胃癌標本的正確固定許

1、胃癌標本的正確固定許 斌主要內(nèi)容n 標本及時固定對生物標志物檢測的重要性n 胃癌手術(shù)標本固定的實踐問題主要內(nèi)容n 標本及時固定對生物標志物檢測的重要性n 胃癌手術(shù)標本固定的實踐問題固定的意義固定是組織制片的基礎(chǔ)及關(guān)鍵步驟，固定是否及時、徹底，影響著整個制片過程。是標本處理過程的一個主要環(huán)節(jié)。固定目的1、保持組織形態(tài)學(xué)特征清晰和穩(wěn)定2、阻止組織、細胞自溶與腐敗3、凝固或沉淀組織細胞內(nèi)物質(zhì)4、保存組織細胞抗原性5、使組織保持一定的硬度和彈性Khoury T, et al. Mod Pathol 2009;22:1457-1467.延遲固定導(dǎo)致激素受體染色減弱固定延遲時間01234567平均Q值0m

2、in10min 30min1h2h4h8hERPRER、PR的平均Q值隨固定延遲時間的增加而下降ER染色減弱的標本比例(n=58)(n=39)離體至固定時間P=0.03Li XX, et al. Mod Pathol 2013; 26, 71-78.延遲固定導(dǎo)致激素受體染色減弱延遲2h以上時間固定，出現(xiàn)染色減弱的比例升高+，無減弱；任一字母代表減弱，A：因細胞輪廓模糊，B：因非一致性信號；C：因核分辨不清病例編號0min 10min 30min1h2 h4 h8 h過夜總的熒光減弱例數(shù)1+A,CCA,CA,C42+A,B,CA,B,CA,B,CA,B,C43+CCC34+CCCCC55+CB,

3、CB,CB,CB,C56+CCC37+A,BA,BA,BA,B48+A,BA,BA,BA,BA,B59+010+A,BA,B2總的熒光減弱例數(shù)+3689935HER2熒光原位雜交檢測結(jié)果與固定延遲時間的關(guān)系Khoury T, et al. Mod Pathol 2009;22:1457-1467.延遲固定導(dǎo)致HER2染色改變延遲1h之后，F(xiàn)ISH染色開始減弱；2h之后，統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異(P0.05)編號0 min 10 min 30 min1 h2 h4 h8 h過夜1否否否否否否是是2否否否否否否否是3否否否否否否否是4否否否否否是是是5否否否否否是是是6否否否否是是是是7否否否否是是是

4、是8否否否否否否是是9否否否否否是是是10否否否否否否否是總的受累例數(shù)00002578Khoury T, et al. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2012;20:531-542.總體組織形態(tài)學(xué)改變情況延遲固定導(dǎo)致組織形態(tài)學(xué)改變延遲固定2h標本開始出現(xiàn)明顯的組織形態(tài)學(xué)改變，延遲固定8h和過夜的標本發(fā)生組織形態(tài)學(xué)改變的幾率最高0 min 10 min 30 min1 h2 h4 h8 hONE-cadherin230230230230208204204204EGFR202020203311與延遲固定時間相關(guān)的膜標志物的表達(中位值)ON：過夜延遲固定導(dǎo)致EG

5、FR和E-cadherin表達改變Khoury T, et al. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2012;20:531-542.EGFR和E-cadherin表達水平自延遲固定2h起開始下降延遲固定時間190195200205210215220225230235ON8h4h2h1H30min10min0scoreE-cadherin 染色評分隨延遲固定時間的變化延遲固定導(dǎo)致Ki-67表達改變彌漫性染色病例所有病例延遲固定時間延遲固定對Ki-67的影響050100150200250ON8h4h2h1h30min10min0minKi-67表達水平在延遲固定4

6、h和8h出現(xiàn)下降 Khoury T, et al. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2012;20:531-542.手術(shù)切除標本的有絲分裂象較活檢標本平均高出3倍多(206 vs 62有絲分裂/10個高倍視野, P=0.008)；而兩者間MIB-1免疫染色的腫瘤細胞比例則相當(dāng)有絲分裂象計數(shù)采用MIB-1免疫組化檢測評估乳腺癌的增殖指數(shù)活檢標本手術(shù)切除標本有絲分裂 /10 HPF活檢標本手術(shù)切除標本MIB-1(占腫瘤細胞的比例)Lehr HA, et al. Modern Pathology 2012:1-7.延遲固定導(dǎo)致腫瘤生物學(xué)特點改變手術(shù)切除標本有絲分裂象

7、增加源自固定延遲：活檢標本自離體至固定的時間為1530 min，而手術(shù)切除標本則需數(shù)個小時主要內(nèi)容n 標本及時固定對生物標志物檢測的重要性n 胃癌手術(shù)標本固定的實踐問題手術(shù)標本及時固定的時間SEOM/SEAP胃癌HER2檢測共識1 手術(shù)標本應(yīng)在切除后30min內(nèi)固定中國胃癌HER2檢測指南2 規(guī)范的標本固定是HER2檢測質(zhì)量的保障，能使組織形態(tài)保存良好，防止細胞內(nèi)蛋白和核酸的降解 所有標本應(yīng)在離體后2030min內(nèi)進行標記、切開、固定等初步處理Werner M, et al3 標本應(yīng)在手術(shù)切除后30min內(nèi)盡快地固定，器官和實體瘤應(yīng)予以切開以確保固定液快速滲透1. Gmez-Martn C,

8、et al. Clin Transl Oncol 2011; 13:636-651. 2. 胃癌HER2檢測指南編寫組. Chin J Pathol 2011; 40:553-557. 3. Werner M, et al. Am J Surg Pathol 2000; 24(7): 1016-1019.SEOM/SEAP：西班牙內(nèi)科腫瘤學(xué)會和西班牙病理學(xué)家學(xué)會據(jù)報道約20的進展期胃癌有HER2過表達或擴增。一項國際多中心隨機對照期臨床研究(TOGA試驗)的結(jié)果顯示，化療聯(lián)合針對HER2的曲妥珠單抗治療可顯著延長進展期胃癌患者的生存期，基于這一結(jié)果，2010年歐洲藥品管理局及美國食品和藥品管理

9、局(FDA)先后批準化療聯(lián)合使用曲妥珠單抗治療HER2陽性胃及胃和食管交界處癌(以下統(tǒng)稱胃癌)患者。胃癌HER2檢測指南準確的胃癌HER2表達和基因擴增檢測結(jié)果是進展期胃癌HER2靶向治療患者篩選和療效預(yù)測的前提胃癌HER2檢測指南一、HER2檢測方法包括免疫組織化學(xué)染色(IHC)和原位雜交(inhibridization)技術(shù)，后者包括熒光原位雜交(FlSH)和雙色銀染原位雜交(DSISH)。FSH和DSISH兩種檢測方法符合率高。各有特點，其中DSISH是一種亮視野下檢測HER2基因擴增的方法，易于觀察，被認為更具有實際應(yīng)用價值。本指南推薦IHC與FSH和DSISH相結(jié)合的檢測策略。胃癌H

10、ER2檢測指南二、HER2檢測適宜范圍 有可能進行曲妥珠單抗治療的進展期胃癌有必要行準確的HER2檢測。胃癌HER2檢測指南三、檢測流程和結(jié)果判斷1HER2狀態(tài)檢測首先選用IHC法。2IHc 3+的病例判斷為HER2陽性，無需進一步做原位雜交檢測。3IHC 1+和O的病例，判斷為HER2陰性，無需進一步做原位雜交檢測。4IHC 2+的病例為不確定病例，需進一步行原位雜檢測，如原位雜交陽性，判斷為HER2陽性；如原位雜交陰性，判斷為HER2陰性。胃癌HER2檢測指南胃癌HER2檢測指南對固定的要求免疫組化檢測固定較差示例：胃癌固定不完全會導(dǎo)致假陽性檢查結(jié)果細胞質(zhì)染色可能由于使用了不適當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞?/p>

11、圖片由Targos Molecular Pathology.提供30分鐘內(nèi)：p 應(yīng)當(dāng)完成什么？p 應(yīng)當(dāng)由誰完成？p 需要的哪些材料？30分鐘內(nèi)：p 應(yīng)當(dāng)完成什么？p 應(yīng)當(dāng)由誰完成？p 需要的哪些材料？組織處理不良示例未剪開固定固定液比例不足組織處理規(guī)范示例剪開手術(shù)標本供圖：紹興市人民醫(yī)院病理科組織處理規(guī)范示例釘于標本板上供圖：紹興市人民醫(yī)院病理科組織處理規(guī)范示例組織處理規(guī)范示例供圖：紹興市人民醫(yī)院病理科組織處理規(guī)范示例浸泡于足量的固定液中供圖：紹興市人民醫(yī)院病理科組織處理規(guī)范示例準確記錄離體時間和固定(開始)時間供圖：紹興市人民醫(yī)院病理科30分鐘內(nèi)：p 應(yīng)當(dāng)完成什么？p 應(yīng)當(dāng)由誰完成？p 需要的哪些材料？應(yīng)當(dāng)根據(jù)醫(yī)院的實際情況，由手術(shù)室和病理科協(xié)商決定如標本能于離體后30min內(nèi)送至病理科并完成處理，可以建議由病理科完成如標本不能于離體后30min內(nèi)送至病理科并完成處理，可以建議在手術(shù)室完成30分鐘內(nèi)：p 應(yīng)當(dāng)完成什么？p 應(yīng)當(dāng)由誰完成？p 需要的哪些材料？n 10%中性緩沖福爾馬林溶液 即 4%中性緩沖甲醛溶液 中性（pH7.2 7.4）避免酸性環(huán)境對組織和抗原造成的破壞用自來水或純水配置的甲醛溶液，常見pH5 7，可能使分子標志物檢測的陽性率顯著降低，導(dǎo)致誤診 緩沖體系：避免外界物質(zhì)（如胃酸等）造成固定