胃癌標(biāo)本的正確固定許

1、胃癌標(biāo)本的正確固定許 斌主要內(nèi)容n 標(biāo)本及時(shí)固定對(duì)生物標(biāo)志物檢測(cè)的重要性n 胃癌手術(shù)標(biāo)本固定的實(shí)踐問題主要內(nèi)容n 標(biāo)本及時(shí)固定對(duì)生物標(biāo)志物檢測(cè)的重要性n 胃癌手術(shù)標(biāo)本固定的實(shí)踐問題固定的意義固定是組織制片的基礎(chǔ)及關(guān)鍵步驟，固定是否及時(shí)、徹底，影響著整個(gè)制片過程。是標(biāo)本處理過程的一個(gè)主要環(huán)節(jié)。固定目的1、保持組織形態(tài)學(xué)特征清晰和穩(wěn)定2、阻止組織、細(xì)胞自溶與腐敗3、凝固或沉淀組織細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)4、保存組織細(xì)胞抗原性5、使組織保持一定的硬度和彈性Khoury T, et al. Mod Pathol 2009;22:1457-1467.延遲固定導(dǎo)致激素受體染色減弱固定延遲時(shí)間01234567平均Q值0m

2、in10min 30min1h2h4h8hERPRER、PR的平均Q值隨固定延遲時(shí)間的增加而下降ER染色減弱的標(biāo)本比例(n=58)(n=39)離體至固定時(shí)間P=0.03Li XX, et al. Mod Pathol 2013; 26, 71-78.延遲固定導(dǎo)致激素受體染色減弱延遲2h以上時(shí)間固定，出現(xiàn)染色減弱的比例升高+，無減弱；任一字母代表減弱，A：因細(xì)胞輪廓模糊，B：因非一致性信號(hào)；C：因核分辨不清病例編號(hào)0min 10min 30min1h2 h4 h8 h過夜總的熒光減弱例數(shù)1+A,CCA,CA,C42+A,B,CA,B,CA,B,CA,B,C43+CCC34+CCCCC55+CB,

3、CB,CB,CB,C56+CCC37+A,BA,BA,BA,B48+A,BA,BA,BA,BA,B59+010+A,BA,B2總的熒光減弱例數(shù)+3689935HER2熒光原位雜交檢測(cè)結(jié)果與固定延遲時(shí)間的關(guān)系Khoury T, et al. Mod Pathol 2009;22:1457-1467.延遲固定導(dǎo)致HER2染色改變延遲1h之后，F(xiàn)ISH染色開始減弱；2h之后，統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異(P0.05)編號(hào)0 min 10 min 30 min1 h2 h4 h8 h過夜1否否否否否否是是2否否否否否否否是3否否否否否否否是4否否否否否是是是5否否否否否是是是6否否否否是是是是7否否否否是是是

4、是8否否否否否否是是9否否否否否是是是10否否否否否否否是總的受累例數(shù)00002578Khoury T, et al. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2012;20:531-542.總體組織形態(tài)學(xué)改變情況延遲固定導(dǎo)致組織形態(tài)學(xué)改變延遲固定2h標(biāo)本開始出現(xiàn)明顯的組織形態(tài)學(xué)改變，延遲固定8h和過夜的標(biāo)本發(fā)生組織形態(tài)學(xué)改變的幾率最高0 min 10 min 30 min1 h2 h4 h8 hONE-cadherin230230230230208204204204EGFR202020203311與延遲固定時(shí)間相關(guān)的膜標(biāo)志物的表達(dá)(中位值)ON：過夜延遲固定導(dǎo)致EG

5、FR和E-cadherin表達(dá)改變Khoury T, et al. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2012;20:531-542.EGFR和E-cadherin表達(dá)水平自延遲固定2h起開始下降延遲固定時(shí)間190195200205210215220225230235ON8h4h2h1H30min10min0scoreE-cadherin 染色評(píng)分隨延遲固定時(shí)間的變化延遲固定導(dǎo)致Ki-67表達(dá)改變彌漫性染色病例所有病例延遲固定時(shí)間延遲固定對(duì)Ki-67的影響050100150200250ON8h4h2h1h30min10min0minKi-67表達(dá)水平在延遲固定4

6、h和8h出現(xiàn)下降 Khoury T, et al. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2012;20:531-542.手術(shù)切除標(biāo)本的有絲分裂象較活檢標(biāo)本平均高出3倍多(206 vs 62有絲分裂/10個(gè)高倍視野, P=0.008)；而兩者間MIB-1免疫染色的腫瘤細(xì)胞比例則相當(dāng)有絲分裂象計(jì)數(shù)采用MIB-1免疫組化檢測(cè)評(píng)估乳腺癌的增殖指數(shù)活檢標(biāo)本手術(shù)切除標(biāo)本有絲分裂 /10 HPF活檢標(biāo)本手術(shù)切除標(biāo)本MIB-1(占腫瘤細(xì)胞的比例)Lehr HA, et al. Modern Pathology 2012:1-7.延遲固定導(dǎo)致腫瘤生物學(xué)特點(diǎn)改變手術(shù)切除標(biāo)本有絲分裂象

7、增加源自固定延遲：活檢標(biāo)本自離體至固定的時(shí)間為1530 min，而手術(shù)切除標(biāo)本則需數(shù)個(gè)小時(shí)主要內(nèi)容n 標(biāo)本及時(shí)固定對(duì)生物標(biāo)志物檢測(cè)的重要性n 胃癌手術(shù)標(biāo)本固定的實(shí)踐問題手術(shù)標(biāo)本及時(shí)固定的時(shí)間SEOM/SEAP胃癌HER2檢測(cè)共識(shí)1 手術(shù)標(biāo)本應(yīng)在切除后30min內(nèi)固定中國(guó)胃癌HER2檢測(cè)指南2 規(guī)范的標(biāo)本固定是HER2檢測(cè)質(zhì)量的保障，能使組織形態(tài)保存良好，防止細(xì)胞內(nèi)蛋白和核酸的降解 所有標(biāo)本應(yīng)在離體后2030min內(nèi)進(jìn)行標(biāo)記、切開、固定等初步處理Werner M, et al3 標(biāo)本應(yīng)在手術(shù)切除后30min內(nèi)盡快地固定，器官和實(shí)體瘤應(yīng)予以切開以確保固定液快速滲透1. Gmez-Martn C,

8、et al. Clin Transl Oncol 2011; 13:636-651. 2. 胃癌HER2檢測(cè)指南編寫組. Chin J Pathol 2011; 40:553-557. 3. Werner M, et al. Am J Surg Pathol 2000; 24(7): 1016-1019.SEOM/SEAP：西班牙內(nèi)科腫瘤學(xué)會(huì)和西班牙病理學(xué)家學(xué)會(huì)據(jù)報(bào)道約20的進(jìn)展期胃癌有HER2過表達(dá)或擴(kuò)增。一項(xiàng)國(guó)際多中心隨機(jī)對(duì)照期臨床研究(TOGA試驗(yàn))的結(jié)果顯示，化療聯(lián)合針對(duì)HER2的曲妥珠單抗治療可顯著延長(zhǎng)進(jìn)展期胃癌患者的生存期，基于這一結(jié)果，2010年歐洲藥品管理局及美國(guó)食品和藥品管理

9、局(FDA)先后批準(zhǔn)化療聯(lián)合使用曲妥珠單抗治療HER2陽性胃及胃和食管交界處癌(以下統(tǒng)稱胃癌)患者。胃癌HER2檢測(cè)指南準(zhǔn)確的胃癌HER2表達(dá)和基因擴(kuò)增檢測(cè)結(jié)果是進(jìn)展期胃癌HER2靶向治療患者篩選和療效預(yù)測(cè)的前提胃癌HER2檢測(cè)指南一、HER2檢測(cè)方法包括免疫組織化學(xué)染色(IHC)和原位雜交(inhibridization)技術(shù)，后者包括熒光原位雜交(FlSH)和雙色銀染原位雜交(DSISH)。FSH和DSISH兩種檢測(cè)方法符合率高。各有特點(diǎn)，其中DSISH是一種亮視野下檢測(cè)HER2基因擴(kuò)增的方法，易于觀察，被認(rèn)為更具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。本指南推薦IHC與FSH和DSISH相結(jié)合的檢測(cè)策略。胃癌H

10、ER2檢測(cè)指南二、HER2檢測(cè)適宜范圍 有可能進(jìn)行曲妥珠單抗治療的進(jìn)展期胃癌有必要行準(zhǔn)確的HER2檢測(cè)。胃癌HER2檢測(cè)指南三、檢測(cè)流程和結(jié)果判斷1HER2狀態(tài)檢測(cè)首先選用IHC法。2IHc 3+的病例判斷為HER2陽性，無需進(jìn)一步做原位雜交檢測(cè)。3IHC 1+和O的病例，判斷為HER2陰性，無需進(jìn)一步做原位雜交檢測(cè)。4IHC 2+的病例為不確定病例，需進(jìn)一步行原位雜檢測(cè)，如原位雜交陽性，判斷為HER2陽性；如原位雜交陰性，判斷為HER2陰性。胃癌HER2檢測(cè)指南胃癌HER2檢測(cè)指南對(duì)固定的要求免疫組化檢測(cè)固定較差示例：胃癌固定不完全會(huì)導(dǎo)致假陽性檢查結(jié)果細(xì)胞質(zhì)染色可能由于使用了不適當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞?/p>

11、圖片由Targos Molecular Pathology.提供30分鐘內(nèi)：p 應(yīng)當(dāng)完成什么？p 應(yīng)當(dāng)由誰完成？p 需要的哪些材料？30分鐘內(nèi)：p 應(yīng)當(dāng)完成什么？p 應(yīng)當(dāng)由誰完成？p 需要的哪些材料？組織處理不良示例未剪開固定固定液比例不足組織處理規(guī)范示例剪開手術(shù)標(biāo)本供圖：紹興市人民醫(yī)院病理科組織處理規(guī)范示例釘于標(biāo)本板上供圖：紹興市人民醫(yī)院病理科組織處理規(guī)范示例組織處理規(guī)范示例供圖：紹興市人民醫(yī)院病理科組織處理規(guī)范示例浸泡于足量的固定液中供圖：紹興市人民醫(yī)院病理科組織處理規(guī)范示例準(zhǔn)確記錄離體時(shí)間和固定(開始)時(shí)間供圖：紹興市人民醫(yī)院病理科30分鐘內(nèi)：p 應(yīng)當(dāng)完成什么？p 應(yīng)當(dāng)由誰完成？p 需要的哪些材料？應(yīng)當(dāng)根據(jù)醫(yī)院的實(shí)際情況，由手術(shù)室和病理科協(xié)商決定如標(biāo)本能于離體后30min內(nèi)送至病理科并完成處理，可以建議由病理科完成如標(biāo)本不能于離體后30min內(nèi)送至病理科并完成處理，可以建議在手術(shù)室完成30分鐘內(nèi)：p 應(yīng)當(dāng)完成什么？p 應(yīng)當(dāng)由誰完成？p 需要的哪些材料？n 10%中性緩沖福爾馬林溶液 即 4%中性緩沖甲醛溶液 中性（pH7.2 7.4）避免酸性環(huán)境對(duì)組織和抗原造成的破壞用自來水或純水配置的甲醛溶液，常見pH5 7，可能使分子標(biāo)志物檢測(cè)的陽性率顯著降低，導(dǎo)致誤診 緩沖體系：避免外界物質(zhì)（如胃酸等）造成固定