可形成爆炸的條件。危險和安全術(shù)語R22表示吞咽有害，S28表示與皮膚接觸后，用大量肥皂清洗。8. 警告：所用包含Proclin300作為防腐劑的試劑。過度暴露在Proclin300可引起皮

10、膚和/或眼睛刺激，以及粘膜和上呼吸道刺激的癥狀。9. 操作人員在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)進(jìn)行培訓(xùn)。試劑儲存和處理1. 所以試劑在未開啟使用之前，請儲存在2-8度。2. 在試劑盒開啟后，試劑在2-8度儲存時間不超過30天。為了更好的儲存，開啟的試劑必須使用相對應(yīng)的蓋子蓋上，蓋子的顏色與試劑瓶的標(biāo)簽相對應(yīng)。這可以避免試劑之間的交叉污染。3. 注意：在試劑盒開啟后，稀釋緩沖液不屬于試劑盒的一部分，應(yīng)當(dāng)在室溫下儲存，且保存時間不能超過30天。4. 避免試劑保存溫度超過35度，也不要冰凍。5. 在使用前，試劑需要平衡至室溫（15-30度）。6. 目視檢查試劑盒包裝，并確定試劑在正確的位置。通過匹配其特有的彩色瓶帽顏色和

11、相應(yīng)標(biāo)簽，檢驗(yàn)每種試劑是否在適當(dāng)?shù)奈恢?。請參照以下圖片的安置。如果發(fā)現(xiàn)試劑放錯了位置，或者存在重復(fù)的瓶子，不要使用該試劑盒，并通知客戶技術(shù)服務(wù)進(jìn)行更換。7. 試劑需避光保存。8. 試劑在正確的保存條件下是穩(wěn)定的，直到保存到印刷在試劑容器或試劑盒上的失效日期。不要使用過期試劑。9. 試劑盒組分經(jīng)過大量的產(chǎn)生和測試。不同試劑盒之間的試劑不能混合使用。檢測過程樣本收集和預(yù)處理使用 CellSave保護(hù)管收集全血1. 初始樣樣本應(yīng)在開始治療方案前進(jìn)行設(shè)計(jì)。后續(xù)樣本可以在治療方案開始后進(jìn)行，在治療過程中，通常在3至4周的時間間隔內(nèi)檢測CTC水平。如果患者用阿霉素進(jìn)行治療，至少應(yīng)在用藥7天后才能取血檢測。

12、2. 只能使用CellSave保存管，通過靜脈無菌的采集全血。3. 采血應(yīng)直到血流停止，以確保血液樣本與抗凝劑和保護(hù)劑的正確比率。立即輕柔的倒轉(zhuǎn)采血管8次進(jìn)行混勻。采血管反轉(zhuǎn)防止凝血。采血管顛倒不足或延遲，可能會導(dǎo)致不準(zhǔn)確的測試結(jié)果。4. 血液樣本可被存儲在CellSave保護(hù)管中并進(jìn)行輸送。請參閱CellSave保護(hù)管使用說明書。不要凍存樣本。警告：在使用CELLTRACKS® AUTOPREP®系統(tǒng)檢測之前，目視檢查每個樣本是否凝血。凝血的樣本應(yīng)被丟棄。CELLTRACKS® AUTOPREP®系統(tǒng)檢測過程1. 手動翻轉(zhuǎn)5次保存樣本血液的CellSa

13、ve保護(hù)管。然后拔出橡膠塞。2. 使用一支新的移液管從CellSave保護(hù)管中轉(zhuǎn)移7.5ml血液到CELLSEARCH®試劑盒提供的一個相應(yīng)標(biāo)記的15ml CELLSEARCH®錐形管中。3. 再用一支新的移液管加入6.5ml稀釋緩沖溶液到上述錐形管中。4. 蓋上管蓋，顛倒5次混勻。5. 樣本離心，使用水平離心機(jī)800 X g離心10min。該10min離心時間不包括達(dá)到800×g所需要的時間。將離心機(jī)剎車“關(guān)閉”或者，如果你的離心機(jī)提供可變制動功能，設(shè)置制動到最低剎車設(shè)置。使用能夠在室溫下離心的離心機(jī)在室溫條件下離心。樣本離心后，目視檢查每個樣品管中血漿和紅血細(xì)

14、胞是否分離。6. 運(yùn)行CELLTRACKS® AUTOPREP®系統(tǒng)之前，上述樣本需要1h的準(zhǔn)備時間。請參閱CELLTRACKS® AUTOPREP®系統(tǒng)用戶指南的完整說明。使用CELLTRACKS 分析儀 II® or CellSpotter®分析儀分析樣本CELLTRACKS® AUTOPREP®系統(tǒng)使用CELLTRACKS分析儀II®或CellSpotter®分析儀將處理好的樣本分配放入到暗盒中準(zhǔn)備進(jìn)行分析。MAGNEST®裝置內(nèi)的放有樣本的暗盒應(yīng)在黑暗中至少孵育20分鐘，并在2

15、4小時內(nèi)進(jìn)行分析。請參閱CELLTRACKS分析儀II®或CellSpotter®分析儀用戶指南的樣本分析和數(shù)據(jù)審查說明。質(zhì)量控制CELLSEARCH®循環(huán)腫瘤細(xì)胞質(zhì)控試劑盒（目錄7900003）檢查整個系統(tǒng)的性能，包括儀器，試劑和操作。在病人測試的每一天或使用大量新的CELLSEARCH®試劑盒時，CELLSEARCH®循環(huán)腫瘤細(xì)胞質(zhì)控應(yīng)該進(jìn)行。請參閱CELLSEARCH®循環(huán)腫瘤細(xì)胞質(zhì)控試劑盒使用說明書和預(yù)期值。結(jié)果解釋結(jié)果以7.5ml血液中CTC的個數(shù)報告。轉(zhuǎn)移性的乳腺癌（MBC）在治療過程中的任何時期，7.5ml血液中CTC數(shù)

16、量5，表示預(yù)后差。預(yù)示著短的無進(jìn)展生存期和總體生存期。轉(zhuǎn)移性的結(jié)直腸癌（MCRC）在治療過程中的任何時期，7.5ml血液中CTC數(shù)量3，表示預(yù)后差。預(yù)示著短的無進(jìn)展生存期和總體生存期。轉(zhuǎn)移性的前列癌（MPC）在治療過程中的任何時期，7.5ml血液中CTC數(shù)量5，表示預(yù)后差。預(yù)示著短的無進(jìn)展生存期和總體生存期。注意如果每7.5ml的樣本血液中，有500個或更多的CTC數(shù)量，樣品殘留可能影響CELLTRACKS® AUTOPREP®系統(tǒng)對隨后樣本包括后續(xù)批次的分析。如果細(xì)胞被延續(xù)到后續(xù)樣本中，這些樣本的CTC數(shù)量可能錯誤地比病人的實(shí)際的CTC計(jì)數(shù)更高。請參閱CELLTRACKS

17、®AUTOPREP®用戶指南以獲取更多信息。局限 CELLSEARCH®結(jié)果應(yīng)按照合適的病人管理程序與來自于診斷測試（即影像學(xué)，實(shí)驗(yàn)室檢查）、體檢和完整病史等所有的臨床信息結(jié)合使用。 本預(yù)后研究并沒有證明任何當(dāng)前治療效果要比任何其他治療或不治療效果要好或者是差。 CELLSEARCH®計(jì)數(shù)結(jié)果和成像效果與評估無進(jìn)展期到有進(jìn)展期的轉(zhuǎn)變不對等。 如果患者使用阿霉素治療，至少應(yīng)在用藥7天后才能取血檢測。如果用阿霉素治療7天內(nèi)取血檢測，對CELLSEARCH®檢測結(jié)果的解釋應(yīng)謹(jǐn)慎。 CELLSEARCH®不能檢測不表達(dá)EpCAM的CTC。 C

18、ELLSEARCH®不能檢測表達(dá)EpCAM,但不表達(dá)細(xì)胞角蛋白8、18和19的CTC。 干擾物質(zhì)：用未處理的樣本作為對照，將SK-BR-3細(xì)胞摻入到血液樣品中，并同潛在的干擾物質(zhì)進(jìn)行作用。對以下癌癥藥物的毒性水平（5次治療指數(shù)），包括非處方藥和其它外源物質(zhì)進(jìn)行了測試：環(huán)磷酰胺，絲裂霉素C®，普羅克瑞®，生物素，5-氟尿嘧啶，甲氨蝶呤，他莫昔芬檸檬酸鹽，紫杉醇，阿那曲唑®，對乙酰氨基酚，乙酰水楊酸，咖啡因，右美沙芬，阿可達(dá)®，人抗小鼠抗體（HAMA）1型，HAMA2型，赫賽汀，和布洛芬。檢測到SK-BR-3細(xì)胞數(shù)無顯著差異，這表明這些物質(zhì)不與CE

19、LLSEARCH®試劑盒產(chǎn)生干擾。通過對加入阿霉素毒性水平的測試，發(fā)現(xiàn)阿霉素能導(dǎo)致白細(xì)胞同時被異常染色成細(xì)胞角蛋白和CD45雙陽性細(xì)胞，這是由于阿霉素能作為熒光化合物嵌入到細(xì)胞核中。如果這樣，所有的細(xì)胞都是CD45陽性和細(xì)胞角蛋白陽性染色，作為一個已知的干擾物質(zhì)染色，這種結(jié)果容易觀察，操作者也很容易識別。如果血液在阿霉素用藥7天后的清除期檢測，這種干擾是不可能在給定的控制治療水平和快速的藥物清除臨床實(shí)踐中觀察到。血脂潛在的干擾也被研究，將濃度為2.6英脫利匹特加入到樣品中，其對應(yīng)于大于1000mg/dl的甘油三酯。將樣品溶解到模擬的總?cè)苎?.4mg/dl的膽紅素，HAMA 1 /

20、HAMA 2和18-60的血細(xì)胞比容也進(jìn)行了研究。脂血，溶血，黃疸和廣泛的血細(xì)胞比容值均不干擾CELLSEARCH®測試。 HAMA 1和HAMA 2也不會干擾，這表明通過非腸胃途徑接收小鼠Ig的個體可以用CELLSEARCH®進(jìn)行成功測試。預(yù)期值健康志愿者，非惡性乳腺疾病者，其他非惡性疾病者種類數(shù)量CTC均值標(biāo)準(zhǔn)差CTC>5的例數(shù)最小值最大值健康志愿者1450.10.2001非惡性乳腺疾病者breast disease1010.21.21012其他非惡性疾病者990.10.4003對145名健康志愿者，101名非惡性乳腺疾病婦女，和99名其他非惡性疾病婦女作為對照組

21、進(jìn)行單點(diǎn)CTC分析發(fā)現(xiàn)：健康個體的外周血中均不存在上皮細(xì)胞。在包括345個總樣本的健康志愿者和非惡性疾病婦女中，只有一個例CTC超過5個/7.5ml。結(jié)果列于表1中。 表1. 對照組健康志愿者，非惡性結(jié)直腸疾病者從35歲以上（包括35歲）的健康男性和女性采取血液。這些健康志愿者均來自于美國的三個中心。本研究的目的為：從每個受試者取2管血，并都進(jìn)行CTC水平的測定評估。總共有150個可評價受試者的血液進(jìn)行了一個或兩個單獨(dú)的7.5ml血液CTC的測定。并非所有評估的受試者都有兩管CTC的結(jié)果。兩組受試者的循環(huán)腫瘤細(xì)胞平均數(shù)是0.0，標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.10.2。從健康志愿者（男性和女性）的284個總樣本

22、中，沒有一個受試者CTC數(shù)超過3 個/7.5ml。結(jié)果示于表2中。表2. Cellsearch®分析對照樣本中CTC結(jié)果健康對照所有對照男性女性Tube 1Tube 2TotalTube 1Tube 2TotalTube 1Tube 2Total數(shù)量14913528468641328171152CTC范圍0-10-10-10-10-10-10-10-10-1CTC均值0.00.00.00.00.00.00.00.00.0CTC標(biāo)準(zhǔn)差0 .10 .20 .10 .10 .10 .10 .10 .20 .2N (%) _> 1 CTC2 (1%)4 (3%)6 (2%)1 (1%)

23、1 (2%)2 (2%)1 (1%)3 (4%)4 (3%)N (%) _> 2 CTC0 (0%)0 (0%)0 (0%)0 (0%)0 (0%)0 (0%)0 (0%)0 (0%)0 (0%)從接受結(jié)腸鏡檢查或手術(shù)為良性疾病的患者中采集大約30ml的血液（以增加檢測細(xì)胞的概率）到4個獨(dú)立的CellSave管中（每管至少7.5ml）。依照之前的檢測方法，對每個受試者總共進(jìn)行了4次7.5ml血液中CTC數(shù)量的檢測。其結(jié)果示下面的表3中。并非所有評估的受試者都有4次檢測的CTC結(jié)果。沒有1例良性結(jié)腸疾病病人在每7.5ml血液只有超過1個CTC的檢出。表3. Cellsearch®

24、分析良性結(jié)直腸疾病樣本中CTC結(jié)果良性疾病按之前的方式采集血液Tube 1Tube 2Tube 3Tube 4Total數(shù)量55555347210CTC范圍0-10-10-10-10-1CTC平均值0.10.00.00.10.0標(biāo)準(zhǔn)差0.20.10.20.30.2% _> 1 CTC3 (5%)1 (2%)2 (4%)4 (9%)10 (5%)% _> 2 CTC0 (0%)0 (0%)0 (0%)0 (0%)0 (0%)圖1顯示了健康人（對照）、良性疾病患者（對照）、在治療開始前和開始治療大約1個月后的轉(zhuǎn)移性乳腺癌、轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌、轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者中CTC的頻率。圖1. 對照組

25、（非癌癥樣本）、轉(zhuǎn)移性乳腺癌(MBC)、轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌(MCRC)、轉(zhuǎn)移性前列腺癌患者(MPC)在治療前和治療后2-5周CTC檢出數(shù)量1MBC轉(zhuǎn)移性乳腺癌相關(guān)數(shù)據(jù)信息見臨床IFU的表1.2MCRC轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌相關(guān)數(shù)據(jù)信息見臨床IFU的表12.3MPC轉(zhuǎn)移性前列腺癌相關(guān)數(shù)據(jù)信息見臨床IFU的表22.性能指標(biāo)回收率采取單個健康受試者血液6管，每管7.5ml。其中5管分別加入數(shù)量為1300，325，81，20，和5的培養(yǎng)乳腺癌細(xì)胞（SK-BR-3）。第6管不加SK-BR-3細(xì)胞作為零點(diǎn)。這些樣本用CELLSEARCH®循環(huán)腫瘤細(xì)胞試劑盒在CELLTRACKS® AUTOPREP

26、®系統(tǒng)上運(yùn)行并用CELLTRACKS分析儀II®對CTC進(jìn)行計(jì)數(shù)。共對5名健康志愿者進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)。并用所檢測到的細(xì)胞數(shù)對理論細(xì)胞數(shù)作圖。該結(jié)果總結(jié)于表4中。表4回收率以確定整體，或最小二乘擬合，對于跨所有數(shù)據(jù)所檢測到的和預(yù)期的細(xì)胞數(shù)的比較中，進(jìn)行線性回歸分析。這30個樣本的回歸方程為Y = 0.93x + 3.87（R 2 = 0.999 R = 0.999）。這項(xiàng)研究結(jié)果表明，在測試的CTC范圍內(nèi)，根據(jù)回歸分析，其回收率平均為93。腫瘤細(xì)胞數(shù)的線性關(guān)系，期望的檢測值與預(yù)期曲線的斜率應(yīng)為1.0。但是，實(shí)驗(yàn)所得斜率為0.93。這是因?yàn)榕cCELLSEARCH® 循環(huán)腫

27、瘤細(xì)胞檢測試劑盒配套使用的 CELLTRACKS® AUTOPREP®系統(tǒng)涉及到捕獲和熒光標(biāo)記細(xì)胞，并使用CELLTRACKS分析儀II®進(jìn)行隨后的檢測和計(jì)數(shù)。這個過程會造成細(xì)胞損失。細(xì)胞損失可以歸因于以下可能性之一：1）通過CELLTRACKS® AUTOPREP®系統(tǒng)，只有93的回收腫瘤細(xì)胞投入到了7.5ml血液中，2）只有93的腫瘤細(xì)胞通過CELLTRACKS分析儀II®進(jìn)入到樣品室中，或3）兩者的這些誤差源的組合。線性/報告范圍 檢查之前數(shù)據(jù)可靠性的另一種方式是將待分析樣本作系列稀釋，以評估測試的線性度。我們通過使用

28、稀釋系列的初始樣品的檢測值（即，第1管）的稀釋系數(shù)劃分確定用于稀釋系列的每個患者樣本的預(yù)期值除去回收百分比的混淆變量。對所有檢測到的腫瘤細(xì)胞與預(yù)期腫瘤細(xì)胞的數(shù)目回歸分析產(chǎn)生了1.007的斜率，截距為3.0，R2 =0.990（R =0.995）。因此，自從回收率（細(xì)胞丟失）受每個初始樣品的CTC值影響時，數(shù)據(jù)分析表明，CTC的檢測線性范圍為0至1238個腫瘤細(xì)胞。檢測下限CELLTRACKS分析儀II®可檢測到每7.5ml血液中僅1個CTC，即暗盒中CTC的檢測下限為1個CTC。線性回歸分析顯示，平均而言，使用CELLTRACKS® AUTOPREP®系統(tǒng)能回收7

29、.5ml血液樣本中93的CTC（見回收率部分）。樣本中大約7的CTC損失不足以影響1個CTC的檢測下限。重復(fù)性a. CELLSEARCH®循環(huán)腫瘤細(xì)胞質(zhì)控品系統(tǒng)重復(fù)性制備了三個獨(dú)立的CELLSEARCH®循環(huán)腫瘤細(xì)胞的質(zhì)控樣品，每天進(jìn)行分析處理，總共超過30天，參照NCCLS指南EP5-A2的長期運(yùn)行方式。每單次使用的樣本瓶含有低、高兩個濃度的細(xì)胞系。這兩個細(xì)胞系已經(jīng)固定，并用兩種不同的熒光染進(jìn)行預(yù)先染色。高低濃度的質(zhì)控細(xì)胞統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)展示如下表5。表5. 精密度分析統(tǒng)計(jì)結(jié)果b. 病人樣本系統(tǒng)重復(fù)性轉(zhuǎn)移性乳腺癌（MBC）在臨床研究的過程中，共收集47例轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的163份

30、重復(fù)血液樣本。這些樣品在多點(diǎn)進(jìn)行處理，以測定CTC方法的重復(fù)性。對這163份重復(fù)樣品進(jìn)行對比的回歸方程為Y=0.98x+0.67，R2=0.99。圖2示出了MBC患者血液的重復(fù)樣本CTC結(jié)果在對數(shù)刻度上繪制的散點(diǎn)圖，閾值為5個CTC，由虛線標(biāo)出。圖2. 在轉(zhuǎn)移性乳腺癌（MBC）樣本中CTC計(jì)數(shù)，樣本數(shù)163例，每7.5ml血液中CTC均值小于5或者大于5圖2備注：可能有一個以上的點(diǎn)疊加在另一個點(diǎn)上。例如，在這個圖中，有50例（31）的兩個管有0 CTC，18例（11）的第1管有0 CTC和第2管有1 CTC，另有18例（11）的第1管有1 CTC和第2管有0 CTC。轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌（MCRC）

31、在臨床研究的過程中，共收集430例轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的1627份重復(fù)血液樣本。這些樣品在多點(diǎn)進(jìn)行處理，以測定CTC方法的重復(fù)性。對這1627份重復(fù)樣品進(jìn)行對比的回歸方程為Y=0.98x+0.18，R2=0.96。圖3示出了MCRC患者血液的重復(fù)樣本CTC結(jié)果在對數(shù)刻度上繪制的散點(diǎn)圖，閾值為3個CTC，由虛線標(biāo)出。圖3. 在轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌（MCRC）樣本中CTC計(jì)數(shù)，樣本數(shù)1627例，每7.5ml血液中CTC均值小于3或者大于3圖3備注：可能有一個以上的點(diǎn)疊加在另一個點(diǎn)上。例如，在這個圖中，有975例（60）的兩個管有0 CTC，116例（7）的第1管有0 CTC和第2管有1 CTC，另有109例（7）的第1管有1 CTC和第2管有0 CTC。來自轉(zhuǎn)移性乳腺癌和結(jié)直腸癌患者的血液樣本中，管與管之間CTC的變異計(jì)數(shù)顯示于圖2及3，偶發(fā)事件（如腫瘤細(xì)胞）的一個給定體積內(nèi)的分布是隨機(jī)的和獨(dú)立的細(xì)胞或疾病類型。這個最好的特征是泊松分布 - 用于