時間分辨培訓

1、上海新波生物技術(shù)有限公司q時間分辨熒光免疫技術(shù)（TRF）定義。 qTRFTRF的標記物及特點。 q為什么叫“時間分辨”? qTRF在免疫分析方法學中的地位。q各種免疫方法學的比較。放射免疫（精度：10-12mol/L ）酶聯(lián)免疫（精度：10-9 mol/L ）化學發(fā)光（精度：10-15mol/L ）n電化學發(fā)光 （精度：10-17mol/L ）時間分辨熒光（精度：10-18mol/L ）生物芯片 （未知） 待測物質(zhì)濃度與檢測手段待測物質(zhì)濃度與檢測手段 臨床化學分析臨床化學分析pg/mLng/mLm mg/mLmg/mLg/L免疫分析免疫分析Therapeutic Drugs (藥物濃度)Thy

2、roid Hormone (甲狀腺激素)Fertility Hormone (孕激素)Cancer Markers (腫瘤標記物)Infectious Disease (傳染病)Vitamins (維生素)Serum Proteins (血清蛋白)10-1210-910-610-310-0各種免疫方法學的比較各種免疫方法學的比較放免自60年代問世以來對臨床診斷起了革命性的貢獻，是一項較為成熟的診斷技術(shù)。夾心法、競爭法的標記原理為以后的檢測技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。放射性（125I），對環(huán)境的污染及對身體的危害，已經(jīng)為重視環(huán)保的國家逐步取消。（如整個歐洲僅尚存幾個放免試驗室）125I的半衰期短而導(dǎo)致

3、其試劑有效期短。標記物125I的穩(wěn)定性差，導(dǎo)致試劑盒批間、批內(nèi)的變異較大；標準曲線有效期短，必須每次定標，造成浪費。操作繁瑣，出報告時間長。無法保存?zhèn)溆?。酶免的最大?yōu)勢在于避免了對環(huán)境和人體危害。試劑有效期較長。衍生技術(shù)：n熒光酶免疫分析n增強化學發(fā)光酶免疫技術(shù)曾經(jīng)一度被認為是取代放免的檢測手段。靈敏度、重復(fù)性不及放免，易造成漏檢和假陽性。因酶的純度和反應(yīng)過程容易受環(huán)境因素影響，導(dǎo)致穩(wěn)定性不好。單個樣本單個樣本檢測速度快，適合做急診。靈敏度較高。自動化程度高。儀器種類：n拜耳 ACS180 系列n雅培 AXSYMn貝克曼 ACCESSn德普 IMMULITE樣品不能重復(fù)檢測；出現(xiàn)故障則整批試劑

4、及血樣報廢。本底較高，易受環(huán)境物質(zhì)干擾。儀器故障率較高。標準曲線穩(wěn)定性較差，需多次定標。檢測精度不高，在超微量分析及早期診斷方面能力不足。非開放性試劑；試劑價格高。80年代末期問世的新型化學化學發(fā)光發(fā)光免疫分析方法?；驹恚焊鶕?jù)三聯(lián)吡啶釕Ru(bpy)3和三丙胺在電場觸發(fā)下產(chǎn)生發(fā)光的化學發(fā)光反應(yīng)。本底較小、靈敏度較高、線性范圍較寬。儀器檢測速度慢 （羅氏公司）ECL1010 60 測試/小時ECL2010 90 測試/小時非開放性試劑系統(tǒng)、不能做科研。試劑價格過高。用三價稀土離子離子及其螯合物作為示蹤物，代替、和，標記抗原、抗體、核酸探針等物質(zhì)；當免疫過程結(jié)束后，根據(jù)稀土離子螯合物的熒光光譜

5、熒光光譜的物理特點 （、 、 ），并采用解離-增強技術(shù)（ DELFIA）放大有效熒光；最后用時間分辨熒光分析儀，測定免疫反應(yīng)最后產(chǎn)物的熒光強度。根據(jù)已知濃度所確定的標準曲線，來判斷未知樣品的濃度值，以達到定量分析的目的。時間分辨熒光免疫原理圖（Time-resolved Fluorescence Immunoassay）鑭系元素共有15種，應(yīng)用在時間分辨熒光免疫技術(shù)中有四種：n銪(Eu)、釤（Sm)、鏑(Dy)、鋱(Te)鑭系元素熒光特點：n熒光壽命極長熒光壽命極長w鑭系元素螯合物（60900 us) w普通熒光免疫中熒光團：1100nsw樣本中蛋白質(zhì)熒光：110ns，易猝滅。nStokes位

6、移大（大約位移大（大約290nm）w銪：發(fā)射光613nm、激發(fā)光340nm，w熒光素的Stokes位移為28nmn熒光特異性強。（發(fā)射光譜帶很窄：熒光特異性強。（發(fā)射光譜帶很窄：615 5nm）n解離-增強技術(shù)可使其熒光性提高100萬倍利用鑭系元素熒光物理特性，熒光激發(fā)后在固定時間段檢測特異性熒光。而在此時間之前，非特異性熒光已完全衰減為0發(fā)射光譜與激發(fā)光譜間存在的巨大StokesStokes位移。可以通過干涉濾干涉濾光片光片將發(fā)射光譜與激發(fā)光譜完全分離。技術(shù)技術(shù)特點特點檢驗先進性檢驗先進性時間分辨時間分辨光譜分辨光譜分辨特異性熒光與非特異性熒光分離發(fā)射熒光與激發(fā)熒光分離背景、高特異性解離解離

7、-增強增強熒光性大大提高穩(wěn)定的熒光螯合物線性范圍更寬重復(fù)性更好原子標記原子標記 標記位點多，可達20個 對標記物結(jié)構(gòu)及活性影響小 無衰變 受環(huán)境影響小高穩(wěn)定性，高精確度試劑保質(zhì)期至少一年標準曲線保留時間長同一批次只需兩點定標多標記多標記單，雙，三，四標記同一試劑盒可同時測多個項目不不 同同 標標 記記 物物 的的 波波 長長0.5 1 2 5 10 20 50 100 200 500 U/L 51002000Cps.10 3時間分辨熒光免疫檢測的標準曲線相當穩(wěn)定，同一批次的試劑盒可用兩點法加批次的參考曲線定標DELFIA hFSH標準曲線穩(wěn)定，試劑保質(zhì)期長標準曲線穩(wěn)定，試劑保質(zhì)期長N=6時間分

8、辨熒光免疫的試劑種類時間分辨熒光免疫的試劑種類w甲狀腺功能檢測甲狀腺功能檢測nTSH，Ultra TSH，T3，T4，F(xiàn)T3，F(xiàn)T4，TBG，TGw性激素類檢測性激素類檢測nFSH，LH，HCG，ProlactinE2，E3，Testo，Prog，SHBGw腫瘤標記檢測腫瘤標記檢測nAFP，CEA，PSA，hTG，-2 Micro，NSE，PAP，PSA（Free/Total），PSA EQM，CA-50，CA-125，CA-199w遺傳科檢查遺傳科檢查n產(chǎn)前篩查： hAFP/ HCG ，PAPPAn新生兒篩查：Neo-TSH，Neo-T4，Neo-IRT，Neo-17a-OH Prog，PK

9、Uw傳染病檢測傳染病檢測nHBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAbw血液科檢測血液科檢測n貧血檢查：Ferritin，Vit B12，F(xiàn)olic acidw科研工具科研工具n單標記檢測，雙標記檢測，三標記檢測，四標記檢測零本底、靈敏度高線性范圍寬試劑有效期長標準曲線穩(wěn)定性好易于自動化TRFIA作為一項具有廣闊發(fā)展?jié)摿Φ男屡d生物學技術(shù)，將會給標記免疫學帶來一場革命。作為一項具有廣闊發(fā)展?jié)摿Φ男屡d生物學技術(shù)，將會給標記免疫學帶來一場革命。新波生物徽標新波生物徽標六邊形模塊六邊形模塊 - - 象征生物科技象征生物科技細胞形內(nèi)核細胞形內(nèi)核 - - 象征企業(yè)內(nèi)涵象征企業(yè)內(nèi)涵多元化組織多

10、元化組織 - - 象征新波個體象征新波個體共同發(fā)共同發(fā)展展有機合有機合作作多元個多元個體體相互相互促進促進子公司：子公司：上海美生生物技術(shù)有限公司蘇州新波生物技術(shù)有限公司廣州新波生物技術(shù)有限公司陜西新波生物技術(shù)有限公司青島新波生物技術(shù)有限公司經(jīng)銷商：經(jīng)銷商：公司簡介公司簡介 上海新波生物技術(shù)有限公司上海新波生物技術(shù)有限公司是一家新近成立于上海浦東張江高科技開發(fā)區(qū)的高新技術(shù)企業(yè)，是國際上少數(shù)幾家掌握“時間分辨熒光免疫”檢測技術(shù)的廠家之一。 新波生物致力于這一新技術(shù)的研究，現(xiàn)已在方法學研究、試劑合成、標記物的制備、抗原抗體純化、檢測儀器的生產(chǎn)等方面均取得了很大成果。 2000年在國內(nèi)首家推出了AN

11、YTEST2000型時間分辨熒光免疫檢測系統(tǒng)，并列為上海市高新技術(shù)項目；與此儀器配套的試劑種類多達82種，其中58項用于臨床檢驗、24項用于科研。儀器種類（DELFIA）全自動 AutoDELFIA 1235 （WALLAC）半自動 VICTOR2 1420 （WALLAC）半自動 ANYTEST2000 （上海新波） 半自動半自動半自動 DELFIA 1234/1232 DELFIA 1234/1232 DELFIA 1234/1232 （WALLAC WALLAC WALLAC 停產(chǎn)）停產(chǎn)）停產(chǎn)）全自動 AutoDELFIA 1235自動的操作界面簡潔的參數(shù)設(shè)置清晰的試劑圖示快速的檢測過程

12、6個項目、480個測試半自動 VICTOR2 1420VICTOR2 1420 操作界面半自動 ANYTEST2000Anytest2000 時間分辨檢測儀試劑的多樣性試劑的多樣性1. 種類多達82種，其中臨床58項、科研24項2. 每年推出新診斷試劑盒（根據(jù)客戶不同需求而開發(fā)） 儀器的先進性儀器的先進性 1. 高靈敏度： 10 -18 mol/L（Eu 3+）2. 線性范圍寬： 10 -13 mol/L 10 -18 mol/L3. 高穩(wěn)定性： 1 %4. 快速測試： 1秒樣5. 標本量靈活： 適合每天1400份標本量6. 適用范圍： 各類大小型的醫(yī)院、生化實驗室7. 應(yīng)用于臨床檢測和科學試

13、驗8. 標準曲線、測試數(shù)據(jù)長期保存、共享9. 智能化操作軟件 價格的可比性價格的可比性 1. 進口試劑國內(nèi)分裝價格與進口酶標試劑可比性2. 專為中國設(shè)計的儀器價格與進口計數(shù)儀的可比性友好的主界面簡潔的操作過程強大的數(shù)據(jù)處理nEgate2310全自動洗扳機n2510變頻振蕩器 q操作界面簡潔明了q內(nèi)置16種洗滌程序（用戶可編輯）q洗滌程序可長期保存q兩種自動清洗模式（WASH、RINSE）q消毒功能（DISINFECTION）q300uL洗液標準量的校準q機械位置隨意調(diào)整，適合各種規(guī)格微孔板、條的洗滌均勻旋轉(zhuǎn)式振動，使得微孔內(nèi)的免疫反應(yīng)可以在孔內(nèi)壁上均勻進行。采用變頻設(shè)計，使得振蕩頻率不受負載變

14、化影響；避免了因負載發(fā)生改變導(dǎo)致頻率漂移的狀態(tài)發(fā)生。乙肝表面抗原免疫反應(yīng)圖乙肝表面抗原免疫反應(yīng)圖 （時間分辨熒光法）乙肝表面抗體免疫反應(yīng)圖乙肝表面抗體免疫反應(yīng)圖 （時間分辨熒光法）乙肝抗原免疫反應(yīng)圖乙肝抗原免疫反應(yīng)圖 （時間分辨熒光法）乙肝抗體免疫反應(yīng)圖乙肝抗體免疫反應(yīng)圖 （時間分辨熒光法）乙肝核心抗體免疫反應(yīng)圖乙肝核心抗體免疫反應(yīng)圖 （時間分辨熒光法）試劑操作介紹試劑操作介紹項目：項目：HBsAg分析類型分析類型: IFMA 定標方式：定標方式： 常數(shù)定標常數(shù)定標本底處理：本底處理： 隨定標時變化隨定標時變化曲線擬合方式曲線擬合方式: 樣條曲線樣條曲線X軸：軸：LOGY軸：軸：LOG-B標準

15、品標準品A：BLANK加入線性參比品及待檢樣本 100uL 孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動1小時 配制銪標記物工作液（見右表） 條銪標記物（ul）銪標記物稀釋液（ml）1151.52303.03454.54606.05757.56909.0710510.5812012洗板洗板4次加入銪標記物工作液 100ul孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動 1小時洗板 洗板6次加入增強液 100uL慢速振動5分鐘 檢測使用HBsAg測定程序 試劑操作介紹試劑操作介紹項目：項目：HBsAb分析類型分析類型: IFMA 定標方式：定標方式： 常數(shù)定標常數(shù)定標本底處理：本底處理： 隨定標時變化隨定標時變化曲線擬合方式曲線

16、擬合方式: 樣條曲線樣條曲線X軸：軸：LOGY軸：軸：LOG-B標準品標準品A：BLANK加入線性參比品及待檢樣本 100uL 孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動1小時 配制銪標記物工作液（見右表） 條銪標記物（ul）銪標記物稀釋液（ml）1301.52603.03904.541206.051507.561809.0721010.5824012洗板洗板4次加入銪標記物工作液 100ul孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動 1小時洗板 洗板6次加入增強液 100uL慢速振動5分鐘 檢測使用HBsAg測定程序 試劑操作介紹試劑操作介紹項目：項目：HBeAg分析類型分析類型: IFMA 定標方式：定標方式： 常數(shù)

17、定標常數(shù)定標本底處理：本底處理： 隨定標時變化隨定標時變化曲線擬合方式曲線擬合方式: 樣條曲線樣條曲線X軸：軸：LOGY軸：軸：LOG-B標準品標準品A：BLANK加入線性參比品及待檢樣本 100uL 孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動1小時 配制銪標記物工作液（見右表） 條銪標記物（ul）銪標記物稀釋液（ml）1151.52303.03454.54606.05757.56909.0710510.5812012洗板洗板4次加入銪標記物工作液 100ul孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動 1小時洗板 洗板6次加入增強液 100uL慢速振動5分鐘 檢測使用HBsAg測定程序 試劑操作介紹試劑操作介紹項目：項目

18、：HBeAb分析類型分析類型: FIA 定標方式：定標方式： 線性定標線性定標本底處理：本底處理： 不變化不變化曲線擬合方式曲線擬合方式: 樣條曲線樣條曲線X軸：軸：LOGY軸：軸：LOG-B標準品標準品A：0加入線性參比品及待檢樣本 50uL 再加入HBeAg中和抗原 50ul孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動1小時 配制銪標記物工作液（見右表） 條銪標記物（ul）銪標記物稀釋液（ml）1151.52303.03454.54606.05757.56909.0710510.5812012洗板洗板4次加入銪標記物工作液 100ul孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動 1小時洗板 洗板6次加入增強液 100uL

19、慢速振動5分鐘 檢測使用HBeAb測定程序 試劑操作介紹試劑操作介紹項目：項目：HBcAb分析類型分析類型: FIA 定標方式：定標方式： 線性定標線性定標本底處理：本底處理： 不變化不變化曲線擬合方式曲線擬合方式: 樣條曲線樣條曲線X軸：軸：LOGY軸：軸：LOG-B標準品標準品A：0加入樣本稀釋液10ul加入線性參比品及待檢樣本 50uL再加入HBcAg中和抗原 50ul孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動1小時 配制銪標記物工作液（見右表） 條銪標記物（ul）銪標記物稀釋液（ml）1151.52303.03454.54606.05757.56909.0710510.5812012洗板洗板4次加入

20、銪標記物工作液 100ul孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動 1小時洗板 洗板6次加入增強液 100uL慢速振動5分鐘 檢測使用HBcAb測定程序 試劑操作介紹試劑操作介紹項目：項目：TSH分析類型分析類型: IFMA 定標方式：定標方式： 常數(shù)定標常數(shù)定標本底處理：本底處理： 隨定標時變化隨定標時變化曲線擬合方式曲線擬合方式: 樣條曲線樣條曲線X軸：軸：LOGY軸：軸：LOG-B標準品標準品A： BLANK配制銪標記物工作液（見右表） 條銪標記物（ul）銪標記物稀釋液（ml）1751.521503.032254.5-加入線性參比品及待檢樣本 100ul加入稀釋后的銪標記 100ul孵育 室溫下振蕩

21、器上緩慢振動 1小時洗板 洗板6次加入增強液 150uL慢速振動5分鐘 檢測使用TSH測定程序 試劑操作介紹試劑操作介紹項目：項目：TT3分析類型分析類型: FIA 定標方式：定標方式： 線性定標線性定標本底處理：本底處理： 不變化不變化曲線擬合方式曲線擬合方式: 樣條曲線樣條曲線X軸：軸：LOGY軸：軸：LOGIT標準品標準品A：0配制銪標記物工作液（見右表） 條銪標記物（ul）銪標記物稀釋液（ml）1303.02606.03909.0-加入線性參比品及待檢樣本 25ul加入稀釋后的銪標記 150ul孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動 1小時洗板 洗板6次加入增強液 150uL慢速振動5分鐘 檢測

22、使用TT3測定程序 試劑操作介紹試劑操作介紹項目：項目：FT3分析類型分析類型: FIA 定標方式：定標方式： 線性定標線性定標本底處理：本底處理： 不變化不變化曲線擬合方式曲線擬合方式: 樣條曲線樣條曲線X軸：軸：LOGY軸：軸：LOGIT標準品標準品A：0配制銪標記物工作液（見右表） 條銪標記物（ul）銪標記物稀釋液（ml）1303.02606.03909.0-加入線性參比品及待檢樣本 25ul加入稀釋后的銪標記 150ul孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動 1小時洗板 洗板6次加入增強液 150uL慢速振動5分鐘 檢測使用FT3測定程序 試劑操作介紹試劑操作介紹項目：項目：TT4分析類型分析類

23、型: FIA 定標方式：定標方式： 線性定標線性定標本底處理：本底處理： 不變化不變化曲線擬合方式曲線擬合方式: 樣條曲線樣條曲線X軸：軸：LOGY軸：軸：LOGIT標準品標準品A：0配制銪標記物工作液（見右表） 條銪標記物（ul）銪標記物稀釋液（ml）1603.021206.031809.0-加入線性參比品及待檢樣本 25ul加入稀釋后的銪標記 150ul孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動 1小時洗板 洗板6次加入增強液 150uL慢速振動5分鐘 檢測使用TT4測定程序 試劑操作介紹試劑操作介紹項目：項目：FT4分析類型分析類型: FIA 定標方式：定標方式： 線性定標線性定標本底處理：本底處理：

24、 不變化不變化曲線擬合方式曲線擬合方式: 樣條曲線樣條曲線X軸：軸：LOGY軸：軸：LOGIT標準品標準品A：0配制銪標記物工作液（見右表） 條銪標記物（ul）銪標記物稀釋液（ml）1303.02606.03909.0-加入線性參比品及待檢樣本 25ul加入稀釋后的銪標記 150ul孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動 1小時洗板 洗板6次加入增強液 150uL慢速振動5分鐘 檢測使用FT4測定程序 試劑操作介紹試劑操作介紹項目：項目：INSULIN分析類型分析類型: IFMA 定標方式：定標方式： 常數(shù)定標常數(shù)定標本底處理：本底處理： 隨定標時變化隨定標時變化曲線擬合方式曲線擬合方式: 樣條曲線樣條

25、曲線X軸：軸：LOGY軸：軸： LOG-B標準品標準品A： BLANK復(fù)溶標準品1.0ml去離子水，至少20分鐘復(fù)溶標記物1.0ml去離子水，至少20分鐘配制銪標記物工作液（見右表） 條銪標記物（ul）銪標記物稀釋液（ml）11203.022406.033609.0-加入線性參比品及待檢樣本 50ul加入稀釋后的銪標記 100ul孵育 室溫下振蕩器上緩慢振動 30分鐘洗板 洗板6次加入增強液 200uL慢速振動5分鐘 檢測使用INSULIN測定程序 試劑操作介紹試劑操作介紹項目：項目：C-PETIDE分析類型分析類型: IFMA 定標方式：定標方式： 常數(shù)定標常數(shù)定標本底處理：本底處理： 隨定標時變化隨定標時變化曲線擬合方式曲線擬合方式: 樣條曲線樣條曲線X軸：軸：LOGY軸：軸： LOG-B標準品標準品A： BLANK復(fù)溶標準品1.0ml去離子水，至少20分鐘配制銪標記物工作液（見右表） 條銪標記物（ul）銪標記物稀釋液（ml）11203.022406.033609